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30 and 32 kDa outer membrane proteins of Bordetella pertussis as a modulator on promoting degranulation of mast cells
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作者 YONG LIANG LOU JIE YAN +1 位作者 YI HUI LUO YA FEI MAO 《Journal of Microbiology and Immunology》 2005年第2期111-119,共9页
The correlation between the activities of the outer menbrane proteins (OMPs) of Bordetella pertussis and the lgE-mediated asthma was investigated in the present study, in which the OMPs of B. pertussis and their com... The correlation between the activities of the outer menbrane proteins (OMPs) of Bordetella pertussis and the lgE-mediated asthma was investigated in the present study, in which the OMPs of B. pertussis and their components were prepared by detergent treatment and chromatography, and the molecular weights of the OMPs components were determined by SDS-PAGE. The amounts of total as well as the ovalbumin (OVA)-specific IgE induced by dead B. pertussis whole bacterial vaccine on guinea pigs were detected by ELISA. Meanwhile, the effect of the OMPs and their components to promote the degranulation of guinea pig mast cells was observed by using the mast cell degranulation test, and ELISA assay was used to measure the histatmine levels in the supematants from the mast cell cultures. Histamine sensitive test was used to demonstrate the effects of the OMPs and their components to increase the histamine lethal sensitivity in mice. It was found that four components with molecular weights of 30, 32, 38 and 69 kDa could be obtained from the OMPs of B. pertussts, and the dead whole bacteria vaccine of B. pertussis had the ability to increase the levels of the total as well as the OVA-specific IgE in sera of guinea pigs. The OMPs and their 30 and 32 kDa components demonstrated significantly enhancing effect on the degranulation of guinea pig mast cells, and the histamine levels in the supematants from the mast cell culture treated with OMPs and their 30 and 32 kDa components were also significantly increased. It is evident that the strong adjuvant activity and the enhancing effect to degranulation of mast cells and the release of histamine of certain outer membrane components of B. pertussis could be demonstrated as revealed by the results of the present study, suggesting the possibility of a close relationship between the infection of vaccination with B. pertussis and the IgE-mediated asthma. 展开更多
