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下调长链非编码RNA XIST靶向miR-124/NF-κB轴缓解IL-1β诱导的软骨细胞凋亡
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作者 谭纪锋 鄢宏 姜骆永 《医学分子生物学杂志》 CAS 2024年第5期481-486,共6页
目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)X染色体失活特异性转录本基因(X inactive specific transcript,XIST)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡的影响及其作用机制。方法生物信息学预测XIST和mi... 目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)X染色体失活特异性转录本基因(X inactive specific transcript,XIST)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡的影响及其作用机制。方法生物信息学预测XIST和miR-124靶向关系并通过双荧光素酶法进行验证;实验设置正常组、IL-1β组、si-NC组、si-XIST组、miR-124-NC组、miR-124 mimics组、si-NC+inhibitor-NC组、si-XIST+inhibitor-NC组、si-NC+miR-124 inhibitor组、si-XIST+miR-124 inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中XIST和miR-124表达;蛋白质印迹检测核因子κB P65(nuclear factor kappa B P65,NF-κB P65)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果lncRNA XIST和miR-124间存在靶向关系;相较于正常组,IL-1β诱导的软骨细胞中lncRNA XIST表达水平、NF-κB P65蛋白表达和细胞凋亡率显著升高,miR-124表达水平显著降低(P<0.05);相较于IL-1β组,si-XIST组和miR-124 mimics组NF-κB P65蛋白表达和细胞凋亡率显著降低(P<0.05);相较于si-NC+inhibitor-NC组,si-XIST+inhibitor-NC组NF-κB P65蛋白表达和细胞凋亡率显著降低,与si-NC+miR-124 inhibitor组比较,si-XIST+miR-124 inhibitor组NF-κB P65蛋白表达和细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论下调lncRNA XIST可靶向调节miR-124/NF-κB轴,从而缓解IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。 展开更多
关键词 长链非编码RNA XIST miR-124 NF-ΚB 软骨细胞 细胞凋亡
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Ca^(2+)诱导HK-2细胞焦亡及黏附性变化对含钙肾结石形成的分子机制研究
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作者 向近杰 吕懋鑫 +2 位作者 王梦悦 张坤 李颢 《天津医药》 CAS 2024年第3期250-255,共6页
目的探究人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)经Ca^(2+)作用后的焦亡经典通路激活及黏附性变化对含钙肾结石形成的作用及机制。方法不同质量浓度的CaCl2(0、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 g/L)培养HK-2细胞24 h,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)... 目的探究人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)经Ca^(2+)作用后的焦亡经典通路激活及黏附性变化对含钙肾结石形成的作用及机制。方法不同质量浓度的CaCl2(0、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 g/L)培养HK-2细胞24 h,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)及流式细胞凋亡术检测筛选最佳处理浓度。使用透射电镜观察高钙环境下肾小管上皮细胞微结构的变化。在高钙处理后用2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的产生,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot法分别检测高钙刺激后HK-2细胞焦亡相关NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、gasderminD(GSDMD)和黏附分子骨桥蛋白(OPN)、CD44的mRNA和蛋白表达水平变化,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(IL)-1β、IL-18和黏附分子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在高钙刺激后的表达变化。结果Ca^(2+)对HK-2细胞生长具有细胞毒性并且可以促进其凋亡,Ca^(2+)浓度越高,对HK-2细胞生长的毒性越大且凋亡率越高。高钙可以促进HK-2细胞发生细胞膜完整性缺失、内容物释放及胞内大量空泡产生等焦亡样形态学改变。与对照组相比,1.0 g/L及2.0 g/L CaCl2组的ROS表达水平依次升高,焦亡相关基因NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18以及黏附相关基因OPN、CD44、MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均依次升高(P<0.05)。结论高钙能使HK-2细胞发生氧化应激损伤并产生ROS,从而激活NLRP3炎症小体,进而导致细胞焦亡经典通路的激活和细胞黏附性的增加,最终间接促进肾结石的形成。 展开更多
关键词 细胞焦亡 高钙尿症 活性氧 细胞黏附分子 肾结石
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牙龈间充质干细胞治疗口腔疾病研究进展
