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血清NT-proBNP与cTnT水平在不同NYHA心功能分级患者中的差异及其对预后的影响
1
作者 靳星 杨凯丽 +1 位作者 曹子倬 马蓉 《中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生》 2024年第11期0094-0097,共4页
探讨血清NT-proBNP与cTnT水平在不同NYHA心功能分级患者中的差异。方法 选取我院2020年1月至2023年6月收治的100例不同程度慢性心力衰竭(CHF)患者作为观察组,另选同期100例健康体检者作为对照组,对两组个体的血清NT-proBNP与cTnT进行检... 探讨血清NT-proBNP与cTnT水平在不同NYHA心功能分级患者中的差异。方法 选取我院2020年1月至2023年6月收治的100例不同程度慢性心力衰竭(CHF)患者作为观察组,另选同期100例健康体检者作为对照组,对两组个体的血清NT-proBNP与cTnT进行检测和比较。并根据观察组中NYHA心功能分级不同,对比不同心功能分级血清NT-proBNP与cTnT水平的差异,以Spearman相关性分析对NT-proBNP、cTnT与NYHA分级的相关性进行探讨。对患者进行24个月随访,记录观察组患者的死亡情况,并通过受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清NT-proBNP与cTnT在预测患者NYHA分级方面的效能。结果 观察组的血清NT-proBNP与cTnT水平高于对照组(P<0.05)。NYHA分级为Ⅰ级的患者,NT-proBNP与cTnT水平低于Ⅱ~Ⅳ级患者(P<0.05),Ⅱ级患者低Ⅲ~Ⅳ级患者(P<0.05),Ⅲ级患者低于Ⅳ级患者(P<0.05)。Spearman相关性分析,NT-proBNP、cTnT与NYHA分级之间存在相关性(P<0.05)。通过受试者工作特征(ROC)曲线对NT-proBNP、cTnT指标应用于预测患者预后过程中的效能进行分析,NT-proBNP的曲线下面积为0.884(P<0.05),cTnT的曲线下面积为0.953(P<0.05)。结论 血清NT-proBNP与cTnT水平在不同NYHA心功能分级患者中的差异显著,同时NT-proBNP、cTnT指标与患者的心功能分级相关,且NT-proBNP、cTnT指标在预测患者预后方面具有较为良好的效果。 展开更多
关键词 NT-PROBNP CTNT 心功能分级 预后
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PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法 被引量：40
2
作者 胡晓红 彭惠民 +2 位作者 刘昕 黄正根 袁科 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期155-158,共4页
目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提... 目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。 展开更多
关键词 DNA提取 PCR 实时荧光定量PCR
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腺苷脱氨酶ADAR1调控肺腺癌细胞放射敏感性的研究
3
作者 陈才 杨文娣 +5 位作者 陈柯宏 张雅倩 曾洪 彭媛 张晓月 杨镇洲 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1378-1386,共9页
目的研究下调ADAR1基因表达对肺腺癌细胞放射敏感性的影响。方法慢病毒转染下调肺腺癌细胞A549的ADAR1基因,分别设阴性对照组(shNC)和ADAR1敲降组(shADAR1),同时以单次剂量0 Gy和6 Gy X射线照射为干预条件。采用蛋白免疫印迹和RT-qPCR... 目的研究下调ADAR1基因表达对肺腺癌细胞放射敏感性的影响。方法慢病毒转染下调肺腺癌细胞A549的ADAR1基因,分别设阴性对照组(shNC)和ADAR1敲降组(shADAR1),同时以单次剂量0 Gy和6 Gy X射线照射为干预条件。采用蛋白免疫印迹和RT-qPCR分别检测A549细胞转染后ADAR1的蛋白和mRNA表达水平。CCK-8实验、伤口愈合实验及Transwell迁移实验检测细胞增殖、迁移能力。克隆形成实验检测下调ADAR1对A549细胞放射敏感性的影响。流式细胞术、蛋白免疫印迹实验检测细胞凋亡及相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。细胞免疫荧光、蛋白免疫印迹实验检测γ-H2AX的表达水平。彗星实验检测细胞DNA损伤程度。4~6周、体质量16~18 g雌性裸鼠12只,用随机数表法分为(n=3):shNC组、shADAR1组、阴性对照联合电离辐射(Ionizing radiation,IR)组(shNC+IR)和ADAR1敲低联合IR组(shADAR1+IR),通过皮下成瘤实验检测不同组细胞在体内生长情况。结果蛋白免疫印迹和RT-qPCR实验显示A549 shADAR1细胞ADAR1的蛋白及mRNA表达量均明显降低(P<0.05)。CCK-8实验、伤口愈合实验及Transwell迁移实验结果显示下调ADAR1抑制A549细胞的增殖、迁移能力,IR后这种抑制趋势更加明显(P<0.01)。