人牙本质基质蛋白1基因启动子的克隆、测序和活性分析 被引量：7

1

作者 逄键梁 吴补领 +1 位作者 张亚庆 赵红萍 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2005年第8期428-434,共7页

目的:克隆并测定牙本质基质蛋白1(dentinmatrixprotein1,Dmp1)基因上游启动子的序列,观察其不同片段在人牙髓干细胞(humandentalpulpstemcells,HDPSCs)中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因的转录调控特点和分析特异性转录位点奠定基础... 目的:克隆并测定牙本质基质蛋白1(dentinmatrixprotein1,Dmp1)基因上游启动子的序列,观察其不同片段在人牙髓干细胞(humandentalpulpstemcells,HDPSCs)中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因的转录调控特点和分析特异性转录位点奠定基础。方法:以人全基因组DNA为模板,通过PCR方法获得目的片段,将其连接到PKey-TA载体进行测序,并对所获得的序列进行生物学信息分析。将不同启动子片段构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染至牙髓干细胞,荧光素酶检测启动子活性并进行分析。结果:从人全基因组中获得2.2kb大小的目的片段,测序结果与基因组相应序列吻合。酶切鉴定表明不同长度启动子报告基因载体构建成功。荧光素酶分析结果显示:不同片段的Dmp1启动子在牙髓干细胞中活性不同,-505～-193区为Dmp1启动子的核心启动子区。结论:成功克隆到Dmp1上游启动子的序列,该启动子区在牙髓干细胞中具有活性,为研究Dmp1基因在成牙本质细胞分化和牙本质矿化中转录调控机制奠定了基础。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 启动子 报告基因 人牙髓干细胞

下载PDF 职称材料

c-Jun、c-Fos对人牙本质基质蛋白1基因转录调控作用的研究 被引量：5

2

作者 逄键梁 邓天政 +3 位作者 朱晓茹 李冬霞 李晓华 柯杰 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期443-447,共5页

目的观察c-Jun和c-Fos对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因转录活性的影响。方法将pRSV-c-Jun和pRSV-c-Fos瞬时转染至HDPSCs中,检测转染后不同时间c-Jun、c-Fos蛋... 目的观察c-Jun和c-Fos对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因转录活性的影响。方法将pRSV-c-Jun和pRSV-c-Fos瞬时转染至HDPSCs中,检测转染后不同时间c-Jun、c-Fos蛋白的表达变化。将重组报告基因载体pGL3-P-505～+86与pRSV-c-Jun、pRSV-c-Fos分别共转染至细胞中,报告基因检测系统检测荧光素酶活性变化。结果瞬时转染c-Jun、c-Fos后,蛋白主要表达于HDPSCs细胞胞浆中,并且在转染48h后表达量均达到最高值;c-Jun和c-Fos能够降低pGL3-P-505～+86的荧光素酶活性,c-Jun降低DMP1启动子区-505～+86bp片段的荧光素酶活性更为显著(P<0.05)。结论 c-Jun和c-Fos可降低人DMP1基因转录活性,是HDPSCs向成牙本质细胞方向分化重要的调节因子,DMP1基因启动子序列-110～-100bp区可能是c-Jun、c-Fos有效作用位点。 展开更多

关键词 C-JUN C-FOS 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 转录活性

下载PDF 职称材料

牙本质基质蛋白1在人不同龋坏牙齿中的免疫定位 被引量：3

3

作者 逄键梁 吴补领 +4 位作者 张亚庆 何宇 何文喜 吴纲 郭鹏 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期414-417,共4页

目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)在不同龋坏人牙齿中的表达 ,探讨DMP1在牙髓损伤修复中的作用。方法 :采用免疫组化SABC方法观察DMP1在不同龋坏人恒牙中的表达 ,并用图像分析系统进行半定量分析。结果 :DMP1在... 目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)在不同龋坏人牙齿中的表达 ,探讨DMP1在牙髓损伤修复中的作用。方法 :采用免疫组化SABC方法观察DMP1在不同龋坏人恒牙中的表达 ,并用图像分析系统进行半定量分析。结果 :DMP1在正常人恒牙组表达阴性 ,浅龋组部分成牙本质细胞和前期牙本质中弱阳性表达 ;中龋组成牙本质细胞数目增多 ,在胞浆和胞突以中阳性表达 ;深龋组成牙本质细胞层排列紊乱 ,出现空泡变性 ,成牙本质细胞样细胞形态细长、扁平 ,两种细胞胞浆和胞突中DMP1表达阳性 ,在修复性牙本质层强阳性表达。与对照组相比 ,成牙本质胞浆中DMP1含量在中龋组和深龋组明显增加 ,浅龋组无显著意义。结论 :DMP1参与成牙本质细胞样细胞分化分泌 。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 DMPl 龋齿 免疫组化 SABC