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作者 赵彩桃 谢小美 +3 位作者 尹文 陈蕊 范桢 郝春波 《口腔医学》 CAS 2024年第7期556-560,共5页
牙龈间充质干细胞(gingival mesenchymal stem cells, GMSCs)是存在于牙龈组织固有层内的一群间充质干细胞,它不仅可以从健康的牙龈组织中分离出来,还可以从增生性甚至炎性牙龈组织中分离出来。GMSCs因来源丰富,易于获取,且具有独特的... 牙龈间充质干细胞(gingival mesenchymal stem cells, GMSCs)是存在于牙龈组织固有层内的一群间充质干细胞,它不仅可以从健康的牙龈组织中分离出来,还可以从增生性甚至炎性牙龈组织中分离出来。GMSCs因来源丰富,易于获取,且具有独特的免疫调节特性及多向分化潜能,成为口腔疾病治疗的研究热点。目前已被应用于牙周炎、牙龈萎缩、口腔癌、颌骨缺损、神经修复等口腔疾病的治疗中,该文对近年来GMSCs在口腔疾病中相关应用的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 牙龈间充质干细胞 组织工程 再生医学
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下调miR-106a-5p对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤及JAK1/STAT3通路的影响 被引量:2
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作者 姜花 沈延梅 马驯凯 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第2期113-117,共5页
目的 探讨下调miR-106a-5p对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞损伤及Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的影响。方法 不同浓度梯度H2O2(0、50、100、200、400μmol/L)处理大鼠心肌细胞H9c2。H9c2细胞分为对照组、H2O2组... 目的 探讨下调miR-106a-5p对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞损伤及Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的影响。方法 不同浓度梯度H2O2(0、50、100、200、400μmol/L)处理大鼠心肌细胞H9c2。H9c2细胞分为对照组、H2O2组(100μmol/L H_(2)O_(2))、miR-106a-5p NC组(100μmol/L H_(2)O_(2)+转染miR-106a-5p NC)和miR-106a-5p siRNA组(100μmol/L H_(2)O_(2)+转染miR-106a-5p siRNA)。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-106a-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹法检测细胞中JAK1/STAT3通路相关蛋白表达。结果 根据H_(2)O_(2)浓度梯度实验,选择100μmol/L H_(2)O_(2)用于后续实验。与对照组相比,H2O2组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中miR-106a-5p水平、MDA含量、p-JAK1/JAK1、p-STAT3/STAT3及细胞培养液中LDH含量显著升高(P<0.05),细胞培养液GSH-Px活性及细胞中SOD活性显著降低(P<0.05);上述指标在H2O2组与miR-106a-5p NC组间的差异无统计学意义(P>0.05);与miR-106a-5p NC组相比,miR-106a-5p siRNA组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中miR-106a-5p水平、MDA含量、p-JAK1/JAK1、p-STAT3/STAT3及细胞培养液中LDH含量显著降低(P<0.05),细胞培养液GSH-Px活性及细胞中SOD活性显著升高(P<0.05)。结论 下调miR-106a-5p可抑制JAK1/STAT3通路激活,提高抗氧化应激水平,减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤。 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 过氧化氢 微RNAS Janus激酶1 STAT3转录因子 氧化性应激
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牛磺酸对胰腺癌细胞系BxPC-3和PANC-1细胞增殖、凋亡和迁移的影响 被引量:1
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作者 高慧婕 李倩 +2 位作者 田斌 朱日明 刘超 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第7期707-712,共6页
目的探讨牛磺酸(Tau)对胰腺癌导管细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外培养胰腺癌BxPC-3和PANC-1细胞,采用不同浓度Tau(0、10、20、40、80、160 mmol/L)进行预处理。采用CCK-8、细胞划痕实验、TUNEL法观察Tau对BxPC-3和PANC-1细胞增... 目的探讨牛磺酸(Tau)对胰腺癌导管细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外培养胰腺癌BxPC-3和PANC-1细胞,采用不同浓度Tau(0、10、20、40、80、160 mmol/L)进行预处理。采用CCK-8、细胞划痕实验、TUNEL法观察Tau对BxPC-3和PANC-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质免疫印迹法检测Tau影响BxPC-3和PANC-1细胞中相关细胞凋亡及细胞周期分子mRNA和蛋白表达的情况。结果Tau可抑制BxPC-3和PANC-1的细胞增殖和迁移活性;同时,Tau能够促进BxPC-3和PANC-1细胞凋亡。与对照组相比,Tau处理后的BxPC-3细胞中相关凋亡因子P53、P21、Bcl-2关联X蛋白(BAX)表达水平呈上升趋势,而增殖细胞核抗原(PCNA)的表达降低;Tau处理后的PANC-1细胞中B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、PCNA、细胞周期蛋白CyclinA2、CyclinB1、CyclinE、周期蛋白依赖性激酶CDK1、CDK2、CDK4、CDK6等的表达较对照组均下降,而相关凋亡蛋白P53、P21的表达水平升高。结论Tau可抑制胰腺癌细胞BxPC-3和PANC-1的增殖和迁移活性,并促进细胞凋亡,可能是通过影响相关细胞凋亡基因和细胞周期蛋白来抑制胰腺癌细胞的活性。 展开更多
