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利用基因扫描分析TCR Vβ亚家族的CDR3长度方法检测T细胞克隆性 被引量:42
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作者 李扬秋 汪明春 吴幼华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期48-50,共3页
分析了健康人、T-ALL外周血及T细胞株Molt-4和Jurkat中TCRVβT细胞的表达和克隆性。应用RT-PCR扩增TCRVβ24个亚家族的CDR3,并经基因扫描和序列分析确定T细胞克隆性。结果表明健康人表达除V... 分析了健康人、T-ALL外周血及T细胞株Molt-4和Jurkat中TCRVβT细胞的表达和克隆性。应用RT-PCR扩增TCRVβ24个亚家族的CDR3,并经基因扫描和序列分析确定T细胞克隆性。结果表明健康人表达除Vβ20外的多克隆T细胞;T-ALL仅表达3~4个Vβ亚家族T细胞;部分呈寡克隆性;Molt-4和Jurkat分别表达Vβ2和Vβ8单克隆T细胞。T-ALL中存在克隆性生长T细胞。该方法是检测T细胞克隆性的敏感和精确的方法。 展开更多
关键词 基因扫描 T细胞 cdr3长度 克隆性 白血病
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活动性肺结核患者α/βTCR基因重排及CDR3谱型分析 被引量:11
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作者 张建波 方毅敏 +5 位作者 黄艳 江丽芳 董涛 朱晓敏 方丹云 赖小敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1136-1139,1143,共5页
目的:建立多重PCR方法扩增α/βTCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/βTCR基因重排特点及CDR3谱型。方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和βTCR扩增引物... 目的:建立多重PCR方法扩增α/βTCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/βTCR基因重排特点及CDR3谱型。方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和βTCR扩增引物,进行多重PCR扩增以获得其全长序列,构建重组质粒并测序,利用DNAstar及网上TCR资源分析序列。结果:3例患者共获得24个α链序列,13个β链序列。α链以AV1S2(54%)、AV12S3(41%)、AV12S2(5%)为主;β链以BV2(38%)、BV29S1(46%)、BV14(3%)、BV4S2(3%)为主。同一病例及不同病例之间CDR3区呈现多样性,但是标本1、标本3各有一条β链的CDR3氨基酸序列相同:SVGTGTLHQETQY;标本2和标本3的各有2条α链CDR3序列相同:AVRDWAGNMLT;标本2的一个α链和标本3的一个α链的CDR3均有:AV…DNN…RLM序列。结论:建立了TCRα和β链全长序列的多重PCR扩增方法。结核患者病变局部克隆性增殖的TCRα和β链谱型呈限制性取用,克隆增生的T淋巴细胞来自不同的亚群,但是相同的CDR3序列对于识别MTB多肽可能具有特异性。 展开更多
关键词 活动性肺结核 T细胞受体 基因重排 cdr3 多重PCR
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CML病人TCR Vβ21寡克隆T细胞及其CDR3序列特点 被引量:21
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作者 李扬秋 陈少华 +1 位作者 杨力建 祁明芳 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期189-192,共4页
目的分析慢性粒细胞白血病 ( CML)病人的克隆性增殖 T细胞及其 CDR3序列的特点。方法利用 RT- PCR扩增 3例 CML 外周血单个核细胞中 2 4个 TCR Vβ基因的 CDR3,了解 TCR VβT细胞的分布。阳性产物进一步经基因扫描分析 ,了解其克隆性。... 目的分析慢性粒细胞白血病 ( CML)病人的克隆性增殖 T细胞及其 CDR3序列的特点。方法利用 RT- PCR扩增 3例 CML 外周血单个核细胞中 2 4个 TCR Vβ基因的 CDR3,了解 TCR VβT细胞的分布。阳性产物进一步经基因扫描分析 ,了解其克隆性。寡克隆的 PCR产物再进行序列分析。结果 3例病人仅存在 3~ 9个 TCR Vβ亚家族 T细胞 ,部分 Vβ亚家族T细胞呈寡克隆性增殖 ,Vβ2 1的寡克隆 T细胞见于全部的 3例病人中。结论 CML 病人外周血 TCR Vβ亚家族 T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖 ,这可能是 CML 中机体对恶性细胞所引起的特异性免疫反应 ,但对不同病人的 Vβ2 1寡克隆 T细胞序列分析并未能发现完全同源的 展开更多