关键词 Bordetella pertussis bacterial outer membrane protein Immunoglobulin E Mast cells Cell degranulation Histamine Asthma
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问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位 被引量:9
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作者 罗冬娇 胡野 +1 位作者 Dennin R H 严杰 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2007年第5期458-464,共7页
目的:改建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化,确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法:参照大肠杆菌偏爱密码子设计,合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原... 目的:改建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化,确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法:参照大肠杆菌偏爱密码子设计,合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS—PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR/PatocI抗血清为一抗的Westernblot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL2ls的免疫反应性,显微镜凝集试验(MAT)比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果:改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8.5%和46.5%。两种rLipL21均能与TR/PatocI抗血清发生免疫结合反应,免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近,均为1:80~1:320。LipL21位于钩体外膜表面。结论:LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量,其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性,其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号/免疫学 钩端螺旋体 问号/遗传学 克隆 分子 细菌外膜蛋白质类/免疫学 细菌外膜蛋白质类/生物合成 重组蛋白质类/免疫学 重组蛋白质类/生物合成 脂蛋白类/免疫学 脂蛋白类/生物合成
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幽门螺杆菌27 kDa外膜蛋白的基因克隆和特性鉴定 被引量:15
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作者 庞智 朱红音 +1 位作者 徐蔚文 萧树东 《胃肠病学》 2002年第5期265-269,共5页
背景:幽门螺杆菌(H.Pylori)是全球人群中感染范围最广的致病菌,现己被公认为慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因子,并与胃腺癌和胃淋巴瘤的形成密切相关。而H.Pylori疫苗可能成为控制这一全球范围感染的有效措施,其研制和开发已成为目... 背景:幽门螺杆菌(H.Pylori)是全球人群中感染范围最广的致病菌,现己被公认为慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因子,并与胃腺癌和胃淋巴瘤的形成密切相关。而H.Pylori疫苗可能成为控制这一全球范围感染的有效措施,其研制和开发已成为目前研究的热点。目的:探索研制H.Pylori疫苗的新途径,对H.Pylori27kDa外膜蛋白(OMP27)进行基因克隆和特性鉴定。方法:培养和收集H.Pylori菌株NCTC11637,采用酚:氯仿抽提和纯化基因组DNA。分别设计引物P1和P2,并以该基因组DNA为模板,以聚合酶链反应(PCR)方法扩增OMP27基因片段。构建pQE30-OMP27重组表达载体时,pQE30质粒载体和纯化的PCR产物均用限制性内切酶Kpnl和HindⅢ双酶切,再用T4 DNA连接酶将双酶切后的目的基因片段OMP27重组于pQE30的相应酶切位点之间,连接产物转化大肠杆菌XL1-Blue。挑选转化克隆、提取质粒,并进行Kpnl和HindⅢ双酶切和PCR方法鉴定,1%琼脂糖凝胶电泳观察酶切和PCR扩增结果,经测序分析确认后,筛选出插入目的基因的阳性克隆,命名为pQE30-OMP27。挑取单个含重组质粒PQE30-OMP27的工程菌(XL1-Blue)阳性克隆,进行培养和IPTG诱导表达后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western blot进行蛋白表达和抗原性鉴定。 展开更多
