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N6-甲基腺苷相关调节因子与骨关节炎:生物信息学和实验验证分析 被引量：3
1
作者 袁长深 廖书宁 +5 位作者 李哲 官岩兵 吴思萍 胡琪 梅其杰 段戡 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第11期1724-1729,共6页
背景:越来越多证据表明N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)调节因子与骨关节炎密切相关,被认为是防治骨关节炎新方向,但具体作用机制不明。目的:通过对骨关节炎基因芯片数据集进行生物信息学分析,探讨m6A对骨关节炎的作用,解析骨关节... 背景:越来越多证据表明N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)调节因子与骨关节炎密切相关,被认为是防治骨关节炎新方向,但具体作用机制不明。目的:通过对骨关节炎基因芯片数据集进行生物信息学分析,探讨m6A对骨关节炎的作用,解析骨关节炎发病机制。方法:首先利用R软件提取GEO数据库中GSE1919数据集中骨关节炎相关m6A调节因子及其表达量,进而对提取结果行基因差异分析及GO、KEGG富集分析;接着对PPI网络拓扑学分析结果和机器学习结果取交集得到m6A关键调节因子,并通过体外细胞实验验证。结果与结论:①提取得到16个骨关节炎相关m6A调节因子表达量,通过差异分析获得ZC3H13、YTHDC1、YTHDF3、HNRNPC等11个m6A差异调节因子;②GO富集分析显示,骨关节炎相关m6A差异调节因子在生物过程中主要于mRNA转运、RNA分解代谢、胰岛素样生长因子受体信号通路调控等发挥作用;③KEGG富集分析显示,差异调节因子主要参与p53、白细胞介素17和AMPK信号通路;④综合PPI网络拓扑学分析和机器学习结果获得m6A关键调节因子——YTHDC1;⑤体外细胞实验结果表明,m6A关键调节因子——YTHDC1在对照组与骨关节炎组中表达存在显著差异(P<0.05);⑥结果显示,YTHDC1与骨关节炎发生发展密切相关,有望成为m6A治疗骨关节炎的分子靶点。 展开更多
关键词 骨关节炎 N6-甲基腺苷 生物信息学 机器学习 调节因子 软骨细胞 实验验证
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生物化学云班课开放式在线考试系统建设及应用 被引量：1
2
作者 李崇奇 肖曼 《基础医学教育》 2024年第2期164-168,共5页
文章通过探讨新型教学模式中存在的问题,认为当前高等学校开放式在线考试系统建设迫在眉睫,并提出了开放式在线考试系统建设的九大原则,然后从题型选择、录入方式、格式、题量、内容、思政等六个方面讨论了开放式在线考试系统建设的方法... 文章通过探讨新型教学模式中存在的问题,认为当前高等学校开放式在线考试系统建设迫在眉睫,并提出了开放式在线考试系统建设的九大原则,然后从题型选择、录入方式、格式、题量、内容、思政等六个方面讨论了开放式在线考试系统建设的方法,并且在五年的课堂教学过程中,应用云班课开放式在线考试系统对学生进行了过程性考核,实现了对学生学习情况实时监测和督促学生学习的目的。 展开更多
关键词 生物化学 云班课 开放式在线考试系统 教学改革 过程性考核
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邻苯二甲酸二异丁酯——新型的ANO2通道开放剂
3
作者 郑晓恬 白立川 +1 位作者 王惠杰 吴琼 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期695-700,共6页
目的筛选ANO2的特异性配体药物,为医药行业开发靶向ANO2新药提供先导化合物的结构信息。方法构建ANO2过表达的HEK293细胞株,应用共聚焦显微镜-膜片钳全细胞记录模式技术筛选ANO2的特异性配体。结果在胞内外钳制电压100 mV及含1μmol... 目的筛选ANO2的特异性配体药物,为医药行业开发靶向ANO2新药提供先导化合物的结构信息。方法构建ANO2过表达的HEK293细胞株,应用共聚焦显微镜-膜片钳全细胞记录模式技术筛选ANO2的特异性配体。结果在胞内外钳制电压100 mV及含1μmol·L^(-1)钙离子电极内液的记录条件下,邻苯二甲酸二异丁酯(diisobutyl phthalate,DIBP)给药前ANO2介导的氯电流密度为(14.67±2.87)pA/pF,给药后ANO2介导的氯电流电导为(28.75±4.05)pA/pF,差异具有统计学意义(P<0.01);钙荧光成像实验结果表明DIBP无调节胞内游离钙信号的作用;在0μmol·L^(-1)钙离子条件下,DIBP对静息状态的ANO2通道不具有直接的激活作用。结论DIBP通过直接作用增强已活化ANO2通道的电导,其作为一种新型的促ANO2通道开放剂为开发靶向ANO2的药物提供结构信息,同时也为研究其他邻苯二甲酸酯类物质的毒理作用提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸二异丁酯 ANO2 配体 过表达 先导化合物 电流密度 白介素-8
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高迁移率族蛋白B1对树突状细胞表型、吞噬功能及ERK/JNK/P38 MAPK信号通路的影响
4
作者 陈颖颖 陈兰 +5 位作者 牟志向 胡小龙 张艺艳 翁娇青 吕佩瑜 关天俊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期248-255,共8页