下载PDF 职称材料

转化生长因子β1对人牙本质基质蛋白1基因转录活性的影响 被引量：3

4

作者 逄键梁 吴补领 +2 位作者 张亚庆 柯杰 吴纲 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期871-875,共5页

目的:观察具有矿化活性的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)在重组人转录生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用下对牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,Dmp1)表达和Dmp1基因启动子转录活性的... 目的:观察具有矿化活性的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)在重组人转录生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用下对牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,Dmp1)表达和Dmp1基因启动子转录活性的影响。方法:通过建立体外培养的HDPSC矿化诱导模型,经10ng/L重组人TGF-β1刺激后,运用RT-PCR、报告基因检测等方法检测细胞在TGF-β1作用后Dmp1mRNA表达变化以及对pGL3-P-193～+86和pGL3-P-505～+862个启动子片段重组报告基因载体活性的影响。结果:诱导矿化后具有部分成牙本质细胞样细胞特征的HDPSC经TGF-β1刺激后,Dmp1mRNA的表达水平明显下降,并存在时间依赖性。pGL3-P-193～+86和pGL3-P-505～+86相对荧光素酶活性均下降,以pGL3-P-505～+86活性下降更明显,说明TGF-β1具有下调HDPSCDmp1转录活性的作用。计算机分析结果发现,Dmp1基因启动子-505～+86bp区存在多个TGF-β1下游作用分子Smads的结合位点。结论:TGF-β1可下调Dmp1mRNA的表达水平和转录活性,以pGL3-P-505～+86活性下降更明显。启动子-505～-193bp区存在TGF-β1下游作用分子或转录因子的结合位点,从而参与下调Dmp1转录表达过程。 展开更多

关键词 转录生长因子β1 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 报告基因 转录活性

下载PDF 职称材料

核心结合因子α1对人牙本质基质蛋白1基因转录活性的作用 被引量：2

5

作者 逄键梁 柯杰 +4 位作者 邓天政 朱晓茹 李晓华 张亚庆 吴补领 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期473-476,共4页

目的:观察核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因转录活性的影响。方法:将pCMV-Osf2瞬时转染至体外矿化诱导的HDPSCs... 目的:观察核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因转录活性的影响。方法:将pCMV-Osf2瞬时转染至体外矿化诱导的HDPSCs中,检测转染后不同时间Cbfα1蛋白的表达变化。将不同长度的DMP1基因启动子片段重组报告基因载体与pCMV-Osf2分别共转染至细胞中,报告基因检测系统检测荧光素酶活性。结果:诱导后的HDPSCs中少量表达Cbfα1,在瞬时转染Cbfα1后,蛋白主要表达于细胞胞质中,并且在转染48 h后表达量达到最高值;Cbfα1可明显增强6个不同长度的DMP1基因启动子片段重组报告基因载体的荧光素酶活性,以pGL3-P-505～+86启动子活性增强最为明显(P<0.05)。计算机分析结果发现,DMP1基因启动子-505～+86 bp区存在Cbfα1的结合位点。结论:Cbfα1可上调人DMP1基因转录活性,是HDPSCs向成牙本质细胞方向分化重要的调节因子之一,DMP1基因启动子序列-199～-185 bp区可能是Cbfα1结合位点。 展开更多

关键词 核心结合因子Α1 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 报告基因 转录活性

下载PDF 职称材料

人牙髓干细胞诱导后人牙本质基质蛋白1基因转录活性的变化和意义 被引量：6

6

作者 逄键梁 吴补领 +2 位作者 张亚庆 柯杰 吴纲 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2007年第9期494-498,共5页