细胞克隆形成实验结果显示随着辐射剂量增加,两组的克隆形成率均有下降,但shADAR1组形成的克隆数低于shNC组。流式细胞术及蛋白免疫印迹实验结果显示下调ADAR1增加A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达(P<0.01),减少Bcl-2蛋白表达(P<0.05),IR后A549 shADAR1细胞凋亡率、Bax蛋白水平进一步升高(P<0.01),Bcl-2蛋白水平进一步降低(P<0.01)。A549 shADAR1细胞经IR后γ-H2AX foci数目及蛋白表达量明显升高(P<0.05),彗星实验结果显示A549 shADAR1细胞经IR后DNA损伤更加明显(P<0.01)。裸鼠皮下成瘤实验结果显示A549 shADAR1细胞皮下成瘤经IR后其生长受到明显抑制(P<0.01)。结论下调ADAR1可显著抑制IR后A549细胞的增殖、迁移,促进细胞凋亡及DNA损伤,从而增加肺腺癌细胞的放射敏感性。 展开更多
关键词 ADAR1 放射敏感性 肺腺癌 DNA损伤
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miR-29通过ITGB1抑制胃癌侵袭、转移的分子机制 被引量：11
4
作者 何兵 余松涛 +3 位作者 吕沐瀚 吴玉云 胡长江 杨仕明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1037-1042,共6页
目的观察miR-29对胃癌细胞体外侵袭力的影响,探讨miR-29通过ITGB1调节胃癌侵袭和转移的具体机制。方法通过基因芯片筛选胃癌与癌旁组织中差异性表达的miRNA;采用生物信息学预测ITGB1调控相关miRNA,通过比对上述2个结果,筛选出miR-29;进... 目的观察miR-29对胃癌细胞体外侵袭力的影响,探讨miR-29通过ITGB1调节胃癌侵袭和转移的具体机制。方法通过基因芯片筛选胃癌与癌旁组织中差异性表达的miRNA;采用生物信息学预测ITGB1调控相关miRNA,通过比对上述2个结果,筛选出miR-29;进一步以miR-29慢病毒及miR-29mimics过表达miR-29后,用Western blot检测胃癌细胞中ITGB1的表达变化;采用双荧光素酶实验分析miR-29与ITGB1的作用机制;采用Transwell侵袭实验及划痕实验检测miR-29慢病毒感染后细胞体外侵袭能力的变化;qRT-PCR检测60例胃癌患者癌组织和癌旁组织中miR-29的表达差异,并分析miR-29的表达与肝癌患者临床病理之间的关系。结果基因芯片及生物信息学预测发现miR-29在胃癌组织里高表达,同时又可能调控ITGB1;双荧光素酶实验证实miR-29可以结合在ITGB13'UTR,miR-29慢病毒及miR-29mimics过表达miR-29都能在蛋白水平下调ITGB1;qRT-PCR结果显示miR-29家族3条miRNA在胃癌组织中的相对含量均低于癌旁组织[miR-29a:癌旁(32.01±10.38),癌(14.16±6.25);miR-29b:癌旁(26.95±5.05),癌(9.82±1.86);miR-29c:癌旁(53.56±8.05),癌(16.79±1.97),P<0.01];进一步统计学分析表明,miR-29a与淋巴结转移有关(P<0.05),miR-29b在具有远处转移的病例组织中C/P比值较无远处转移的病例组织明显降低(P<0.05)。结论miR-29可以在转录后水平调控ITGB1的表达,从而抑制胃癌细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 ITGB1 MIR-29 胃肿瘤 肿瘤转移
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特异性ILK-siRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响 被引量：6
5
作者 朱军 高娟 +2 位作者 李红彦 潘湘阳 陈俊霞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期360-364,共5页
目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测E... 目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测EJ细胞中ILK mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILK mRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与3个对照组比较,转染pGenSil-1 siRNA1与pGensil-1 siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP-2及MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。 展开更多
关键词 RNA 小分子干扰 膀胱肿瘤 细胞系 肿瘤 侵袭 迁移 整合素连接激酶
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真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-sponge的构建及其表达活性研究 被引量：6
6
作者 胡燕 廖珍媛 +4 位作者 李永菊 陈超 朱顺飞 熊思东 徐林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期33-37,共5页