关键词 T细胞克隆 慢性粒细胞白血病 TCRVβ21 cdr3序列
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Jurkat细胞TCR基因重排对BV CDR3的影响 被引量:7
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作者 邹红云 马骊 +3 位作者 姚新生 温茜 罗微 王小宁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期939-943,共5页
目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BVCDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCRBV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖... 目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BVCDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCRBV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖传代过程中以及在T细胞激活剂和超抗原SEA等刺激诱导后TCRBVCDR3谱系漂移及长度和序列变化。结果表达TCRBV8家族的单克隆细胞株Jurkat,在增殖传代过程中,以及经刺激诱导48或72h后,未监测到有TCRBV8以外的新的BV亚家族出现,BV8CDR3长度和一级核苷酸序列也未发生变化。结论Jurkat细胞发生的TCR基因重排可能不引起TCRBVCDR3改变,因而对TCRBVCDR3区抗原识别特异性(即抗原特异性漂移)并未产生影响,但并不排除TCR发生改变的可能性。 展开更多
关键词 JURKAT细胞 基因重排 基因扫描 TCR BV cdr3
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CDR3突变提高抗TNF-αFab段的亲和力 被引量:5
5
作者 汪保安 陈晓穗 +3 位作者 王琰 王欲晓 曲佳 周丽君 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期388-392,共5页
目的通过抗体库技术在CDR3区引入限定性突变以提高抗TNF-α抗体Fab的亲和力.方法首先合成含CDR3区突变的寡核苷酸,限定突变率以保持50%~70%的亲本序列,通过重叠延伸PCR的方法引入突变,构建突变库,再以硫氰酸铵溶液作洗涤液,筛选亲和力... 目的通过抗体库技术在CDR3区引入限定性突变以提高抗TNF-α抗体Fab的亲和力.方法首先合成含CDR3区突变的寡核苷酸,限定突变率以保持50%~70%的亲本序列,通过重叠延伸PCR的方法引入突变,构建突变库,再以硫氰酸铵溶液作洗涤液,筛选亲和力得到提高的特异性克隆,用非竞争性ELISA法测定亲和常数.结果从轻链突变库中筛选得到1个活性提高的特异性克隆K8,在第93位发生N→R突变,其亲和常数为2.8×108 L/mol,较亲本抗体(0.1×108 L/mol)提高了近28倍;从重链突变库中筛选得到多个活性增高的克隆,部分克隆测序显示96、97和100 d位置发生R→K、Y→Q、M→L突变的几率最高,且对亲和力提高贡献大.测定了10个变种的亲和常数,分别为0.2×108、0.22×108、1.8×108、3.2×108、3.3×108、3.5×108、3.7×108、4.0×108、 6.3×108和6.5×108 L/mol,最大的提高了近65倍.结论 CDR3区的限定性突变可显著提高抗体亲和力. 展开更多
关键词 亲和力成熟 cdr3突变 肿瘤坏死因子Α
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CML细胞抗原相关TCR Vα13/Vβ21和Vα18/Vβ21寡克隆T细胞及其CDR3序列特点 被引量:3
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作者 查显丰 李扬秋 +3 位作者 陈少华 杨力建 卢育洪 张涛 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期538-542,共5页
