E2-2基因腺病毒载体的构建及其对EPCs生长、增殖及ID1表达的影响 被引量：2

1

作者 刘晓丽 杨海捷 +3 位作者 苏勇 谭志胜 朱琴 王红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期1664-1669,共6页

目的构建转录因子E2-2基因腺病毒载体,观测内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1(inhibitor of DNA binding/differentiation,ID1)表达的影响。方法分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR... 目的构建转录因子E2-2基因腺病毒载体,观测内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1(inhibitor of DNA binding/differentiation,ID1)表达的影响。方法分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法扩增E2-2基因CDs全长DNA,克隆入载体pTG19-T后,亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack/E2-2重组载体,与pAdEasy-1骨架质粒同源重组形成重组病毒pAd/E2-2,经293细胞包装,获具高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。将该病毒感染EPCs,倒置显微镜观测经感染的EPCs的GFP表达情况。CCK-8(cell count kit-8)法检测病毒pAd/E2-2对EPCs生长、增殖的影响。RT-PCR、Western blot分别检测经感染的EPCs中E2-2与ID1基因及其编码蛋白的表达情况,并予以定量分析。结果分离、培养并鉴定到小鼠骨髓EPCs。克隆到2013 bp的E2-2基因,并获得高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。CCK-8法检测表明,与对照比较,过表达E2-2的EPCs的生长、增殖速度减慢,48h开始变得尤为明显(P<0.01);RT-PCR、Western blot及定量分析结果显示,E2-2能下调ID1的表达,与对照比较,差异具统计学意义(P<0.01)。结论分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs,克隆出E2-2基因,证实E2-2能明显抑制EPCs的生长、增殖,并能下调ID1基因的表达。 展开更多

关键词 ePCS e2-2基因 ID1基因 腺病毒

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慢病毒介导shRNA沉默E2-2基因促进内皮前体细胞增殖 被引量：1

2

作者 刘晓丽 马阳 +3 位作者 梁源 喻杨 梁云华 王红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第22期2261-2266,共6页

目的构建小鼠转录因子基因E2-2 RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒载体,并观测其沉默E2-2基因对内皮前体细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）增殖的影响。方法 SPF级昆明小鼠20只,雌雄不拘,4周龄,体质量18-20 g。分离、培... 目的构建小鼠转录因子基因E2-2 RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒载体,并观测其沉默E2-2基因对内皮前体细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）增殖的影响。方法 SPF级昆明小鼠20只,雌雄不拘,4周龄,体质量18-20 g。分离、培养小鼠骨髓EPCs,并予以鉴定。针对E2-2基因mRNA序列,筛选3个siRNA干扰靶点并予以合成;将合成的siRNA导入EPCs,用RT-PCR法检测其对靶基因的抑制效果,以确定最佳siRNA。设计并合成针对最佳siRNA靶序列的shRNA,连入FT203-PLVX载体,构建慢病毒载体FT203-PLVX/E2-2shRNA,并予以测序鉴定。测序正确者经293细胞包装,形成具高效感染力的FT203-PLVX/E2-2shRNA慢病毒。将该重组慢病毒感染EPCs,倒置显微镜观测被感染细胞的绿色荧光蛋白（GFP）的表达变化、CCK-8法检测被感染细胞的增殖情况;在mRNA和蛋白水平分别检测并定量分析被感染细胞的E2-2及核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达变化。结果小鼠骨髓EPCs得以分离、培养与鉴定。筛检到E2-2基因的最佳干扰靶序列为CGTCAGCTAGTGTTTCTAA;测序证实,成功构建FT203-PLVX/E2-2 shRNA慢病毒载体。荧光观察显示,被慢病毒感染的EPCs明显表达GFP。CCK-8检测表明,与对照细胞比较,沉默E2-2的EPCs的增殖加快,48 h开始变得更为明显（P〈0.01）;mRNA和蛋白水平检测及定量分析结果显示,E2-2 shRNA慢病毒能有效沉默EPCs的E2-2,并上调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达。结论小鼠骨髓EPCs得以分离、培养与鉴定;成功构建E2-2基因RNAi慢病毒载体,该载体能有效沉默EPCs的E2-2基因,促使EPCs的增殖并上调其核抗原PCNA的表达。 展开更多

关键词 e2-2基因 RNAI 内皮前体细胞 慢病毒

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龙胆苦苷、木兰花碱对RA模型大鼠踝关节组织病理学及血清PGE2、Bcl-2水平的影响 被引量：2