关键词 PCR 基因表达 幽门螺杆菌27kDa 外膜蛋白 基因克隆 特性鉴定
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76例耐亚胺培南铜绿假单胞菌B类碳青霉烯酶与耐药现状研究 被引量:9
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作者 王丽娟 李武平 +4 位作者 史皆然 徐修礼 刘冰 孙慧英 马春丽 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第5期559-561,共3页
目的调查耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药现状及其B类碳青霉烯酶和膜孔蛋白基因的存在情况,指导临床合理使用抗菌药物。方法连续收集2012年2月至2012年8月该院临床标本中分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌共76株,采用聚合酶链反应技术(PCR)检... 目的调查耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药现状及其B类碳青霉烯酶和膜孔蛋白基因的存在情况,指导临床合理使用抗菌药物。方法连续收集2012年2月至2012年8月该院临床标本中分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌共76株,采用聚合酶链反应技术(PCR)检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶耐药基因及膜孔蛋白基因情况,并通过药物敏感试验了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征。结果 76株耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要分布在神经外科ICU、神经内科ICU、烧伤科,分别占36.8%、25.0%、13.2%;所检菌株对多黏菌素B敏感,对其余9种抗菌药物均不同程度耐药;50株携带VIM基因,17株携带IMP基因,2株携带SIM基因,膜孔蛋白基因均未检出。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌多药耐药及泛耐药现象严重,其原因可能与多耐药基因表达及膜孔蛋白缺失有关,耐药基因以VIM、IMP为主,应加强耐药性监测,合理使用抗菌药物,防止耐亚胺培南铜绿假单胞菌的蔓延。 展开更多
关键词 假单胞菌 铜绿 亚胺培南 碳青霉烯酶 细菌外膜蛋白质类 抗药性
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实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立 被引量:5
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作者 牛东升 杨晓 +2 位作者 陈梅玲 王锡乐 温博海 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1297-1299,共3页
目的建立检测斑点热立克次体的群特异性实时荧光定量PCR方法。方法根据斑点热立克次体外膜蛋白B(ompB)基因序列设计群特异性引物和探针,以克隆的斑点热立克次体ompB基因片段作为模板,在荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量检测法。结... 目的建立检测斑点热立克次体的群特异性实时荧光定量PCR方法。方法根据斑点热立克次体外膜蛋白B(ompB)基因序列设计群特异性引物和探针,以克隆的斑点热立克次体ompB基因片段作为模板,在荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量检测法。结果该方法定量检测标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系,最小检出量小于10个拷贝。用该方法检测斑点热立克次体(立氏立克次体、西伯利亚立克次体、西伯利亚立克次体精河株、康氏立克次体、小蛛立克次体、澳大利亚立克次体、派氏立克次体、扇头蜱立克次体、非洲立克次体、阿斯特罕立克次体、斯洛伐克立克次体、日本立克次体、马赛立克次体、猫立克次体和黑龙江立克次体)DNA样本的结果均为阳性,但检测普氏立克次体、莫氏立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体、查菲埃立克体、汉赛巴通体以及其他9种病原菌DNA样本的结果均为阴性。用荧光定量PCR检测立氏立克次体、黑龙江立克次体、西伯利亚立克次体精河株感染BALB/C小鼠脾脏组织DNA,均检出不同水平的阳性结果,结果与感染进程相关。结论本研究建立的检测斑点热立克次体的实时荧光定量PCR具有较高的敏感性和群特异性,适合样本中各种斑点热立克次体的快速检测,可用于斑点热的实验室快速诊断和自然疫源地的流行病学研究。 展开更多