目的构建靶向miR-126的真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-海绵体(sponge),并探讨其下调miR-126的表达对肝癌HepG2细胞体外生长的影响,为后续深入研究miR-126在肝癌发生中的作用提供前期实验基础。方法合成miR-126-sponge,构建pEGFP-C2-miR-... 目的构建靶向miR-126的真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-海绵体(sponge),并探讨其下调miR-126的表达对肝癌HepG2细胞体外生长的影响,为后续深入研究miR-126在肝癌发生中的作用提供前期实验基础。方法合成miR-126-sponge,构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体,体外瞬时转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察EGFP的表达情况;Real-time PCR检测细胞中miR-126的表达水平;MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖变化;划痕实验观察细胞的体外迁移能力改变。结果成功构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体(命名为p-miR-126-sp);Real-time PCR结果显示,与对照组(p-Cont)相比,p-miR-126-sp组中miR-126表达水平显著降低(P<0.05);MTT检测发现,p-miR-126-sp组中细胞增殖数目明显减少(P<0.05);此外,p-miR-126-sp组的克隆形成数和细胞迁移数均明显减少(P<0.05)。结论 miR-126-sponge可显著下调miR-126的表达水平进而抑制肝癌细胞HepG2的体外增殖及迁移能力。 展开更多
关键词 miR-126-sponge 肝癌 HEPG2细胞 细胞增殖
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人β_3肾上腺素受体真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β_3-AR的构建及表达 被引量：7
7
作者 曾凡新 董志 +1 位作者 傅洁民 刘晓海 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第21期2070-2072,共3页
目的构建人β3肾上腺素受体(β3-AR)的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR,并通过脂质体介导转染HEK293细胞使之表达该受体蛋白。方法以pENTR_ADRB3-Stop质粒为模板,采用PCR法扩增出人β3-AR cDNA,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建... 目的构建人β3肾上腺素受体(β3-AR)的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR,并通过脂质体介导转染HEK293细胞使之表达该受体蛋白。方法以pENTR_ADRB3-Stop质粒为模板,采用PCR法扩增出人β3-AR cDNA,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建成真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR。将该质粒转染HEK293真核细胞,通过RT-PCR检测β3-AR mRNA在HEK293细胞内的表达,通过免疫荧光法检测β3-AR蛋白在HEK293细胞中的表达。结果酶切和DNA测序鉴定均证实重组质粒含有人β3-AR编码区全长。在转染重组质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR的HEK293细胞中检测到了β3-AR基因的转录和翻译产物。结论通过基因工程方法成功构建了β3-AR的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β-AR,为进一步建立β-AR的稳定表达细胞株,用于筛选高效、高选择性β-AR激动剂奠定了基础。 展开更多
关键词 Β3肾上腺素受体 真核表达载体 HEK293细胞
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RNAi抑制大肠癌HCT116细胞株VEGF-mRNA表达的实验研究 被引量：6
8
作者 吕伟 郝嘉 +1 位作者 郝迎学 张超 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1089-1092,共4页