3

作者 葛珊 郑丽霞 +2 位作者 李飒 郭从嘉 高慧琴 《中兽医医药杂志》 CAS 2022年第6期19-24,F0002,共7页

通过观察对比秦艽主要成分龙胆苦苷、威灵仙主要成分木兰花碱及龙胆苦苷配伍木兰花碱对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠的足跖肿胀情况、组织病理学及血清中PGE2、Bcl-2水平的影响,探究龙胆苦苷、木兰花碱的抗炎活性对类风湿关节炎(RA)... 通过观察对比秦艽主要成分龙胆苦苷、威灵仙主要成分木兰花碱及龙胆苦苷配伍木兰花碱对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠的足跖肿胀情况、组织病理学及血清中PGE2、Bcl-2水平的影响,探究龙胆苦苷、木兰花碱的抗炎活性对类风湿关节炎(RA)的治疗作用。48只SD大鼠适应性饲养3 d,按照随机数字表法分为空白组、模型组、阳性药物(甲氨蝶呤)组、龙胆苦苷组、木兰花碱组、龙胆苦苷配伍木兰花碱组(简称龙木配伍组)。除空白组外,其余各组大鼠均建立RA模型。造模结束后,空白组和模型组给予相应体积生理盐水进行灌胃,各给药组大鼠灌胃相应药液,每天1次,连续给药15 d。试验过程中,分别对各组大鼠、体质量、足跖肿胀度、AI评分进行观察并记录;对各组大鼠踝关节进行组织病理学观察;采用ELISA方法检测各组大鼠血清中前列腺素E2(PGE2)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达水平。给药治疗后,与模型组大鼠比较,各给药组大鼠精神状态、足跖肿胀情况、组织病理状态均有不同程度好转,各给药组大鼠血清中PGE2、Bcl-2水平与模型组比较均显著降低(P<0.05或P<0.01),但各给药组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。龙胆苦苷、木兰花碱及龙胆苦苷配伍木兰花碱能够有效改善RA模型大鼠的足跖肿胀与组织病理状态,明显降低血清中PGE2、Bcl-2表达水平,其作用机制可能是通过龙胆苦苷、木兰花碱抑制血清中PGE2、Bcl-2的过度表达,抑制炎症反应,从而对RA起到一定的治疗作用。 展开更多

关键词 龙胆苦苷 木兰花碱 类风湿关节炎 前列腺素e2 B淋巴细胞瘤-2基因

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苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对Nrf2/HO-1通路的影响 被引量：9

4

作者 李晓玲 汪砚雨 +1 位作者 徐梅 赵子明 《浙江中医药大学学报》 CAS 2021年第8期849-856,共8页

[目的]探讨苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。[方法]45只雄性SD大鼠中随机选择10只作为正常对照组... [目的]探讨苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。[方法]45只雄性SD大鼠中随机选择10只作为正常对照组,其余35只经尾静脉注射氯化钡溶液制备慢性心律失常模型,将30只建模成功的大鼠随机分为苓桂术甘汤组、阳性对照组、模型对照组,每组各10只。苓桂术甘汤组大鼠采用苓桂术甘汤灌胃,阳性对照组采用酒石酸美托洛尔灌胃,模型对照组和正常对照组接受等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,2次/d,均干预4周。采用心电图检验大鼠造模成功情况,以酶联免疫吸附法检验大鼠血清谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽硫基转移酶(glutathione S-transferase,GST)含量,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌组织病理变化,DNA缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)与Western blot检测心肌组织中Nrf2、HO-1基因及蛋白表达水平。[结果]与正常对照组比较,模型对照组、阳性对照组、苓桂术甘汤组GSH和GST含量较低,心肌细胞凋亡率较高,Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白相对表达量较高(P<0.05)。与模型对照组比较,阳性对照组、苓桂术甘汤组大鼠的GSH和GST含量较高,心肌细胞凋亡率较低(P<0.05);与阳性对照组比较,苓桂术甘汤组大鼠的GSH和GST含量较低,心肌细胞凋亡率较高(P<0.05)。模型对照组心肌组织水肿、充血严重,肌束紊乱,心肌细胞间隙增宽;阳性对照组、苓桂术甘汤组心肌组织水肿、肌束及心肌细胞间隙明显改善。与模型对照组比较,阳性对照组、苓桂术甘汤组大鼠Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量均较高(P<0.05);与阳性对照组比较,苓桂术甘汤组大鼠Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量均较低(P<0.05)。[结论]苓桂术甘汤可能通过激活Nrf2/HO-1通路,发挥对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用。 展开更多

关键词 苓桂术甘汤 慢性心律失常 心肌损伤 核因子e2相关性因子2 血红素氧合酶-1 心肌细胞凋亡 基因表达 蛋白表达

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亚低温对脓毒症小鼠肺损伤及Nrf2/HO-1通路的影响 被引量：1

5

作者 林冬梅 蒋良艳 +3 位作者 赖洁 黄晓 胡军涛 汤展宏 《广西医科大学学报》 CAS 2022年第12期1918-1923,共6页

目的:探究亚低温对脓毒症小鼠肺损伤及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路的影响。方法:野生型(WT)和Nrf2基因敲除(Nrf2-KO)C57/BL6小鼠各20只,分别随机分为假手术常温组(S组)、假手术亚低温组(SH组)、脓毒症常温组(N组)... 目的:探究亚低温对脓毒症小鼠肺损伤及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路的影响。方法:野生型(WT)和Nrf2基因敲除(Nrf2-KO)C57/BL6小鼠各20只,分别随机分为假手术常温组(S组)、假手术亚低温组(SH组)、脓毒症常温组(N组)和脓毒症亚低温组(H组),每组5只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。采用苏木精—伊红(HE)染色观察肺组织损伤情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平,试剂盒检测肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。分别采用western blotting和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肺组织中Nrf2和HO-1基因及蛋白表达。结果:与S组相比,WT和Nrf2-KO小鼠N组TNF-α、IL-1β和MDA含量升高,HO-1 mRNA及蛋白表达量升高,SOD活性降低(均P<0.05),肺组织损伤严重。WT小鼠N组Nrf2 mRNA及蛋白表达量较S组升高(P<0.05),而Nrf2-KO小鼠各组Nrf2均无表达。与N组相比,WT小鼠H组TNF-α、IL-1β和MDA含量降低,SOD活性升高,Nrf2和HO-1 mRNA及蛋白表达量升高(均P<0.05),肺组织损伤减轻;而Nrf2-KO小鼠H组与N组上述各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:亚低温可以减轻脓毒症小鼠肺损伤,其机制可能与激活肺组织Nrf2/HO-1通路,增强抗氧化应激能力,以及减少炎症因子的生成有关。 展开更多