目的探究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)对硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导的树突状细胞(DCs)表型、吞噬功能及细胞外信号调节激酶(ERK)/氨基末端蛋白激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶P38抗体(P38 MAPK)信号通路... 目的探究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)对硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导的树突状细胞(DCs)表型、吞噬功能及细胞外信号调节激酶(ERK)/氨基末端蛋白激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶P38抗体(P38 MAPK)信号通路的影响。方法分别以30、300、600μmol·L^(-1)IS干预人原代DC细胞24 h,分为Control组、IS-30组、IS-300组、IS-600组,通过流式细胞分析鉴定细胞表型并检测细胞吞噬功能;细胞经600μmol·L^(-1)IS干预24 h后加入1 mg·L^(-1)anti-HMGB1或经1 mg·L^(-1)HMGB1单独处理后分为Control组、IS组、HMGB1组、IS^(+)anti-HMGB1组,通过流式细胞分析鉴定细胞表型并检测细胞吞噬功能;Western blot和免疫荧光染色检测ERK/JNK/P38 MAPK信号通路相关蛋白表达。结果随IS浓度增加,CD83^(+)和CD86^(+)细胞数逐渐增加(P<0.01),DCs吞噬能力逐渐下降(P<0.01);与IS组相比,IS^(+)anti-HMGB1组的CD83^(+)和CD86^(+)细胞数明显减少(P<0.01),细胞吞噬能力增加(P<0.01)。此外,与Control组比较,IS或HMGB1组p-ERK/ERK、p-P38/P38、p-JNK/JNK的蛋白表达升高(均P<0.01);与IS组相比,IS^(+)anti-HMGB1组p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK的蛋白表达降低(均P<0.01)。结论拮抗HMGB1可抑制IS诱导的DCs表型及成熟并抑制ERK/JNK/P38 MAPK信号通路激活。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白B1 树突状细胞 硫酸吲哚酚 表型 吞噬功能
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TGF-β1通过组蛋白修饰酶调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的表观基因学研究
5
作者 何建伟 晏春艳 +5 位作者 杨宗树 高永昌 蒋雯 方钦正 戴晓琴 曹薇薇 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期123-130,共8页
目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)/Smad信号通路与组蛋白甲基化酶和去甲基化酶的相关性。方法BMSCs成骨诱导培养,用TGF-β1... 目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)/Smad信号通路与组蛋白甲基化酶和去甲基化酶的相关性。方法BMSCs成骨诱导培养,用TGF-β1、SB431542和TGF-β1+SB431542干预。分为4组:BMSCsCtrl-3d组(A组),BMSCs-Ctrl-ost3d组(B组),BMSCs-TGF-β1-ost3d组(C组),BMSCs-TGF-β1-SB1UMost3d组(D组)。用qRT-PCR方法检测各组甲基化酶和去甲基化酶mRNA表达量。结果(1)与A组比较,B组DM3B、KDM4A、KDM4B、KDM4C、KDM4D、KDM5A、KDM5B、KDM5C、KDM6A、KDM6B、EZH1的mRNA表达明显增强(P<0.05)。(2)与B组比较,C组KDM3B、KDM4A、KDM4C、KDM4D、KDM5C、EZH1的mRNA表达明显降低(P<0.05);KDM5B、KDM6A、KDM6B的mRNA表达明显增强(P<0.05);而KDM4B、KDM5A表达无明显改变(P>0.05)。(3)与C组比较,D组KDM3B、KDM6A、KDM6B的mRNA表达发生明显改变(P<0.05);KDM4C、KDM4D、KDM5C和EZH1的mRNA改变不显著(P>0.05),KDM4A的mRNA发生非特异性改变(P<0.05)。结论TGF-β1通过TGF-β1/Smad信号通路和TGF-β1/非Smad信号调控部分相关组蛋白甲基化转移酶/去甲化酶的表达,从而促进了BMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 成骨分化 组蛋白甲基化酶 TGF-Β1/SMAD信号通路
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面肩肱肌营养不良症患者外周血单个核细胞来源的诱导多能干细胞的构建及骨骼肌分化
6
作者 焦娇 霍海芹 +4 位作者 季修庆 许伊云 陈昊 许争峰 胡平 《临床检验杂志》 CAS 2024年第7期527-534,共8页
