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荧光探针Fluo-3/AM和FuraRed测量单细胞中比率钙 被引量：6
1
作者 马晓冬 朱晓亮 +5 位作者 赵清 张瑾 张飒 雷国华 黄行许 鲍永耀 《中国医学物理学杂志》 CSCD 1999年第3期180-182,共3页
应用ACAS570激光扫描共聚焦显微镜（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM简称共焦显微镜）和钙离子指示剂Fluo－3／AM、FuraRed荧光探剂双标记技术，测定了单个活细胞内比率钙的动态变化。结果显示37℃，Fluo－3／AM浓度10μmol／L，... 应用ACAS570激光扫描共聚焦显微镜（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM简称共焦显微镜）和钙离子指示剂Fluo－3／AM、FuraRed荧光探剂双标记技术，测定了单个活细胞内比率钙的动态变化。结果显示37℃，Fluo－3／AM浓度10μmol／L，FuraRed浓度10μmol／L的条件下，昆明小鼠巨噬细胞负载1h左右即可获良好的标记效果。用比率探针测量细胞内Ca^2＋的动态变化，使Ca^2＋的定性定量测定不受染料浓度、细胞大小、照射光强度以及一定程度的光漂白和染料泄漏等因素的影响，提供了一种准确定性定量细胞内Ca^2＋的实时、动态、原位变化的新方法。 展开更多
关键词 激光扫描 共聚焦显微镜 比率钙 荧光探针
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激光扫描共聚焦显微镜和Fluo-3/AM检测细胞内游离钙 被引量：3
2
作者 霍霞 鲍永耀 +2 位作者 黄辉 黄行许 朴英杰 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期35-37,共3页
利用细胞培养技术，Ｃａ２＋敏感荧光探针Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ标记细胞，激光扫描共聚焦显微镜检测鸡胚胎巨噬细胞内游离钙浓度（〔Ｃａ２＋〕ｉ）的变化。结果显示细菌脂多糖（ＬＰＳ）可引起培养的鸡胚胎巨噬细胞内〔Ｃａ２＋〕ｉ升高... 利用细胞培养技术，Ｃａ２＋敏感荧光探针Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ标记细胞，激光扫描共聚焦显微镜检测鸡胚胎巨噬细胞内游离钙浓度（〔Ｃａ２＋〕ｉ）的变化。结果显示细菌脂多糖（ＬＰＳ）可引起培养的鸡胚胎巨噬细胞内〔Ｃａ２＋〕ｉ升高，ＬＰＳ的作用可被维拉帕米部分抑制。本实验表明激光扫描共聚焦显微镜结合Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ能准确迅速地检测单个或多个贴壁粘附细胞胞内〔Ｃａ２＋〕ｉ的动态变化，并同步观察细胞的形态及其荧光分布情况。 展开更多
关键词 激光扫描 共聚焦显微镜 钙 巨噬细胞 显微镜
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应用Ca^(2+)荧光探针fluo-3和fluo-4测定H_2O_2诱导的A549细胞凋亡过程中的[Ca^(2+)]_i变化 被引量：7
3
作者 张四洋 李春艳 +2 位作者 高建 邱雪杉 崔泽实 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期197-202,共6页
背景与目的肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤,Ca2+对于肿瘤细胞凋亡有重要的调控作用。实时监测肺癌细胞内Ca2+水平,有助于深入研究Ca2+介导肺癌细胞凋亡的分子机制。本研究旨在观察Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4在H2O2诱导的A549细胞凋亡... 背景与目的肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤,Ca2+对于肿瘤细胞凋亡有重要的调控作用。实时监测肺癌细胞内Ca2+水平,有助于深入研究Ca2+介导肺癌细胞凋亡的分子机制。本研究旨在观察Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用,实时测定胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i),探讨[Ca2+]i与细胞凋亡的关系,并比较两种Ca2+探针在荧光强度及[Ca2+]i测定值方面的差异。