目的　研究载体介导的RNAi(RNAinterference)技术对大肠癌细胞株HCT116中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)mRNA表达的抑制作用。方法　依据Tuschl等设计siRNA的原则,以VEGF为靶基因设计并合成有小发夹结构的两... 目的　研究载体介导的RNAi(RNAinterference)技术对大肠癌细胞株HCT116中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)mRNA表达的抑制作用。方法　依据Tuschl等设计siRNA的原则,以VEGF为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆到载体Pavu6+ 2 7中构建重组体(Pavu6+ 2 7 VEGFsiR NA)。DOTAP脂质体法转染重组体至大肠癌HCT116细胞株,经G418筛选,以空质粒(Pavu6+ 2 7)转染为对照;半定量RT PCR法观察HCT116细胞中VEGF mRNA表达改变。结果　①成功构建发卡样VEGFsiRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体(Pavu6+ 2 7 VEGFsiRNA) ;②Pavu6+ 2 7 VEGFsiRNA转染HCT116细胞后,VEGF mRNA表达较空载体Pavu6+ 2 7转染的对照组显著下降。结论　成功构建载体介导的VEGF靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制HCT116细胞中VEGF mRNA表达,为下一步利用RNAi技术抑制肿瘤血管形成以及局部侵袭和远处转移提供研究基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 HCT116 VEGF
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β-TrCP-OD-HA重组腺病毒对白血病K562细胞凋亡的影响 被引量：3
9
作者 罗红伟 田文君 +4 位作者 季茂胜 刘钉宾 王小飞 黄宗干 冯文莉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第15期1602-1604,共3页
目的研究癌蛋白Bcr-Abl被泛素-蛋白酶体系统靶向降解的可能性及诱导白血病K562细胞凋亡的作用。方法含有Bcr-Abl融合蛋白N端寡聚化区(OD)的重组腺病毒Ad5β-TrCP-OD-HA特异性结合Bcr-Abl融合蛋白的N端寡聚化区(OD),通过感染将嵌合泛素... 目的研究癌蛋白Bcr-Abl被泛素-蛋白酶体系统靶向降解的可能性及诱导白血病K562细胞凋亡的作用。方法含有Bcr-Abl融合蛋白N端寡聚化区(OD)的重组腺病毒Ad5β-TrCP-OD-HA特异性结合Bcr-Abl融合蛋白的N端寡聚化区(OD),通过感染将嵌合泛素连接酶β-TrCP运送到靶细胞K562细胞,同时,β-TrCP基因突变的重组腺病毒Ad5△F-TrCP-OD-HA和仅含绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒Ad5GFP,分别作为对照。感染后,Western blot检测Bcr-Abl融合蛋白的表达;倒置显微镜、光镜和电镜观察细胞形态学变化。结果成功建立携β-TrCP-OD-HA、△F-TrCP-OD-HA的重组腺病毒的K562细胞株,重组腺病毒感染K562细胞后,Ad5β-TrCP-OD-HA组的Bcr-Abl融合蛋白含量下降,与Ad5β-TrCP-OD-HA组、Ad5GFP组及对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);倒置显微镜可见Ad5β-TrCP-OD-HA作用后细胞体积变小、形态不规则;光镜下发现胞体变小,细胞质空泡,细胞核出现碎裂和凋亡小体;电镜观察到出现了典型的细胞凋亡的超微结构。结论重组腺病毒介导的β-TrCP-OD-HA在白血病K562细胞内能够降低Bcr-Abl融合蛋白含量,并且诱导K562细胞发生了凋亡。 展开更多
关键词 Bcr—Abl融合蛋白 泛素连接酶 β-TrCP K562细胞 细胞凋亡
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pSiRNA-Notch1逆转录病毒载体的构建及对恶性脑胶质瘤细胞的作用 被引量：4
10
作者 尹昌林 吕胜青 +3 位作者 黄轶 李光辉 唐莉 杨辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1211-1214,共4页
目的建立逆转录病毒介导的人Notch1基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用。方法将人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer5.1-H1Retro中,构建成携带人Notch1基因RNAi逆转录病毒载体pSiRNA-Not... 目的建立逆转录病毒介导的人Notch1基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用。方法将人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer5.1-H1Retro中,构建成携带人Notch1基因RNAi逆转录病毒载体pSiRNA-Notch1,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染U251和CHG-5恶性脑胶质瘤细胞,用WST-8、RT-PCR和Western blot分别检测对转染细胞活性、人Notch1 mRNA和蛋白表达的影响。结果重组pSiRNA-Notch1质粒经测序鉴定正确。重组逆转录病毒滴度可达224×104cfu/ml,感染U251和CHG-5恶细胞后3d能明显抑制细胞生长,RT-PCR和Western blot检测人Notch1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论携带人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段的逆转录病毒有明显的抑制恶性脑胶质瘤细胞生长作用,为下一步开展基因治疗恶性脑胶质瘤奠定了基础。 展开更多