目的建立并鉴定面肩肱肌营养不良症(FSHD)患者外周血单个核细胞(PBMC)来源的诱导多能干细胞(iPSCs),初步探讨其骨骼肌分化能力,评估该细胞模型应用于疾病机制研究的可行性。方法收集1例FSHD患者的PBMC,用含4个重编程转录因子(OCT4、SOX2... 目的建立并鉴定面肩肱肌营养不良症(FSHD)患者外周血单个核细胞(PBMC)来源的诱导多能干细胞(iPSCs),初步探讨其骨骼肌分化能力,评估该细胞模型应用于疾病机制研究的可行性。方法收集1例FSHD患者的PBMC,用含4个重编程转录因子(OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC)的仙台病毒感染PBMC并获得FSHD患者来源的iPSCs,继续诱导其骨骼肌分化。通过基因组光学图谱技术、核型、免疫荧光染色、实时荧光定量PCR等分析iPSCs和骨骼肌细胞特性。结果成功获得FSHD患者来源的iPSCs,其可表达多能干性标记。FSHD-iPSC核型及D4Z4拷贝数结果与患者的临床背景一致,并在体外可定向诱导分化为骨骼肌细胞,该细胞同时表达DUX4致病基因以及调节基因。结论FSHD患者来源的PBMC可重编程为iPSCs,FSHD-iPSC可分化为疾病相关的肌源组细胞及肌管细胞,为FSHD发病机制的体外研究提供了良好的细胞模型,并为寻找该病的有效治疗手段提供了工具。 展开更多
关键词 面肩肱肌营养不良症 诱导多能干细胞 骨骼肌分化 肌管细胞
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软骨细胞中生物钟基因Bmal1对细胞周期相关基因表达的影响
7
作者 杨春生 王添兴 +2 位作者 张铁成 武恒敏 王宝兰 《基础医学与临床》 CAS 2024年第4期496-502,共7页
目的 探讨生物钟和细胞周期在骨关节炎(OA)软骨细胞中内在的关系,主要是时钟基因Bmal1对细胞周期相关基因的调控。方法 将胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)诱导后的软骨样ATDC5细胞分为normal组、OA组、LV-Bmal1组。采用CCK8法检测各组细胞活力;... 目的 探讨生物钟和细胞周期在骨关节炎(OA)软骨细胞中内在的关系,主要是时钟基因Bmal1对细胞周期相关基因的调控。方法 将胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)诱导后的软骨样ATDC5细胞分为normal组、OA组、LV-Bmal1组。采用CCK8法检测各组细胞活力;RT-qPCR法检测Bmal1、Per1、Wee1、Cdk1、Ccnb1和Mmp13 mRNA在各组中的表达;Western blot检测BMAL1、PER1、WEE1、CDK1、CCNB1和MMP13蛋白在各组中的表达水平;流式细胞测量术分析Bmal1对细胞周期中不同分期及细胞凋亡的影响;分析Bmal1对Per1、Wee1、Cdk1、Ccnb1和Mmp13的调控和它们在OA中发挥的作用。结果 与normal组相比,OA组细胞活力提高,Bmal1、Wee1的mRNA相对表达量下降,Per1、Cdk1、Ccnb1、Mmp13的mRNA相对表达量明显增加;LV-Bmal1组细胞活力下降,Bmal1、Wee1的mRNA相对表达量上升,Per1、Cdk1、Ccnb1、Mmp13的mRNA相对表达量下降(P<0.05);相关性分析显示,Bmal1与Wee1呈正相关,二者与Per1、Cdk1、Ccnb1或Mmp13存在负相关;Western blot结果显示,不同组别中蛋白表达水平的结果与PCR趋势一致;细胞周期和细胞凋亡检测结果显示,和normal组相比,OA组S期、G2/M期缩短,细胞比例明显下降,细胞早期和晚期凋亡比例增加,LV-Bmal1组S期、G2/M期延长,细胞比例增加,早期和晚期凋亡比例下降。结论 炎性软骨细胞中生物钟基因Bmal1可能参与调节细胞周期相关基因的表达。 展开更多
关键词 生物钟 细胞周期 骨关节炎 软骨细胞 凋亡
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小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA在非酒精性脂肪性肝病中的作用
8
作者 李想 李晔 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1054-1066,共13页
小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)是由细胞分泌的一种细胞外囊泡,产生于多泡体,多泡体与质膜融合并释放到细胞外基质。由于小细胞外囊泡可以携带分子质量相对较小的核酸、蛋白质、脂质,能够执行细胞间物质传递、细胞间... 小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)是由细胞分泌的一种细胞外囊泡,产生于多泡体,多泡体与质膜融合并释放到细胞外基质。由于小细胞外囊泡可以携带分子质量相对较小的核酸、蛋白质、脂质,能够执行细胞间物质传递、细胞间通讯等功能。因此,小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA不仅参与细胞正常生理过程,也可以在多种疾病的发生发展过程中起重要作用。本文综述了小细胞外囊泡在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用,小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA不仅有望成为NAFLD诊断的标志物,同时也具有治疗NAFLD的潜在作用,或能为治疗NAFLD提供新思路。 展开更多