关键词 立克次体属 斑点热 聚合酶链反应 细菌外膜蛋白质类B
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外膜蛋白疫苗对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用 被引量:10
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作者 陈洁 陈旻湖 +1 位作者 朱森林 陈为 《胃肠病学》 2001年第2期75-77,共3页
目的:研究幽门螺杆菌(H. pylori)外膜蛋白(OMP)加大肠杆菌不耐热内毒素(LT)经口免疫对小鼠H. pylori感染的保护作用。探讨定量细菌培养在疫苗免疫效果评价中的应用。方法:从H. Pylori NCTC1... 目的:研究幽门螺杆菌(H. pylori)外膜蛋白(OMP)加大肠杆菌不耐热内毒素(LT)经口免疫对小鼠H. pylori感染的保护作用。探讨定量细菌培养在疫苗免疫效果评价中的应用。方法:从H. Pylori NCTC11637菌株制备OMP和全菌超声粉碎抗原,LT作为粘膜免疫佐剂。通过灌胃分别以H. Pylori全菌超声粉碎抗原1mg加LT 10μg(A组)、H. Pylori OMP 0.5 mg加LT 10μg(B组)和生理盐水(C组)免疫小鼠(n=30),每周1次,共4次。免疫完成后4周以H. pylori Sydney Strain1菌株攻击小鼠1次(1×107 CFU/只),攻击后4周处死小鼠,取胃分别作快速尿素酶试验、病理检查及定量细菌培养,观察H.Pylori定植情况。结果: C组小鼠H.Pylori定植密度为2.40×107CFU/g胃组织,A组和B组小鼠分别为2.03×105 CFU/g和6.76×105CFU/g胃组织,免疫组的定植密度明显降低。结论:口服H. pylori OMP加LT对小鼠H. Pylori感染具有一定免疫保护作用,但不能完全预防感染,需进一步筛选更为有效的抗原和佐剂。定量细菌培养可以? 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 细菌外膜蛋白质炎 肠毒素炎 免疫法 定量培养
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鼠伤寒沙门菌外膜蛋白与耐药性关系的分析 被引量:5
7
作者 刘维红 郭爱珍 +3 位作者 徐引弟 贾爱卿 严克霞 陈焕春 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期48-49,53,共3页
目的分析鼠伤寒沙门菌外膜蛋白(OMP)与耐药性的关系。方法用消除剂丫啶橙消除耐药性,盲传测其遗传稳定性,采用超声波物理裂解法制备鼠伤寒沙门菌外膜蛋白标本,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDA-PAGE)检测外膜蛋白,用紫外分光光度计测其吸光... 目的分析鼠伤寒沙门菌外膜蛋白(OMP)与耐药性的关系。方法用消除剂丫啶橙消除耐药性,盲传测其遗传稳定性,采用超声波物理裂解法制备鼠伤寒沙门菌外膜蛋白标本,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDA-PAGE)检测外膜蛋白,用紫外分光光度计测其吸光值,计算浓度。结果抗性消除表型能稳定遗传,耐药鼠伤寒沙门菌与敏感鼠伤寒沙门菌都含有6条主要的外膜蛋白条带,两者相比,发现耐药菌的外膜蛋白在约57、53、30 kDa处减弱或缺失,总的蛋白浓度也低于后者。结论鼠伤寒沙门菌耐药性与外膜蛋白的减弱或缺失有关。 展开更多
关键词 细菌外膜蛋白 鼠伤寒沙门菌 SDS-PAGE 耐药性消除
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问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定 被引量:3
8
作者 姜久昆 林旭瑷 +1 位作者 严杰 薛峰 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2008年第6期585-591,621,共8页
目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增... 目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号/免疫学 细菌外膜蛋白质类/生物合成 细菌外膜蛋白质类/分离 外膜脂蛋白/属特异性抗原 LipL41/1/LipL41/2 抗原表位/预测 噬菌体展示 免疫学鉴定
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羊布鲁氏菌外膜蛋白质的组成鉴定 被引量:4
9
作者 曲勍 王玉飞 +7 位作者 徐杰 钟志军 乔凤 杜昕颖 汪舟佳 黄留玉 于雅琴 陈泽良 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期805-811,共7页