关键词 pSiRNA—Notch1逆转录病毒载体 恶性脑胶质瘤 基因治疗
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RhoC-siRNA表达载体对肝癌细胞生长速度及侵袭力的影响 被引量：6
11
作者 郑文建 梁平 赵弘智 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期1779-1782,共4页
目的构建RhoC-siRNA表达载体,研究其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法构建RhoC-siRNA表达载体,以脂质体转染法将之稳定转染入SK-Hep1肝癌细胞株,Western blot法鉴定转染细胞中RhoC蛋白表达的抑制情况,观察转染前后肝癌细胞形态、生长... 目的构建RhoC-siRNA表达载体,研究其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法构建RhoC-siRNA表达载体,以脂质体转染法将之稳定转染入SK-Hep1肝癌细胞株,Western blot法鉴定转染细胞中RhoC蛋白表达的抑制情况,观察转染前后肝癌细胞形态、生长曲线、黏附、运动及体外侵袭能力的改变。结果酶切及测序证实RhoC-siRNA真核表达载体构建成功,将之转染入肝癌细胞后,细胞中RhoC蛋白表达水平降低达60%,细胞形态及生长速度无明显改变,但细胞黏附、运动能力及体外侵袭能力均降低。结论RhoC-siRNA表达载体对肝癌细胞的形态及生长曲线无显著影响,但可抑制其体外侵袭转移能力,可为肝癌的生物学治疗提供新的方法。 展开更多
关键词 RHOC SIRNA 肝癌细胞 侵袭
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dHMN-V型家系BSCL2基因和GARS基因突变分析 被引量：3
12
作者 李清华 刘承伟 +3 位作者 林剑锋 林小慧 陈梅玲 吴岚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期2115-2117,共3页
目的报告1个远端型遗传性运动神经病V型(distal hereditary motor neuronopathyV,dHMN-V)家系,并探讨与BSCL2(berardinelli-seip congenital lipody-strophy2)基因和GARS基因(glycyltRNA synthetase)突变的关系。方法对该家系进行临床... 目的报告1个远端型遗传性运动神经病V型(distal hereditary motor neuronopathyV,dHMN-V)家系,并探讨与BSCL2(berardinelli-seip congenital lipody-strophy2)基因和GARS基因(glycyltRNA synthetase)突变的关系。方法对该家系进行临床及电生理检查,并应用PCR直接测序法对先证者及其部分家系成员进行GARS基因全部17个外显子和BSCL2基因3号外显子突变检测。结果该家系5代共13例患者,临床主要表现为成年起病,开始为单或双手大鱼际肌萎缩,逐渐出现小鱼际肌、手部骨间肌萎缩,遇冷挛缩,继而出现足趾骨间肌萎缩;肌电图提示运动神经神经传导速度降低,而感觉神经神经传导速度基本正常;突变分析结果显示该家系BSCL2基因3号外显子糖基化位点无突变,在GARS基因也未发现致病突变,仅在内含子区和外显子非编码区发现3个多态,分别为IVS18+136G→A,IVS17-6C→T和C.-39G>C,其中IVS18+136G→A,IVS17-6C→T为新发现的2个多态。结论 dHMN-V具有临床和遗传异质性,其可能存在除BSCL2基因和GARS基因外的新的基因位点。 展开更多
关键词 远端型遗传性运动神经病V型 GARS基因 BSCL2基因 基因突变
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TSG101-siRNA对肝癌耐药细胞株QGY／CDDP的逆转作用 被引量：4
13
作者 向征 张才全 汤为学 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期170-173,共4页
目的构建TSG101(tumor susceptibility gene101)小干扰RNA(TSG101-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物顺铂(CDDP)对肝癌耐药细胞株QGY/CDDP增殖的影响。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101... 目的构建TSG101(tumor susceptibility gene101)小干扰RNA(TSG101-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物顺铂(CDDP)对肝癌耐药细胞株QGY/CDDP增殖的影响。