关键词 小细胞外囊泡 非酒精性脂肪性肝病 非编码RNA 微小RNA 长链非编码RNA 环状RNA
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UCP2对ANG Ⅱ诱导的内皮细胞线粒体损伤的保护作用
9
作者 陈鹏 杨红年 +3 位作者 杜立文 关海昕 崔彬 张玲 《宁夏医学杂志》 CAS 2024年第7期565-568,I0001,共5页
目的探究线粒体解偶联蛋白2(UCP2)对由血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)刺激引发的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)线粒体功能损害的保护作用及分子机制。方法培养HUVECs,给予ANGⅡ处理24 h,CCK8实验检测细胞活性变化;Western-blotting实验以COXⅣ为内参蛋... 目的探究线粒体解偶联蛋白2(UCP2)对由血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)刺激引发的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)线粒体功能损害的保护作用及分子机制。方法培养HUVECs,给予ANGⅡ处理24 h,CCK8实验检测细胞活性变化;Western-blotting实验以COXⅣ为内参蛋白,检测线粒体损伤相关蛋白MDM2和ATM及UCP2表达水平变化;Real-time PCR实验以GAPDH为内参基因,检测线粒体损伤基因ATM、ENOS、MDM2和MNSOD及UCP2表达水平变化,评价细胞内氧化状态;进一步通过上调和下调HUVECs中UCP2表达,Western-blotting联合Real-time PCR检测线粒体损伤相关蛋白及基因表达水平变化。结果ANGⅡ能够抑制HUVECs增殖,同时表现出一定浓度依赖性。随着ANGⅡ浓度升高,Western-blotting检测发现ATM表达降低、UCP2和MDM2表达增高(P<0.05);Real-time PCR检测发现ATM和ENOS表达降低,MDM2、UCP2和MNSOD表达增高(P<0.05)。过表达UCP2慢病毒感染细胞后,Western-blotting检测发现MDM2及ATM表达降低,Real-time PCR检测发现ATM、MDM2及MNSOD表达降低,UCP2敲低质粒转染细胞后,Western-blotting检测发现MDM2及ATM表达增高,Real-time PCR检测发现ATM、MDM2及MNSOD表达增高(P<0.05)。结论ANGⅡ可引起HUVECs线粒体损伤,且UCP2在这一过程中发挥保护作用,可减轻ANGⅡ导致的HUVECs线粒体损伤。 展开更多
关键词 HUVECS 线粒体损伤 血管紧张素Ⅱ 线粒体解偶联蛋白2
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miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析
10
作者 郑世雄 杨巍 刘合亮 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期127-133,共7页
[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8... [目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化. 展开更多
关键词 miR-210-5p BMP2/Smad信号通路 小鼠脂肪干细胞 成骨分化
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首都医科大学阶平班医学生物化学自主学习改革探索
11
作者 周妍 王雅梅 +1 位作者 毕晓郁 孟艳 《基础医学教育》 2024年第10期843-846,共4页
医学生物化学是最为重要的基础医学课程,内容复杂,难于理解及记忆。改变传统教学方法,激发学生的内驱力可显著提升学习效果。互联网、大数据等信息技术不断飞跃。基于智慧学习环境下开发新型自主学习模式将有助于推进以学为主、以教为... 医学生物化学是最为重要的基础医学课程,内容复杂,难于理解及记忆。改变传统教学方法,激发学生的内驱力可显著提升学习效果。互联网、大数据等信息技术不断飞跃。基于智慧学习环境下开发新型自主学习模式将有助于推进以学为主、以教为辅的教学改革,提高学习兴趣、激发学习潜能,对其他基础医学课程的学习也具有潜移默化的影响。文章以首都医科大学阶平班为例,对自主学习开展现状、基于智慧学习环境下个性化自主学习及评价体系的构建进行探讨,旨在完善以拔尖创新医学人才培养为目标的新型教学改革。 展开更多
关键词 医学生物化学 考核评价 教学改革 自主学习 阶平班
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人工智能辅助的苏格拉底式对话教学在医学分子生物学中的实践
12
作者 张静 王雅梅 孔璐 《基础医学教育》 2024年第7期614-618,共5页
文章探讨了在医学分子生物学教学中应用基于人工智能工具的苏格拉底式对话教学法的创新模式。通过结合苏格拉底式对话教学法和医学分子生物学教学的特点和挑战以及人工智能工具在促进教学效果和学习体验方面的关键作用,提出了针对大班... 文章探讨了在医学分子生物学教学中应用基于人工智能工具的苏格拉底式对话教学法的创新模式。通过结合苏格拉底式对话教学法和医学分子生物学教学的特点和挑战以及人工智能工具在促进教学效果和学习体验方面的关键作用,提出了针对大班额实施苏格拉底式对话教学法的挑战和对策,并进行了实践验证。研究结果表明,基于人工智能工具的苏格拉底式对话教学法能够提高学生的参与度和学习动力,促进批判性思维能力的培养,并实现个性化和差异化教学。这一创新模式将为医学分子生物学教学提供有效的教学方法和策略,推动医学教育的发展和进步。 展开更多
