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流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较
被引量:
5
1
作者
郭继强
韩亚萍
+4 位作者
李芳
赵晴
贾原
靳保利
张俊萍
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1691-1697,共7页
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染...
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染色后经流式细胞术检测。A组:CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法;B组:Annectin-V/PI双色荧光染色法;C组:CFSE/PI双色荧光染色法。结果:培养17 d后,NK细胞(CD3-CD56+)由培养第0天(16.34±10.51)%增加到(83.63±10.63)%(P<0.05)。3种染色方法检测结果均显示,扩增后NK细胞对K562细胞具有显著细胞毒活性:A组NK细胞对K562细胞的细胞毒活性均明显高于B和C组(P<0.05),当效靶比为10∶1时,A、B和C 3个组细胞毒活性分别为(36.56±3.69)%、(22.35±2.71)%和(10.85±2.09)%;当效靶比为20∶1时细胞毒活性分别为(47.83±5.52)%、(39.07±5.55)%和(29.61±4.81)%;当效靶比为40∶1时细胞毒活性则分别为(67.7±4.77)%、(51.51±4.43)%和(44.12±5.62)%,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论:健康者外周血经体外分离培养,可得到高纯度NK细胞;流式细胞检测技术CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法能特异性地和灵敏地检测NK细胞的细胞毒活性。
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关键词
流式细胞技术
细胞毒作用
NK细胞
CFSE
annexin-v/7-aad
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职称材料
荧光显微镜法检测小鼠胸腺细胞凋亡的染料选择
被引量:
2
2
作者
苗苗
郭茜茜
+1 位作者
吴丹丹
于广
《电子显微学报》
CAS
CSCD
2015年第3期272-276,共5页
目的:通过荧光显微镜检测对比不同染料的特点,并找出最佳染料组合用于胸腺细胞凋亡检测。方法:PI,7-AAD,Annexin V-Alexa Flour 488(AF488)分别单染胸腺细胞,Annexin V-AF488与PI/7-AAD双染胸腺细胞在荧光显微镜下观察,Annexin V-APC与7...
目的:通过荧光显微镜检测对比不同染料的特点,并找出最佳染料组合用于胸腺细胞凋亡检测。方法:PI,7-AAD,Annexin V-Alexa Flour 488(AF488)分别单染胸腺细胞,Annexin V-AF488与PI/7-AAD双染胸腺细胞在荧光显微镜下观察,Annexin V-APC与7-AAD双染胸腺细胞在流式细胞仪下观察。结果:采用荧光显微镜检测,PI单染后在绿色模块下能够看到阳性信号,而7-AAD单染后在绿色模块下不会出现阳性信号;三种染料中,PI与7-AAD单染细胞涂片后随着时间的延长阳性信号逐渐增多,Annexin V-AF488单染细胞涂片后随着时间的延长阳性信号稍微减弱;7-AAD与Annexin V-AF488双染胸腺细胞在荧光显微镜下检测的结果和7-AAD与Annexin V-APC双染胸腺细胞流式细胞仪检测的结果无差异。结论:采用荧光显微镜法检测胸腺细胞凋亡,7-AAD与Annexin V-AF488结合最佳。
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关键词
PI
7
-aad
ANNEXIN
V-AF488
胸腺细胞凋亡
荧光显微镜
流式细胞仪
下载PDF
职称材料
快速诱导细胞凋亡方法探讨
被引量:
3
3
作者
朱雪梅
李艳梅
卫林
《河南师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2021年第2期80-86,共7页
[目的]利用流式细胞仪检测细胞凋亡在基础研究、疾病诊断及预后预测及评价中具有重要的应用价值.补偿调节所需的单阳染色管的制备,是流式细胞术检测凋亡过程的一个重要步骤.探讨了快速诱导不同细胞系和原代细胞凋亡的方法,优化用于检测...
[目的]利用流式细胞仪检测细胞凋亡在基础研究、疾病诊断及预后预测及评价中具有重要的应用价值.补偿调节所需的单阳染色管的制备,是流式细胞术检测凋亡过程的一个重要步骤.探讨了快速诱导不同细胞系和原代细胞凋亡的方法,优化用于检测细胞凋亡的流式单阳染色管快速制备.[方法](1)分别用100μmol/L H_(2)O_(2)、体积分数4%多聚甲醛、75%乙醇和反复冻融的方法处理293T细胞15 min、30 min、1 h,Annexin V-PE/7-AAD双标记流式检测293T细胞凋亡率.(2)体积分数1%乙醇、5%乙醇、10%乙醇和20%乙醇处理293T细胞、RAW264.7细胞、HeLa细胞、T细胞和B细胞1 min,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果](1)293T细胞经100μmol/L H_(2)O_(2)、体积分数4%多聚甲醛、75%乙醇和反复冻融法处理后,几乎所有细胞均处于凋亡状态.(2)293T细胞、RAW264.7细胞、T细胞和B细胞用1%乙醇处理1 min,HeLa细胞用20%乙醇处理1 min,可出现较明显的凋亡现象.[结论]细胞凋亡实验时,根据细胞的生长特性,可选择体积分数1%~20%的乙醇诱导1 min,作为制备单阳染色管的最佳方案.
