禽用活病毒载体疫苗的研究进展

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作者 王丽华 宋亚芬 +3 位作者 张兵 张乾义 赵永达 杨承槐 《中国兽药杂志》 2024年第8期70-79,共10页

疫苗接种是家禽疾病防控最有效的策略之一,随着分子生物学的发展,重组DNA技术被广泛用于许多新型家禽疫苗的构建和生产中。就近年来常用的火鸡疱疹病毒、鸭瘟病毒、传染性喉气管炎病毒、禽痘病毒、新城疫病毒等活病毒载体疫苗研究进展... 疫苗接种是家禽疾病防控最有效的策略之一,随着分子生物学的发展,重组DNA技术被广泛用于许多新型家禽疫苗的构建和生产中。就近年来常用的火鸡疱疹病毒、鸭瘟病毒、传染性喉气管炎病毒、禽痘病毒、新城疫病毒等活病毒载体疫苗研究进展进行综述,分析其临床应用、优缺点等,为开发更加安全有效的家禽活病毒载体疫苗提供参考。 展开更多

关键词 家禽 病毒载体 疫苗

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猪细小病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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作者 杨奕 吴发兴 +4 位作者 康京丽 孙洪涛 王志亮 许信刚 张琪 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期75-79,共5页

旨在建立一种猪细小病毒(PPV)快速准确PCR检测方法,根据PPV VP2基因的保守序列设计并合成1对特异性引物和1条特异性探针,建立了可检测PPV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。建立的检测方法敏感性高,最低可检测8.76×10^(1)copies/μL的P... 旨在建立一种猪细小病毒(PPV)快速准确PCR检测方法,根据PPV VP2基因的保守序列设计并合成1对特异性引物和1条特异性探针,建立了可检测PPV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。建立的检测方法敏感性高,最低可检测8.76×10^(1)copies/μL的PPV VP2基因标准品;特异性试验结果显示,该方法检测猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应;重复性试验组内与组间变异系数均低于2%,重复性良好。用该方法检测102份临床样本,检出阳性样本16份,阳性检出率为15.69%,将检测出的阳性样本进行PCR扩增并测序,证实检测样品中确实存在PPV。该方法敏感性高、特异性强,适用于PPV的定量检测及猪细小病毒病的流行病学调查。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2 TAQMAN探针 荧光定量PCR

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猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达及在ELISA中的初步应用 被引量：5

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作者 赵玲 朱玲 +3 位作者 郭万柱 徐志文 漆信桥 李凤勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期808-814,共7页

本研究旨在建立以PCV2Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法,构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因原核表达质粒pET32a-ORF2并转化至Rosetta菌,在1.0mmol.L-1 IPTG和37℃条件下诱导下,Cap蛋白获得高效表达,Western blot检测证实其具有免疫... 本研究旨在建立以PCV2Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法,构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因原核表达质粒pET32a-ORF2并转化至Rosetta菌,在1.0mmol.L-1 IPTG和37℃条件下诱导下,Cap蛋白获得高效表达,Western blot检测证实其具有免疫反应活性,以纯化的蛋白为抗原建立了检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果表明抗原最适包被浓度为2.16μg.mL-1;血清最佳稀释度为1∶40;抗原最佳包被条件为4℃过夜;最佳封闭条件为1%BSA 37℃1h;血清反应时间为37℃30min;酶标二抗最适作用时间为37℃45min;底物最佳反应条件为37℃显色15min。用该方法对四川省184份猪血清样品进行检测,总阳性率为80.98%(149/184),与商品化的PCV2ELISA试剂盒得到的结果基本一致。本试验成功建立了PCV2血清抗体间接ELISA方法,具有较高的敏感性和特异性,可用于大规模的血清学检测。 展开更多

关键词 圆环病毒2型 CAP蛋白 间接ELISA

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禽流感病毒A型和H5亚型RT-PCR检测试剂盒研究 被引量：5

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作者 孙明 李纯铃 +4 位作者 赵铁柱 王传彬 陈西钊 田克恭 王宏伟 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第1期3-6,共4页