关键词 牛磺酸 胰腺肿瘤 肿瘤抑制蛋白质P53 周期素依赖激酶抑制剂p21 细胞周期蛋白类 周期蛋白依赖性激酶
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NGF/TrkA轴对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡和侵袭的影响
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作者 龙颖 黄芳依 韦有生 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第8期809-814,共6页
目的探讨神经生长因子(NGF)/原肌球蛋白受体激酶A(TrkA)轴对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法体外培养正常宫颈上皮细胞HUCEC和宫颈癌细胞SiHa,将SiHa细胞分为对照组(正常培养)、L-NGF组(50μg/L重组人NGF蛋白)、H-NGF组(100... 目的探讨神经生长因子(NGF)/原肌球蛋白受体激酶A(TrkA)轴对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法体外培养正常宫颈上皮细胞HUCEC和宫颈癌细胞SiHa,将SiHa细胞分为对照组(正常培养)、L-NGF组(50μg/L重组人NGF蛋白)、H-NGF组(100μg/L重组人NGF蛋白)、H-NGF+L-K252a组(100μg/L重组人NGF蛋白+50μg/L K252a)、H-NGF+H-K252a组(100μg/L重组人NGF蛋白+100μg/L K252a)。Western blot检测NGF、TrkA、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;CCK-8法检测SiHa细胞增殖情况;流式细胞术检测SiHa细胞凋亡;划痕愈合实验测定细胞迁移;Transwell试验测定细胞侵袭。结果SiHa细胞较HUCEC细胞NGF、TrkA水平升高(P<0.01)。与对照组相比,L-NGF组、H-NGF组NGF、TrkA水平,增殖活力,迁移率,侵袭细胞数量以及N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著增加,凋亡率、E-cadherin蛋白水平显著下降(P<0.05),且H-NGF组较L-NGF组以上指标差异更显著(P<0.05);与H-NGF组相比,H-NGF+L-K252a组、H-NGF+H-K252a组NGF、TrkA水平,增殖活力,迁移率,侵袭细胞数量以及N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著降低,凋亡率、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05),且H-NGF+H-K252a组较H-NGF+L-K252a组以上指标差异更显著(P<0.05)。结论下调NGF/TrkA轴可以抑制宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭,促进其凋亡。 展开更多
关键词 神经生长因子 受体 TrkA 宫颈肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 肿瘤浸润
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白藜芦醇调控Nrf2-GPX4通路对H_(2)O_(2)诱导肺泡上皮细胞铁死亡的影响 被引量:1
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作者 李艳萍 王协涛 +1 位作者 史立彬 刘琼 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第6期568-572,共5页
目的探索白藜芦醇(RES)调控核因子E2相关因子2(Nrf2)-谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路对H_(2)O_(2)诱导A549细胞铁死亡的影响。方法将人肺泡上皮A549细胞随机分为对照组、H_(2)O_(2)组、RES低浓度(RES-L,50μmol/L)组、RES中浓度(RES-M,... 目的探索白藜芦醇(RES)调控核因子E2相关因子2(Nrf2)-谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路对H_(2)O_(2)诱导A549细胞铁死亡的影响。方法将人肺泡上皮A549细胞随机分为对照组、H_(2)O_(2)组、RES低浓度(RES-L,50μmol/L)组、RES中浓度(RES-M,100μmol/L)组、RES高浓度(RES-H,150μmol/L)组、ML385(Nrf2抑制剂,2μmol/L ML385)组、RES-H+ML385(150μmol/L RES+2μmol/L ML385)组。除对照组外,其余各组均经H_(2)O_(2)处理细胞后,再使用相应剂量的药物或抑制剂进行干预。干预结束后,MTT法测定各组细胞活力,试剂盒检测细胞内铁离子含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平;透射电子显微镜观察线粒体结构;Western blot法检测Nrf2、GPX4、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果与对照组相比,H_(2)O_(2)组线粒体形态较受损严重,细胞存活率、SOD、GSH含量以及Nrf2、GPX4、HO-1蛋白表达均降低,铁离子、MDA含量增加(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,随着RES浓度的增加,A549细胞线粒体形态损伤得到改善,细胞存活率、SOD、GSH含量以及Nrf2、GPX4、HO-1蛋白表达逐渐增加,铁离子、MDA含量逐渐下降(P<0.05),但ML385组细胞线粒体损伤加重,细胞存活率、SOD、GSH含量以及Nrf2、GPX4、HO-1蛋白表达均降低,铁离子、MDA含量增加(P<0.05),且ML385处理可逆转RES对H_(2)O_(2)诱导A549细胞的保护作用。结论RES可能通过激活Nrf2-GPX4信号通路降低H_(2)O_(2)诱导的A549细胞内氧化应激水平,抑制铁死亡。 展开更多