方法采用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4负载细胞,1 h后用不同浓度的H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果在相同的探针浓度、负载时间和相同的图像采集参数的条件下,选定细胞内fluo-4平均荧光强度高于fluo-3。50 mM H2O2刺激后,A549细胞胞浆内[Ca2+]i迅速升高,通过公式计算发现采用fluo-3探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是112.2 nM-1,069.6 nM,采用fluo-4探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是7.6nM-505.4 nM。同时发现经H2O2刺激后,凋亡细胞百分比明显增加(P<0.01)。结论 H2O2促进A549细胞内Ca2+释放,诱导细胞凋亡。Ca2+探针fluo-4可能更适合于监测含量较低的细胞中[Ca2+]i变化。 展开更多
关键词 fluo-3 fluo-4 CA^2+ H2O2 细胞凋亡
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采用Fluo-3 AM-ester探针研究桃不同组织的Ca^2＋信号分布 被引量：2
4
作者 鲁振华 王志强 +3 位作者 彭斌 牛良 崔国朝 刘淑娥 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期915-917,I0001,共4页
钙作为植物最重要的矿质元素之一,在植物生理和生化活动中起重要作用。采用激光扫描共聚焦显微镜,以Fluo-3 AM-ester为荧光探针研究了桃果肉和叶柄组织中Ca2+的分布,结果表明Fluo-3 AM-ester可作为荧光探针对桃不同组织中游离的Ca2+信... 钙作为植物最重要的矿质元素之一,在植物生理和生化活动中起重要作用。采用激光扫描共聚焦显微镜,以Fluo-3 AM-ester为荧光探针研究了桃果肉和叶柄组织中Ca2+的分布,结果表明Fluo-3 AM-ester可作为荧光探针对桃不同组织中游离的Ca2+信号强度和分布特征进行分析。不同的物镜观察(10×和20×)下,Ca2+荧光信号相对强度差异不大;在叶柄中Ca2+荧光信号主要分布于维管束,在果实中多分布于细胞壁;但叶柄中荧光信号分布明显高于果肉组织,这与钙在不同组织中的功能有关。 展开更多
关键词 桃 Ca2+信号 激光扫描共聚焦显微镜 fluo-3AM-ester
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Fluo-3荧光微量法测定人红细胞胞浆内游离钙离子浓度 被引量：12
5
作者 石玉玲 习松 《检验医学》 CAS 北大核心 2005年第3期290-291,共2页
关键词 胞浆内游离钙离子浓度 fluo-3 微量法测定 人红细胞 花生四烯酸代谢 原子吸收光度法 荧光 高血压病患者 细胞内钙离子 血管平滑肌 血栓烷A2 血小板 功能异常 血压升高 分离过程 人为因素 测定方法 钙代谢 钙测定 胞浆钙
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Ca^(2+)荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3测定H_2O_2刺激的A549细胞中Ca^(2+)浓度变化 被引量：2
6
作者 张四洋 周末 +3 位作者 高建 于淼 邱雪杉 崔泽实 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第7期1497-1501,共5页
目的:本研究旨在观察Ca2+荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3在H2O2刺激的A549细胞中的应用,实时测定细胞质Ca2+浓度([Ca2+]i),并比较两种Ca2+探针在荧光曲线及[Ca2+]i测定值等方面的差异。方法:采用Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC... 目的:本研究旨在观察Ca2+荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3在H2O2刺激的A549细胞中的应用,实时测定细胞质Ca2+浓度([Ca2+]i),并比较两种Ca2+探针在荧光曲线及[Ca2+]i测定值等方面的差异。