关键词 亚低温 脓毒症 肺损伤 Nrf2/HO-1通路 Nrf2基因敲除

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草鱼核因子E2相关因子2基因克隆分析及其对呼吸爆发的调控作用 被引量：5

6

作者 冯燕 秦真东 +6 位作者 代云佳 张玉蕾 刘小玲 周洋 兰江风 赵丽娟 林蠡 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期161-177,共17页

呼吸爆发过程可以产生大量的活性氧,核因子E2相关因子2(Nrf2)在此过程中起着重要作用。实验克隆和分析了草鱼的Nrf2基因,随后制备了Nrf2蛋白的多克隆抗体,研究了其和呼吸爆发的关系。草鱼Nrf2基因cDNA长度为1994 bp,开放阅读框为1782 bp... 呼吸爆发过程可以产生大量的活性氧,核因子E2相关因子2(Nrf2)在此过程中起着重要作用。实验克隆和分析了草鱼的Nrf2基因,随后制备了Nrf2蛋白的多克隆抗体,研究了其和呼吸爆发的关系。草鱼Nrf2基因cDNA长度为1994 bp,开放阅读框为1782 bp,编码593个氨基酸(aa)。氨基酸序列比对发现,草鱼Nrf2基因与鲤的同源性最高,为87%;草鱼Nrf2基因含有6个进化过程中保守的Neh[Nrf2-Epoxy chloropropane(ECH)homology]区。实时定量PCR(q RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测结果表明,Nrf2基因在检测的草鱼8个组织中均有表达。Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚(t BHQ)处理草鱼肾细胞(CIK)后,CIK细胞总抗氧化能力显著上调,产生的活性氧下调,Nrf2及其下游的HO-1和GST基因的m RNA表达上调。Western blot和免疫荧光(IF)检测结果表明,t BHQ处理CIK后,Nrf2的蛋白表达也上调,并伴随着入细胞核现象。研究表明,保守的草鱼Nrf2基因在机体中广泛表达,能通过上调自身及其下游抗氧化基因的表达下调细胞活性氧的产生,从而参与调控呼吸爆发过程。 展开更多

关键词 草鱼 核因子e2相关因子2(Nrf2) 基因克隆 多克隆抗体制备 呼吸爆发

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初治急性髓系白血病患者中MDR1和Nrf2基因的表达研究 被引量：2

7

作者 韦祁 董慧娟 +4 位作者 梁家宝 陈凯 周勇 周淑芸 徐兵 《生物医学工程与临床》 CAS 2015年第6期623-628,共6页

目的探讨急性髓系白血病（AML）患者MDR1和Nrf2基因表达水平及其临床意义。方法选择2011年10月至2014年1月南方医科大学南方医院血液科110例初治AML患者,其中男性66例,女性44例;年龄14~77岁,中位年龄36岁。通过实时荧光定量聚合酶链反应... 目的探讨急性髓系白血病（AML）患者MDR1和Nrf2基因表达水平及其临床意义。方法选择2011年10月至2014年1月南方医科大学南方医院血液科110例初治AML患者,其中男性66例,女性44例;年龄14~77岁,中位年龄36岁。通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法联合检测患者MDR1和Nrf2基因的表达水平,分析其表达水平与疾病特征及临床疗效之间的关系。结果以110例初治AML患者MDR1和Nrf2基因表达量的中位数为分界点,将患者分别分为MDR1基因低表达组和MDR1基因高表达组及Nrf2基因低表达组和Nrf2基因高表达组各55例,而初治AML患者MDR1和Nrf2基因表达水平在不同分层的年龄、性别、法国（France）、美国（American）和英国（Britain）（FAB）分型、外周血象、骨髓原始细胞比例、遗传学危险度分层、免疫分型CD34表达间差异无统计学意义（P〉0.05）。MDR1基因低表达组完全缓解（CR）率和总生存（OS）率均显著高于MDR1基因高表达组（P=0.032、0.045）,而Nrf2基因低表达组和Nrf2基因高表达组CR率和OS率差异无统计学意义（P〉0.05）。在MDR1基因低表达组患者中Nrf2基因表达水平高、低两组患者CR率及OS率差异均无统计学意义（P〉0.05）。但在MDR1基因高表达组患者中Nrf2基因高表达组患者CR率和OS率皆优于Nrf2基因低表达组患者（P=0.007和P=0.001）。结论 MDR1基因是AML预后差的指标之一,Nrf2基因不同表达水平患者的危险度分层、疗效、预后差异均无统计学意义;但在MDR1基因高表达组患者中Nrf2基因高表达可能是预后好的指标。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 MDR1基因 Nrf2基因 治疗预后

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BMAL1对H_(2)O_(2)诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制探讨 被引量：4