关键词 白藜芦醇 A549细胞 铁死亡 氧化性应激 NF-E2相关因子2 谷胱甘肽过氧化酶 线粒体
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牙髓再生相关细胞因子研究进展 被引量:1
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作者 姚敏慧 吴锦涛 +5 位作者 周愉 褚凤清 蒋葭葭 陈玥 周莉丽 李泽汉 《口腔医学》 CAS 2023年第3期282-288,共7页
随着分子生物学、生物材料学、组织工程学等学科的不断发展,牙髓根尖周病的再生性治疗面临新的机遇。目前,大量关于牙髓再生的研究表明:细胞因子在促进牙髓干细胞迁移、增殖和成骨向分化等方面发挥重要作用。该文将对近期作为热点研究... 随着分子生物学、生物材料学、组织工程学等学科的不断发展,牙髓根尖周病的再生性治疗面临新的机遇。目前,大量关于牙髓再生的研究表明:细胞因子在促进牙髓干细胞迁移、增殖和成骨向分化等方面发挥重要作用。该文将对近期作为热点研究的几类牙髓再生的相关细胞因子进行综述,分析其在牙髓再生中的作用及调节机制。 展开更多
关键词 牙髓再生 血管生成 细胞因子 信号分子 信号通路 SDF⁃1 CXCL⁃12 CXCR4 浓缩生长因子
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磁性三氧化二铁纳米粒子对小鼠腹腔巨噬细胞的氧化损伤作用(英文) 被引量:11
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作者 王晓娜 唐萌 +6 位作者 张婷 杨磊 夏婷 曾垂焕 熊丽林 张宇 顾宁 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期2575-2577,2585,共4页
背景:已有报道表明纳米级的Fe2O3产生的细胞毒性与细胞的脂质过氧化存在一定的联系。氧化铁纳米粒子是否对巨噬细胞产生毒性,其毒性机制与氧化作用有何关联?目的:观察不同浓度Fe2O3纳米粒子对巨噬细胞的氧化损伤作用。设计:观察对比实... 背景:已有报道表明纳米级的Fe2O3产生的细胞毒性与细胞的脂质过氧化存在一定的联系。氧化铁纳米粒子是否对巨噬细胞产生毒性,其毒性机制与氧化作用有何关联?目的:观察不同浓度Fe2O3纳米粒子对巨噬细胞的氧化损伤作用。设计:观察对比实验。单位:东南大学公共卫生学院。材料:RAW264.7细胞为小鼠腹腔巨噬细胞,购自中国科学院上海细胞所。Fe2O3纳米粒子(30nm)悬浮液由东南大学生物医学工程系制备提供。实验前先进行预处理:将Fe2O3纳米粒子悬浮液置60℃水浴中10h,然后37℃水浴过夜。如此反复3次,灭菌处理。小瓶分装,4℃保存。DMEM高糖培养液(美国Gibco公司);胰蛋白酶(美国Difco公司,进口分装);新生牛血清(杭州四季青公司);过氧化氢、羟自由基、超氧阴离子自由基、乳酸脱氢酶、超微量ATP酶和考马斯亮蓝蛋白含量测定试剂盒(南京建成生物技术公司)。方法:实验于2006-03/07在东南大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系实验室完成。RAW264.7细胞用DMEM培养基于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中进行培养。每日用倒置显微镜观察细胞生长情况,取生长状态良好的对数生长期细胞进行试验。①细胞中氧自由基的检测:将密度为1.5×105L-1的巨噬细胞接种于24孔培养板,每孔1mL,37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养24h后,以质量浓度为1.0700、0.5350和0.2675g/L的Fe2O3纳米粒子(30nm)悬浮液染毒细胞为纳米粒子干预组,并设生理盐水为溶剂对照组,24h后终止培养,染毒结束后,低温条件下用玻璃匀浆器破碎细胞,按试剂盒说明,分别测定细胞中过氧化氢、羟自由基、超氧阴离子自由基。②培养液中乳酸脱氢酶活性及膜ATP酶活性的测定:纳米粒子干预组及对照组干预方法同上,染毒结束后,检测培养液中乳酸脱氢酶活性及膜ATP酶活性,乳酸脱氢酶活性的检测采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒,严格按照说明书进行操作。膜ATP酶活性的检测采用低温条件下用玻璃匀浆器破碎细胞,按试剂盒说明检测膜Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。主要观察指标:①不同质量浓度Fe2O3纳米粒子对细胞过氧化氢、羟自由基和超氧阴离子的影响。②乳酸脱氢酶活性、膜Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性检测结果。结果:①Fe2O30.2675,0.5350,1.0700g/L纳米粒子干预组羟自由基水平高于溶剂对照组[(0.605±0.066),(0.410±0.080),(0.764±0.051),(0.285±0.057)mkat/g,P<0.05],超氧阴离子自由基高于溶剂对照组[(9.935±1.159),(8.912±0.131),(13.479±0.752),(5.635±0.475)μkat/g,P<0.05],Fe2O31.0700g/L过氧化氢水平高于溶剂对照组[(14.695±2.815),(2.397±0.399)mmol/L,P<0.05]②Fe2O3纳米粒子在实验浓度范围内,能够引起培养液中乳酸脱氢酶活性显著升高(P<0.05)。Fe2O3纳米粒子对细胞膜Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均产生影响,且随着Fe2O3纳米粒子染毒剂量增加,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性逐渐降低,与对照组比较,差异均具有显著性(P<0.05)。结论:Fe2O3纳米粒子剂量增加导致细胞内过氧化氢、羟自由基、超氧阴离子自由基增多,从而使细胞膜通透性增加,膜Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性受到抑制。 展开更多
关键词 FE2O3 纳米粒子 巨噬细胞 氧化应激 毒性
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内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡 被引量:10