方法:采用Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC3.6转染A549细胞,24h后用50mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用Ca2+荧光染料探针fluo-3负载细胞,1h后用50mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果:采用Cameleon探针转染的细胞中,反映[Ca2+]i变化的R值曲线迅速升高后逐渐降至刺激前水平,通过公式计算发现[Ca2+]i变化范围是33.1-596.1 nmol/L。采用fluo-3探针负载的细胞中,反映[Ca2+]i变化的荧光强度F值曲线逐渐升高至稳定,通过公式计算得到[Ca2+]i变化范围是131.8-695.6 nmol/L。同时发现经H2O2刺激后,凋亡细胞百分比显著增加(P<0.01)。结论:Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC3.6和荧光染料探针fluo-3均检测到H2O2诱导的细胞内[Ca2+]i变化,Cameleon YC3.6可能更灵敏地反映快速变化的钙信号。 展开更多
关键词 CAMELEON YC3 6 fluo-3 H2O2 CA2+ 细胞凋亡
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激光扫描共聚焦显微镜检测Fluo-3 AM负载大鼠心肌微血管内皮细胞最佳浓度和时间的探讨
7
作者 冯波 董虹 +3 位作者 张涛 胡格 房克凤 穆祥 《中国农学通报》 CSCD 2013年第17期80-84,共5页
为了探讨Ca2+荧光探针Fluo-3 AM对大鼠心肌微血管内皮细胞(Rat Myocardial Microvascular Endothelial Cells RMMECs)最佳装载浓度和时间。将Fluo-3 AM分别稀释成1、2、3、4、5μM/L,每一浓度的探针分别装载细胞5、10、15、20min,应用... 为了探讨Ca2+荧光探针Fluo-3 AM对大鼠心肌微血管内皮细胞(Rat Myocardial Microvascular Endothelial Cells RMMECs)最佳装载浓度和时间。将Fluo-3 AM分别稀释成1、2、3、4、5μM/L,每一浓度的探针分别装载细胞5、10、15、20min,应用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内荧光信号的强度、位置、装载探针后细胞的形态来观察装载效果。结果表明:1～3μM/L的Fluo-3 AM负载5～20min均不出现荧光信号;4μM/L的Fluo-3 AM负载5～10min时即出现荧光信号;5μM/L的Fluo-3 AM孵育细胞15min后出现清晰且分布均匀的荧光信号。Fluo-3 AM对贴壁生长的RMMECs负载效果主要受探针浓度和负载时间的影响。 展开更多
关键词 激光扫描共聚焦显微镜 fluo-3AM 大鼠 心肌微血管内皮细胞 钙离子
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Fluo-3检测细胞内钙离子的条件优化 被引量：2
8
作者 尹琪 《生物技术通讯》 CAS 2006年第6期927-928,共2页
目的:优化用于检测细胞内钙离子的Fluo-3浓度条件和羧苯磺胺浓度条件,以得到最适的检测用浓度组合。方法:应用析因实验设计方法,选择32种不同的Fluo-3和羧苯磺胺浓度组合孵育CHO-K1细胞,通过FlexStation检测平台检测细胞内的钙离子浓度... 目的:优化用于检测细胞内钙离子的Fluo-3浓度条件和羧苯磺胺浓度条件,以得到最适的检测用浓度组合。方法:应用析因实验设计方法,选择32种不同的Fluo-3和羧苯磺胺浓度组合孵育CHO-K1细胞,通过FlexStation检测平台检测细胞内的钙离子浓度。结果与结论:检测信号随着Fluo-3浓度的升高而增强,同时随着羧苯磺胺浓度的升高而减弱。4μmol/L的Fluo-3和1mmol/L的羧苯磺胺浓度组合是最适用的检测条件。 展开更多
关键词 fluo-3 羧苯磺胺 钙离子
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2,3,7,8-TCDD对培养乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度影响的研究 被引量：3
9
作者 孙黎黎 常青 +2 位作者 梁志清 余资江 糜建红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第20期2048-2050,共3页