关键词 医学分子生物学 苏格拉底式对话教学法 人工智能 教学改革 大班教学
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生物化学与分子生物学教学实验室精细化管理的探索与实践
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作者 廖志银 翁登坡 +3 位作者 霍朝霞 邹玲 周恒达 于晓虹 《基础医学教育》 2024年第8期660-664,共5页
生物化学与分子生物学教学实验室是培养学生基本实验技能和科研实践能力的重要场所,其管理水平直接影响着实验教学的教学质量和教学效率。浙江大学基础医学教学实验中心充分利用网络优势,以人为核心,建立多个线上教学管理平台,同时利用... 生物化学与分子生物学教学实验室是培养学生基本实验技能和科研实践能力的重要场所,其管理水平直接影响着实验教学的教学质量和教学效率。浙江大学基础医学教学实验中心充分利用网络优势,以人为核心,建立多个线上教学管理平台,同时利用二维码对学科细节进行优化管理,为实验教学线下资源转化为数字化、信息化、精细化管理提供了新途径;另外,对实验耗材、生化固废、玻璃容器等的常规管理进行了细节优化,也为实验室优化管理和创新教学积累了宝贵经验。 展开更多
关键词 生物化学与分子生物学 实验教学 教学实验室 二维码 精细化管理
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NDUFS6蛋白生物信息学分析及过表达质粒的构建与鉴定
14
作者 张瑜 孙美琪 +4 位作者 徐方晶 王洁 方克宝 王一帆 何军 《宁夏医科大学学报》 2024年第4期353-359,共7页
目的 应用生物信息学方法分析线粒体呼吸链复合体Ⅰ结构亚基烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(泛素)铁硫蛋白6(NDUFS6)的理化性质,构建pCV702-NDUFS6过表达质粒并进行鉴定,为进一步研究NDUFS6蛋白功能奠定基础。方法 利用Expasy、UniProtKB、... 目的 应用生物信息学方法分析线粒体呼吸链复合体Ⅰ结构亚基烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(泛素)铁硫蛋白6(NDUFS6)的理化性质,构建pCV702-NDUFS6过表达质粒并进行鉴定,为进一步研究NDUFS6蛋白功能奠定基础。方法 利用Expasy、UniProtKB、NCBI、SOPMA等生物信息学工具分析NDUFS6蛋白的理化性质、二级结构等;根据NDUFS6 cDNA序列构建携带NDUFS6基因的过表达质粒pCV702-NDUFS6,转染大鼠心肌细胞H9C2,并设置阴性对照(NC)组和相应空载体CON520作为阳性对照(PC)组,经嘌呤霉素筛选后,采用RT-qPCR和Western blot检测NDUFS6 mRNA和蛋白表达水平。结果 NDUFS6蛋白由116个氨基酸组成,理论等电点pI为9.37。蛋白二级结构以无规则卷曲(占50%)为主。酶切鉴定和基因测序结果显示,pCV702-NDUFS6表达质粒构建成功。RT-qPCR和Western blot结果显示,相较于NC组和PC组,过表达组NDUFS6表达水平均上调(P均<0.05)。结论 成功构建了能在心肌细胞H9C2中有效过表达NDUFS6基因的过表达质粒。 展开更多
关键词 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(泛素)铁硫蛋白6 生物信息学分析 心肌细胞 质粒构建
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活性氧/蛋白激酶RNA样内质网激酶信号轴对卡介苗诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞铁死亡的调控作用
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作者 陈飞飞 郑永智 +2 位作者 吴素芳 康乾 晋春阳 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1448-1458,共11页
目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)/蛋白激酶RNA样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)信号通路对卡介苗(BCG)感染引起的RAW264.7小鼠巨噬细胞铁死亡的调控作用。方法:采用铁死亡螯合... 目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)/蛋白激酶RNA样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)信号通路对卡介苗(BCG)感染引起的RAW264.7小鼠巨噬细胞铁死亡的调控作用。