目的　检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法　根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂... 目的　检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法　根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂盒 ,对H1～ 15亚型AIV参考株、38份AIV国内分离株进行检测试验。结果　建立了A型、H5亚型禽流感病毒RT PCR检测方法 ,并在此基础上组装试剂盒 ,用A型试剂盒检测时 ,全部AIV毒株均为阳性 ,能检测 1 10 2 4血凝单位禽流感病毒 ;用H5亚型试剂盒检测时 ,仅有H5亚型AIV参考株和 19株H5亚型AIV分离株呈阳性 ,其余H1～H4、H6～H15参考株和H7、H9分离株以及 1株H5分株均为阴性 ,能检测1 6 4血凝单位禽流感病毒。 2种试剂盒对实验感染鸡病料检出率均为 10 0 %。结论　研制的AIVA型、H5亚型RT PCR试剂盒具有特异性强、敏感性高、稳定性和重复性好的特点。 展开更多

关键词 禽流感病毒 A型 H5亚型 RT—PCR检测 试剂盒 禽流感

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鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达 被引量：5

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作者 杨俊兴 花群义 +5 位作者 陈焕春 陈兵 吕建强 曹琛福 阮周曦 张彩红 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期5-8,共4页

根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体... 根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体转入大肠埃希菌(E.coliLMG194),用L-阿拉伯糖诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,EHDV VP7基因在LMG194中得到了表达,其表达产物可以与EHDV阳性血清特异性反应,说明该融和蛋白具有免疫学活性。 展开更多

关键词 鹿流行性出血病病毒(EHDV) VP7基因 基因克隆 表达

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口蹄疫病毒研究概况 被引量：45

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作者 卢曾军 刘在新 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第2期69-74,共6页

关键词 口蹄疫 基因组 抗原 疫苗 口蹄疫病毒

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禽白血病病毒J亚群诱导蛋鸡群多种肿瘤 被引量：3

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作者 陈洪博 于琳琳 +5 位作者 姜艳萍 王玥 王峰 王晓伟 王桂花 成子强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1491-1496,共6页

2009年8月,山东泰安某海兰褐商品蛋鸡场,开产后产蛋率只有60%～70%,31周龄时,死亡率突然增加,最高达20%。患病鸡经大体剖检、病理组织学、PCR和免疫组织化学检测确诊为J亚群禽白血病。病理组织学检测发现送检鸡除了髓细胞瘤外,还存在明... 2009年8月,山东泰安某海兰褐商品蛋鸡场,开产后产蛋率只有60%～70%,31周龄时,死亡率突然增加,最高达20%。患病鸡经大体剖检、病理组织学、PCR和免疫组织化学检测确诊为J亚群禽白血病。病理组织学检测发现送检鸡除了髓细胞瘤外,还存在明显的纤维肉瘤、组织肉瘤、腺癌和血管内皮瘤等肿瘤。纤维肉瘤单独存在,组织肉瘤、腺癌和血管内皮瘤分别和髓细胞瘤混合存在,本文详细描述了各肿瘤的组织学特点。ALV-J从肉种鸡传向商品蛋鸡后引起肿瘤谱扩展的原因和机制值得进一步研究。 展开更多

关键词 禽白血病病毒J亚群(ALV-J) 商品蛋鸡 肿瘤 组织病理学

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间接ELISA检测犬瘟热血清抗体方法的建立 被引量：5

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作者 杨敬 乌仁高娃 +1 位作者 范薇 隋丽华 《动物医学进展》 CSCD 2005年第11期61-64,共4页

以重组表达的犬瘟热病毒融合蛋白(fusion protein,F)作为包被抗原,建立了检测犬瘟热病毒血清抗体的间接ELISA方法。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为125ng/孔,血清最佳稀释度为1∶160。经阻断试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重... 以重组表达的犬瘟热病毒融合蛋白(fusion protein,F)作为包被抗原,建立了检测犬瘟热病毒血清抗体的间接ELISA方法。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为125ng/孔,血清最佳稀释度为1∶160。经阻断试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性较好,可用于犬瘟热血清抗体的定量和定性检测。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 F基因 间接ELISA