目的测定培养SD大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i,观察2,3,7,8四氯二苯并二噁英(2,3,7,8tetrachlorodibenzopdioxin,以下略为TCDD)对心肌细胞[Ca2+]i的影响。方法将实验动物分为0.05、0.5、5、10μg/kg4个染毒组,采用Fluo3/AM... 目的测定培养SD大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i,观察2,3,7,8四氯二苯并二噁英(2,3,7,8tetrachlorodibenzopdioxin,以下略为TCDD)对心肌细胞[Ca2+]i的影响。方法将实验动物分为0.05、0.5、5、10μg/kg4个染毒组,采用Fluo3/AM同时加入PluronicF127作为细胞内游离钙离子的荧光探针,负载培养的心肌细胞,应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)技术检测空白组及染毒组乳鼠心肌细胞[Ca2+]i。结果静息时,心肌细胞[Ca2+]i为(77.68±12.00)nmol/L。染毒组心肌细胞的[Ca2+]i显示不同程度的升高,且呈剂量依赖性。结论应用Fluo3/AM和PluronicF127结合CLSM技术可以精确的反映细胞内游离钙离子浓度,TCDD可能通过某种机制增加心肌细胞[Ca2+]i,从而对乳鼠心脏功能产生一定损伤。 展开更多
关键词 TCDD 心肌细胞 钙离子 fluo-3/am
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多非替利衍生物CPU228(V03)对大鼠心室肌细胞钙瞬变的调节
10
作者 黄志江 林生 +4 位作者 戴德哉 纳涛 吉民 赵小辰 孙立 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2005年第2期121-127,共7页
目的 :在β 受体激动情况下 ,研究多非替利衍生物CPU 2 2 8对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca2 + 浓度([Ca2 + ]i)变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法 :游离单个大鼠心室肌细胞 ,Fluo 3 AM负载 ,电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变 ,定量测定心室... 目的 :在β 受体激动情况下 ,研究多非替利衍生物CPU 2 2 8对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca2 + 浓度([Ca2 + ]i)变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法 :游离单个大鼠心室肌细胞 ,Fluo 3 AM负载 ,电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变 ,定量测定心室肌细胞内Ca2 +浓度变化 ,异丙肾上腺素 (isoproterenol,ISO) 10 0nmol·L-1激动β 受体 ,观察CPU 2 2 81μmol·L-1对钙瞬变动力学参数、[Ca2 + ]i 及钙负荷水平的影响。结果 :CPU2 2 81μmol·L-1对大鼠心室肌细胞 [Ca2 + ]i 的影响不明显 (P >0 .0 5 ) ;ISO 10 0nmol·L-1显著升高大鼠心室肌细胞 [Ca2 + ]i 和细胞内钙负荷水平 ,缩短钙瞬变时程 ,并且增加钙瞬变的消除速率。CPU 2 2 81μmol·L-1显著抑制ISO的上述作用。结论 :在β 受体激动情况下 ,CPU 2 2 8可以降低心肌细胞 [Ca2 + ]i,使ISO改变的钙瞬变动力学参数恢复到正常水平。 展开更多
关键词 CPU 228 心室肌细胞 异丙肾上腺素 钙瞬变 fluo-3
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用Fluo3-AM测定2型糖尿病患者淋巴细胞内Ca^(2+)浓度及药物对患者胞内Ca^(2+)浓度的影响 被引量：6
11
作者 章立 李新荣 +1 位作者 徐蘅 张鉴棠 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期451-455,共5页