目的:观察人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)经矿化液诱导后牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)的表达、细胞生物学变化以及对人DMP1基因启动子转录活性的影响。方法:通过建立体外培养的HDPSC体外矿化诱导模... 目的:观察人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)经矿化液诱导后牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)的表达、细胞生物学变化以及对人DMP1基因启动子转录活性的影响。方法:通过建立体外培养的HDPSC体外矿化诱导模型,运用RT-PCR、组织染色等方法检测矿化诱导后细胞DMP1 mRNA表达、细胞形态和矿化能力的变化以及对两个DMP1基因启动子重组报告基因载体pGL3-P-193^+86和pGL3-P-505^+86活性的影响。结果:HDPSC经矿化液诱导后,能够向成牙本质细胞方向分化,出现成牙本质细胞样细胞表型。与对照组相比较,随着诱导时间的延长,细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性增强,较早的出现了矿化结节,说明在诱导液作用后细胞矿化能力升高。诱导后的细胞出现了DMP1 mRNA表达水平增高,pGL3-P-193^+86和pGL3-P-505^+86活性均出现增强的趋势,尤其以pGL3-P-505^+86活性增强更明显。结论:矿化液可诱导HDPSC向成牙本质细胞方向分化,诱导后的细胞矿化能力增强,DMP1表达和转录活性也随之增强,提示DMP1可能参与成牙本质细胞的分化过程。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 报告基因 启动子 转录活性

下载PDF 职称材料

牙本质基质蛋白1在人牙胚发育过程中的表达和意义 被引量：2

7

作者 逄键梁 吴补领 +2 位作者 张亚庆 高杰 郭鹏 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2003年第1期18-20,T002,共4页

目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化 ,探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法 :制备人牙胚发育各期组织标本 ,采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果... 目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化 ,探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法 :制备人牙胚发育各期组织标本 ,采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果 :DMP1主要表达于钟状晚期分泌型成牙本质细胞 ,在前成牙本质细胞、前成釉细胞和牙乳头细胞中表达弱阳性 ,在成釉细胞中有一过性表达 ,即在釉基质开始形成但没有形成硬组织时的分泌型成釉细胞中有表达 ,但在随后的分泌型成釉细胞中表达渐弱至阴性。结论 :观察到DMP1在人牙胚发育不同时期的表达和表达变化 。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 人牙胚 免疫组织化学

下载PDF 职称材料

大鼠牙本质基质蛋白1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响 被引量：2

8

作者 高杰 宋淑梅 +1 位作者 吴补领 汪平 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2003年第1期15-17,共3页

目的 :探讨大鼠牙本质基质蛋白 1(DMP1)对体外培养的人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响。方法 :利用MTT法研究牙髓细胞的细胞增殖情况 ,碱性磷酸酶检测试剂盒检测牙髓细胞内ALP活性。结果 :DMP1在细胞培养 3d和 5d时 ,5 μg/mL组可促进人... 目的 :探讨大鼠牙本质基质蛋白 1(DMP1)对体外培养的人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响。方法 :利用MTT法研究牙髓细胞的细胞增殖情况 ,碱性磷酸酶检测试剂盒检测牙髓细胞内ALP活性。结果 :DMP1在细胞培养 3d和 5d时 ,5 μg/mL组可促进人牙髓细胞增殖 (P <0 .0 5 )。细胞培养 3d时 ,仅5 μg/mL组可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 5d时 1μg/mL和 5 μg/mL均可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 7d时促进作用进一步加强 (P <0 .0 5 )。结论 :DMP1在一定浓度下可促进牙髓细胞的增殖 ;DMP1对牙髓细胞ALP活性的促进作用呈浓度依赖性 ,高浓度DMP1可以促进人牙髓细胞ALP活性 ,随着时间的延长 ,促进ALP活性的作用也增强。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶

下载PDF 职称材料

甲状旁腺激素对人牙乳头细胞牙本质基质蛋白1表达的影响

9

作者 逄键梁 吴补领 +3 位作者 张亚庆 何文喜 郭鹏 高杰 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2003年第7期372-375,共4页

目的 :观察甲状旁腺激素 (parathyroidhormone ,PTH)对体外培养的人牙乳头细胞 (humandentalpapillacells,HDPC)牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)合成分泌的影响。方法 :原代方法培养出人牙乳头细胞 ,用不同浓度的甲状旁腺... 目的 :观察甲状旁腺激素 (parathyroidhormone ,PTH)对体外培养的人牙乳头细胞 (humandentalpapillacells,HDPC)牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)合成分泌的影响。方法 :原代方法培养出人牙乳头细胞 ,用不同浓度的甲状旁腺激素刺激培养的第 5代人牙乳头细胞 ,免疫组化观察结果 ,并采用图像分析的方法 ,进行半定量分析。结果 :PTH可刺激人牙乳头细胞DMP1的表达 ,诱导的DMP1主要表达于细胞胞浆内 ,呈一定的浓度依赖性 ,0 .3μg/mL为刺激最佳浓度。 结论 :PTH能够刺激人牙乳头细胞产生DMP1,对牙乳头细胞向成牙本质细胞分化有一定促进作用 ,可能是成牙本质细胞分化的重要介质之一。 展开更多