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;RT-PCR检测TSG101-siRNA对QGY/CDDP细胞tsg101mRNA表达的影响;Western blot检测TSG101-siRNA对TSG101基因表达蛋白的抑制效率;采用MTT法测定TSG101-siRNA联合化疗药物CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制作用。结果测序显示干扰载体构建成功,TSG101-siRNA能抑制tsg101mRNA表达,使QGY/CDDP细胞TSG101蛋白的表达下降,抑制QGY/CDDP细胞的增殖,明显增强CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制。结论TSG101-siRNA的真核表达载体能有效地抑制QGY/CDDP细胞的增殖,提高化疗药物CDDP对QGY/CDDP的抑制率,能逆转肝癌耐药细胞株QGY/CDDP对CDDP的耐药性。 展开更多
关键词 肝癌 耐药 小干扰RNA TSG101
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甲状腺乳头状癌中B-raf基因V600E突变的检测方法对比分析 被引量：5
14
作者 阳宇 杜晓华 +2 位作者 刘影 郑细闰 郑广娟 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期815-816,共2页
甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，女性多于男性，约90％甲状腺癌为甲状腺乳头状癌（papillary thyroid careinoma,PTC）。近年，甲状腺癌的发病率呈上升趋势，B—raf基因与PTC密切相关，最多见的突变位点为V600E，是目前分析和检测... 甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，女性多于男性，约90％甲状腺癌为甲状腺乳头状癌（papillary thyroid careinoma,PTC）。近年，甲状腺癌的发病率呈上升趋势，B—raf基因与PTC密切相关，最多见的突变位点为V600E，是目前分析和检测的热点。本文回顾性分析136例PTC的B—raf基因V600E突变，并采用免疫组化Ventana BenchMark法和RT．PCR法进行检测，分析两种方法的一致性， 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 乳头状癌 B-RAF V600E
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洛伐他汀对BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞p21的影响 被引量：2
15
作者 罗远琼 糜漫天 +2 位作者 许红霞 韦娜 张乾勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期386-389,共4页
目的　探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (LOV)对高表达BRCA1基因MCF 7乳腺癌细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p2 1的影响。方法　应用基因转染技术获得BRCA1高表达的MCF 7乳腺癌细胞 (MCF 7BRCA1)。 8μmol/LLOV处理细胞 1、2、3d后 ,通过... 目的　探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (LOV)对高表达BRCA1基因MCF 7乳腺癌细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p2 1的影响。方法　应用基因转染技术获得BRCA1高表达的MCF 7乳腺癌细胞 (MCF 7BRCA1)。 8μmol/LLOV处理细胞 1、2、3d后 ,通过MTT、Western blot等方法检测MCF 7及MCF 7BRCA1两种细胞的增殖功能以及周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p2 1表达的改变。结果　LOV处理后 ,细胞生长减慢 ,细胞的增殖能力降低 ,而p2 1的蛋白表达增加 ,其中 ,以BRCA1基因转染的细胞经LOV处理后变化更为显著。结论　BRCA1基因能增强LOV对MCF 7乳腺癌细胞的增殖抑制作用 ,诱导周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p2 1活性增加 ,推测这可能是LOV抑制BRCA1基因高表达MCF 7乳腺癌细胞增殖的重要分子机制之一。 展开更多
关键词 LOVASTATIN MCF-7细胞 细胞增殖 乳腺癌 P21
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pCS^(2+)-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备 被引量：2
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作者 丁可军 何志旭 +3 位作者 舒莉萍 许威 姬牧远 杨小燕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1119-1120,共2页