8

作者 易娜 袁李礼 《天津医药》 CAS 北大核心 2021年第8期791-795,共5页

目的探讨节律基因BMAL1对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制。方法构建BMAL1稳定过表达的H9C2细胞系后,实验分为2个部分。(1)实验1。对照组、H_(2)O_(2)组(0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)、BMAL1过表达(BMAL1-... 目的探讨节律基因BMAL1对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制。方法构建BMAL1稳定过表达的H9C2细胞系后,实验分为2个部分。(1)实验1。对照组、H_(2)O_(2)组(0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组(BMAL1稳定过表达H9C2细胞)、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组(0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h)。(2)实验2。H_(2)O_(2)组、BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达+抑制NRF2+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组(NRF2抑制剂2μmol/L的ML385预处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h,再用0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)、BMAL1过表达+抑制HO-1+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+Znpp+H_(2)O_(2))组(HO-1抑制剂5μmol/L的Znpp预处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h,再用0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)。CCK-8法检测细胞活力,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、TBA法检测丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测BMAL1、核因子E2相关因子2(NRF2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果(1)与Control组相比,BMAL1-OE组BMAL1 mRNA表达水平升高,H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性下降、MDA含量增加,BMAL1、NRF2和HO-1蛋白相对表达水平降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性增加,MDA含量减少,而BMAL1、NRF2和HO-1蛋白相对表达水平升高(P<0.05);(2)与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组和BMAL1-OE+Znpp+H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性降低,MDA含量增加(P<0.05)。结论BMAL1可能通过上调NRF2/HO-1信号轴,减轻H_(2)O_(2)诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤。 展开更多

关键词 肌细胞 心脏 过氧化氢 氧化性应激 ARNTL转录因子类 NF-e2相关因子2 血红素加氧酶-1 节律基因BMAL1

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耐药肝癌细胞p62表达与顺铂敏感性的关系 被引量：1

9

作者 郑志明 邹海鹏 +1 位作者 林碧华 龙冰清 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第39期1-5,共5页

目的观察顺铂耐药的肝癌细胞中p62的表达情况,及p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂敏感性的变化。方法培养肝癌亲本细胞Hep G2、Huh7,通过浓度梯度法建立顺铂耐药细胞模型,采用Western blotting法检测亲本Hep G2、Huh7细胞和耐药Hep G2、... 目的观察顺铂耐药的肝癌细胞中p62的表达情况,及p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂敏感性的变化。方法培养肝癌亲本细胞Hep G2、Huh7,通过浓度梯度法建立顺铂耐药细胞模型,采用Western blotting法检测亲本Hep G2、Huh7细胞和耐药Hep G2、Huh7细胞中的p62蛋白。将耐药Hep G2、Huh7细胞分为沉默组和耐药组,分别转染p62 siRNA和siRNA Negative Control。在转染48 h后的0、1、2、3、4、5 d测算沉默组和耐药组细胞存活率。转染后48 h进行Hochest 33258染色观察沉默组和耐药组细胞凋亡核形态、计数凋亡细胞,采用Annexin VFITC/PI流式细胞术测算细胞凋亡率。转染后48 h采用Western blotting法检测沉默组与耐药组细胞中的核因子红细胞前体2相关因子2(Nrf2),RT-PCR法检测Nrf2蛋白下游的谷氨酸半胱氨酸合成酶(GCL)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、NADP(H)醌氧化还原酶(NQO1)、血红素氧化酶1(HO-1)、多药耐药蛋白(Mrp)基因。结果耐药的Hep G2、Huh7细胞中p62蛋白相对表达量分别高于亲本Hep G2、Huh7细胞(P均<0.05)。转染48 h后的0、1、2、3、4、5 d沉默组Hep G2、Huh7细胞存活率低于耐药组(P均<0.05)。沉默组凋亡细胞数及凋亡率均高于耐药组(P均<0.05)。沉默组细胞中Nrf2蛋白及NQO1、GCL、GST、HO-1、Mrp mRNA相对表达量均低于耐药组(P均<0.05)。结论顺铂耐药的肝癌细胞中p62蛋白表达上调;p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂的敏感性增强,其机制可能与Nrf2及其下游基因表达下调有关。 展开更多

关键词 肝癌 肝癌细胞 耐药 顺铂 P62 基因沉默 核因子红细胞前体2相关因子2

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靶向Nrf2基因RNA干扰真核表达载体的构建

10

作者 杨晓云 李延青 +4 位作者 梁晓红 郭玉婷 袁俊华 张燕 朱强 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第4期345-350,共6页

目的：利用pSUPER载体构建针对人核因子E2p45相关因子2（Nrf2）基因的RNA干扰真核表达载体，为研究Nrf2基因在结肠癌化学预防中的作用奠定实验基础。方珐：设计特异性针对Nrf2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列，构建重组载体pSUPER-N... 目的：利用pSUPER载体构建针对人核因子E2p45相关因子2（Nrf2）基因的RNA干扰真核表达载体，为研究Nrf2基因在结肠癌化学预防中的作用奠定实验基础。方珐：设计特异性针对Nrf2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列，构建重组载体pSUPER-Nrf2转染人结肠癌HT-29细胞。同时转染pEGFP-N1质粒，通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光监测转染效率，共转染pEGFP-N148h后G418筛选稳定表达的细胞。RT-PCR和Western blot检测瞬时及稳定转染细胞Nrf2基因的表达，观察稳定筛选出的细胞中UGT1A基因mRNA水平的表达变化。结果：成功构建RNA干扰真核表达载体pSU-PER-Nrf2。转染后24-96h，荧光显微镜及FCM检测显示转染效率为30％-75％。瞬时转染pSUPER-Nrf2-A2，pSUPER-Nrf2-B2重组质粒Nrf2 mRNA的表达差异无显著性（P〉0．05）；瞬时转染72h及稳定转染后，pSUPER-Nrf2-A1，pSUPER-Nrf2-B1可显著抑制Nrf2基因的表达。RT-PCR检测显示，稳定筛选出的细胞中UGT1A表达水平降低（P〈0．05）。结论：成功构建了Nrf2的RNA干扰表达载体，筛选并获得低表达Nrf2基因的稳定克隆，筛选出的细胞UGT1A表达水平明显降低，表明Nrf2可能对UGT1A酶的表达具有调节作用。 展开更多