关键词 人牙乳头细胞 甲状旁腺激素 牙本质基质蛋白1

下载PDF 职称材料

促红细胞生成素对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的促进作用研究

10

作者 汪莉 钟素兰 +1 位作者 朗么磋 张义林 《中国美容医学》 CAS 2024年第7期65-70,共6页

目的:探究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用。方法:分离并鉴定人牙髓细胞(Dental pulp cells,DPCs),将DPCs分为对照(control)组、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)组、TNF-... 目的:探究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用。方法:分离并鉴定人牙髓细胞(Dental pulp cells,DPCs),将DPCs分为对照(control)组、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)组、TNF-α+EPO组;使用CCK-8法、Transwell法、碱性磷酸酶染色和茜素红染色法检测细胞增殖、迁移、成骨分化能力。将30只大鼠随机分为磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffered saline,PBS)组、氢氧化钙[Ca(OH)2]组和EPO组,对大鼠上颌第一磨牙进行牙髓暴露,分别以含PBS、Ca(OH)2和EPO的胶原蛋白海绵盖髓;术后1个月处死大鼠,micro-CT和苏木精-伊红染色观察修复性牙本质形成;免疫组化染色和Western blot检测牙本质基质蛋白-1(Dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)、Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,Runx2)、Osterix(Osx)水平。结果:与control组相比,TNF-α组DPCs增殖、迁移、成骨分化能力降低(P<0.05);与TNF-α组相比,TNF-α+EPO组DPCs增殖、迁移、成骨分化能力提高(P<0.05)。与PBS组、Ca(OH)2组相比,EPO组露髓处形成连续完整的钙化桥及大量修复性牙本质,DMP-1、DSPP、Runx2、Osx水平升高(P<0.05)。结论:EPO通过提高DMP-1、DSPP、Runx2、Osx水平促进牙髓损伤大鼠修复性牙本质形成。 展开更多

关键词 促红细胞生成素 牙髓损伤修复 修复性牙本质形成 牙本质基质蛋白-1 牙本质涎磷蛋白

下载PDF 职称材料

Nestin阳性细胞过表达DMP1对小鼠颌骨密度的影响 被引量：1

11

作者 潘敏 孙瑶 《口腔医学》 CAS 2016年第10期870-875,共6页

目的探讨Nestin阳性细胞中牙本质基质蛋白1(DMP1)的作用。方法 DMP1是牙齿和骨中重要的矿化蛋白,但是Nestin阳性细胞中DMP1的作用仍不清楚。我们构建了Nestin阳性细胞中过表达DMP1的转基因小鼠。以野生型(wild type,WT)小鼠为对照组,通... 目的探讨Nestin阳性细胞中牙本质基质蛋白1(DMP1)的作用。方法 DMP1是牙齿和骨中重要的矿化蛋白,但是Nestin阳性细胞中DMP1的作用仍不清楚。我们构建了Nestin阳性细胞中过表达DMP1的转基因小鼠。以野生型(wild type,WT)小鼠为对照组,通过HE染色,Micro CT检测DMP1-Tg小鼠颌骨的变化,进一步通过TRAP染色检测DMP1-Tg小鼠颌骨破骨方面的变化。结果相对于WT小鼠,DMP1-Tg小鼠颌骨骨量下降;TRAP染色显示DMP1-Tg小鼠下颌骨破骨细胞增多。结论在下颌骨发育过程中,Nestin阳性细胞中过表达DMP1对骨形成发挥抑制作用。 展开更多

关键词 NESTIN 牙本质基质蛋白1 颌骨 小鼠

下载PDF 职称材料

人牙本质基质蛋白1基因启动子在不同细胞中的活性比较和分析 被引量：7

12

作者 逄键梁 吴补领 +2 位作者 张亚庆 赵红萍 刘艳丽 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期148-152,共5页