方法:采用铁死亡螯合剂去铁胺(deferoxamine,DFO)研究铁死亡在BCG感染诱导细胞死亡中的作用,将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、DFO组、BCG+DFO组;采用PERK抑制剂GSK2606414研究PERK信号通路在BCG感染诱导细胞铁死亡中的作用,将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、GSK2606414组、BCG+GSK2606414组;采用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)观察ROS在调控PERK中的作用,将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、NAC组和BCG+NAC组。通过比色法检测细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、Fe^(2+)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)及脂质过氧化水平;通过蛋白免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、磷酸化PERK(p-PERK)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)及C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)表达水平;通过流式细胞术检测ROS含量;通过免疫荧光法检测p-PERK蛋白水平;通过菌落形成单位(colony-forming unit,CFU)实验计算BCG在细胞内的存活。结果:与BCG组比较,BCG+DFO组细胞存活率[(84.72±3.62)%vs.(58.41±2.73)%]、GSH水平[(8.85±0.54)μmol/mg vs.(4.81±0.36)μmol/mg]和GPX4蛋白相对表达水平(0.82±0.06 vs.0.33±0.03)升高(t=-4.263,P=0.004;t=-10.116,P<0.001;t=-10.519,P<0.001),LDH释放率[(15.70±3.18)%vs.(56.24±4.98)%]、Fe^(2+)含量[(8.15±0.64)μmol/mg vs.(18.68±1.27)μmol/mg]和脂质过氧化水平[(22.18±2.24)%vs.(58.13±4.47)%]均明显降低(t=35.982,P<0.001;t=20.203,P<0.001;t=32.528,P<0.001)。与BCG组比较,BCG+GSK2606414组细胞中p-PERK蛋白相对表达水平(0.23±0.02 vs.0.69±0.04)、ATF4蛋白相对表达水平(0.39±0.02 vs.0.91±0.06)和CHOP蛋白相对表达水平(0.24±0.03 vs.0.61±0.04),以及Fe^(2+)[(11.70±0.91)μmol/mg vs.(17.92±1.22)μmol/mg]和脂质过氧化[(19.17±1.75)%vs.(53.28±3.01)%]水平均明显降低(t=17.177,P<0.001;t=21.024,P<0.001;t=19.358,P<0.001;t=11.999,P<0.001;t=30.292,P<0.001),细胞中GPX4蛋白相对表达水平(0.57±0.04 vs.0.20±0.02)和GSH水平[(8.15±0.47)μmol/mg vs.(4.69±0.22)μmol/mg]则明显升高(t=-15.044,P<0.001;t=-9.316,P<0.001)。此外,BCG感染GSK2606414处理后的巨噬细胞,其24 h和48 h的菌载量[(1.72±0.15)×10^(5) CFU和(1.48±0.12)×10^(5) CFU]较BCG组[(3.51±0.28)×10^(5) CFU和(2.94±0.21)×10^(5) CFU]明显降低(t=17.576,P<0.001;t=15.225,P<0.001)。与BCG组(3.24±0.14)比较,BCG+NAC组细胞中的相对ROS水平(1.59±0.11)明显降低(t=20.215,P<0.001)。BCG感染NAC处理后的巨噬细胞,其24 h和48 h的菌载量[(0.91±0.12)×10^(5) CFU和(0.80±0.13)×10^(5) CFU]较BCG组[(2.18±0.18)×10^(5) CFU和(2.37±0.21)×10^(5) CFU]明显降低(t=16.672,P<0.001;t=20.630,P<0.001)。结论:BCG感染诱导的巨噬细胞铁死亡与ROS/PERK信号的激活有关。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 巨噬细胞 铁死亡 活性氧
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低氧与DMOG对BMSCs成脂分化影响的对比研究
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作者 张磊 邓雪春 鲜明 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第2期113-119,共7页