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禽白血病病毒J亚群自然感染商品蛋鸡致瘤性新特征 被引量：1

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作者 于琳琳 姜艳萍 +5 位作者 王玥 陈洪博 王峰 王晓伟 王桂花 成子强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期602-608,共7页

2009年8月,山东省邹城市某海兰褐蛋鸡群,160日龄发病,死亡率为7%。患鸡经大体剖检、病理组织学、PCR和免疫组织化学等检测,确诊为禽白血病病毒J亚群(ALV-J)感染。病理组织学检测发现,病鸡单独患血管瘤,或髓细胞瘤和纤维肉瘤多发性出现,... 2009年8月,山东省邹城市某海兰褐蛋鸡群,160日龄发病,死亡率为7%。患鸡经大体剖检、病理组织学、PCR和免疫组织化学等检测,确诊为禽白血病病毒J亚群(ALV-J)感染。病理组织学检测发现,病鸡单独患血管瘤,或髓细胞瘤和纤维肉瘤多发性出现,由ALV-J自然感染引起同一鸡体出现髓细胞瘤和纤维肉瘤尚属国内外首次报道。肝脏研磨接种DF-1细胞培养7d后传3代,细胞无病变,ELISA检测感染细胞上清ALV p27抗原阳性,进一步确诊此鸡群为ALV感染。对病变严重的鸡进行病毒分离及ALV-J gp85基因同源性比较显示与原型株HPRS-103的同源性最高,达94.1%。本研究丰富了ALV-J感染的临床诊断依据,并为ALV-J在我国蛋鸡群中多潜能致瘤机制的研究提供了科学基础。 展开更多

关键词 禽白血病病毒J亚群(ALV-J) 血管瘤 髓细胞瘤 纤维肉瘤

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H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫鸵鸟后抗体消长规律及免疫程序的研究 被引量：1

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作者 刘佩红 周锦萍 +6 位作者 瞿浩生 刘明华 倪惠军 金笑敏 卢军 张维谊 徐新红 《动物医学进展》 CSCD 2007年第B08期1-4,共4页

为了探讨鸵鸟对H5亚型禽流感灭活疫苗的免疫原性,做好鸵鸟禽流感的防控工作,采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型禽流感疫苗,不同剂量免疫鸵鸟,用HI方法检测母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和... 为了探讨鸵鸟对H5亚型禽流感灭活疫苗的免疫原性,做好鸵鸟禽流感的防控工作,采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型禽流感疫苗,不同剂量免疫鸵鸟,用HI方法检测母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄。结果表明,雏鸵鸟母源抗体能维持约3周～8周;8周龄时分组首免,C1组产生的免疫反应优于C2组,抗体峰值能达到7.50log2,维持时间为9周左右;17周龄时C1组以3.0mL/羽进行二免,2周后抗体达到7.40log2,3周～7周抗体维持在高峰值,最高达8.80log2,以后逐渐下降,有效抗体水平能维持至接种后25周左右。二免后25周进行三免,以5mL/羽三免后2周抗体可达到9.80log2,2周～4周抗体维持在最高峰,以后缓慢下降,期间抗体时有起伏,但有效抗体水平约可维持1年时间。三免后45周内抗体水平合格率均在70%以上。根据抗体消长规律,初步推荐了鸵鸟的免疫程序。 展开更多

关键词 禽流感 H5N1亚型 重组灭活疫苗 抗体消长 免疫程序 鸵鸟

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表达红色荧光蛋白的重组鸭肠炎病毒的构建及鉴定

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作者 苗清新 宋亚芬 +3 位作者 王静文 张兵 张敏 杨承槐 《中国兽药杂志》 2021年第10期7-13,共7页