目的观察并比较不同长度的人牙本质基质蛋白1(Dmp1)基因上游启动子片段在人牙髓干细胞(HDPSC)、成骨细胞(OC)和子宫颈癌上皮细胞株Hela中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因在矿化组织中的特异性转录调控特点和作用机制奠定基础。方法... 目的观察并比较不同长度的人牙本质基质蛋白1(Dmp1)基因上游启动子片段在人牙髓干细胞(HDPSC)、成骨细胞(OC)和子宫颈癌上皮细胞株Hela中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因在矿化组织中的特异性转录调控特点和作用机制奠定基础。方法以获得正确序列的2 195 bp Dmp1基因上游启动子重组T载体为模板,通过 PCR方法获得不同长度的Dmp1基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染至HDP- SC、OC和Hela细胞,荧光素酶检测这些细胞中启动子活性并进行分析。结果成功地获得了6段不同长度的Dmp1 启动子目的片段。酶切鉴定表明不同长度启动子报告基因载体构建成功,不同片段的Dmp1启动子在不同细胞中活性不同,在HDPSC和OC中活性较强,而在Hela细胞中活性最低。在-505--193 bp区和-935--505 bp区可能分别存在HDPSC和OC较为特异的转录调控作用区域点,该区可能包含Dmp1表达的基础调控元件。结论成功克隆了不同长度的Dmp1上游启动子的序列,不同启动子片段在牙髓干细胞和成骨细胞等矿化性细胞中活性较强,并初步确定了Dmp1启动子在矿化性细胞中的基本启动子区域,而在非矿化性细胞Hela细胞中活性较低。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 成骨细胞

下载PDF 职称材料

转化生长因子β1和重组人骨形成蛋白2对成牙本质细胞系MDPC-23牙本质基质蛋白1表达的影响 被引量：2

13

作者 逄键梁 吴补领 +4 位作者 张亚庆 何文喜 刘鹏 张敬雷 郭鹏 《口腔医学》 CAS 2003年第4期199-202,共4页

目的 观察转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白2(bone morphogenic protein 2,rhBMP2)单独或联合作用对小鼠成牙本质细胞系 MDPC-23牙本质基质蛋白 1(dental matrix potein,DMP1)合成分泌的影... 目的 观察转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白2(bone morphogenic protein 2,rhBMP2)单独或联合作用对小鼠成牙本质细胞系 MDPC-23牙本质基质蛋白 1(dental matrix potein,DMP1)合成分泌的影响。方法 利用不同浓度的TGF-β1和rhBMP2以及二者联合刺激培养MDPC-23细胞,用免疫组化SABC方法和图像分析观察分析结果。结果 2μg/L的 TGF-β1能够增强 MDPC-23细胞 DMP1的表达;不同浓度的 rhBMP2均可增强细胞 DMP1的表达量,呈浓度依赖性增强;2μg/L的 TGF-β1和不同浓度的 rhBMP2联合应用可明显增强 DMP1的表达。诱导的 DMP1主要表达于胞质和细胞突起中。结论 TGF-β1和rhBMP2单独和联合应用能够增强成牙本质细胞系MDW-23产生DMP1,二者联合应用作用更加显著,说明二者对成牙本质细胞的分泌和成熟有一定促进作用。 展开更多