目的:分析慢性粒细胞白血病(CML)病人的克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点。方法:利用RT-PCR和基因扫描分析1例CML患者外周血单个核细胞中的TCR Vα和Vβ基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα和Vβ亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增... 目的:分析慢性粒细胞白血病(CML)病人的克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点。方法:利用RT-PCR和基因扫描分析1例CML患者外周血单个核细胞中的TCR Vα和Vβ基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα和Vβ亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增殖特点,寡克隆的PCR产物再进行序列分析。结果:该病人外周血T细胞表达18个TCR Vα和12个TCR Vβ亚家族,其中Vα13、Vα18、Vβ1和Vβ21亚家族呈寡克隆性。CDR3序列分析获得3个TCR克隆基因序列,分别为Vα13NJα49、Vα18NJα50和Vβ21NDβNJβ2.7。结论:获得1例CML病人外周血克隆性增殖αβ+T细胞的3个TCR基因CDR3序列,提示病人可能存在与CML细胞抗原相关的Vα13/Vβ21或Vα18/Vβ21T细胞克隆。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 T细胞受体 基因扫描 cdr3 克隆性
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银屑病T细胞应答及TCRCDR3谱系研究进展 被引量:5
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作者 秦欢 马龙 +1 位作者 潘雨蓉 姚新生 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1068-1069,1072,共3页
银屑病是一种与免疫应答异常有关的慢性复发性炎症性疾病,其发病机制至今未完全阐明。目前普遍认为T细胞介导的细胞免疫功能紊乱在银屑病发生及持续发展中发挥了重要作用。本文将从T细胞应答及TCR CDR3谱型分布特征入手,对TCR偏向及CDR... 银屑病是一种与免疫应答异常有关的慢性复发性炎症性疾病,其发病机制至今未完全阐明。目前普遍认为T细胞介导的细胞免疫功能紊乱在银屑病发生及持续发展中发挥了重要作用。本文将从T细胞应答及TCR CDR3谱型分布特征入手,对TCR偏向及CDR3组库特征和银屑病发病的关系进行综述,为银屑病的发病机制研究和个体化治疗提供新思路。 展开更多
关键词 银屑病 T细胞应答 T细胞受体 cdr3
原文传递
特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞的构建及生物学功能鉴定 被引量:2
8
作者 郗雪艳 曹伟 +1 位作者 崔莲仙 何维 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期879-882,885,共5页
目的:建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法:利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,... 目的:建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法:利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,共转染J.RT3-T3.5细胞,双压力抗生素筛选获得表达特异性γδTCR的转染细胞,通过ELISA和Re-altime PCR检测该转染细胞在接受抗原刺激后IL-2的分泌情况。结果:ELISA和Realtime PCR结果显示表达DBS4.3特异性γδTCR的转染细胞在DBS4.3特异性抗原仲丁胺和抗γδTCR抗体刺激作用下,活化分泌IL-2。结论:构建了特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台,为研究γδTCR识别抗原的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 cdr3取代型γδTCR 抗原识别
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日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链(CDR3)_6基因的构建表达及初步鉴定 被引量:1
9
作者 焦永军 岳国锋 +4 位作者 徐玮 宋晓彤 朱进 管晓虹 冯振卿 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2006年第1期15-18,共4页