关键词 基因 Nrf2 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 RNA干扰 结肠肿瘤

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Nrf2基因多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研究 被引量：5

11

作者 李曼 任勇刚 张淼 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期268-271,共4页

目的:探讨陕西地区汉族人群中,核因子E2相关因子2(Nrf2)基因多态性与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法:收集2016-01/2017-01在我院治疗的386例2型糖尿病(T2DM)患者分为无视网膜病变(DWR)组181例,增生期DR(PDR)组62例和非增生期DR(NP... 目的:探讨陕西地区汉族人群中,核因子E2相关因子2(Nrf2)基因多态性与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法:收集2016-01/2017-01在我院治疗的386例2型糖尿病(T2DM)患者分为无视网膜病变(DWR)组181例,增生期DR(PDR)组62例和非增生期DR(NPDR)组143例。另外,收集120例非糖尿病且无视网膜疾病的患者作为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)联合DNA直接测序法检测Nrf2基因启动子rs6721961位点单核苷酸多态性。结果:DWR组与对照组比较,rs6721961位点基因型和等位基因分布频率均无差异(P>0. 05); PDR组和NPDR组分别与对照组和DWR组比较,突变纯合子(AA基因型)和突变基因(A等位基因)分布频率差异均有统计学意义(P<0. 05)。PDR组和NPDR组比较,基因型和等位基因分布频率均无差异(P>0. 05)。Logistic多因素回归分析结果显示rs6721961位点A等位基因与DR发生相关(OR=1. 532,95%CI:1. 169~2. 008,P=0. 014)。结论:Nrf2基因多态性可能与DR遗传易感性相关。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 核因子e2相关因子2 基因多态性

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Nrf2基因启动子rs35652124，rs6706649和rs6721961位点单核苷酸多态性与阿尔茨海默病的相关性研究 被引量：2

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作者 张宝华 武琪 《现代检验医学杂志》 CAS 2017年第5期62-65,共4页

目的探讨陕西地区汉族人群中,核因子E2相关因子2(Nrf2)基因多态性与阿尔茨海默病(AD)的相关性。方法收集2015年1月～2016年12月于安康市中医医院治疗的382例AD患者,按照患者发病年龄分为早发性阿尔茨海默病(EOAD)患者116例和晚发性阿尔... 目的探讨陕西地区汉族人群中,核因子E2相关因子2(Nrf2)基因多态性与阿尔茨海默病(AD)的相关性。方法收集2015年1月～2016年12月于安康市中医医院治疗的382例AD患者,按照患者发病年龄分为早发性阿尔茨海默病(EOAD)患者116例和晚发性阿尔茨海默病(LOAD)患者266例,另选择120例认知功能正常志愿者作为对照组,收集所有入组成员的临床资料,并采用聚合酶链反应(PCR)联合DNA直接测序法检测Nrf2基因启动子rs35652124,rs6706649和rs6721961位点单核苷酸多态性。结果 EOAD组与对照组比较,rs35652124和rs6721961位点基因型和等位基因分布频率差异均有统计学意义(均P<0.05)。LOAD组与对照组比较,三个SNP位点基因型和等位基因分布频率差异均无统计学意义(均P>0.05)。对于EOAD组,rs35652124和rs6721961位点不同基因型患者,发病年龄差异具有统计学意义(P<0.05)。对于LOAD组,三个SNP位点不同基因型患者发病年龄差异无统计学意义(均P>0.05)。结论Nrf2基因多态性可能与EOAD遗传易感性相关,且影响EOAD患者发病年龄。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 核因子e2相关因子2 基因多态性

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HOXB7基因沉默表达对大鼠氧化应激及肝脏Nrf2表达的影响

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作者 王哲 刘铁权 马师琦 《临床和实验医学杂志》 2020年第7期722-725,共4页