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作者 孔曼 陈娟 +4 位作者 周洁 朱文德 万丽敏 熊宇芳 李子希 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期253-257,共5页
目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各... 目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡率;苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌细胞凋亡的典型形态;通过Western blot检测ERS标志蛋白p-PERK和CHOP的表达变化。进一步采用ERS抑制剂化学伴侣PBA(4-phenylbutyric acid)抑制心肌细胞ERS,Western blot检测p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表达变化;采用流式细胞仪检测Caspase-12和Caspase-3的活性。结果①低浓度H2O2可显著诱导心肌细胞凋亡,高浓度H2O2则导致心肌细胞发生坏死;100μmol/L H2O2刺激心肌细胞8h时其凋亡率最高。②心肌细胞发生凋亡时ERS标志蛋白p-PERK和CHOP表达显著增高。③ERS抑制剂PBA预处理心肌细胞,可有效抑制H2O2诱导的p-PERK、CHOP表达及Caspase-3、Caspase-12活性的上调,与单纯H2O2处理组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度H2O2可通过促发ERS整合调控机制介导心肌细胞凋亡。这一结果将从ERS整合调控细胞应激的角度为心血管疾病的防治提供新思路。 展开更多
关键词 内质网应激 氧化应激 细胞凋亡 心肌细胞
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LBP对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的调节作用 被引量:7
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作者 舒旷怡 张颖 +4 位作者 杨锦红 任凭 杨爱平 余玲玲 李向阳 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期937-941,共5页
目的采用脂多糖结合蛋白(LBP)和脂多糖(LPS)以不同比例、不同方式刺激THP-1细胞分泌细胞因子,探讨LBP在LPS转运和活化过程中的调节作用,以及单核巨噬细胞受LPS活化后其炎性和负炎性因子分泌的平衡情况。方法将THP-1细胞进行增殖和传代后... 目的采用脂多糖结合蛋白(LBP)和脂多糖(LPS)以不同比例、不同方式刺激THP-1细胞分泌细胞因子,探讨LBP在LPS转运和活化过程中的调节作用,以及单核巨噬细胞受LPS活化后其炎性和负炎性因子分泌的平衡情况。方法将THP-1细胞进行增殖和传代后,经PMA刺激,转化为巨噬细胞。实验分为4个组:LPS组(用不同浓度LPS单独刺激)、LBP组(用不同浓度LBP单独刺激)、LBP/LPS预孵育组(LBP和LPS以不同浓度比例混合,37℃孵育15min)、LBP/LPS不孵育组(先加一定浓度LPS,再以不同浓度比例加入LBP)。分别培养4、12、24h后,吸出上清液,发光法检测TNF-α,IL-10和IL-6水平,并进行统计学分析。结果 THP-1细胞为悬浮生长,用PMA诱导转化后变为巨噬细胞,变为贴壁生长。分别用1、10、100、1000ng/mlLPS单独刺激巨噬细胞分泌TNF-α,1ng/ml和其他组间均有统计学差异(P<0.05),其余3组间无统计学差异(P>0.05)。用LBP刺激巨噬细胞,LBP浓度为1000ng/ml时,TNF-α和IL-6分泌达到最高。LBP/LPS不孵育组中,TNF-α和IL-6分泌曲线在LBP/LPS为10出现最高峰。LBP/LPS预孵育组的TNF-α和IL-6分泌曲线较平缓,无明显分泌高峰。LPS浓度为1000ng/ml时IL-10为8±0pg/ml,其余组IL-10均小于5pg/ml。经析因分析,LPS和LBP之间有交互关系(F=3.425,P<0.01),两者是否预孵育和培养时间有交互作用(F=4.240,P=0.026),LBP浓度和是否预孵育之间有交互作用(F=4.896,P<0.01)。LPS浓度和是否预孵育,LPS浓度和培养时间,LBP浓度和培养时间均无明显交互作用(P>0.05)。结论 LPS是活化单核巨噬细胞的重要物质,LPS在高浓度时刺激巨噬细胞分泌细胞因子具有饱和现象。LBP本身在高浓度时具有刺激巨噬细胞的活性,低浓度的LBP能增强LPS对巨噬细胞的活化,高浓度LBP则起到负性调节作用。体外单核细胞经PMA分化成巨噬细胞后,再用LPS刺激,IL-10无明显分泌,引起炎性和负炎性因子的严重失衡。 展开更多
关键词 脂多糖类 脂多糖结合蛋白 肿瘤坏死因子α 白细胞介素-10 白细胞介素-6
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藤黄酸抑制NF-κB信号通路阻滞Raji细胞周期进程 被引量:7
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作者 王勇 陈燕 +4 位作者 吴小建 陈子 柯文娟 舒文秀 吴秋玲 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期169-172,共4页
目的探讨藤黄酸对人B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞系Raji细胞周期的影响及可能的信号通路。方法采用碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹检测Cyclin D3、Cyclin E和NF-κB蛋白表达。结果藤黄酸能明显抑制Raji细胞增殖,呈剂量... 目的探讨藤黄酸对人B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞系Raji细胞周期的影响及可能的信号通路。方法采用碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹检测Cyclin D3、Cyclin E和NF-κB蛋白表达。结果藤黄酸能明显抑制Raji细胞增殖,呈剂量依赖性阻滞Raji细胞周期于G0/G1期,下调Cyclin D3、Cyclin E和NF-κB蛋白表达。结论藤黄酸通过抑制调节Cyclin D3和Cyclin E的表达,阻滞细胞周期进程,该过程可能与NF-κB传导通路有关。 展开更多
