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题名甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用研究
被引量：6
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作者
许俊强
孙梓健
宋明
汤青林
王志敏
王小佳
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机构
西南大学园艺园林学院
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出处
《园艺学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期2429-2440,共12页
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基金
国家自然科学基金项目(31071802
31000908)
+2 种基金
重庆市自然科学基金重点项目(2011BA1002)
中央高校基本科研业务费专项(XDJK2012B020)
国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2012CB113900)
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文摘
为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK),构建原核表达载体pGEX-CaM12、pCold-eSRK和pCold-iSRK,转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达,表达产物纯化后进行体外相互作用,结果表明CaM12能够与SRK7进行相互作用,但作用区域是iSRK7而不是eSRK7。为进一步验证其相互作用,本研究利用酵母双杂交系统,构建pGBKT7-CaM12、pGADT7-eSRK7、pGADT7-iSRK7和pGADT7-SRK7酵母表达载体,转化相应酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后未出现自激活和毒性现象,相互作用结果与原核表达检测一致。同时将CaM12的3个EF-hands结构域突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-与iSRK7分别构建酵母表达载体pGADT7-CAM12-2-、pGADT7-CAM12-23-、pGADT7-CAM12-234-,检测其相互作用。结果表明CaM12 EF-hands突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-在酵母双杂交系统中均不能与iSRK7片段发生相互作用,说明CaM12的EF-hands结构域突变后失去结合Ca2+能力而不能与iSRK7相互作用。该研究可为自交不亲和机理提供新的参考依据。
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关键词
结球甘蓝
cam12
S位点受体激酶(SRK7)基因
原核表达
酵母双杂交
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Keywords
Brassica oleracea
cam12
SRK7
prokaryotic expression
yeast two-hybrid
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分类号
S635.1
[农业科学—蔬菜学]
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