目的设计、构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链(H链)CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6,并对表达产物进行初步鉴定。方法克隆NP30H链(CDR3)6基因,导入PET-28(a)载体并在E.coliBL21中表达;表达产物经纯化后用ELISA方法测定活性。结果(... 目的设计、构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链(H链)CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6,并对表达产物进行初步鉴定。方法克隆NP30H链(CDR3)6基因,导入PET-28(a)载体并在E.coliBL21中表达;表达产物经纯化后用ELISA方法测定活性。结果(CDR3)6基因被成功构建、表达,表达产物经ELISA检测证实其可与抗NP30抗体NP48及日本血吸虫病人血清反应。结论(CDR3)6部分保留了抗独特型抗体表位的亲和性和特异性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抗独特型抗体 H链 cdr3 克隆 表达
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APL相关TCR Vα6、Vα10和Vβ23寡克隆T细胞CDR3序列分析 被引量:1
10
作者 陈少华 李扬秋 +4 位作者 杨力建 周羽竝 李萡 张学利 罗更新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期136-138,共3页
目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR... 目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析。结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219)。结论:APL患者外周血T细胞出现的TCRVα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料。 展开更多
关键词 APL TCR cdr3 T细胞克隆
原文传递
B细胞BCR CDR3受体库的高通量测序分析概况 被引量:2
11
作者 王小妹 王鹏 姚新生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期947-950,954,共5页
B细胞是介导机体体液免疫应答的主要细胞群,其识别、结合抗原主要依赖互补决定区(CDR),它决定着抗体的特异性,而互补决定区3(CDR3)比CDR1、CDR2更具多样性,通过观察机体B细胞BCR CDR3受体库的多样性、重叠率的大小、
关键词 cdr3 B细胞 BCR 受体库 测序分析 高通量 互补决定区 体液免疫应答
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强的松治疗重症肌无力对TCR V β亚家族表达及CDR3谱型的影响 被引量:1
12
作者 卜碧涛 唐冰杉 +2 位作者 刘颖 杨明山 方思羽 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2003年第4期238-241,共4页
目的 探讨重症肌无力(MG)患者T细胞受体(TCR)β链(V β)亚家族优势表达及β链3号互补决定区(CDR3)的长度谱型特点;研究强的松治疗MG患者前后TCR V β优势表达及β链CDR3长度谱型特点的变化。方法 通过逆转录聚合酶链式反应扩增MG患者外... 目的 探讨重症肌无力(MG)患者T细胞受体(TCR)β链(V β)亚家族优势表达及β链3号互补决定区(CDR3)的长度谱型特点;研究强的松治疗MG患者前后TCR V β优势表达及β链CDR3长度谱型特点的变化。方法 通过逆转录聚合酶链式反应扩增MG患者外周血循环T细胞中不同亚家族含CDR3的大片段,分析亚家族的表达,并经基因扫描(长度谱型分析)分析CDR3谱型。结果 MG患者外周血TCR Vβ 6、8、12、15亚家族呈倾斜性分布,且部分亚家族T细胞呈现单克隆或寡克隆增殖;强的松治疗后症状明显改善,倾斜性分布现象在缓解期逐渐恢复正常。结论 TCR V β 6、8、12、15亚家族可能与MG症状有关;强的松类肾上腺皮质激素药治疗MG的机制可能是通过改变TCR V β亚家族表达以及抑制病理性T细胞克隆增殖而发挥作用。 展开更多
关键词 强的松 药物治疗 重症肌无力 TCRVβ亚家族 cdr3谱型 肾上腺皮质激素
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利用TCRVβ家族CDR3长度分析检测HCL和c-ALL的克隆性增殖T细胞 被引量:2