目的探讨同源盒基因(HOX)B7基因沉默表达对大鼠氧化应激及肝脏NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的影响。方法C57野生型雄性大鼠20只(对照组)与HOXB7基因沉默C57雄性大鼠20只(沉默组)分别采用皮下多点注射50%四氯化碳法建立肝硬化模型。记录两... 目的探讨同源盒基因(HOX)B7基因沉默表达对大鼠氧化应激及肝脏NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的影响。方法C57野生型雄性大鼠20只(对照组)与HOXB7基因沉默C57雄性大鼠20只(沉默组)分别采用皮下多点注射50%四氯化碳法建立肝硬化模型。记录两组建模后第4周、第8周大鼠体重;采用速率法检测两组建模后第4周、第8周血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)含量;采用化学比色法检测建模后第4周、第8周肝脏组织丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH)含量;免疫组化分析SOD表达;记录建模后第8周的肝脏Nrf2 mRNA与蛋白表达水平。结果两组大鼠建模后主要表现为毛发不整、反应变迟缓,病理显示所有大鼠均建模成功。建模后第4周、第8周沉默组大鼠体重显著高于对照组(P<0.05)、血清AST、ALT、GGT值以及肝脏组织MDA含量均显著低于对照组(P<0.05),肝脏组织T-SOD和GSH含量显著高于对照组(P<0.05);沉默组建模后第8周的肝脏SOD表达阳性率显著高于对照组(P<0.05)。沉默组建模后第8周的肝脏Nrf2 mRNA与蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论HOXB7基因沉默表达能抑制大鼠氧化应激反应,提高肝脏SOD表达水平,有利于肝脏Nrf2的表达,从而能促进肝硬化大鼠恢复体重,降低肝功能损伤。 展开更多

关键词 大鼠 肝硬化 同源盒基因 基因沉默 氧化应激 NF-e2相关因子2

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Keapl-Nrf2-ARE通路与脑缺血 被引量：5

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作者 鲍兵 陈志颖 殷小平 《国际脑血管病杂志》 北大核心 2012年第7期547-550,共4页

Keapl—Nrt2-ARE通路在抗肿瘤、抗应激、抗凋亡、抗炎症等方面具有广泛的细胞保护功能。其在神经系统疾病中的神经保护作用已成为目前的研究热点之一。文章综述了Keapl—Nrf2-ARE通路在脑缺血中的神经保护作用。

关键词 NF—e2相关因子2 脑缺血 基因表达调控 酶学 氧化性应激 神经保护药

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NF-κB p65介导的前列腺素E2分泌及DNA结合抑制因子2蛋白表达在促进大鼠桡骨骨折早期愈合的作用 被引量：4

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作者 牛增志 王乐禹 +5 位作者 胡晓芳 汪海仪 欧阳钧 黄文华 余磊 邱小忠 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期569-574,共6页

目的骨再生过程包含一系列复杂的分子信号途径,通过探讨NF-κB作为骨折愈合过程中"关键性激活点"的可能性,为基因治疗骨折延迟愈合和骨不连提供实验依据。方法取6～7周龄Wistar雄性大鼠33只,体重180～220 g,随机分为4组。对照... 目的骨再生过程包含一系列复杂的分子信号途径,通过探讨NF-κB作为骨折愈合过程中"关键性激活点"的可能性,为基因治疗骨折延迟愈合和骨不连提供实验依据。方法取6～7周龄Wistar雄性大鼠33只,体重180～220 g,随机分为4组。对照组(A组,n=3)、单纯NF-κB抑制剂Bay 11-7082处理组(B组,n=6):分别在大鼠右前肢桡骨中下段经皮注射0.3 mL生理盐水或含50μmol/L Bay 11-7082的生理盐水,每天1次,持续至处死。单纯骨折组(C组,n=12)、Bay 11-7082干预骨折组(D组,n=12):制备右侧桡骨中下段骨折模型后,C组不作任何处理,D组处理方法同B组。观察大鼠一般情况,A组于注射后7 d,B、C、D组于注射后3、7 d取标本行ALP活性、前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)含量检测以及Western blot检测NF-κB p65、BMP-7和DNA结合抑制因子2(inhibitor of DNA binding 2,Id2),并取C、D组14、28 d标本行HE染色观察。结果各组大鼠均存活至实验完成。注射后3、7 d B组ALP活性及PGE2含量与A组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组较A组增高,D组较A组降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。注射后3、7 d,各组骨折端组织中均见NF-κB p65、BMP-7、Id2表达,B组各因子表达水平与A组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组NF-κB p65和BMP-7蛋白表达水平较A组增高,Id2蛋白表达水平较A组降低,差异均有统计学意义(P<0.01);D组NF-κB p65、BMP-7蛋白表达水平较A组降低,Id2蛋白表达较A组增高,差异均有统计学意义(P<0.01)。组织学观察示,注射后14、28 d C组骨折端组织见大量骨性骨痂,而D组28 d时才见骨性骨痂。结论 NF-κB p65可通过调控PGE2分泌以及BMP-7和Id2蛋白表达促进大鼠桡骨骨折的早期愈合。 展开更多

关键词 骨折愈合 NF-ΚB 前列腺素e2 BMP-7 DAN结合抑制因子2 基因治疗 大鼠

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Nrf2基因启动子多态性与妊娠期糖尿病合并生殖道感染PROM易感性的关联 被引量：3

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作者 王海艳 郭艳巍 +1 位作者 杨佳琦 刘艳芳 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期904-909,共6页