关键词 藤黄酸 细胞周期 核因子-ΚB 细胞周期蛋白D3 细胞周期蛋白E
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PI3K/AKT/GSK-3β信号在脑缺血预处理中的作用及对海马细胞凋亡的影响 被引量:17
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作者 张慧 姜咏梅 尹琳 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期408-412,428,共6页
目的研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响。方法制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型。进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AK... 目的研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响。方法制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型。进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的蛋白表达,RT-PCR检测GSK-3β的转录。结果①与脑缺血组比较,CIPC组在神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞凋亡、GSK-3β蛋白表达及转录水平均降低(均P<0.05),但脑缺血组与LY294002组比较,上述各检测值差异均无统计学意义(均P>0.05);②与脑缺血组比较,CIPC组的p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的蛋白表达均增高,LY294002组各蛋白表达较CIPC组均降低(均P<0.05),LY294002组与脑缺血组比较各蛋白表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论脑缺血预处理降低GSK-3β的转录和蛋白表达,增加p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的表达,减少神经元凋亡。LY294002可抵消脑缺血预处理的保护作用。 展开更多
关键词 脑缺血预处理 磷脂酰肌醇激酶-3/丝苏氨酸蛋白激酶通路 糖原合成酶激酶-3Β 髓细胞淋巴瘤-1 3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1
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NF-κB介导ADMA上调大鼠腹腔巨噬细胞LOX-1的表达 被引量:6
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作者 徐雪晶 何军 +2 位作者 张新金 文渊 马业新 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期771-774,779,共5页
目的探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)上调大鼠腹腔巨噬细胞的氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达是否受核因子-κB(NF-κB)的调控。方法分离培养大鼠腹腔巨噬细胞。实验分组:正常对照组,以含10%胎牛血清(FBS)DMEM培养液与巨噬细胞共孵育... 目的探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)上调大鼠腹腔巨噬细胞的氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达是否受核因子-κB(NF-κB)的调控。方法分离培养大鼠腹腔巨噬细胞。实验分组:正常对照组,以含10%胎牛血清(FBS)DMEM培养液与巨噬细胞共孵育;氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)组,在培养液中加oxLDL(50 mg/L);A+O组,在培养液中加ADMA(15μmol/L)和oxLDL(50 mg/L);P+A+O组,在培养液中加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,25μmol/L)、ADMA(15μmol/L)o、xLDL(50 mg/L)。以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot分别检测LOX-1 mRNA和蛋白表达,以电泳迁移率变动分析(EMSA)和增强化学发光法(ECL)检测NF-κB活性。结果 oxLDL组与A+O组LOX-1 mRNA和蛋白表达比对照组明显增强,以A+O组尤为明显(均P<0.05);P+A+O组LOX-1mRNA和蛋白表达较A+O组降低(P<0.05)。与对照组相比,oxLDL组与A+O组NF-κB活性明显增强,以A+O组尤为明显(均P<0.05);P+A+O组NF-κB活性较A+O组降低(P<0.05)。相关分析:NF-κB活性与LOX-1 mRNA和蛋白表达量呈正相关(均为r=0.82,P<0.05)。结论 ADMA可能通过NF-κB途径增强LOX-1表达而促进巨噬细胞转化为泡沫细胞,促进动脉粥样硬化的发生发展。 展开更多
关键词 核因子-ΚB 非对称性二甲基精氨酸 氧化型低密度脂蛋白受体 巨噬细胞 动脉粥样硬化
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柚皮素通过抑制NF-κB信号通路减轻哮喘大鼠气道炎症反应 被引量:20
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作者 周旋 谭志团 +3 位作者 任翼 陈秋丽 吴虹 虞道锐 《天津医药》 CAS 北大核心 2021年第5期483-489,共7页