目的对比低氧培养与常氧下添加二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响。方法流式细胞术及细胞的成骨、成脂、成软骨三系分化对骨髓BMSCs进行鉴定;ELISA法观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在对照组(21%O2... 目的对比低氧培养与常氧下添加二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响。方法流式细胞术及细胞的成骨、成脂、成软骨三系分化对骨髓BMSCs进行鉴定;ELISA法观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在对照组(21%O2)、低氧组(1%低氧培养组)及DMOG干预组(常氧+DMOG培养组)下表达情况;油红O染色法观察BMSCs内脂肪滴形成情况;分别采用Real-time PCR法和Western blot法检测各组成脂相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的mRNA和蛋白水平。结果流式细胞术显示骨髓单个核细胞阳性表达CD90、CD44、CD105,阴性表达CD34,且能够向成骨、成软骨、成脂三系分化;与对照组HIF-1α蛋白表达(85.00±1.87)相比,低氧组及DMOG干预组(480.40±6.91、331±7.78)明显上调(P<0.01),其中低氧组HIF-1α蛋白较DMOG干预组HIF-1α蛋白明显上调(P<0.01);与对照组阳性细胞数(51.80±4.15)相比,低氧组和DMOG干预组(27.80±3.11、31.20±2.59)明显减少(P<0.05),低氧组与DMOG干预组阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,低氧组与DMOG干预组PPARγ与C/EBPα的mRNA明显下调,差异具有统计学意义(P<0.01)。与低氧组相比,DMOG干预组PPAR-γ及C/EBPα的mRNA表达明显下调(P<0.05)。与对照组相比,低氧组及DMOG干预组PPAR-γ蛋白表达分别下调了28.3%及39.8%(P<0.01),C/EBPα的蛋白表达分别下调了36.7%及42.5%(P<0.01);与低氧组相比,DMOG干预组PPAR-γ及C/EBPα蛋白表达分别下降了16%及9.1%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1%物理性低氧和常氧条件下0.5 mmol/L DMOG均能抑制BMSCs成脂分化,1%物理性低氧具有更强的抑制作用。 展开更多
关键词 低氧 二甲基乙二酰基甘氨酸 成脂肪分化
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缺氧诱导的胃癌细胞外泌体通过促进中性粒细胞胞外诱捕网的形成对胃癌细胞增殖能力的影响
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作者 文斐 顾磊 +1 位作者 张海 胡志勇 《广东医学》 CAS 2024年第7期832-838,共7页
目的探究缺氧条件下胃癌细胞外泌体(exosome,exo)诱导的中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)对胃癌细胞生长的影响。方法提取正常和缺氧培养条件下SGC-7901和HGC细胞分泌的外泌体(记为N-SGC-7901 exo、N-HGC exo... 目的探究缺氧条件下胃癌细胞外泌体(exosome,exo)诱导的中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)对胃癌细胞生长的影响。方法提取正常和缺氧培养条件下SGC-7901和HGC细胞分泌的外泌体(记为N-SGC-7901 exo、N-HGC exo、H-SGC-7901 exo和H-HGC exo),中性粒细胞分为磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution,PBS)组、N-SGC-7901组、N-HGC组、H-SGC-7901组、H-HGC组、N-SGC-7901 exo组、N-HGC exo组、H-SGC-7901 exo组、H-HGC exo组,Sytox Green染色检测各组细胞NETs的形成。SGC-7901细胞分为PBS/培养液(culture medium,CM)组、N-SGC-7901 exo/CM组、H-SGC-7901 exo/CM组、H-SGC-7901 exo/CM+DNAse组,HGC细胞分为PBS/CM组、N-HGC exo/CM组、H-HGC exo/CM组和H-HGC exo+DNAse/CM组。CCK8检测SGC-7901和HGC细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。结果相比于PBS组,N-SGC-7901组、H-SGC-7901组、N-HGC组、H-SGC组中性粒细胞NETs增加,且H-SGC-7901组高于N-SGC-7901组,H-SGC组高于N-HGC组。相比于PBS组,N-SGC-7901 exo组、H-SGC-7901 exo组、N-HGC exo组、H-SGC exo组中性粒细胞NETs增加,且H-SGC-7901 exo组高于N-SGC-7901 exo组,H-SGC exo组高于N-HGC exo组。相比于PBS/CM组,N-SGC-7901 exo/CM组和H-SGC-7901 exo/CM组SGC-7901细胞增殖和克隆形成能力显著增加(P<0.01),并且H-SGC-7901 exo/CM组高于N-SGC-7901 exo/CM组(P<0.001),而H-SGC-7901 exo/CM+DNase组增殖和克隆形成能力显著低于H-SGC-7901 exo/CM组。相比于PBS/CM组,N-HGC exo/CM组和H-HGC exo/CM组HGC细胞增殖和克隆形成能力显著增加(P<0.01),并且H-HGC exo/CM组高于N-HGC exo/CM组(P<0.001),H-HGC exo/CM+DNase组增殖和克隆形成能力显著低于H-HGC exo/CM组。结论缺氧条件下胃癌细胞外泌体通过促进NETs形成而促进胃癌细胞的生长。 展开更多