目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入... 目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入片段序列测序鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成DIG-FLASH基因反义mRNA探针。结果RT-PCR法扩增出长度为533bp的特异性产物,构建的pCS2+-FLASH重组质粒经酶切鉴定和测序结果与预期相符;用FLASH反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观察到FLASH在野生型斑马鱼神经系统中存在表达。结论成功构建了pCS2+-FLASH重组质粒及FLASH基因反义mRNA探针。 展开更多
关键词 斑马鱼 pCS^2+ FLASH 反义mRNA
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细胞死亡调控基因GRIM19重组腺病毒的构建及在恶性胶质瘤CHG-5细胞中的表达 被引量：2
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作者 姚声涛 黄轶 +1 位作者 曾昭淳 唐文渊 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第23期2194-2197,共4页
目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤CHG-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及E... 目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤CHG-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5183(pAdeasy)菌内同源重组,筛选阳性克隆,酶切测序鉴定,线性化后转染293T细胞进行包装、扩增、纯化,PCR检测病毒上清,TCID50法测定病毒滴度并感染CHG-5细胞后Western免疫印迹法验证GRIM19蛋白表达。结果连接重组后经酶切和测序法筛选出pAd-GRIM19;转染293T包装细胞,观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,细胞生长状态良好,未见明显细胞毒作用。Ad-GRIM19及Ad-EGFP初纯病毒经氯化铯梯度离心纯化最终获得约5×1010U/ml与8×1010U/ml滴度的重组病毒;将其体外感染胶质瘤CHG-5细胞,均能达到90%左右的感染率,Western免疫印迹法表明Ad-GRIM19感染组GRIM19蛋白表达明显升高。结论成功构建了携带GRIM19基因的重组腺病毒,为体内外进一步研究GRIM19对脑胶质瘤的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 GRIM19 腺病毒 胶质瘤细胞 CHG-5
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甲基化特异性多重连接探针扩增及甲基化特异性PCR诊断Prader-Willi综合征方法比较 被引量：5
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作者 王薇 魏珉 +3 位作者 宋红梅 邱正庆 施惠萍 赵时敏 《协和医学杂志》 2014年第4期369-375,共7页
目的应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)和甲基化特异性多重连接探针扩增(methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification,MS-MLPA)方法对Prader-Willi综合征(Prader-Willi syndrome,PWS)... 目的应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)和甲基化特异性多重连接探针扩增(methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification,MS-MLPA)方法对Prader-Willi综合征(Prader-Willi syndrome,PWS)进行诊断并比较两种方法的差异。方法回顾性研究2005年10月至2014年2月到北京协和医院就诊的患儿及正常对照共102例,男57例,女45例。其中正常对照16例;荧光原位杂交或高分辨染色体确诊PWS阳性对照2例;临床疑似PWS患儿84例。提取受试者外周血基因组DNA分别应用MS-PCR及MS-MLPA方法进行基因分析,对疑似患儿进行确诊和遗传类型分型,并计算两种方法的特异性、敏感性及准确度,应用卡方检验对两种方法进行比较。结果 MSPCR结果示正常对照及阳性对照与其表型全部相符,84例疑似患儿中有39例提示为PWS,45例提示正常。MS-MLPA结果示除正常对照外的86例受试者中,29例提示为父源缺失型PWS;9例提示为母源二体型PWS;47例提示为正常;1例因DNA过于陈旧未检出有效结果。对比两种方法检测结果,有2例MS-PCR结果显示为PWS,但MS-MLPA结果显示为正常,通过增加DNA用量重新进行MS-PCR检测后,除外PWS。结合临床表现,受试者中明确诊断PWS的患儿39例,非PWS者63例。MS-PCR方法共出现2例假阳性,假阳性率为3.17%(2/63)。MS-PCR方法敏感性100%,特异性96.83%,准确度98.03%;MS-MLPA方法敏感性97.43%,特异性100%,准确度99.02%。两种方法的敏感性、特异性及准确度差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 MS-PCR及MS-MLPA敏感性、特异性及准确度皆佳,均可用于PWS诊断,MS-MLPA可区分父源缺失型及母源二体型。MS-PCR应保证DNA用量充足以避免假阳性出现。MS-MLPA应使用新鲜提取的DNA,且实验条件要求更为严格。建议同时使用两种方法检测以获得准确结果。 展开更多