目的探讨柚皮素对哮喘大鼠气道炎症反应的影响及其作用机制。方法利用卵清蛋白(OVA)诱导建立哮喘大鼠模型,实验分为正常对照组、哮喘模型组、柚皮素100 mg/kg及柚皮素200 mg/kg组,实验结束后麻醉脱颈处死大鼠;Giemsa染色检测支气管肺泡... 目的探讨柚皮素对哮喘大鼠气道炎症反应的影响及其作用机制。方法利用卵清蛋白(OVA)诱导建立哮喘大鼠模型,实验分为正常对照组、哮喘模型组、柚皮素100 mg/kg及柚皮素200 mg/kg组,实验结束后麻醉脱颈处死大鼠;Giemsa染色检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞的数量及分类;HE染色观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测血清中核因子κB(NF-κB)的含量和BALF中辅助性T2(Th2)细胞因子的含量;免疫组化和实时定量PCR(qPCR)检测哮喘大鼠肺部NF-κB蛋白及mRNA的表达水平。脂多糖(LPS)诱导建立A549炎症细胞模型,柚皮素处理细胞后免疫荧光和Western blot检测A549细胞中NF-κB蛋白的表达水平。结果柚皮素100 mg/kg和柚皮素200 mg/kg组均可减少单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞对哮喘大鼠肺部和支气管的浸润,并可改善哮喘大鼠肺泡的生理结构,减少支气管黏膜上皮脱落,促进支气管假复层及纤毛结构修复。柚皮素可降低肺部NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA的表达(P<0.05),降低血清中NF-κB p65、NF-κB p50和BALF中Th2细胞因子白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13的含量(P<0.05)。在体外LPS诱导的炎症A549细胞中,柚皮素可降低NF-κB p65、NF-κB p50蛋白的表达,上调IκBα的表达(P<0.05)。结论柚皮素可有效减轻哮喘大鼠肺部和支气管的炎症反应,其潜在的作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 哮喘 NF-ΚB 炎症 A549细胞 白细胞介素类 柚皮素 气道炎症反应
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特异性标记胚胎干细胞分化的成血管细胞 被引量:5
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作者 李春 周诗君 +1 位作者 翟志敏 周海胜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期545-549,共5页
克隆小鼠flk1基因启动子和增强子,构建成血管细胞特异性表达GFP载体,并转染小鼠胚胎干细胞(ES)。将ES分化形成胚胎体(EB),观察EB中GFP表达,收集第4天的EB细胞进行流式细胞分析和分选,以获得GFP+细胞进行血细胞集落形成实验,以确定GFP标... 克隆小鼠flk1基因启动子和增强子,构建成血管细胞特异性表达GFP载体,并转染小鼠胚胎干细胞(ES)。将ES分化形成胚胎体(EB),观察EB中GFP表达,收集第4天的EB细胞进行流式细胞分析和分选,以获得GFP+细胞进行血细胞集落形成实验,以确定GFP标记细胞造血分化潜能。结果显示,成功构建成血管细胞特异性表达GFP载体;转染的ES形成的EB中可见绿色荧光细胞。流式细胞分析结果发现,转基因组EB中的GFP+细胞(27.5%)与对照组EB中FLK1+细胞(28.1%)比较差异无统计学意义;GFP+和FLK1+细胞形成集落数比较差异无统计学意义。表明对ES分化产生的成血管细胞实现了特异性标记,为后续研究ES体外造血分化的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 成血管细胞 造血细胞 细胞分化 胞标记
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体外培养人牙周膜成纤维细胞及其成骨表型特征检测 被引量:11
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作者 骆凯 闫福华 +3 位作者 金岩 刘源 赵宇 董蕊 《口腔医学》 CAS 2004年第1期8-10,共3页
目的 探讨牙周膜成纤维细胞作为牙周组织工程种子细胞的可行性。方法 采用酶消化法体外培养人牙周膜成纤维细胞 ,以人胎儿皮肤成纤维细胞为对照检测细胞碱性磷酸酶表达及矿化能力。结果 体外培养人牙周膜成纤维细胞与人胎儿皮肤成纤... 目的 探讨牙周膜成纤维细胞作为牙周组织工程种子细胞的可行性。方法 采用酶消化法体外培养人牙周膜成纤维细胞 ,以人胎儿皮肤成纤维细胞为对照检测细胞碱性磷酸酶表达及矿化能力。结果 体外培养人牙周膜成纤维细胞与人胎儿皮肤成纤维细胞相比表达更高水平的碱性磷酸酶 (P <0 .0 5 ) ,矿化诱导液连续培养 30d均可观察到矿化结节形成。结论 采用酶消化法可快速简便地获取原代人牙周膜成纤维细胞。体外培养牙周膜成纤维细胞具有成骨样细胞表型特征 ,与人胎儿皮肤成纤维细胞相比更具分化潜能 。 展开更多
关键词 牙周膜成纤维细胞 细胞培养 组织工程
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高良姜素通过PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路增强胃癌SGC-7901细胞对阿帕替尼的敏感性 被引量:18
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作者 贺文煜 张海明 袁昌劲 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第10期1020-1025,共6页
目的探讨高良姜素对阿帕替尼抗胃癌作用的影响及可能机制。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,3-( 4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(M TT)法筛选出高良姜素和阿帕替尼抑制胃癌细胞增殖的合适浓度。将胃癌细胞分为4组:空白对照组、... 目的探讨高良姜素对阿帕替尼抗胃癌作用的影响及可能机制。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,3-( 4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(M TT)法筛选出高良姜素和阿帕替尼抑制胃癌细胞增殖的合适浓度。将胃癌细胞分为4组:空白对照组、高良姜素组、阿帕替尼组和高良姜素+阿帕替尼组。MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Westernblot检测细胞凋亡及PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路相关蛋白表达。结果阿帕替尼和高良姜素均显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,并呈浓度依赖性(P<0 .05), 20mg/L阿帕替尼和300mg/L高良姜素是最佳的干预浓度。与20mg/L阿帕替尼组相比,高良姜素+阿帕替尼组可以明显抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。流式细胞术结果显示,高良姜素+阿帕替尼组对胃癌SGC-7901细胞促凋亡作用明显优于20mg/L阿帕替尼组(P<0.05)。Westernblot结果显示,高良姜素+阿帕替尼组Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化蛋白激酶B( p-Akt)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达明显高于20mg/L阿帕替尼组,B淋巴细胞瘤-2( Bcl-2)蛋白明显低于20mg/L阿帕替尼组(P<0 .05)。结论高良姜素可能通过抑制PI3K/Akt和激活p38-MAPK信号通路增强阿帕替尼抗胃癌SGC-7901细胞的作用。 展开更多
