目的:探讨顺铂(顺式二氨二氯铂)(c i sdichlorodiamineplatinum,DDP)对人结肠癌Caco-2细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Caspase9、Caspase3表达的影响.方法:体外培养结肠癌Caco-2细胞;检测不同浓度DDP干预下MTT染色的A值,判定其对人结肠癌细...目的:探讨顺铂(顺式二氨二氯铂)(c i sdichlorodiamineplatinum,DDP)对人结肠癌Caco-2细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Caspase9、Caspase3表达的影响.方法:体外培养结肠癌Caco-2细胞;检测不同浓度DDP干预下MTT染色的A值,判定其对人结肠癌细胞恶性增殖的影响;不同浓度D D P对人结肠癌细胞凋亡的影响使用流式细胞仪进行检测,Western blot检测不同浓度DDP对人结肠癌细胞内Bcl-2蛋白的表达;应用分光光度法检测不同浓度DDP对人结肠癌细胞内Caspase9、Caspase3蛋白活性的影响.结果:(1)癌细胞增殖结果显示,在一定的作用时间范围内,Caco-2细胞存活率与DDP浓度呈负相关,具有剂量依赖性,其中4.000、2.000μg/m L干预的各组细胞抑制率最显著,差异均有统计学意义(P<0.05).而低剂量组0.250、0.125μg/m L及对照DMSO干预组细胞存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05),其细胞存活率明显高于其他各浓度组,差异有统计学意义(P<0.01);(2)流式细胞仪检测结果显示:DDP能诱导Caco-2细胞的凋亡,其诱导凋亡的效果呈时间和剂量性依赖;(3)Western blot检测结果显示:Bcl-2蛋白在结肠癌Caco-2细胞中低表达,DDP干预Caco-2细胞72 h后,与对照组比较,Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05).Caspase9、Caspase3在Caco-2细胞中低表达,DDP干预Caco-2细胞48、72 h后,与对照组比较,Caspase9、Caspase3表达明显升高(P<0.01).结论:顺铂可以抑制Caco-2细胞增殖、诱导Caco-2细胞凋亡,其机制可能与活化Caco-2细胞中Caspase9、Caspase3蛋白以及抑制Bcl-2蛋白表达有关.展开更多
Caspase3、Bcl-2、Bak是细胞凋亡过程中3种重要的调节蛋白,为研究感染猪圆环2型病毒(PCV2)后体内细胞的凋亡情况,本实验以BALB/c小鼠为实验模型,建立了SYBR Green I实时定量PCR检测细胞凋亡的方法。结果表明实验组Caspase3的表达在各时...Caspase3、Bcl-2、Bak是细胞凋亡过程中3种重要的调节蛋白,为研究感染猪圆环2型病毒(PCV2)后体内细胞的凋亡情况,本实验以BALB/c小鼠为实验模型,建立了SYBR Green I实时定量PCR检测细胞凋亡的方法。结果表明实验组Caspase3的表达在各时间段里与对照组相比均呈上升趋势,提示了PCV2感染可以上调Caspase3水平,从而增加被病毒感染组织的细胞凋亡,而小鼠心、脑、脾等组织Bak基因表达明显上调,Bcl-2基因表达水平也伴随Bak基因而升高。这些结果揭示了PCV2感染BALB/c小鼠后,相关细胞凋亡基因在体内的作用与机制,同时为今后细胞凋亡的检测提供了新的方法。展开更多
目的观察经后增殖方对超排卵小鼠卵巢凋亡相关基因及其蛋白表达的调节作用,探讨中药益气血法对超排卵小鼠卵巢颗粒细胞凋亡及卵泡质量的影响。方法建立超排卵小鼠模型,30只小鼠随机分为空白组、模型组、中药治疗组。采用实时荧光定量PCR...目的观察经后增殖方对超排卵小鼠卵巢凋亡相关基因及其蛋白表达的调节作用,探讨中药益气血法对超排卵小鼠卵巢颗粒细胞凋亡及卵泡质量的影响。方法建立超排卵小鼠模型,30只小鼠随机分为空白组、模型组、中药治疗组。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测Bcl-2、Bax、Caspase3基因和蛋白的表达水平。结果中药治疗组Bax、Cas-pase3 mRNA的表达水平与模型组比较(0.895 vs 1.779,0.674 vs 2.066,均P<0.05),差异均有统计学意义;中药治疗组Bcl-2、Bax、Caspase3 mRNA的表达水平与空白组比较(1.11 vs 1.26,0.89 vs 0.79,0.67 vs 0.96),差异均无统计学意义(P>0.05);中药治疗组Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的表达水平与模型组比较(0.62 vs0.41,0.79 vs 1.06,0.49 vs 0.89),差异均有统计学意义(P<0.05),与空白组比较(0.62 vs 0.64,0.79 vs 0.73,0.49 vs 0.50)差异均无统计学意义(P>0.05)。结论经后增殖方能促进Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax、Cas-pase3基因及蛋白的表达,抑制超排卵小鼠卵巢颗粒细胞凋亡至接近自然排卵小鼠的水平,提高超排卵小鼠卵泡质量。展开更多
文摘Caspase3、Bcl-2、Bak是细胞凋亡过程中3种重要的调节蛋白,为研究感染猪圆环2型病毒(PCV2)后体内细胞的凋亡情况,本实验以BALB/c小鼠为实验模型,建立了SYBR Green I实时定量PCR检测细胞凋亡的方法。结果表明实验组Caspase3的表达在各时间段里与对照组相比均呈上升趋势,提示了PCV2感染可以上调Caspase3水平,从而增加被病毒感染组织的细胞凋亡,而小鼠心、脑、脾等组织Bak基因表达明显上调,Bcl-2基因表达水平也伴随Bak基因而升高。这些结果揭示了PCV2感染BALB/c小鼠后,相关细胞凋亡基因在体内的作用与机制,同时为今后细胞凋亡的检测提供了新的方法。
文摘目的观察经后增殖方对超排卵小鼠卵巢凋亡相关基因及其蛋白表达的调节作用,探讨中药益气血法对超排卵小鼠卵巢颗粒细胞凋亡及卵泡质量的影响。方法建立超排卵小鼠模型,30只小鼠随机分为空白组、模型组、中药治疗组。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测Bcl-2、Bax、Caspase3基因和蛋白的表达水平。结果中药治疗组Bax、Cas-pase3 mRNA的表达水平与模型组比较(0.895 vs 1.779,0.674 vs 2.066,均P<0.05),差异均有统计学意义;中药治疗组Bcl-2、Bax、Caspase3 mRNA的表达水平与空白组比较(1.11 vs 1.26,0.89 vs 0.79,0.67 vs 0.96),差异均无统计学意义(P>0.05);中药治疗组Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的表达水平与模型组比较(0.62 vs0.41,0.79 vs 1.06,0.49 vs 0.89),差异均有统计学意义(P<0.05),与空白组比较(0.62 vs 0.64,0.79 vs 0.73,0.49 vs 0.50)差异均无统计学意义(P>0.05)。结论经后增殖方能促进Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax、Cas-pase3基因及蛋白的表达,抑制超排卵小鼠卵巢颗粒细胞凋亡至接近自然排卵小鼠的水平,提高超排卵小鼠卵泡质量。