13
作者 李扬秋 汪明春 《白血病》 CAS 1999年第1期19-21,共3页
目的推介检测分析T细胞克隆性增殖的新方法,探讨判别恶性肿瘤免疫状态的新途经。方法应用RT-PCR检测T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族的互补决定区3(CDR3)长度,并经基因扫描(genescan)分析检测3例多毛... 目的推介检测分析T细胞克隆性增殖的新方法,探讨判别恶性肿瘤免疫状态的新途经。方法应用RT-PCR检测T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族的互补决定区3(CDR3)长度,并经基因扫描(genescan)分析检测3例多毛细胞白血病(HCL)和1例普通型急性淋巴细胞白血病(c-ALL)病人外周血的T细胞克隆性。结果4例病人的部分Vβ家族的扩增产物出现单峰(单克隆)或—主峰(寡克隆)图像,而正常对照的全部PCR产物呈多峰(多克隆)图像。结论HCL和c-ALL病人外周血中存在克隆性生殖T细胞,可能是宿主对白血病抗原的一种直接反应。 展开更多
关键词 T细胞受体β cdr3 基因扫描 急性白血病
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麻风T细胞应答及TCR CDR3谱序研究进展 被引量:3
14
作者 杨丽文 李月红 姚新生 《中国麻风皮肤病杂志》 2015年第6期347-350,共4页
麻风的发生、发展及转归与机体免疫系统密切相关,其中T细胞介导的免疫应答发挥了关键性作用。T细胞通过T细胞受体(TCR)互补决定区CDR3与麻风分枝杆菌抗原结合,产生特异性T细胞免疫效应。测定TCR CDR3谱型分布特征能够反映麻风分枝杆菌... 麻风的发生、发展及转归与机体免疫系统密切相关,其中T细胞介导的免疫应答发挥了关键性作用。T细胞通过T细胞受体(TCR)互补决定区CDR3与麻风分枝杆菌抗原结合,产生特异性T细胞免疫效应。测定TCR CDR3谱型分布特征能够反映麻风分枝杆菌感染状态下特定T细胞的扩增程度。本文就麻风T细胞应答及TCR CDR3谱序研究进展作一综述。 展开更多
关键词 麻风 T细胞应答 TCR cdr3
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基于荧光定量PCRDNA熔解曲线技术分析浸润性导管乳腺癌患者外周血和肿瘤组织TCR beta链CDR3谱系(英文) 被引量:4
15
作者 贺晓燕 孙素红 +4 位作者 杨伟明 唐文台 马锐 张天 姚新生 《遵义医学院学报》 2016年第1期35-43,共9页
目的采用TCR beta链CDR3谱系荧光定量PCR的DNA熔解曲线技术,探讨浸润性导管乳腺癌患者外周血T细胞和肿瘤组织T细胞之间TRBV基因表达情况。方法从遵义医学院附属医院甲乳外科采集乳腺癌志愿患者的乳腺肿瘤组织和外周血样本,选取病理诊断... 目的采用TCR beta链CDR3谱系荧光定量PCR的DNA熔解曲线技术,探讨浸润性导管乳腺癌患者外周血T细胞和肿瘤组织T细胞之间TRBV基因表达情况。方法从遵义医学院附属医院甲乳外科采集乳腺癌志愿患者的乳腺肿瘤组织和外周血样本,选取病理诊断为浸润性导管癌的志愿患者23例,免疫组织化学检测ER、PR、PS2、C-erb B-2、nm23、P53和Ki-67的表达。分离每位志愿患者外周血单个核细胞(PBMCs),提取PBMCs和肿瘤部位组织总RNA,逆转录为c DNA,荧光定量PCR技术扩增各c DNA样本的TCR beta链CDR3区,DNA熔解曲线法对比分析各样本TRBV基因家族的表达情况。结果 23例浸润性导管乳腺癌志愿患者,外周血样本中TRBV6、TRBV8、TRBV12、TRBV14和TRBV24表达超过50%,肿瘤组织样本中TRBV6、TRBV12、TRBV14和TRBV24表达超过50%。选取的23例样本中的20例,其外周血和肿瘤组织均过表达相同的TRBV基因家族,但总TRBV基因家族的表达与ER、PR、PS2、C-erb B-2、nm2、P53和Ki-67的阳性或阴性没有明显的相关性。结论浸润性导管乳腺癌患者的外周血和肿瘤组织之间TRBV基因表达出现一致性,但表现出复杂多样性,与乳腺肿瘤相关抗原无明显相关,其机制可能与乳腺癌个体化的全身和局部免疫应答相关,对乳腺癌外周血和肿瘤组织部位特异T细胞TRBV基因表达探讨可为乳腺癌的免疫机制和个体化治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 浸润性导管癌 TRBV基因 TCR cdr3谱系 DNA熔解曲线技术 荧光定量PCR
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FQ-PCR溶解曲线技术分析白血病患者PBMC中T细胞TCRα/βCDR3谱系特征 被引量:3
16
作者 孙永苹 石彬 +3 位作者 朱红倩 汤贤英 马锐 姚新生 《遵义医学院学报》 2014年第1期39-47,共9页