用 Fluo 3- AM为荧光探针 ,测定 2型糖尿病患者淋巴细胞内 Ca2 +浓度 ,观察了肾上腺素、多巴酚丁胺、Bay K 864 4、胰岛素等药物对胞内 Ca2 +的作用机制。实验表明患者胞浆内 Ca2 +浓度与正常人相比显著升高 ;药物对胞内 Ca2 +的刺激表... 用 Fluo 3- AM为荧光探针 ,测定 2型糖尿病患者淋巴细胞内 Ca2 +浓度 ,观察了肾上腺素、多巴酚丁胺、Bay K 864 4、胰岛素等药物对胞内 Ca2 +的作用机制。实验表明患者胞浆内 Ca2 +浓度与正常人相比显著升高 ;药物对胞内 Ca2 +的刺激表明 ,病人对外界钙激动剂更敏感。胰岛素能刺激胞内 Ca2 +浓度升高 ,其作用机制是激活钙离子通道。肾上腺素不仅能激活钙离子通道 ,也能促使钙从钙池中释放。上述研究也表明 Fluo- 3是有效的研究胞内 Ca2 +变化的荧光探针。 2型糖尿病的发生可能与 Ca2 +浓度升高有关 。 展开更多
关键词 细胞内游离钙 糖尿病 淋巴细胞 NIDDM
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低温处理对冬、春小麦细胞Ca^(2+)时空变化的影响 被引量：17
12
作者 刘炜 孙德兰 +4 位作者 王红 简令成 尚忠林 王学臣 赵可夫 《Acta Botanica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2001年第12期1218-1223,共6页
用Fluo 3/AM染色 ,通过激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)方法 ,对静息态及连续降温条件下不同抗寒性小麦(TriticumaestivumL .)叶肉细胞原生质体 [Ca2 + ]cyt (thefreeCa2 + concentrationinthecytoplasm)的时空变化进行了比较。结果表明 ,... 用Fluo 3/AM染色 ,通过激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)方法 ,对静息态及连续降温条件下不同抗寒性小麦(TriticumaestivumL .)叶肉细胞原生质体 [Ca2 + ]cyt (thefreeCa2 + concentrationinthecytoplasm)的时空变化进行了比较。结果表明 ,静息态下小麦原生质体整体荧光强度基本不变 ,暗示 [Ca2 + ]cyt能维持在一稳定水平 ;同时 ,不同品种小麦间也显示了 [Ca2 + ]cyt水平荧光强度的不同。温度由 15℃连续降至约 2℃时 ,抗寒冬小麦 [Ca2 + ]cyt出现升高后的回复 ,2℃之后逐渐升高 ;冷敏感春小麦则无此回复过程 ,而是一直升高到最大值。推测这一不同的动态变化最终决定了植物在低温下产生冷适应的不同能力。这进一步为“Ca2 + 是低温下生理信号的传导者” 展开更多
关键词 fluo-3/am 小麦原生质体 静息态 CA^2+ 时空变化 钙
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西红花苷对培养的牛内皮细胞内钙的调节作用 被引量：12
13
作者 绪广林 钱之玉 任萱 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期445-447,共3页
目的 观察西红花苷对不同刺激因子5-羟色胺（5-HT）、组胺（His）、过氧化氢（H2O2）所致内皮细胞内钙升高的影响。方法 采用Fluo-3/AM荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦扫描显微镜上测定培养的单个牛内皮细胞内游离钙的浓度。结果 在含... 目的 观察西红花苷对不同刺激因子5-羟色胺（5-HT）、组胺（His）、过氧化氢（H2O2）所致内皮细胞内钙升高的影响。方法 采用Fluo-3/AM荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦扫描显微镜上测定培养的单个牛内皮细胞内游离钙的浓度。结果 在含钙的Hank’s液中,5-经色胺、组胺、过氧化氢能明显升高静息状态的细胞内钙,增幅分别为280％、320％、285％。西红花苷1、10μmol/L对5-羟色胺、组胺、过氧化氢引起的钙增高有显著的抑制作用,并呈一定的剂量依赖性。0.1μmol/L西红花苷对细胞内钙升高无显著影响。结论 西红花苷抗动脉粥样硬化、高血压及炎症作用可能与其内皮细胞保护作用有关。 展开更多
关键词 西红花苷 fluo-3/am 激光共聚焦扫描显微镜 内皮细胞 细胞内钙 心血管病
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西红花苷对牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响(英文) 被引量：9
14
作者 何书英 钱之玉 唐富天 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期778-781,共4页