前期研究发现,随着病毒的不断传代,插入到鸭肠炎病毒(DEV)UL2基因中的报告基因绿色荧光蛋白(GFP)会发生点突变或缺失,严重影响了重组DEV的反向筛选。为筛选更加稳定的报告基因,通过酶切连接的方法以表达红色荧光蛋白(RFP)的表达盒取代... 前期研究发现,随着病毒的不断传代,插入到鸭肠炎病毒(DEV)UL2基因中的报告基因绿色荧光蛋白(GFP)会发生点突变或缺失,严重影响了重组DEV的反向筛选。为筛选更加稳定的报告基因,通过酶切连接的方法以表达红色荧光蛋白(RFP)的表达盒取代重组质粒pT-UL2-GFP-gpt中的GFP-gpt表达盒,构建表达RFP的UL2基因缺失转移载体pT-UL2-RFP。该转移载体与DEV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经克隆纯化获得表达RFP的重组DEV。通过测定重组病毒及其亲本毒的一步生长曲线及用PCR测定不同代次重组病毒的RFP序列发现,重组病毒在细胞和上清中的病毒含量分别在48 h和84 h达到峰值106.4 TCID50/0.1 mL和106.83 TCID50/0.1 mL,与亲本毒无明显差异(P>0.05);RFP表达盒在重组DEV连续传12代后仍可稳定表达,表明在DEV UL2区域插入RFP表达盒不影响病毒的繁殖,且RFP表达盒比GFP表达盒更适合作为报告基因。该研究结果对重组DEV的构建、筛选具有重要意义。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒 红色荧光蛋白 重组病毒

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TaqMan~T-PCR对水疱性口炎病毒的鉴定检测 被引量：9

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作者 花群义 徐自忠 +4 位作者 杨云庆 董俊 杨晶焰 周晓黎 贾建军 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期64-68,共5页

水疱性口炎分为印第安那型 ( Indiana)和新泽西型 ( New Jersey)。这两种血清型病毒的快速和可靠的鉴别对该病的诊断、检疫、分子流行病学调查和监测至关重要。文章按照 VSV核蛋白基因序列 ,设计了一对两型通用引物和两型各自特异性探... 水疱性口炎分为印第安那型 ( Indiana)和新泽西型 ( New Jersey)。这两种血清型病毒的快速和可靠的鉴别对该病的诊断、检疫、分子流行病学调查和监测至关重要。文章按照 VSV核蛋白基因序列 ,设计了一对两型通用引物和两型各自特异性探针。研究建立了 VSV实时荧光定量 PCR检测方法 ,对 VSV细胞培养物、人工感染实验动物组织、血清样品 ,以及系列稀释的不同 TCID50 样品、其它相关或相似病毒进行鉴定 ,同时与常规 PCR、病毒分离试验作了比较。Taq Man○R RT-PCR的特异性和敏感性相当于或优于对照方法。重复性和稳定性试验证实 ,该方法可靠。每个试验中设立阳性、阴性对照和标准稀释度对照 ,使试验结果可对病毒 RNA作准确定量 ,并可在 4h内获得结果。研究结果表明 ,Taq Man○R RT-PCR方法是一种特异性强、敏感性高、快速安全的定量检测方法。因此 ,可以作为 VSV的快速检测和定型。 展开更多

关键词 TaqManRT-PCR 水疱性口炎病毒 鉴定 检测 印第安那型 新泽西型

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广西鸭圆环病毒流行毒株遗传变异分析 被引量：9

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作者 粟艳琼 郑敏 +2 位作者 张步娴 屈素洁 莫胜兰 《动物医学进展》 北大核心 2015年第10期20-25,共6页

为了解广西鸭圆环病毒(DuCV)流行毒株的遗传变异情况,进一步为研制鉴别诊断DuCV方法和制定科学防控措施奠定基础。采用PCR方法对采自广西不同地区的阳性鸭组织样品进行了全基因组扩增和测序,共获得14个完整的DuCV全基因组序列。与GenBan... 为了解广西鸭圆环病毒(DuCV)流行毒株的遗传变异情况,进一步为研制鉴别诊断DuCV方法和制定科学防控措施奠定基础。采用PCR方法对采自广西不同地区的阳性鸭组织样品进行了全基因组扩增和测序,共获得14个完整的DuCV全基因组序列。与GenBank中登录的52个国内外DuCV毒株进行遗传进化分析及同源性比较。结果表明,当前广西同时存在基因1.1亚型、基因1.2亚型和基因2.1亚型3种不同的DuCV毒株在流行,其中基因1.1亚型和1.2亚型为优势流行毒株。 展开更多