目的:通过蛋白质组技术阐明羊布鲁氏菌外膜蛋白的主要组成。方法:提取并纯化羊布鲁氏菌的外膜蛋白,应用双向电泳技术进行分离,选取双向电泳图上主要的蛋白点进行质谱分析,同时主要蛋白质点的肽指纹图谱利用Mascot在NCBInr蛋白数据库中... 目的:通过蛋白质组技术阐明羊布鲁氏菌外膜蛋白的主要组成。方法:提取并纯化羊布鲁氏菌的外膜蛋白,应用双向电泳技术进行分离,选取双向电泳图上主要的蛋白点进行质谱分析,同时主要蛋白质点的肽指纹图谱利用Mascot在NCBInr蛋白数据库中进行检索。结果:共鉴定到67个蛋白点,主要外膜蛋白为Omp25和Omp31,其他外膜蛋白如Imp、Frp、GroEL等,功能涉及物质运输、能量代谢、应激等。结论:对主要外膜蛋白Omp25和Omp31的识别与分析不仅有助于对布鲁氏菌致病机制的研究,而且为布鲁氏菌病的疫苗研制提供靶标蛋白。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 细菌外膜蛋白质类 双向电泳
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基于耐药基因OPRD2探讨铜绿假单胞菌的临床感染特性 被引量:5
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作者 丁军颖 桂红 +4 位作者 洪燕英 安世栋 丁雪菲 卢幼然 刘清泉 《解放军医药杂志》 CAS 2015年第10期69-71,75,共4页
目的探讨2014年首都医科大学附属北京中医医院铜绿假单胞菌临床感染的分布情况,并分析其耐药特点。方法分离2014年全院感染病例的送检标本15 620例,留存铜绿假单胞菌,以最小抑菌浓度(MIC)法检测其对20种抗生素的敏感性,并对全耐药的铜... 目的探讨2014年首都医科大学附属北京中医医院铜绿假单胞菌临床感染的分布情况,并分析其耐药特点。方法分离2014年全院感染病例的送检标本15 620例,留存铜绿假单胞菌,以最小抑菌浓度(MIC)法检测其对20种抗生素的敏感性,并对全耐药的铜绿假单胞菌进行耐药基因外膜蛋白D2(OPRD2)的检测。结果本研究分离非重复病原菌5075株,铜绿假单胞菌332株(6.54%)。标本来源以痰液为主,主要发生在疮疡外科、呼吸科和重症监护病房。分离的铜绿假单胞菌对阿米卡星最敏感;对头孢唑啉耐药率最高。对20种抗生素均耐药9株铜绿假单胞菌其OPRD2耐药基因并非全部缺失。结论临床感染铜绿假单胞菌比例大,范围广。加强对铜绿假单胞菌感染及耐药性的监测,尤其相关耐药基因的检测,可为临床合理治疗提供依据。 展开更多
关键词 耐药基因 临床感染 铜绿假单胞菌 细菌外膜蛋白
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问号钩端螺旋体主要外膜蛋白免疫功能表位及其致炎作用的研究 被引量:3
11
作者 徐丽慧 严杰 +1 位作者 阮萍 毛亚飞 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第1期9-14,共6页
目的 :了解问号钩端螺旋体 (简称钩体 )主要外膜蛋白 Omp L 1、Lip L 32和 L ip L 4 1免疫功能表位及其致炎作用。方法 :建立 Ni- NTA亲和层析法 ,提取不同基因型表达的目的重组蛋白 r Omp L1/ 1和 Omp L1/ 2、L ip L32 / 1和 r Lip L32... 目的 :了解问号钩端螺旋体 (简称钩体 )主要外膜蛋白 Omp L 1、Lip L 32和 L ip L 4 1免疫功能表位及其致炎作用。方法 :建立 Ni- NTA亲和层析法 ,提取不同基因型表达的目的重组蛋白 r Omp L1/ 1和 Omp L1/ 2、L ip L32 / 1和 r Lip L32 / 2、Lip L4 1/ 1和 r Lip L4 1/ 2。采用 SDS- PAGE检测上述目的重组蛋白的表达情况和提取物纯度。分别采用 Signal P3.0预测服务器 Signal P- NN软件、Propred MHC class- binding peptide prediction- Pro Pred预测服务器 EMBOSS软件 ,对上述蛋白的信号肽、MHC- 类分子结合肽和 B细胞表位进行分析。以人脐静脉内皮细胞株EVC- 30 4为效应细胞 ,采用 EL ISA检测上述目的重组蛋白诱导人脐静脉内皮细胞 EVC- 30 4分泌 IL - 1、IL - 8和TNF- α的作用。结果 :在 IPTG诱导下 ,所构建的原核表达系统可有效表达 r Omp L1/ 1和 r Omp L1/ 2、r Lip L32 / 1和r Lip L32 / 2、r L ip L4 1/ 1和 r Lip L4 1/ 2 ,其产量分别约占细菌总蛋白的 30 %和 15 %、4 0 %和 35 %、15 %和 10 %。提纯后的目的重组蛋白 SDS- PAGE后均仅见单一的蛋白条带。Omp L1s、Lip L32 / 1和 Lip L32 / 2、Lip L4 1s的信号肽分别位于 N端 1- 2 4、1- 2 1和 1- 2 4、1- 2 4位氨基酸残基。 Omp L 1s。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号/致病力 细菌外膜蛋白/致病力 免疫显性表位/分析 细胞因子
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琼氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药分子机制研究 被引量:6