目的 探究核因子E2相关因子2(Nrf2)基因启动子多态性与妊娠期糖尿病(GDM)合并生殖道感染患者足月胎膜早破(PROM)易感性的关联。方法 选取2017年1月-2020年6月在承德医学院附属医院定期产检、分娩的GDM产妇175例,分析产妇妊娠期生殖道感... 目的 探究核因子E2相关因子2(Nrf2)基因启动子多态性与妊娠期糖尿病(GDM)合并生殖道感染患者足月胎膜早破(PROM)易感性的关联。方法 选取2017年1月-2020年6月在承德医学院附属医院定期产检、分娩的GDM产妇175例,分析产妇妊娠期生殖道感染情况和感染病原菌的病原学特点;根据产妇是否发生PROM分为PROM组46例和非PROM组129例,另选取同期于医院正常分娩的健康产妇105名为对照组,聚合酶链反应(PCR)检测Nrf2基因启动子-653G/A、-651G/A和-617C/A位点的多态性。结果 57例(32.57%)GDM产妇发生生殖道感染,检出的89株感染病原菌以革兰阳性菌为主(29.21%)。PROM组、非PROM组和对照组的生殖道感染率比较:PROM组>非PROM组>对照组(P<0.05),新生儿出生体质量比较:PROM组<非PROM组<对照组(P<0.05)。PROM组Nrf2基因启动子-617C/A位点的CC基因型、C等位基因频率均低于非PROM组和对照组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,生殖道感染、Nrf2基因启动子-617C/A位点CA/AA基因型是足月PROM的危险因素(P<0.05)。结论 GDM产妇生殖道感染发生率较高,感染的病原菌分布具有一定特征性;Nrf2基因启动子-617C/A位点的多态性可能与足月PROM易感性有关,而生殖道感染会进一步促进足月PROM的发生。 展开更多

关键词 妊娠期糖尿病 生殖道感染 足月胎膜早破 核因子e2相关因子2 基因多态性

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共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒的构建及其免疫原性研究 被引量：10

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作者 何雷 张彦明 +7 位作者 徐彦召 唐青海 王静 杨小云 代晨 向华 常鹏祥 林鸷 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期385-391,共7页

为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性... 为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性接头序列(5个甘氨酸密码子)串联,插入腺病毒穿梭载体AdTrack中,在受体菌中与骨架载体AdEasy同源重组。重组质粒AdEasy-E2-pIL-2转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒rAd-E2-pIL-2。用rAd-E2-pIL-2免疫家兔,经兔体交互免疫试验评定其免疫效果。结果显示,经RT-PCR和West-ern blot检测,成功构建了rAd-E2-pIL-2,重组病毒滴度达108.12PFU/mL。rAd-E2-pIL-2接种家兔后刺激接种兔产生猪瘟病毒特异性抗体,淋巴细胞转化试验结果显示猪瘟病毒诱导兔淋巴细胞特异性增殖,攻毒后rAd-E2-pIL-2接种兔和猪瘟病毒C株接种兔均未出现定型热反应。研究结果表明,rAd-E2-pIL-2免疫兔可以预防猪瘟病毒C株接种引发的体温反应,rAd-E2-pIL-2可望成为猪瘟候选疫苗。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2基因 猪白细胞介素2 重组腺病毒 细胞因子佐剂

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核因子E2相关因子2外显子基因多态性与糖尿病足感染易感性及严重程度的关联 被引量：3

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作者 李伟 吕梁 +4 位作者 董雪 侯亮 鞠爱霞 王德忠 李宁 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期717-720,共4页

目的 探讨核因子E2相关因子2外显子(Nrf2)基因多态性与糖尿病足感染(DFI)易感性及严重程度的关联。方法 选择滕州市中心人民医院内分泌科2020年1月-2021年1月收治的DFI患者75例为研究对象。选择同期医院进行治疗血糖控制达标的2型糖尿... 目的 探讨核因子E2相关因子2外显子(Nrf2)基因多态性与糖尿病足感染(DFI)易感性及严重程度的关联。方法 选择滕州市中心人民医院内分泌科2020年1月-2021年1月收治的DFI患者75例为研究对象。选择同期医院进行治疗血糖控制达标的2型糖尿病患者70例为对照组。通过电子病历调取入组对象临床资料,DFI组患者根据疾病严重程度分为轻度组和中/重度组,针对Nrf2基因rs6721961位点设计特异性引物,采用聚合酶链式反应法扩增目的片段并经凝胶电泳观察基因分型。结果 DFI组AA基因型、A等位基因频率高于对照组,两组GG、GA基因型频率比较,无统计学差异,DFI组血清Nrf2水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);中/重度组AA基因型高于轻度组,差异具有统计学意义(P<0.05),两组CC、CA基因型频率比较,无统计学差异,中/重度组血清Nrf2水平低于轻度组,差异具有统计学意义(P<0.05);Logistic回归结果显示携带Nrf2基因rs6721961位点AA基因型和A等位基因为DFI患者病情严重的危险因素(P<0.05)。结论 Nrf2基因rs6721961位点AA基因型显著增加本地区DFI易感性,为临床中针对性预防提供参考。 展开更多

关键词 核因子e2相关因子2外显子 基因多态性 糖尿病足感染 严重程度 易感性

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慢病毒介导siRNA对大鼠脊髓组织细胞外信号调节激酶1/2及核因子E2相关因子2基因的影响

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作者 李维朝 姚绍平 +2 位作者 孙先润 孟增东 刘伟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第9期912-917,共6页