关键词 成牙本质细胞系 转化生长因子 重组人骨形成蛋白2 牙本质基质蛋白l 小鼠

下载PDF 职称材料

牙本质基质蛋白1基因反义核酸对MDPC-23细胞内、外钙离子浓度的影响

14

作者 逄键梁 吴补领 +4 位作者 谢志海 张亚庆 吴纲 何文喜 郭鹏 《口腔医学》 CAS 2005年第6期341-344,共4页

目的观察牙本质基质蛋白1(DMP1)基因反义寡核苷酸作用下成牙本质细胞系MDPC-23细胞内、外钙离子浓度的动态变化,揭示牙本质矿化机制。方法以稳定表达DMP1的MDPC-23细胞为靶细胞,10μmol/L反义DMP1(AS-ODN)为阻断剂,用Western blot法检... 目的观察牙本质基质蛋白1(DMP1)基因反义寡核苷酸作用下成牙本质细胞系MDPC-23细胞内、外钙离子浓度的动态变化,揭示牙本质矿化机制。方法以稳定表达DMP1的MDPC-23细胞为靶细胞,10μmol/L反义DMP1(AS-ODN)为阻断剂,用Western blot法检测不同时间细胞DMP1的表达情况,并观察不同作用时间内MDPC-23细胞内游离钙离子[(Ca2+)if]、总钙离子[(Ca2+)it]和细胞外钙离子[(Ca2+)e]的动态变化。结果Western blot法检测DMP1蛋白在MDPC-23细胞的表达在AS-ODN加入后12 h时减弱,24 h后完全阻断。与正常组和正义核酸组(S-ODN)相比较(平均荧光值为87.46±39.60),AS-ODN组(Ca2+)if先升高(平均荧光值12 h处为104.10±27.06;24 h处为98.46±19.92),AS-ODN作用24 h后,(Ca2+)if又降低(平均荧光值36 h处为77.54±14.95;48 h处为68.43±22.11);(Ca2+)it明显降低,于24 h处至最低值(0.142±0.233)mmol/L(P<0.01);(Ca2+)e呈上升趋势,且与对照组差异无显著性(P>0.05)。结论反义DMP1能够影响MDPC-23细胞内(Ca2+)if和(Ca2+)it浓度,提示DMP1参与调节成牙本质细胞的钙离子代谢和转运过程,可能在牙本质矿化过程中发挥作用。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 反义核酸 钙离子 成牙本质细胞

下载PDF 职称材料

BMP-7诱导成牙本质细胞相关蛋白在DPSCs中的研究 被引量：2

15

作者 马娟 朱瑞乔 +3 位作者 史小蕾 徐辉 金岩 金磊 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期753-756,共4页

目的:检测成牙本质细胞相关功能性蛋白(DSPP、DMP-1、ALP)在BMP-7诱导前后的牙髓干细胞(dental pulp stenl cells,DPSCs)中的表达。方法:采用电镜观察、CCK8和细胞免疫化学染色的方法,观察经100 ng/ml BMP-7诱导后的DPSCs细胞形态、增... 目的:检测成牙本质细胞相关功能性蛋白(DSPP、DMP-1、ALP)在BMP-7诱导前后的牙髓干细胞(dental pulp stenl cells,DPSCs)中的表达。方法:采用电镜观察、CCK8和细胞免疫化学染色的方法,观察经100 ng/ml BMP-7诱导后的DPSCs细胞形态、增殖和向成牙本质细胞方向分化的情况。结果:经BMP-7诱导的DPSCs形态无明显变化;BMP-7诱导后第7天细胞增殖比对照组减慢。DPSCs不表达或低表达DSPP、DMP-1和ALP经BMP-7诱导后,DSPP、DMP-1和ALP呈阳性表达。结论:DPSCs经BMP-7诱导后可以向成牙本质细胞方向分化。 展开更多

关键词 牙本质涎磷蛋白 牙本质基质蛋白 碱性磷酸酶 BMP-7 DPSCs

下载PDF 职称材料

儿童乳牙牙髓干细胞顺硬度基质表面延展和向牙本质分化的潜能 被引量：1

16

作者 李章一 刘凤婷 +5 位作者 黄建永 苏小营 王志兴 郑全 李艳霞 刘晓智 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第13期2005-2010,共6页

背景:牙髓干细胞在适宜诱导条件下能够向牙本质分化,是牙齿组织工程的重要种子细胞。然而,以往所使用的诱导剂多为化学制剂,不利于体内应用。近来有报道称间充质干细胞能够顺材质硬度分化,这种由物理特性诱导的细胞分化研究报道较少。目... 背景:牙髓干细胞在适宜诱导条件下能够向牙本质分化,是牙齿组织工程的重要种子细胞。然而,以往所使用的诱导剂多为化学制剂,不利于体内应用。近来有报道称间充质干细胞能够顺材质硬度分化,这种由物理特性诱导的细胞分化研究报道较少。目的:观察人源性乳牙牙髓干细胞在硬介质表面的延展特点及向牙本质分化潜能,为牙组织工程提供参考。方法:原代分离培养和鉴定儿童自然脱落的乳牙牙髓干细胞;使用低熔点琼脂糖配制弹性模量为(9.12±0.94),(27.18±3.55),(59.37±4.05)和(86.45±5.33)k Pa4个梯度的固体凝胶基质,二维克隆形成实验和划痕实验检测第4代乳牙牙髓干细胞在上述硬基质表面的延展能力,Western blot方法检测牙本质基质蛋白1、牙本质磷蛋白、牙本质涎蛋白的表达。结果与结论:当人乳牙牙髓干细胞接种于极低和低等硬度凝胶介质表面时,乳牙牙髓干细胞几乎均以边缘整齐的细胞克隆存在,很少见细胞平铺和延展现象;但是当将其接种于中等和高等硬度凝胶介质表面时,乳牙牙髓干细胞克隆边缘则表现出明显的平铺和延展,表现为细胞胞体变大,细胞边缘外伸明显。相似的现象也经细胞划痕实验所验证。人源性乳牙牙髓干细胞在中等和高等弹性模量介质表面培养时,表达较高水平的牙本质基质蛋白1、牙本质磷蛋白、牙本质涎蛋白。结果表明,人源性乳牙牙髓干细胞随着培养基质硬度的增加其延展性及成牙本质分化能力逐渐增强,为未来牙组织工程提供方法借鉴。 展开更多