目的 研究西红花苷对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响。方法 以Fluo-3/AM作为Ca2+荧光探针,采用激光扫描共聚焦显微镜观察牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果无论细胞外有无钙离子,西红花苷(1×10～8,1×10～7,1... 目的 研究西红花苷对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响。方法 以Fluo-3/AM作为Ca2+荧光探针,采用激光扫描共聚焦显微镜观察牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果无论细胞外有无钙离子,西红花苷(1×10～8,1×10～7,1×10～6mol·L-1)均能明显抑制1×10～2mol·L-1H2O2引起的细胞内钙离子浓度的升高,其抑制率含钙条件下分别为34.1％,57.1％和74.3％(P<0.01),无钙条件下分别为26.2％,32.1％和50.0％(P<0.01);在胞外无钙的条件下,西红花苷(1×10-8,1×10～7,1×10-6mol·L-1)能抑制70 mmol·L-1 CHCl3导致雷洛丁敏感钙池的释放,其抑制率分别为27.8％,27.8％和50.0％(P<0.01)。结论 西红花苷能抑制胞外钙离子的内流及内质网上钙离子的释放。 展开更多
关键词 西红花苷 激光共聚焦显微镜 平滑肌细胞 fluo-3/am 钙离子
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芥子碱对PC12细胞内游离钙升高的影响 被引量：4
15
作者 何玲 刘丽芳 +4 位作者 李海涛 郭胜伟 邱嘉斌 李富 蔡宝昌 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期1679-1683,共5页
目的:考察芥子碱对高钾除极和谷氨酸引起细胞外钙内流以及咖啡因和环匹阿尼酸(cyclopia-zonic acid,CPA)引起细胞内钙释放所导致的PC12细胞内游离钙升高的影响。方法:PC12细胞用终浓度为5μmo.lL-1的钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM于37℃避... 目的:考察芥子碱对高钾除极和谷氨酸引起细胞外钙内流以及咖啡因和环匹阿尼酸(cyclopia-zonic acid,CPA)引起细胞内钙释放所导致的PC12细胞内游离钙升高的影响。方法:PC12细胞用终浓度为5μmo.lL-1的钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM于37℃避光负载孵育。细胞内游离钙([Ca2+]i)用VictorⅡ1420多功能标记分析仪检测,以荧光强度(FI)表示。结果:当有外钙存在时,PC12细胞静息[Ca2+]i的FI值为(1 188±163),75 mmol.L-1KCl和10 mmol.L-1谷氨酸引起细胞外钙内流,使[Ca2+]i增高,FI峰值分别增至(4 270±982)和(3 096±402)。芥子碱(0.01,0.1,1.0,10,100μmol.L-1)对静息[Ca2+]i没有明显的影响,但浓度相关性地抑制高钾和谷氨酸诱发的[Ca2+]i增高,抑制率分别为10.2%,39.5%,53.7%,71.8%,88.4%和30.3%,55.7%,68.5%,79.2%,94.1%。当无外钙存在时,PC12细胞静息[Ca2+]i的FI值为(813±112)。咖啡因(40 mmol.L-1)和CPA(30μmol.L-1)分别引起Caffeine-ryanodine和三磷酸肌醇(InsP3)敏感型-钙池释放而使[Ca2+]i升高,FI值分别增至(2 944±371)和(1 844±332)。芥子碱(0.1,1.0,10,100μmol.L-1)浓度相关性地抑制咖啡因和CPA诱发的[Ca2+]i增高,抑制率分别为23.7%,61.9%,77.5%,88.2%和10.9%,23.8%,44.6%,68.3%。结论:芥子碱能显著抑制电压依赖性和受体依赖性钙通道开放所引起的外钙内流,且对受体依赖性钙通道的抑制作用更强。此外,芥子碱对Caffeine-ryan-odine受体和InsP3敏感型钙池的内钙释放也有明显抑制作用,且对Caffeine-ryanodine受体敏感型钙池的抑制作用更强。这提示芥子碱有望成为很有研发前景的新型钙阻滞剂。 展开更多
关键词 芥子碱 细胞内游离钙 PCI2细胞 fluo-3/am 钙阻滞剂
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哈巴苷对缺氧缺糖诱导下大鼠海马神经细胞游离Ca^(2+)浓度的影响 被引量：5