目的评价慢病毒介导细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)-si RNA及核因子(nuclear factor,NF)E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)-si RNA进入大鼠局部脊髓组织的转染效果。方法采用NYU撞... 目的评价慢病毒介导细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)-si RNA及核因子(nuclear factor,NF)E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)-si RNA进入大鼠局部脊髓组织的转染效果。方法采用NYU撞击法构建SD大鼠脊髓损伤模型(模型组),使用微量注射器将含荧光慢病毒载体(LV-Nrf2-RNAi和LV-ERK1/2-RNAi)稀释液注射至其脊髓T10水平背侧深约0.8 mm处,荧光显微镜下观察不同时间点(12 h、24 h、72 h、7 d及14 d)转染效果。以只切除椎板,不打击脊髓的大鼠作为假手术组,在模型组和假手术组中同时设转染组和未转染组。取大鼠脊髓组织,采用RT-PCR及Western blot法检测转染后7 d时ERK1/2及Nrf2基因m RNA转录及蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠脊髓组织在慢病毒转染后各时间点均有较强的荧光表达,病毒转染7 d以内,荧光强度与时间呈正相关,在转染7 d后达到高峰。转染7 d后,假手术组与模型组中ERK1/2及Nrf2基因m RNA转录及蛋白表达水平均较未转染组明显降低(P均<0.05)。结论慢病毒介导si RNA转染大鼠脊髓组织,能够有效沉默ERK1/2及Nrf2基因的表达。 展开更多

关键词 慢病毒 RNA干扰 细胞外信号调节激酶1/2 核因子e2相关因子2基因 脊髓组织

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氢气对野生型及Nrf2基因敲除型脓毒症小鼠肺损伤的影响:与Nrf2/HO-1/HMGB1通路的关系 被引量：10

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作者 杨曼 于洋 +1 位作者 谢克亮 于泳浩 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期862-866,共5页

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf 2)通过调控Nrf 2/血红素加氧酶-1(HO-1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)通路在氢气(H2)治疗脓毒症小鼠肺损伤中的关键作用.方法雄性野生型(WT)和Nrf 2基因敲除型(Nrf 2-KO)ICR小鼠各120只,分别按随机数字表法... 目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf 2)通过调控Nrf 2/血红素加氧酶-1(HO-1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)通路在氢气(H2)治疗脓毒症小鼠肺损伤中的关键作用.方法雄性野生型(WT)和Nrf 2基因敲除型(Nrf 2-KO)ICR小鼠各120只,分别按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、H2对照组(Sham+H2组)、盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型组(CLP组)及H2干预组(CLP+H2组),每组30只.采用CLP制备脓毒症模型,Sham组和Sham+H2组除盲肠结扎和穿孔外,均采用相同的手术方式.Sham+H2组及CLP+H2组小鼠分别于术后1 h、6 h吸入2% H2各1 h,Sham组和CLP组仅吸入空气.制模后每组各取20只小鼠观察7 d存活情况;其他小鼠于制模后24 h处死取肺组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)含量,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测HO-1、HMGB1表达,采用免疫荧光法检测HO-1阳性表达.结果与Sham组相比,WT及Nrf 2-KO小鼠CLP组7 d存活率均明显降低〔WT小鼠:0%(0/20)比100%(20/20),Nrf 2-KO小鼠:0%(0/20)比100%(0/20),均P<0.05〕;WT小鼠中CLP+H2组7 d存活率较CLP组明显升高〔40%(8/20)比0%(0/20),P<0.05〕,而Nrf 2-KO小鼠中CLP+H2组与CLP组7 d存活率相比差异无统计学意义〔0%(0/20)比0%(0/20),P>0.05〕.在WT小鼠中,与Sham组相比,CLP组肺组织SOD和CAT活性均明显降低〔SOD(kU/g):131.30±28.21比251.00±22.84,CAT(kU/g):13.43±1.52比20.76±1.63,均P<0.01〕,MDA含量及HO-1、HMGB1表达均明显升高〔MDA(μmol/g):6.26±1.18比 4.16±0.58,HO-1/β-actin :0.160±0.045 比 0.023±0.005,HMGB1/β-actin :0.656±0.055 比 0.005±0.001,均P<0.05〕;与CLP组相比,CLP+H2组肺组织SOD、CAT活性及HO-1表达均明显升高〔SOD(kU/g):220.32±35.06 比 131.30±28.21,CAT(kU/g):18.95±2.49 比 13.43±1.52,HO-1/β-actin :0.376±0.025 比0.160±0.045,均P<0.01〕,MDA含量及HMGB1表达均明显降低〔MDA(μmol/g):4.26±0.75比6.26±1.18, HMGB1/β-actin :0.343±0.040比0.656±0.055,均P<0.05〕.在Nrf 2-KO小鼠中,与Sham组比较,CLP组CAT活性明显降低(kU/g :12.28±1.49比19.11±1.53,P<0.01),MDA含量及HO-1、HMGB1表达均明显升高〔MDA(μmol/g):6.85±0.54 比 4.59±0.50,HO-1/β-actin :0.063±0.005 比 0.021±0.003,HMGB1/β-actin :0.713±0.035比0.005±0.001,均P<0.01〕,而SOD活性差异无统计学意义(kU/g:114.19±9.94比135.75±28.10, P>0.05);CLP+H2与CLP组上述指标相比差异均无统计学意义.结论 H2通过Nrf 2/HO-1/HMGB1途径抑制脓毒症小鼠肺损伤;Nrf 2在H2治疗脓毒症肺损伤的过程中起主要作用. 展开更多

关键词 肺损伤 脓毒症 氢气 核因子e2相关因子2基因敲除

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