关键词 胃癌 缺氧 外泌体 中性粒细胞胞外诱捕网 生长
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以鸟氨酸循环为例探讨生物化学课程教学方法及思政融入
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作者 李帅 李佩琼 刘清南 《基础医学教育》 2024年第2期109-112,共4页
生物化学课程的代谢内容涉及很多循环代谢,占据生物化学课程代谢的半壁江山,且多为难点和重点。为了达到较好的教学效果,文章以鸟氨酸循环为例,采用多种教学手段和技巧积极探索和尝试,旨在达到学生掌握知识的同时,学会掌握代谢的逻辑,... 生物化学课程的代谢内容涉及很多循环代谢,占据生物化学课程代谢的半壁江山,且多为难点和重点。为了达到较好的教学效果,文章以鸟氨酸循环为例,采用多种教学手段和技巧积极探索和尝试,旨在达到学生掌握知识的同时,学会掌握代谢的逻辑,提高学习能力,提升科研思维。同时融入恰当的思政内容,以期提高生物化学课程的教学质量。 展开更多
关键词 生物化学 鸟氨酸循环 教学方法 教学技巧 课程思政
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cGAS-STING通路与老龄化疾病的研究进展
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作者 刘倩倩 毛志勇 吴桂珠 《同济大学学报（医学版）》 2024年第5期768-776,共9页
衰老是指随着年龄的增长生物体在分子、细胞、组织和系统水平上损伤的积累和功能的减退,逐渐趋向死亡的一种现象。衰老是导致年龄相关性疾病(aging-related diseases,ARDs)发生、发展和死亡的重要危险因素。衰老具有的特征有基因组不稳... 衰老是指随着年龄的增长生物体在分子、细胞、组织和系统水平上损伤的积累和功能的减退,逐渐趋向死亡的一种现象。衰老是导致年龄相关性疾病(aging-related diseases,ARDs)发生、发展和死亡的重要危险因素。衰老具有的特征有基因组不稳定、端粒损耗、表观遗传改变、蛋白质稳态丧失、大自噬失能、营养感应失调、线粒体功能障碍、细胞衰老、干细胞耗竭、细胞间通讯改变、慢性炎症和生态失调等。其中,细胞衰老主要由端粒缩短、DNA损伤、氧化应激以及细胞周期阻滞等因素所引起。DNA损伤累积导致促炎因子的过表达,包括各种细胞因子、趋化因子,统称为衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)。最近诸多科学研究表明,cGAS-STING通路会在衰老细胞中激活,从而进一步触发SASP表型。本文将对cGAS与细胞衰老的关系、SASP的调控以及相关老龄化疾病的影响进行综述。 展开更多
关键词 衰老 cGAS-STING通路 衰老相关分泌表型
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七氟烷对胶质瘤U87细胞侵袭能力的影响及机制研究
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作者 郝景茹 宋雨桐 高灿 《系统医学》 2024年第11期1-4,共4页
目的探讨七氟烷对U87细胞侵袭能力的影响及机制。方法于2022年9月—2023年6月,采用徐州医科大学麻醉学实验室提供的U87细胞培养至对数生长期。Transwell实验取对数生长期细胞分成8份,然后随机分为对照(Con)组和七氟烷(Sev)组,每组4份进... 目的探讨七氟烷对U87细胞侵袭能力的影响及机制。方法于2022年9月—2023年6月,采用徐州医科大学麻醉学实验室提供的U87细胞培养至对数生长期。Transwell实验取对数生长期细胞分成8份,然后随机分为对照(Con)组和七氟烷(Sev)组,每组4份进行平行实验。培养的细胞置于麻醉箱内,七氟烷组通载体气体和1.4%七氟烷4 h,对照组只通载体气体,观察七氟烷对U87细胞侵袭能力的影响;免疫印迹实验取对数生长期细胞分成12份,然后随机分为对照组,七氟烷2 h组和七氟烷4 h组,每组4份进行平行实验,观察七氟烷对pERK1/2、ERK1/2表达水平的影响;细胞免疫荧光化学实验取对数生长期细胞分成8份,然后随机分为对照组和七氟烷组(4 h),每组4份进行平行实验,检测七氟烷对pERK1/2、Nrf2在细胞分布的影响。结果与对照组相比,七氟烷组U87细胞穿过微孔膜的数目减少[Con组(100.000±0.000)%,Sev组(34.180±3.342)%],差异有统计学意义(t=16.697,P<0.05)。与对照组相比,七氟烷组pERK1/2的灰度值下降[Con组(100.000±0.000)%,Sev2 h组(0.196±0.028)%,Sev4 h组(0.073±0.025)%],差异有统计学意义(F=546.886,P<0.05),且核内pERK1/2[Con组(21.903±1.776)%,Sev组(8.412±0.367)%]及核内Nrf2表达水平均显著下降[Con组(18.083±0.788)%,Sev组(12.315±1.604)%],差异有统计学意义(t=7.438、3.228,P均<0.05)。结论七氟烷通过抑制ERK1/2-Nrf2信号通路抑制人胶质细胞瘤U87侵袭能力。 展开更多
关键词 七氟烷 细胞外信号调节激酶 转录因子NF-E2相关因子2 人胶质细胞瘤
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