为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24...为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24 h Control组)和24 h试验组(24 h NMB组),每组10只,2个对照组和2个试验组分别按体重10μL/g腹腔注射生理盐水和10 nmol/L NMB溶液;称量注射前后小鼠体重,计算饲料用量,并观察小鼠行为特征;各组小鼠分别于注射后12小时、24小时摘眼球采血并处死取睾丸,通过ELISA法检测小鼠血清中睾酮的浓度;通过实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹法(Western-blot)检测小鼠睾丸中NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA和蛋白表达量。结果表明:与12 h Control组相比,12 h NMB组小鼠行为无明显异常,体重增量、总摄食量略有减少,料重比略有增高,但差异不显著(P>0.05);NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与24 h Control组相比,24 h NMB组小鼠被毛粗乱、脾气暴躁,体重增量显著减少(P<0.05);总摄食量减少,料重比略有增高,但均差异不显著(P>0.05);NMB m RNA和蛋白表达量极显著降低(P<0.01),NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与12 h NMB组相比,24 h NMB组NMBR m RNA表达量极显著降低(P<0.01),24 h NMB组NMBR蛋白表达量显著增加(P<0.05)。说明小鼠腹腔注射NMB能够抑制小鼠摄食,但对小鼠睾丸中睾酮的合成和分泌影响不大。展开更多
本实验旨在探究Mic60在小鼠卵母细胞体外成熟中的作用。选取4~6周龄的雌性C57BL/6J小鼠,注射孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后采集卵母细胞并随机分为对照组和Mic60抑制组(包括50、100、130、150μmol/L组,Miclxin组为130μmol/L)。卵母...本实验旨在探究Mic60在小鼠卵母细胞体外成熟中的作用。选取4~6周龄的雌性C57BL/6J小鼠,注射孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后采集卵母细胞并随机分为对照组和Mic60抑制组(包括50、100、130、150μmol/L组,Miclxin组为130μmol/L)。卵母细胞体外培养16 h后,通过免疫荧光染色检测纺锤体形态、ROS水平、线粒体分布和质量,利用qPCR检测抗氧化基因表达、线粒体呼吸链亚基的表达、整合应激反应相关基因的表达。结果表明:与对照组相比,130μmol/L Mic60抑制剂会降低卵母细胞体外成熟率(78.29%vs.21.08%,P<0.01),并显著阻碍纺锤体的组装;与对照组相比,Miclxin组卵母细胞中的ROS水平升高(P<0.05),且Sod1(0.83 vs. 0.22)和Sod2(0.84 vs. 0.27)基因表达降低(P<0.05),线粒体分布异常比例升高(0.16 vs. 0.57,P<0.05),线粒体膜电位水平降低(1.61 vs. 1.05,P<0.05),ATP产生降低(1.16 vs. 0.79,P<0.05);Miclxin组卵母细胞线粒体呼吸链复合体亚基Ndufv2和Sdha表达降低(P<0.05),Cyc1表达升高(P<0.05),卵母细胞mtDNA拷贝数降低(19 324 vs. 9 066,P<0.05);与对照组相比,Miclxin组卵母细胞Oma1、Dele1、Eif2ak1、eIF2α基因表达上调(P<0.05),触发了整合应激反应(Integrated Stress Response,ISR)并上调了ISR主要效应因子Atf4、Atf5和Chop的表达(P<0.05)。可见,抑制Mic60会通过损害线粒体功能并触发ISR影响卵母细胞体外成熟效果。展开更多
文摘为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24 h Control组)和24 h试验组(24 h NMB组),每组10只,2个对照组和2个试验组分别按体重10μL/g腹腔注射生理盐水和10 nmol/L NMB溶液;称量注射前后小鼠体重,计算饲料用量,并观察小鼠行为特征;各组小鼠分别于注射后12小时、24小时摘眼球采血并处死取睾丸,通过ELISA法检测小鼠血清中睾酮的浓度;通过实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹法(Western-blot)检测小鼠睾丸中NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA和蛋白表达量。结果表明:与12 h Control组相比,12 h NMB组小鼠行为无明显异常,体重增量、总摄食量略有减少,料重比略有增高,但差异不显著(P>0.05);NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与24 h Control组相比,24 h NMB组小鼠被毛粗乱、脾气暴躁,体重增量显著减少(P<0.05);总摄食量减少,料重比略有增高,但均差异不显著(P>0.05);NMB m RNA和蛋白表达量极显著降低(P<0.01),NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与12 h NMB组相比,24 h NMB组NMBR m RNA表达量极显著降低(P<0.01),24 h NMB组NMBR蛋白表达量显著增加(P<0.05)。说明小鼠腹腔注射NMB能够抑制小鼠摄食,但对小鼠睾丸中睾酮的合成和分泌影响不大。
文摘本实验旨在探究Mic60在小鼠卵母细胞体外成熟中的作用。选取4~6周龄的雌性C57BL/6J小鼠,注射孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后采集卵母细胞并随机分为对照组和Mic60抑制组(包括50、100、130、150μmol/L组,Miclxin组为130μmol/L)。卵母细胞体外培养16 h后,通过免疫荧光染色检测纺锤体形态、ROS水平、线粒体分布和质量,利用qPCR检测抗氧化基因表达、线粒体呼吸链亚基的表达、整合应激反应相关基因的表达。结果表明:与对照组相比,130μmol/L Mic60抑制剂会降低卵母细胞体外成熟率(78.29%vs.21.08%,P<0.01),并显著阻碍纺锤体的组装;与对照组相比,Miclxin组卵母细胞中的ROS水平升高(P<0.05),且Sod1(0.83 vs. 0.22)和Sod2(0.84 vs. 0.27)基因表达降低(P<0.05),线粒体分布异常比例升高(0.16 vs. 0.57,P<0.05),线粒体膜电位水平降低(1.61 vs. 1.05,P<0.05),ATP产生降低(1.16 vs. 0.79,P<0.05);Miclxin组卵母细胞线粒体呼吸链复合体亚基Ndufv2和Sdha表达降低(P<0.05),Cyc1表达升高(P<0.05),卵母细胞mtDNA拷贝数降低(19 324 vs. 9 066,P<0.05);与对照组相比,Miclxin组卵母细胞Oma1、Dele1、Eif2ak1、eIF2α基因表达上调(P<0.05),触发了整合应激反应(Integrated Stress Response,ISR)并上调了ISR主要效应因子Atf4、Atf5和Chop的表达(P<0.05)。可见,抑制Mic60会通过损害线粒体功能并触发ISR影响卵母细胞体外成熟效果。