关键词 高良姜素 胃肿瘤 阿帕替尼 抗肿瘤作用 PI3K/AKT信号通路 p38-MAPK信号通路
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重庆地区汉族老年人群klotho G-395A、F352V与C370S基因多态性及其组合分布 被引量:4
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作者 田小春 马厚勋 +3 位作者 刘晓林 周平 吴平 翟福利 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-4,共4页
目的研究重庆地区汉族老年人群klotho G-395A、F352V与C370S 3个位点的单核苷酸多态性(SNP)及其等位基因频率、单倍型组合分布特征。方法利用单一等位基因特异性引物PCR技术检测klotho G-395A、F352V、C370S的SNP,应用聚类分析其基因多... 目的研究重庆地区汉族老年人群klotho G-395A、F352V与C370S 3个位点的单核苷酸多态性(SNP)及其等位基因频率、单倍型组合分布特征。方法利用单一等位基因特异性引物PCR技术检测klotho G-395A、F352V、C370S的SNP,应用聚类分析其基因多态性特征。结果 klotho G-395A SNP基因型分布GG、GA、AA分别为47.66%、42.58%、9.76%,G、A等位基因频率分别为68.95%、31.05%;klotho F352V SNP基因型分布FF、FV、VV分别为35.49%、59.09%、5.61%,F、V等位基因频率分别为65.04%、34.96%;klotho C370S SNP基因型分布CC CS、SS分别为37.30%、58.76%、3.88%,C、S等位基因频率分别为66.68%、33.32%。研究发现了klotho基因在3个位点的SNP前10种组合基因型分布:klothoG-395G+F352V+C370S 253例(16.92%),klotho G-395A+F352V+C370S 241例(16.12%),klotho G-395G+F352V+C370C 152例(10.17%),klotho G-395A+F352V+C370C 131例(8.76%),klotho G-395G+F352F+C370S 126例(8.43%),klotho G-395A+F352F+C370C 121例(8.09%),klotho G-395G+F352F+C370C 109例(7.29%),klotho G-395A+F352F+C370C 86例(5.75%),klotho A-395A+F352V+C370S 52例(3.48%),klotho A-395A+F352F+C370C 30例(2.01%),klotho G-395G+V352V+C370S 30例(2.01%)。结论本研究首次揭示了klotho基因的3个位点的SNP基因型组合分布特征,为进一步开展klotho基因及其表达研究提供了线索和依据。 展开更多
关键词 KLOTHO 单核苷酸多态性 组合分布 老年人
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依那西普对大鼠切口痛和脊髓TNF-α表达的影响 被引量:6
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作者 周子超 姚尚龙 +1 位作者 章沿峰 游志坚 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期460-464,共5页
目的观察依那西普对切口疼痛模型大鼠疼痛程度、痛阈和脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法雄性SD大鼠60只随机分为模型对照组(C组)和依那西普组(E组),按术后-1(术前1h)、4、8、16和24h随机分配大鼠,每组每时间点6只。戊巴比... 目的观察依那西普对切口疼痛模型大鼠疼痛程度、痛阈和脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法雄性SD大鼠60只随机分为模型对照组(C组)和依那西普组(E组),按术后-1(术前1h)、4、8、16和24h随机分配大鼠,每组每时间点6只。戊巴比妥钠麻醉大鼠后,对大鼠左足底实施手术刺激;C组大鼠鞘内注射生理盐水10μl,E组大鼠鞘内注射可溶性TNF-α受体依那西普100μg(10μl)。用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375分别测定大鼠机械性痛阈和热痛阈;用RT-PCR方法测定腰脊髓TNF-αmRNA的表达,用Westernblot方法测定脊髓TNF-α蛋白的表达。结果①术后两组大鼠累积疼痛评分(CPS)均升高(P<0.01),E组术后各时间点CPS低于C组(P<0.05或<0.01)。②术后两组大鼠机械性痛阈(HWMT)和热痛阈(HWTL)明显下降(P<0.01),术后各时间点E组大鼠HWMT、HWTL均明显高于C组(P<0.05或P<0.01)。③术后两组大鼠脊髓TNF-αmRNA及蛋白表达均上调(P<0.01),术后各时间点E组大鼠脊髓TNF-αmRNA及蛋白表达水平均明显低于C组(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠脊髓TNF-α参与了手术后疼痛的产生和维持,可溶性TNF-α受体依那西普可抑制大鼠切口痛和脊髓TNF-α mRNA及蛋白表达。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α 机械性痛阈 热痛阈
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