目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的C... 目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的CDR3区,FQ-PCR溶解曲线技术分析CDR3谱系特征,并测序分析单克隆家族CDR3区氨基酸序列的组成。结果 4例健康志愿者PBMC中α/βT细胞的CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,均表现为多峰图;而15例白血病患者PBMC中α/βT细胞CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,多数患者出现寡或偏峰型图、低或无峰型图、典型的单峰型图;不同白血病患者异常峰的频率不一致;单峰型图TRAV和TRBV PCR产物基因测序,未发现不同患者存在完全相同的CDR3区。结论FQ-PCR溶解曲线技术能很好的分析白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3谱系的单、寡、多克隆性增殖;非T细胞白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3的单峰(或寡峰)家族T细胞,可能来源于机体对肿瘤应答的T细胞,而在T细胞白血病患者,可能为肿瘤T细胞或机体抗肿瘤T细胞。本实验可为进一步研究白血病的免疫应答机制和个体化治疗提供基础。 展开更多
关键词 白血病 TCR cdr3 FQ-PCR 溶解曲线
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一例弥漫性大B淋巴细胞瘤组织样本T细胞TCR α/β CDR3谱序的初步分析 被引量:3
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作者 孙永苹 汤贤英 +2 位作者 朱红倩 杨雪峰 姚新生 《遵义医学院学报》 2012年第2期98-103,共6页
目的 FQ-PCR溶解曲线法初步分析1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者组织标本中T细胞TRAV和TRBV基因各家族CDR3谱序。方法提取4例淋巴结增生组织和1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者的mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因的CDR3区... 目的 FQ-PCR溶解曲线法初步分析1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者组织标本中T细胞TRAV和TRBV基因各家族CDR3谱序。方法提取4例淋巴结增生组织和1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者的mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因的CDR3区,利用FQ-PCR技术了解其克隆性,溶解曲线单峰家族基因测序分析CDR3区基因和氨基酸序列。结果该例淋巴瘤患者淋巴结组织T细胞FQ-PCR溶解曲线分别在TRAV10、TRAV18和TRBV6、TRBV24家族中出现单峰表现,其CDR3区氨基酸序列为CAGANFGNEKLTFGTGTCR、CAPSFSGYSTLTFGKGTM、CASSERGQPQHFGDGTCR、CATTPAGEYYGYTFGSGT-CR,4例增生淋巴结组织FQ-PCR溶解曲线均为寡峰和多峰。结论该例淋巴瘤组织中FQ-PCR溶解曲线单峰家族的T细胞可能为高应答T细胞,本实验为进一步研究淋巴溜的免疫应答机制和个体化治疗提供了研究基础。 展开更多
关键词 弥漫性大B淋巴细胞瘤 TCR cdr3 FQ-PCR溶解曲线分析技术
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内毒素耐受状态下胸腺细胞TCRβ链CDR3区多态性和长度的变化 被引量:1
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作者 贾力 陶弋婧 +8 位作者 赵娟娟 郭萌萌 陈超 褚风云 王海嵘 刘云 罗军敏 姚新生 徐林 《遵义医学院学报》 2017年第2期139-142,149,共5页