关键词 牙髓干细胞 牙本质 细胞迁移 细胞分化 牙本质基质蛋白1 牙本质磷蛋白 牙本质涎蛋白

下载PDF 职称材料

牙本质基质蛋白1基因转染猪成纤维细胞的实验研究 被引量：5

17

作者 刘冬梅 董福生 +2 位作者 王洁 于利洁 顾洪涛 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期373-377,共5页

目的评价牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP1)转基因修饰猪口腔黏膜成纤维细胞(porcine oral mucosa fibroblasts,POMF)后,对 POMF 生物学特性及 DMP1表达的影响。方法构建 pEGFP-DMP1绿色荧光融合蛋白真核表达载体,脂质体... 目的评价牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP1)转基因修饰猪口腔黏膜成纤维细胞(porcine oral mucosa fibroblasts,POMF)后,对 POMF 生物学特性及 DMP1表达的影响。方法构建 pEGFP-DMP1绿色荧光融合蛋白真核表达载体,脂质体介导转染 POMF,同时转染猪骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)作为对照。检测转染后细胞的 DMP1、釉鞘蛋白、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)基因表达以及 DMP1、DSP 蛋白的表达情况,同时检测转染细胞矿化诱导后钙盐染色及转染细胞三维立体培养钙结节的形成情况。结果成功构建了 DMP1真核表达载体pEGFP-DMP1,转基因后的 POMF 及 MSC 均可见有 DMP1、釉鞘蛋白、DSP 基因表达及 DMP1、DSP 蛋白表达阳性。DMP1转染 POMF 及 MSC 矿化诱导后钙盐染色,以及 DMP1转染细胞三维立体培养石蜡切片 HE 染色,其矿化结节形成率均高于未转染细胞。结论 POMF 转基因表达 DMP1能增强其矿化能力,诱导牙齿发育相关基因釉鞘蛋白及 DSP 的表达。 展开更多

关键词 转染 成纤维细胞 荧光抗体技术 牙本质基质蛋白1

原文传递

Cbfα1在人牙本质基质蛋白1基因启动子结合位点的初步定位

18

作者 逄键梁 邓天政 +3 位作者 熊亚茸 朱晓茹 李晓华 柯杰 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期163-166,共4页

目的对核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)在人牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)基因启动子上结合位点进行初步定位。方法 DMP1基因启动子-505^+86 bp区存在成牙本质细胞分化重要的转录调控因子Cbfα1的作用... 目的对核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)在人牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)基因启动子上结合位点进行初步定位。方法 DMP1基因启动子-505^+86 bp区存在成牙本质细胞分化重要的转录调控因子Cbfα1的作用位点,为验证它对DMP1是否具有直接的转录调控作用,将计算机分析结果Cbfα1结合位点(TTGGGAACCACAAGA,-199^-185 bp)进行体外定点基因突变,双酶切和DNA测序鉴定突变效果,突变后的质粒pGL3-P’-505^+86和PCMV-Osf2共转染至体外培养的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)中,报告基因检测系统检测虫萤光素酶活性的改变,单纯转染pGL3-P-505^+86组作为空白对照。结果与PCMV-Osf2共转染后,突变pGL3-P’-505^+86共转染组在HDPSCs中的荧光素酶活性较未突变pGL3-P-505^+86共转染组明显下降(P<0.05),突变pGL3-P’-505^+86共转染组较单纯转染pGL3-P-505^+86组活性稍有升高,但无统计学意义(P>0.05)。结论 Cbfα1对DMP1基因转录具有直接的调控作用,DMP1启动子-199^-185 bp区是Cbfα1的结合位点之一。 展开更多