12
作者 张永 唐英春 +4 位作者 张扣兴 陆坚 莫晓能 潘晓娴 席云 《中国抗感染化疗杂志》 2005年第2期77-82,共6页
目的 研究琼氏不动杆菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法 对耐亚胺培南琼氏不动杆菌临床分离株ZN3858,采用琼脂对倍稀释法进行药敏试验,协同抑制试验,质粒接合试验,Southern blot等电聚焦电泳,PCR扩增OXA、IMP、VIM型碳青霉烯酶基因及... 目的 研究琼氏不动杆菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法 对耐亚胺培南琼氏不动杆菌临床分离株ZN3858,采用琼脂对倍稀释法进行药敏试验,协同抑制试验,质粒接合试验,Southern blot等电聚焦电泳,PCR扩增OXA、IMP、VIM型碳青霉烯酶基因及整合子编码序列及其分子克隆和测序,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)方法研究其外膜蛋白表达情况,阐述其对碳青霉烯类分子耐药机制。结果 受试琼氏不动杆菌具有多重耐药性;耐药基因分子克隆、测序并结合等电聚焦分析证实均产OXA 23型碳青霉烯酶,质粒接合试验、Southern blot显示其编码基因定位在染色体上;与敏感株相比,该菌22、35、47kDa外膜蛋白表达不同程度降低,飞行时间质谱显示:它们与一些耐药相关的外膜蛋白有一定的相似性。结论 表达OXA 23型碳青霉烯酶伴外膜蛋白下调是琼氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药重要分子机制。 展开更多
关键词 琼氏不动杆菌 耐药 DNA序列分析 细菌外膜蛋白 质谱
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淋球菌外膜Porin Ⅰ蛋白多价抗血清的制备及其临床应用初探 被引量:2
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作者 岑建萍 程浩 +2 位作者 曾凤英 郑磊 卢忠明 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2007年第9期531-533,共3页
目的制备淋球菌外膜GST-PⅠ融合蛋白多价抗血清,并探讨该多价抗血清与临床泌尿生殖道分泌物标本的结合情况。方法重组的淋球菌外膜GST-PⅠ融合蛋白免疫家兔,获得多价抗血清;并用双向免疫扩散法鉴定家兔多价抗血清的效价。家兔多价抗血... 目的制备淋球菌外膜GST-PⅠ融合蛋白多价抗血清,并探讨该多价抗血清与临床泌尿生殖道分泌物标本的结合情况。方法重组的淋球菌外膜GST-PⅠ融合蛋白免疫家兔,获得多价抗血清;并用双向免疫扩散法鉴定家兔多价抗血清的效价。家兔多价抗血清与临床泌尿生殖道分泌物标本的结合采用试管凝集法,出现棉絮状沉淀则为阳性;并把同一标本的试管凝集法结果与淋球菌培养结果相比较,观察两者的阳性符合率。同时以生理盐水和非淋菌性尿道炎患者的泌尿生殖道分泌物标本作为对照。结果成功免疫家兔并获得了PI蛋白多价抗血清,经鉴定多价抗血清的效价达1:8;淋球菌培养阳性的35例分泌物标本中,试管凝集法阳性23例,两方法结果符合率为65.71%。而对照组试管凝集法结果均为阴性。结论淋球菌外膜PI蛋白不仅具有一定的免疫原性,而且其免疫家兔产生的多价抗血清与淋病患者的分泌物标本有良好的结合率,特异性高。有望经纯化、标记后得到一种新的简单快速的淋病诊断试剂盒。 展开更多
关键词 奈瑟氏球菌 细茵外膜蛋白质类 抗血清
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鲍曼不动杆菌外膜蛋白与耐药性分析 被引量:6
14
作者 黄艳飞 陈群 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期144-145,共2页
目的 :分析 35株鲍曼不动杆菌外膜蛋白 (OMP)与耐药性的关系。方法 :采用超声物理法制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白标本 ,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测外膜蛋白。直接荧光法测鲍曼不动杆菌对环丙沙星的吸收和积累。结果 :35株鲍... 目的 :分析 35株鲍曼不动杆菌外膜蛋白 (OMP)与耐药性的关系。方法 :采用超声物理法制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白标本 ,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测外膜蛋白。直接荧光法测鲍曼不动杆菌对环丙沙星的吸收和积累。结果 :35株鲍曼不动杆菌都有 10条主要OMP带 ,耐药菌株与敏感菌株相比 ,发现外膜蛋白在约 2 9Ku条带处消失 ,而在 2 6Ku条带处却明显增强。耐药菌株药物积累量不及敏感菌株 ,经叠氮钠处理后 ,积累量上升并接近敏感菌株。结论 :鲍曼不动杆菌耐药与外膜蛋白的低通透性和主动外运有关。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白 耐药性 聚丙烯酰胺凝胶电泳