16
作者 李官泽 徐慕蝶 +3 位作者 肖文喜 应夏丽 钟晓明 黄真 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期361-365,共5页
目的:研究哈巴苷对缺氧缺糖(OGD)诱导下海马神经细胞内游离Ca2+浓度的影响。方法:原代培养新生24 h内SD乳鼠海马神经细胞,采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定并检测其纯度;哈巴苷(0.5、1、5、10、25、50、100、150、200... 目的:研究哈巴苷对缺氧缺糖(OGD)诱导下海马神经细胞内游离Ca2+浓度的影响。方法:原代培养新生24 h内SD乳鼠海马神经细胞,采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定并检测其纯度;哈巴苷(0.5、1、5、10、25、50、100、150、200、250、500、1 000μmol/L)预处理48 h后,OGD 4 h,另设正常对照组及模型组,采用MTT法检测各组海马神经细胞活力,筛选哈巴苷有效浓度范围;将SD乳鼠海马神经细胞随机分为正常对照组、模型组、哈巴苷各剂量(50、75、100、125μmol/L)组,采用Fluo-3/AM负载的海马神经细胞,应用荧光倒置显微镜及荧光分光光度计观测哈巴苷各剂量对OGD海马神经细胞内游离Ca2+浓度的影响。结果:原代SD乳鼠海马神经细胞培养至第7天,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定为海马神经细胞,并检测其神经细胞纯度为85%~90%;MTT结果显示:与模型组比较,哈巴苷10、25、50、100μmol/L能显著增强海马神经细胞的活力(P<0.05或P<0.01),确定哈巴苷预处理48 h的有效浓度范围为10~100μmol/L;荧光倒置显微镜下观察,正常对照组海马神经细胞Ca2+荧光强度弱,模型组海马神经细胞Ca2+荧光强度强;与模型组比较,哈巴苷各剂量预处理48 h,均能降低OGD诱导的海马神经细胞Ca2+的荧光强度,其中75μmol/L组荧光强度降低最为明显。荧光分光光度法测定显示:与正常对照组比较,模型组海马神经细胞内游离Ca2+浓度显著升高(P<0.01);与模型组比较,哈巴苷75μmol/L能显著降低OGD诱导下海马神经细胞内游离Ca2+的浓度(P<0.05)。结论:哈巴苷预保护48 h能降低OGD诱导的海马神经细胞内游离Ca2+的浓度,以75μmol/L剂量效果最好,其保护作用与降低细胞内游离Ca2+浓度有关。 展开更多
关键词 哈巴苷 OGD 海马神经细胞 fluo-3/am负载 荧光分光光度法 Ca2+浓度
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共聚焦激光扫描显微镜技术在研究大鼠海马神经元胞内钙超载中的应用 被引量：4
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作者 黄娅林 赵鹏 程介士 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期98-100,104,F003,共5页
目的 观察抑制性氨基酸牛磺酸对兴奋性氨基酸谷氨酸所致胞内钙超载的影响。方法 选择Fluo-3／ AM对培养的海马神经元进行着色后,用共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)实时 扫描,动态显示海马神经元二维图像... 目的 观察抑制性氨基酸牛磺酸对兴奋性氨基酸谷氨酸所致胞内钙超载的影响。方法 选择Fluo-3／ AM对培养的海马神经元进行着色后,用共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)实时 扫描,动态显示海马神经元二维图像,以计算机相应软件对胞内钙的荧光强度变化进行分析统计。结果 在 0.5 mmol／L谷氨酸作用下,胞内钙荧光强度迅速升高(P<0.001);0.5 mmol／L谷氨酸与3 mmol／L牛磺酸共同 作用于海马神经元时,胞内钙荧光强度明显降低(P<0.001);灌流液中去除牛磺酸后,胞内钙荧光强度上升(P <0.001)。结论 抑制性氨基酸牛磺酸可抑制由兴奋性氨基酸谷氨酸所致神经元的胞内钙超载;CLSM以其独 特的优势,在高清晰度地显示海马神经元形态的同时,也可动态地观察活细胞在不同环境下胞内钙的快速变化 以及定量分析。该技术在动态观察和二维图像的高分辨率上比传统测钙方法有更大的优越性。 展开更多
关键词 钙超载 海马神经元 共聚焦激光扫描显微镜 牛磺酸 谷氨酸 CLSM 大鼠海马 荧光强度 活细胞 fluo-3/am