目的研究内毒素耐受状态下小鼠胸腺T细胞TCRβ链CDR3多态性和长度的变化,并探讨其意义。方法以5mg/kg浓度LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,5 mg/kg浓度生理盐水腹腔注射72 h后为对照组,提取对照组、模型后72 h实验组和8 d实... 目的研究内毒素耐受状态下小鼠胸腺T细胞TCRβ链CDR3多态性和长度的变化,并探讨其意义。方法以5mg/kg浓度LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,5 mg/kg浓度生理盐水腹腔注射72 h后为对照组,提取对照组、模型后72 h实验组和8 d实验组的小鼠胸腺组织RNA,并逆转录为c DNA;以22条TRBV基因家族序列设计上游引物,TRBJ1-1基因家族序列设计下游引物,PCR扩增出完整的TCRβ链CDR3区;毛细管电泳技术分析TCRβ链CDR3区的多态性和长度。结果正常小鼠胸腺样本多数呈现中间高两边低的正态性分布的TCRβ链CDR3谱型峰图,少数呈现偏峰、寡峰或低峰;LPS注射后72 h胸腺样本TCRβ链CDR3区呈现数量不等的偏峰、寡峰和低峰;模型8 d胸腺样本大多呈现多峰。此外,与正常组相比,模型72 h和8 d胸腺样本TCRβ链CDR3区产物长度均发生了不同程度的变化。结论内毒素耐受状态下,小鼠胸腺细胞TCRβ链CDR3区的多态性和长度均发生了明显改变,为后续进一步研究该状态下胸腺细胞发育及功能变化提供前期实验基础。 展开更多
关键词 内毒素 胸腺 TCRβ链cdr3 小鼠
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MSM HIV感染者特异性T细胞TCR α CDR3谱序初探 被引量:1
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作者 李志峰 冯连贵 +5 位作者 王豫林 曾艺 张宏军 冷文杰 陈亮 李琴 《疾病监测与控制》 2013年第12期713-715,共3页
目的监测HIV感染者的外周血样本TCRα链CDR3谱系变化,发现HIV特异性TCR TRAV家族。方法用本实验室已建立的"荧光定量PCR溶解曲线法监测HIV感染者TCR CDR3谱系漂移技术",对22名健康男性、19名MSM HIV感染者的外周血样本TCRα链... 目的监测HIV感染者的外周血样本TCRα链CDR3谱系变化,发现HIV特异性TCR TRAV家族。方法用本实验室已建立的"荧光定量PCR溶解曲线法监测HIV感染者TCR CDR3谱系漂移技术",对22名健康男性、19名MSM HIV感染者的外周血样本TCRα链CDR3变化进行监测。结果MSM HIV感染者的TRAV4.2,TARV10和TRAV23的单(寡)性表达频率要高于健康男性人群(P<0.05),MSM HIV感染者的TRAV亚家族的缺失率(1.70%)虽然高于对照男性健康人群的TRAV亚家族的缺失率(0.80%),但二者没有统计学差异。结论在国内首次利用"荧光定量PCR溶解曲线法"监测HIV感染者TCRα链CDR3漂移变化,发现MSM HIV感染者的TCR AV家族存在单(寡)性增生和缺失现象,非正态分布现象增加,多样性减少。 展开更多
关键词 HIV TCR cdr3 谱系漂移
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人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa CDR3基因片段的克隆及其DNA疫苗制备
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作者 仲凯励 张伟京 +1 位作者 张云生 毛宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期757-760,764,共5页
目的 :为探讨B细胞淋巴瘤细胞膜表面免疫球蛋白可变区的互补决定区 3能否在动物体内激发特异性抗独特型抗体 ,以人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa为模型 ,克隆其膜表面免疫球蛋白重链可变区互补决定区 3(CDR3)基因片段作为抗原基因 ,构建DNA... 目的 :为探讨B细胞淋巴瘤细胞膜表面免疫球蛋白可变区的互补决定区 3能否在动物体内激发特异性抗独特型抗体 ,以人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa为模型 ,克隆其膜表面免疫球蛋白重链可变区互补决定区 3(CDR3)基因片段作为抗原基因 ,构建DNA疫苗质粒。方法 :以RT PCR的方法获得互补决定区 3(CDR3)基因片段 ,进而克隆了小鼠单核细胞趋化因子 (MCP 3)基因作为佐剂分子 ,以重组PCR的方法获得CDR3和MCP 3基因的融合基因片段 ,克隆在真核表达载体pcDNA3 1中构建DNA疫苗质粒 ,然后通过脂质体转染的方法验证该质粒在真核细胞中的表达情况。结果 :应用分子生物学的方法获得了以Namalwa细胞mIgCDR3作为抗原基因的DNA疫苗质粒。结论 :人B细胞淋巴瘤细胞系NamalwaCDR3基因的DNA疫苗构建正确 ,体外瞬时转染实验证明该质粒能够在真核细胞中正确表达。 展开更多
关键词 DNA疫苗 独特位 互补决定区3(cdr3)
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