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关键词
细胞凋亡
流式细胞术
Annexin
V-PE
/7
-aad
下载PDF
职称材料
题名
流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较
被引量:
5
1
作者
郭继强
韩亚萍
李芳
赵晴
贾原
靳保利
张俊萍
机构
山西医学科学院山西大医院生物治疗科
山西医科大学研究生院
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1691-1697,共7页
基金
山西省生物治疗基础建设示范平台基金项目(2014091105-0101)
文摘
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染色后经流式细胞术检测。A组:CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法;B组:Annectin-V/PI双色荧光染色法;C组:CFSE/PI双色荧光染色法。结果:培养17 d后,NK细胞(CD3-CD56+)由培养第0天(16.34±10.51)%增加到(83.63±10.63)%(P<0.05)。3种染色方法检测结果均显示,扩增后NK细胞对K562细胞具有显著细胞毒活性:A组NK细胞对K562细胞的细胞毒活性均明显高于B和C组(P<0.05),当效靶比为10∶1时,A、B和C 3个组细胞毒活性分别为(36.56±3.69)%、(22.35±2.71)%和(10.85±2.09)%;当效靶比为20∶1时细胞毒活性分别为(47.83±5.52)%、(39.07±5.55)%和(29.61±4.81)%;当效靶比为40∶1时细胞毒活性则分别为(67.7±4.77)%、(51.51±4.43)%和(44.12±5.62)%,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论:健康者外周血经体外分离培养,可得到高纯度NK细胞;流式细胞检测技术CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法能特异性地和灵敏地检测NK细胞的细胞毒活性。
关键词
流式细胞技术
细胞毒作用
NK细胞
CFSE
annexin-v/7-aad
Keywords
flow cytometry
cell-mediated cytotoxicity
NK cell
carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester(CFSE)
annexin-v/7-aad
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
荧光显微镜法检测小鼠胸腺细胞凋亡的染料选择
被引量:
2
2
作者
苗苗
郭茜茜
吴丹丹
于广
机构
辽宁医学院基础医学院
出处
《电子显微学报》
CAS
CSCD
2015年第3期272-276,共5页
基金
NK细胞亚群在小鼠心脏移植慢性排斥中的作用机制(No.81373162)
文摘
目的:通过荧光显微镜检测对比不同染料的特点,并找出最佳染料组合用于胸腺细胞凋亡检测。方法:PI,7-AAD,Annexin V-Alexa Flour 488(AF488)分别单染胸腺细胞,Annexin V-AF488与PI/7-AAD双染胸腺细胞在荧光显微镜下观察,Annexin V-APC与7-AAD双染胸腺细胞在流式细胞仪下观察。结果:采用荧光显微镜检测,PI单染后在绿色模块下能够看到阳性信号,而7-AAD单染后在绿色模块下不会出现阳性信号;三种染料中,PI与7-AAD单染细胞涂片后随着时间的延长阳性信号逐渐增多,Annexin V-AF488单染细胞涂片后随着时间的延长阳性信号稍微减弱;7-AAD与Annexin V-AF488双染胸腺细胞在荧光显微镜下检测的结果和7-AAD与Annexin V-APC双染胸腺细胞流式细胞仪检测的结果无差异。结论:采用荧光显微镜法检测胸腺细胞凋亡,7-AAD与Annexin V-AF488结合最佳。
关键词
PI
7
-aad
ANNEXIN
V-AF488
胸腺细胞凋亡
荧光显微镜
流式细胞仪
Keywords
PI
7
-aad
Annexin V-AF488
thymocyte apoptosis
fluorescence microscope
flow cytometry
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
快速诱导细胞凋亡方法探讨
被引量:
3
3
作者
朱雪梅
李艳梅
卫林
机构
苏州大学生物医学研究院
出处
《河南师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2021年第2期80-86,共7页
基金
国家自然科学基金(31870868)
江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD).
文摘
[目的]利用流式细胞仪检测细胞凋亡在基础研究、疾病诊断及预后预测及评价中具有重要的应用价值.补偿调节所需的单阳染色管的制备,是流式细胞术检测凋亡过程的一个重要步骤.探讨了快速诱导不同细胞系和原代细胞凋亡的方法,优化用于检测细胞凋亡的流式单阳染色管快速制备.[方法](1)分别用100μmol/L H_(2)O_(2)、体积分数4%多聚甲醛、75%乙醇和反复冻融的方法处理293T细胞15 min、30 min、1 h,Annexin V-PE/7-AAD双标记流式检测293T细胞凋亡率.(2)体积分数1%乙醇、5%乙醇、10%乙醇和20%乙醇处理293T细胞、RAW264.7细胞、HeLa细胞、T细胞和B细胞1 min,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果](1)293T细胞经100μmol/L H_(2)O_(2)、体积分数4%多聚甲醛、75%乙醇和反复冻融法处理后,几乎所有细胞均处于凋亡状态.(2)293T细胞、RAW264.7细胞、T细胞和B细胞用1%乙醇处理1 min,HeLa细胞用20%乙醇处理1 min,可出现较明显的凋亡现象.[结论]细胞凋亡实验时,根据细胞的生长特性,可选择体积分数1%~20%的乙醇诱导1 min,作为制备单阳染色管的最佳方案.
关键词
细胞凋亡
流式细胞术
Annexin
V-PE
/7
-aad
Keywords
apoptosis
flow cytometry
Annexin V-PE
/7
-aad
分类号
R3923 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较
郭继强
韩亚萍
李芳
赵晴
贾原
靳保利
张俊萍
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
5
下载PDF
职称材料
2
荧光显微镜法检测小鼠胸腺细胞凋亡的染料选择
苗苗
郭茜茜
吴丹丹
于广
《电子显微学报》
CAS
CSCD
2015
2
下载PDF
职称材料
3
快速诱导细胞凋亡方法探讨
朱雪梅
李艳梅
卫林
《河南师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2021
3
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职称材料
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