关键词 鸭圆环病毒 流行毒株 遗传变异

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过表达HDAC6基因的Vero细胞系建立及其对狂犬病病毒增殖效率评价 被引量：2

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作者 殷娟斌 张志雄 +5 位作者 王莎莎 马小琴 梁正基 孙跃峰 王相伟 殷相平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期150-155,共6页

为提高狂犬病病毒(rabies virus,RABV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)过表达的Vero/HDAC6细胞系,分析RABV在Vero/HDAC6细胞系与Vero细胞中的复制差异。首先以非洲绿猴... 为提高狂犬病病毒(rabies virus,RABV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)过表达的Vero/HDAC6细胞系,分析RABV在Vero/HDAC6细胞系与Vero细胞中的复制差异。首先以非洲绿猴HDAC6基因为目标构建重组质粒plv-SV40-puro-3×flag-HDAC6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装。将包装好的慢病毒感染Vero细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达HDAC6基因的阳性细胞。利用TCID50和Western-blot技术检测RABV在Vero/HDAC6细胞系中的复制能力。结果表明,过表达HDAC6能够明显促进RABV复制,并且RABV在Vero/HDAC6细胞系中的增殖能力高于野生型细胞。本研究构建的Vero/HDAC6细胞系能显著促进RABV的增殖,为RABV疫苗候选细胞株奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 HDAC6 VERO细胞 慢病毒包装 过表达细胞系

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二重微滴式数字PCR定量检测禽呼肠孤病毒和鸡滑液囊支原体方法的建立

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作者 谢志勤 谢芝勋 +14 位作者 张艳芳 李小凤 范晴 谢丽基 万丽军 罗思思 李孟 张民秀 曾婷婷 黄娇玲 王盛 李丹 韦悠 任红玉 阮志华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1232-1241,共10页

为绝对定量检测禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS),本研究建立了二重微滴式数字PCR(ddPCR)。根据已发表的ARV S1基因和MS的VlhA基因序列保守序列,分别设计了针对S1和VlhA基因的特异引物和探针... 为绝对定量检测禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS),本研究建立了二重微滴式数字PCR(ddPCR)。根据已发表的ARV S1基因和MS的VlhA基因序列保守序列,分别设计了针对S1和VlhA基因的特异引物和探针,通过优化引物和探针的浓度及反应条件后,建立了二重ddPCR定量检测ARV和MS方法,并对建立方法的特异性、敏感性和重复性进行测试。结果显示,优化后最佳的引物和探针浓度分别为1.2和0.35μmol/L,最佳退火温度为55℃。特异性检测结果只检出ARV和MS,没有检出其他对照的禽病病原。敏感性检测结果显示,该方法检测ARV及MS重组质粒DNA的检出限分别为微滴数6.3和5.4 copies/μL,检测方法的检出限与单重ddPCR最低检出限相同,敏感性比荧光定量PCR方法高10倍。对3个连续稀释的ARV和MS重组质粒DNA检测结果的变异系数均小于5%,重复性好。对92份病鸡关节囊、喉拭子及肺样品进行检测,二重ddPCR方法检出12份样品呈ARV阳性,9份样品呈MS阳性,其中2份样品呈ARV和MS阳性,ARV阳性检出率为13.0%(12/92),MS阳性检出率为9.8%(9/92),混合感染阳性率为2.2%(2/92)。结果表明,本研究建立的二重ddPCR方法在定量检测ARV及MS时特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量检测ARV及MS提供了更敏感的检测技术手段。 展开更多

关键词 二重微滴式数字PCR 定量检测 禽呼肠孤病毒 鸡滑液囊支原体

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