关键词 核心结合因子Α1 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 结合位点

原文传递

Smad3在转化生长因子β_1调控人牙本质基质蛋白1基因表达中的作用

19

作者 逄键梁 柯杰 +3 位作者 李晓华 苏方 朱晓茹 吴补领 《临床口腔医学杂志》 2009年第9期524-527,共4页

目的:观察Smad3在转化生长因子β1(TGF-β1)调控人牙本质基质蛋白1(DMP1)转录表达中的作用并对DMP1基因启动子上的结合位点进行初步定位。方法:将Smad3瞬时转染至具有矿化活性的人牙髓干细胞(HDPSC)中,观察Smad3蛋白表达和转位情况,并... 目的:观察Smad3在转化生长因子β1(TGF-β1)调控人牙本质基质蛋白1(DMP1)转录表达中的作用并对DMP1基因启动子上的结合位点进行初步定位。方法:将Smad3瞬时转染至具有矿化活性的人牙髓干细胞(HDPSC)中,观察Smad3蛋白表达和转位情况,并检测在有无TGF-β1的刺激下细胞中pGL3-P-193～+86和pGL3-P-505～+86启动子活性的变化。pGL3-P-505～+86与Smad3共转染至细胞中,10ng/ml TGF-β1刺激2h后,提取细胞核蛋白,EMSA法检测DMP1基因启动子-505～-193bp区存在的Smad3结合位点。结果:HDPSC中瞬时转染Smad3后,其主要表达于细胞胞浆中,随着TGF-β1刺激不同时间后,Smad3在细胞中的表达出现从胞浆到胞核的转位。Smad3可明显加强TGF-β1下调pGL3-P-193～+86和pGL3-P-505～+86启动子活性的作用,在DMP1基因启动子-505～-193bp区至少有一个Smad3结合区域为-209～-201bp区的GTCTAGTCA序列。结论:Smad3是TGF-β1信号通路的下游作用分子,可介导TGF-β1下调DMP1基因转录过程,DMP1基因启动子-209～-201bp区序列为Smad3结合区域。 展开更多

关键词 SMAD3 转化生长因子Β1 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 转录活性

原文传递

牙本质基质蛋白1基因反义核酸对MDPC-23细胞碱性磷酸酶活性和矿化能力的影响

20

作者 张亚庆 逄键梁 吴补领 《临床口腔医学杂志》 2004年第9期540-543,共4页

目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)基因反义寡核苷酸 (AS -ODN)对成牙本质细胞系MDPC -2 3细胞碱性磷酸酶 (ALPase)活性和矿化能力的影响 ,深入研究成牙本质细胞的分化和牙本质形成的机制。方法 :以稳定表达DMP1的... 目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)基因反义寡核苷酸 (AS -ODN)对成牙本质细胞系MDPC -2 3细胞碱性磷酸酶 (ALPase)活性和矿化能力的影响 ,深入研究成牙本质细胞的分化和牙本质形成的机制。方法 :以稳定表达DMP1的MDPC -2 3细胞为靶细胞、不同浓度DMP1反义核酸为阻断剂 ,观察不同作用时间对MDPC -2 3细胞ALPase活性的影响。用Westernblot法检测 10 μmol/LAS -ODN不同作用时间细胞DMP1表达情况 ,并观察连续作用 10d对该细胞矿化能力的影响。结果 :与正常组和S -ODN组比较 ,不同浓度的AS -ODN能够降低MDPC -2 3细胞ALPase活性 ,其中 10 μmol/LAS -ODN降低ALPase活性最为显著 (作用 5d时OD值最低 ,为 0 .3 3 78± 2 .0E)。Westernblot法检测到DMP1在MDPC -2 3细胞的表达在 10 μmol/LAS -ODN加入 12h后减弱 ,2 4h后完全阻断。此浓度AS -ODN连续作用细胞 10d后 ,vonKossa染色显示细胞中出现明显的钙盐沉积 ,矿化结节的数量和大小明显少于对照组。结论 :DMP1反义核酸能够降低MDPC -2 3细胞AL Pase活性和矿化能力 ,提示DMP1参与调节成牙本质细胞矿化过程 ,可能具有启动牙本质矿化的作用。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 反义核酸 碱性磷酸酶 矿化

原文传递