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细菌β-内酰胺酶及外膜蛋白改变与耐药性关系的研究 被引量:2
15
作者 黎世能 王浴生 雷军 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期302-305,共4页
本文通过细菌β-内酰胺酶活性检测及外膜蛋白电泳分析,研究了它们在细菌耐药性中的作用。结果指出:4株耐Aztreonam(Az)菌株,β-内酰胺酶明显升高,活性达349~1235U,对青霉素类、头孢菌素类产生耐药(MIC≥25μg/ml),但对四环素、氯霉素... 本文通过细菌β-内酰胺酶活性检测及外膜蛋白电泳分析,研究了它们在细菌耐药性中的作用。结果指出:4株耐Aztreonam(Az)菌株,β-内酰胺酶明显升高,活性达349~1235U,对青霉素类、头孢菌素类产生耐药(MIC≥25μg/ml),但对四环素、氯霉素、诺氟沙星、链霉素等非β-内酰胺抗生素及Imipenem仍敏感。另一株耐AZ,株,β-内酰胺酶无明显升高,但外膜蛋白变化明显,和相应敏感株比较,分子量为36 K、37K蛋白带缺失,37.5 K蛋白减少,39K蛋白增加,对头孢菌素类、四环类、氯霉素、诺氟沙星耐药,但对链霉素,Imipenem及青霉素仍敏感。 展开更多
关键词 细胞 Β-内酰胺酶 外膜蛋白 抗药性
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重组钩端螺旋体外膜蛋白酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的建立 被引量:2
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作者 范薇 于长明 +4 位作者 杨敬 隋丽华 战大伟 贺争鸣 孙岩松 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第4期249-252,共4页
目的建立以重组外膜蛋白为基础的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。方法以基因重组技术获取重组钩端螺旋体外膜蛋白LipL32,以该蛋白为抗原,特异的钩体抗血清进行ELISA方阵滴定、交叉性试验、阻断试验,并对北京地区的70份犬血清使用建立... 目的建立以重组外膜蛋白为基础的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。方法以基因重组技术获取重组钩端螺旋体外膜蛋白LipL32,以该蛋白为抗原,特异的钩体抗血清进行ELISA方阵滴定、交叉性试验、阻断试验,并对北京地区的70份犬血清使用建立的ELISA方法以及德国Virion公司的全菌体钩端螺旋体ELISA试剂盒进行相互验证。结果方阵滴定试验确立以100ng/孔为抗原包被浓度,1∶160为血清稀释度。交叉性试验具有广泛性、阻断试验标明该方法特异性强、灵敏度高。两种方法数据经χ2检验,两者检出率之间差异不显著。结论重组LipL32蛋白具有结合活性。初步建立了以重组LipL32蛋白为抗原的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。 展开更多
关键词 钩端螺旋体病 细菌外膜蛋白类 酶联免疫吸附测定
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非靶位基因突变及外膜通透性的改变对大肠杆菌喹诺酮耐药和多重耐药的影响 被引量:1
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作者 赵瑞华 舒明星 陈淑贞 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期263-265,共3页
目的 :探讨非靶位基因突变及外膜通透性改变对大肠杆菌喹诺酮类耐药和多重耐药的影响。方法 :PCR扩增大肠杆菌marOR区并进行DNA测序分析 ,提取外膜蛋白进行组成型分析。结果 :在R4 1 0菌株中 ,存在两处新位点的突变 :1 870 (T→C ,Val→... 目的 :探讨非靶位基因突变及外膜通透性改变对大肠杆菌喹诺酮类耐药和多重耐药的影响。方法 :PCR扩增大肠杆菌marOR区并进行DNA测序分析 ,提取外膜蛋白进行组成型分析。结果 :在R4 1 0菌株中 ,存在两处新位点的突变 :1 870 (T→C ,Val→Ala)和 1 879(A→C ,terminator→Ser)。 3株对喹诺酮类药物高耐且同时多耐的菌株均存在OmpF缺失。结论 :多重耐药基因marOR区内的突变可能导致MarA表达增加和外膜蛋白组成型改变(OmpF缺失 ) 。 展开更多
关键词 非靶位基因突变 外膜通透性 大肠杆菌 喹诺酮 耐药 多重耐药 影响 细菌外膜蛋白
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布鲁杆菌外膜蛋白OMP31和bp26基因的克隆、表达及鉴定 被引量:1
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作者 陈瑶 李明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期277-280,共4页