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拟南芥叶细胞游离钙离子的测定 被引量：10
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作者 孙清鹏 王小菁 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期79-82,共4页
低温(4℃)条件下将钙离子荧光探针Fluo-3/AM导入拟南芥叶细胞,利用激光共聚焦显微技术检测了胞内钙离子荧光强度的分布。实验证明,低温导入Fluo-3/AM法测定拟南芥叶细胞中钙离子荧光强度的变化切实可行。茉莉酸(JA)处理能够诱导胞内游... 低温(4℃)条件下将钙离子荧光探针Fluo-3/AM导入拟南芥叶细胞,利用激光共聚焦显微技术检测了胞内钙离子荧光强度的分布。实验证明,低温导入Fluo-3/AM法测定拟南芥叶细胞中钙离子荧光强度的变化切实可行。茉莉酸(JA)处理能够诱导胞内游离钙离子浓度的升高。 展开更多
关键词 拟南芥 fluo-3/am 钙离子 茉莉酸
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赛拉嗪麻醉对大鼠大脑皮质神经细胞游离钙离子浓度的影响 被引量：2
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作者 李志强 李小波 +3 位作者 石星星 尹柏双 范宏刚 王洪斌 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第4期3-4,8,共3页
为了研究赛拉嗪麻醉对大鼠大脑皮质神经细胞游离钙离子浓度的影响,将15只SD大鼠在无菌条件下处死,分离脑组织、制备脑神经细胞悬液,分为对照组、KCl组、赛拉嗪低剂量组和赛拉嗪高剂量组。用Fluo-3/AM负载,除对照组外其他组使用50mmol/L... 为了研究赛拉嗪麻醉对大鼠大脑皮质神经细胞游离钙离子浓度的影响,将15只SD大鼠在无菌条件下处死,分离脑组织、制备脑神经细胞悬液,分为对照组、KCl组、赛拉嗪低剂量组和赛拉嗪高剂量组。用Fluo-3/AM负载,除对照组外其他组使用50mmol/L的KCl刺激,药物组加入药物,然后用流式细胞仪检测钙离子荧光强度。结果显示,对照组荧光强度最低,赛拉嗪低剂量组较KCl组显著增加(P<0.05),赛拉嗪高剂量组较KCl组极显著增加(P<0.01)。结果表明,Ca2+是赛拉嗪全麻作用的主要靶位之一,而且其中枢抑制效应与增加神经细胞内[Ca2+]i有关。 展开更多
关键词 赛拉嗪 神经细胞 CA2+ fluo-3/am 流式细胞仪
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小檗胺对 KC1、Ouabain诱导的[Ca^(2+)]_i升高的影响(英文) 被引量：3
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作者 赵艳玲 乔国芬 +1 位作者 周虹 李柏岩 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 1999年第4期265-268,共4页
研究小檗胺（Ber）对氯化钾（KC1）和哇巴因（Oua）诱导的家兔血管平滑肌细胞（VSMC）内游离钙（［Ca(2+)］i）的影响。培养的VSMC以荧光探针Fluo-3/AM负载，通过激光共聚焦显微镜检查法检测［Ca(2+)］i。细胞外钙2．0mmol·L(-1)时... 研究小檗胺（Ber）对氯化钾（KC1）和哇巴因（Oua）诱导的家兔血管平滑肌细胞（VSMC）内游离钙（［Ca(2+)］i）的影响。培养的VSMC以荧光探针Fluo-3/AM负载，通过激光共聚焦显微镜检查法检测［Ca(2+)］i。细胞外钙2．0mmol·L(-1)时，VSMC静息时［Ca(2+)］i水平为（228±46）／FI（n＝26），且不被Ber30βmol·L(-1)所影响（P＞0．05）。但KCl60mmol.L(-1)升高的[Ca(2+)]i；可被Ber预处理所抑制（P＜0.01）。荧光强度达峰值的时间明显延长（P＜0．05或P＜0．01）。实验结果还显示，在标本中加入KC1或Oua，VSMC核内的荧光值不受影响。Ber的这些作用与Ver10μmoh.L(-1)的作用相似。本研究的结果显示，Ber可拮抗KC1或Oua升高［Ca(2+)］的作用，此抑制作用可能与Ber阻断电压依赖性钙通道及激活Na+－K+－ATPase的作用有关。 展开更多
关键词 小檗碱 fluo-3/am 钙 离子通道 血管平滑肌细胞
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