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山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：2
1
作者 高纪振 周丽梅 +3 位作者 王爱华 靳亚平 宋毓民 吴庆侠 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第8期25-30,共6页
【目的】制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。【方法】以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD5... 【目的】制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。【方法】以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD58间接竞争ELISA检测方法,对不同生理时期山羊血清中CD58的含量进行检测。【结果】筛选出1株稳定分泌抗CD58单克隆抗体的杂交瘤细胞株G6;玫瑰花环抑制试验和Western-blotting试验表明,制备的细胞株能分泌针对CD58的特异性单克隆抗体;对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建立了检测CD58的间接竞争ELISA方法,该方法最适可测范围为10-1000000 ng/mL,理论最低检测限为3.087 ng/mL,批内和批间平均变异系数分别为3.50%和5.22%;用建立的方法检测未发情和发情山羊血清中CD58含量分别为（32.160±3.69）和（35.929±3.08）μg/mL,怀孕山羊血清中CD58含量为（61.564±5.10）μg/mL。【结论】建立了山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法,该方法敏感、特异,具有良好的重复性对不同生理时期山羊血清中CD58含量的检测表明，怀孕山羊血清中CD58含量显著高于未发情和发情山羊。 展开更多
关键词 CD58蛋白 单克隆抗体 间接竞争ELISA方法
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