关键词 Prader-Will综合征 甲基化特异性PCR 甲基化特异性多重连接探针扩增
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融合型自杀基因Fcy∶∶Fur/5-FC对人卵巢癌细胞杀伤作用的研究 被引量：1
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作者 伍霞 钟玲 +2 位作者 池余刚 蒋兴伟 王勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第23期2226-2228,共3页
目的研究融合型自杀基因Fcy∶∶Fur联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对人卵巢癌细胞株(SKOV3)的杀伤作用。方法构建含有融合型自杀基因Fcy∶∶Fur的荧光真核表达质粒,转染SKOV3细胞,筛选稳定表达的细胞株,RT-PCR和Western blot检测Fcy∶∶Fur表达。... 目的研究融合型自杀基因Fcy∶∶Fur联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对人卵巢癌细胞株(SKOV3)的杀伤作用。方法构建含有融合型自杀基因Fcy∶∶Fur的荧光真核表达质粒,转染SKOV3细胞,筛选稳定表达的细胞株,RT-PCR和Western blot检测Fcy∶∶Fur表达。以MTT法和FCM法检测5-FC对Fcy∶∶Fur转基因细胞的杀伤效应。结果测序鉴定证实插入片段正确。细胞转染24h后,60%转染细胞发出绿色荧光。经G418筛选,RT-PCR和Westernblot法检测到Fcy∶∶Fur表达。加入5-FC后,MTT法检测到明显杀伤效应,FCM法检测到显著凋亡峰。结论融合型自杀基因Fcy∶∶Fur联合5-FC对人卵巢癌细胞SKOV3有明显的杀伤作用。 展开更多
关键词 自杀基因 Fcy∶∶Fur 基因转染 稳定表达 SKOV3
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人乳腺癌细胞HYAL1基因真核表达载体的构建及其在MCF-7和ZR-75-30细胞中的表达 被引量：1
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作者 苏新良 任国胜 +1 位作者 王小毅 谭金祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期146-149,共4页
目的构建人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体并稳定转染HYAL1基因低表达的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞株,为进一步探讨HYAL1基因在乳腺癌的侵袭和转移中的作用奠定基础。方法采用RT-PCR技术从高表达HYAL1的人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中扩... 目的构建人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体并稳定转染HYAL1基因低表达的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞株,为进一步探讨HYAL1基因在乳腺癌的侵袭和转移中的作用奠定基础。方法采用RT-PCR技术从高表达HYAL1的人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中扩增透明质酸酶HYLAL1基因,并将其插入真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,构建的重组表达质粒经脂质体介导转染HYAL1基因低表达的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞。结果用RT-PCR成功地扩增出1条1332bp的DNA片段,经限制性内切酶酶切分析和DNA测序证明已经成功构建了人乳腺癌HY-AL1基因的真核表达载体。RT-PCR证明转染了重组质粒的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞可以高效稳定的表达HYAL1基因,且其穿透细胞外基质的能力增强。结论成功构建了人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体,获得了稳定表达人HYAL1基因的MCF-7和ZR-75-30细胞克隆,且其侵袭能力增强。 展开更多
关键词 透明质酸酶 HYAL1 真核表达 乳腺癌细胞 侵袭
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