目的克隆并测序中国布鲁杆菌外膜蛋白基因OMP31和bp26,重组表达OMP31和bp26蛋白, 并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁杆菌基因组中获得OMP31和bp26基因,连接入PMD18-T克隆质粒并测序。测序后分别克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,在大... 目的克隆并测序中国布鲁杆菌外膜蛋白基因OMP31和bp26,重组表达OMP31和bp26蛋白, 并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁杆菌基因组中获得OMP31和bp26基因,连接入PMD18-T克隆质粒并测序。测序后分别克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,在大肠埃希菌中表达融合蛋白。用Western-blot技术分析重组表达的GST-OMP31和GST-bp26的免疫学特性。结果 OMP31和bp26基因的测序结果与 GeneBank中已报道的布鲁杆菌株完全一致,并在大肠埃希菌中成功表达了GST-OMP31和GST-bp26融合蛋白。布鲁杆菌免疫兔血清能特异性识别所表达的蛋白而不与载体蛋白发生反应。结论成功表达了布鲁杆菌外膜蛋白OMP31和bp26,它可以被布鲁杆菌免疫血清特异性识别,表现出良好的抗原性,为之后的实验室诊断和亚单位疫苗的研究打下良好的物质基础。 展开更多
关键词 布鲁杆菌属 细菌外膜蛋白质类 免疫活性 诊断
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基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立 被引量:1
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作者 刘畅 李楚楚 李智洋 《临床检验杂志》 CAS 2019年第10期742-744,共3页
目的建立一种基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法。方法利用细菌外膜囊泡表面携带高丰度细菌外膜蛋白A(OmpA)的特点,构建OmpA-NanoLuc荧光素酶融合蛋白,根据荧光素酶活性评估样品中的细菌外膜囊泡数量。结果成功构建OmpA-Nano... 目的建立一种基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法。方法利用细菌外膜囊泡表面携带高丰度细菌外膜蛋白A(OmpA)的特点,构建OmpA-NanoLuc荧光素酶融合蛋白,根据荧光素酶活性评估样品中的细菌外膜囊泡数量。结果成功构建OmpA-NanoLuc融合蛋白表达载体,受试菌株在表达该融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有稳定的荧光素酶活性。可通过检测荧光素酶活性的方式对细菌外膜囊泡进行半定量检测。结论建立了一种基于荧光素酶标记的细菌外膜囊泡半定量检测方法,可用于评估特定菌株的细胞外膜囊泡分泌水平。 展开更多
关键词 细菌外膜囊泡 外膜蛋白 荧光素酶
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戊二醛脱毒前后的百日咳杆菌外膜蛋白及其组分的毒性与免疫原性
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作者 吴清明 严杰 +2 位作者 王贤军 方平楚 沈建根 《浙江医科大学学报》 CSCD 1992年第3期110-113,共4页
应用TritonX-100抽提和Sephadex G-100层析获得百日咳杆菌外膜蛋白(OMP)及其5个组分(OMP_1~OMP_5).OMP_1~OMP_4均具有促白细胞增多、组胺敏感和胰岛活化蛋白的活性.OMP及其各组分对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)具有毒性作用,可使该细胞... 应用TritonX-100抽提和Sephadex G-100层析获得百日咳杆菌外膜蛋白(OMP)及其5个组分(OMP_1~OMP_5).OMP_1~OMP_4均具有促白细胞增多、组胺敏感和胰岛活化蛋白的活性.OMP及其各组分对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)具有毒性作用,可使该细胞聚集生长、~3H-TdR掺入量下降,及核糖体大量脱落和膜旁颗粒减少等现象.OMP组分OMP_1~OMP_4经0.3%戊二醛处理后,上述生物学活性均明显下降,CHO细胞不出现聚集生长,~3H-TdR掺入量明显高于未脱毒的组分,与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).脱毒前后的OMP各组分对小鼠的主动保护作用未见明显变化(P>0.05).实验结果表明,戊二醛能有效地降低OMP_1~OMP_4的毒性,但脱毒后的OMP_1~OMP_4仍具备较强的免疫原性和保护力.因此,OMP及其组分经戊二醛处理后,有希望成为百日咳杆茵的无细胞疫苗. 展开更多
关键词 细菌外膜蛋白 百日咳杆菌 疫苗
原文传递
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