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影响根癌农杆菌EHA105感受态细胞转化效率因素的研究 被引量：2
1
作者 高世武 郭晋隆 +3 位作者 阙友雄 许莉萍 杨颖颖 陈如凯 《热带生物学报》 2012年第1期22-27,31,共7页
通过对EHA105菌株48 h不间断培养观察,绘制出其生长曲线图;同时用不同浓度的CaCl2溶液分别制备根癌农杆菌EHA105的感受态细胞,在转化过程中用不同的温度进行热激处理,统计分析阳性转化子个数,明确了采用冻融法将外源DNA导入农杆菌EHA10... 通过对EHA105菌株48 h不间断培养观察,绘制出其生长曲线图;同时用不同浓度的CaCl2溶液分别制备根癌农杆菌EHA105的感受态细胞,在转化过程中用不同的温度进行热激处理,统计分析阳性转化子个数,明确了采用冻融法将外源DNA导入农杆菌EHA105时的几个影响因素的参数。结果表明,当OD600值在1.0～1.5之间时,根癌农杆菌EHA105正处在对数生长期,活力最强;制备感受态细胞时,CaCl2溶液的浓度在6～10 mmol.L-1之间,无显著差异,但以10 mmol.L-1效果最佳,转化率达5.322×106.μg-1,热激处理温度在20～37℃之间均无显著差异,但37℃处理时转化率最高,达5.550×106.μg-1。 展开更多
关键词 根癌农杆菌eha105 生长曲线 冻融法 转化率
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根癌农杆菌介导的g10h基因遗传转化长春花初步研究 被引量：7
2
作者 袁芳 王荃 +3 位作者 潘琪芳 田跃胜 赵静雅 唐克轩 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2009年第6期606-610,共5页
以长春花下胚轴为基因转化的受体材料,利用根癌农杆菌EHA105介导,将g10h基因转化到3种不同品系的长春花中。结果表明,附加100μmol·L^(-1)乙酰丁香酮的根癌农杆菌悬液在OD_(600)=0.5～0.6时侵染效果较好;PCR分子检测转基因植株部... 以长春花下胚轴为基因转化的受体材料,利用根癌农杆菌EHA105介导,将g10h基因转化到3种不同品系的长春花中。结果表明,附加100μmol·L^(-1)乙酰丁香酮的根癌农杆菌悬液在OD_(600)=0.5～0.6时侵染效果较好;PCR分子检测转基因植株部分呈现阳性,证明g10h基因已整合到长春花基因组中,3种不同品系的长春花的再生率和阳性率存在差异;采用Real timePCR技术进一步检测g10h基因表达情况,结果表明转基因长春花植株中g10h mRNA表达量比非转基因对照高1.62～3.79倍。 展开更多
关键词 长春花 根癌农杆菌eha105 g10h基因 遗传转化
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将TERF1基因导入糖橙的研究 被引量：1
3
作者 罗赛男 钟晓红 +1 位作者 邓子牛 黄容峰 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期623-627,共5页
用携带TERF1基因的EHA105和LB4404 2种农杆菌分别转化糖橙实生苗节间茎段。根据已建立的再生体系和转化体系,对已得到的抗性芽经PCR和RT-PCR检测,验证已获得7个转TERF1基因的糖橙株系。此外,还比较了2种农杆菌菌株对糖橙的浸染能力,结... 用携带TERF1基因的EHA105和LB4404 2种农杆菌分别转化糖橙实生苗节间茎段。根据已建立的再生体系和转化体系,对已得到的抗性芽经PCR和RT-PCR检测,验证已获得7个转TERF1基因的糖橙株系。此外,还比较了2种农杆菌菌株对糖橙的浸染能力,结果表明,EHA105农杆菌的浸染能力强于LB4404。 展开更多
关键词 糖橙 TERF1基因 eha105农杆菌 LBA4404农杆菌
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利用农杆菌介导法获得转基因香蕉植株 被引量：3
4
作者 陆英 李华平 郑服丛 《热带农业科学》 2007年第2期10-13,共4页
用含质粒pBI426的根癌农杆菌EHA105转化香蕉品种威廉斯的横切薄片,在含100mg/L卡那霉素和600mg/L羧苄青霉素的MS分化培养基上诱导分化芽,获得17株转化苗。抽提植株DNA,以未转化植株为阴性对照,进行聚合酶链式反应,结果发现7株苗含有GUS... 用含质粒pBI426的根癌农杆菌EHA105转化香蕉品种威廉斯的横切薄片,在含100mg/L卡那霉素和600mg/L羧苄青霉素的MS分化培养基上诱导分化芽,获得17株转化苗。抽提植株DNA,以未转化植株为阴性对照,进行聚合酶链式反应,结果发现7株苗含有GUS基因。这初步证明了GUS基因已经转入香蕉薄片中。 展开更多
关键词 质粒pBI426 根癌农杆菌eha105 香蕉转化
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Cry2A基因植物表达载体构建及其转化子生长曲线的建立
5
作者 高世武 郭晋隆 +2 位作者 许莉萍 杨颖颖 陈如凯 《亚热带农业研究》 2010年第4期284-288,共5页
根据定向克隆原则,以pCAMBIA2301为载体骨架,Cry2A基因为目的基因,构建了大小为15354 bp的植物表达载体p2AST2301。新载体带有抗虫基因Cry2A和筛选标记基因NPTⅡ,适合通过农杆菌进行遗传转化,并以抗生素G418为筛选底物。同时将新载体转... 根据定向克隆原则,以pCAMBIA2301为载体骨架,Cry2A基因为目的基因,构建了大小为15354 bp的植物表达载体p2AST2301。新载体带有抗虫基因Cry2A和筛选标记基因NPTⅡ,适合通过农杆菌进行遗传转化,并以抗生素G418为筛选底物。同时将新载体转化根癌农杆菌EHA105,获得了用于植物遗传转化的工程菌,并且明确了工程菌D600 nm值在1.0-1.6之间活力最强。 展开更多
关键词 Cry2A基因 表达载体 根癌农杆菌 eha105
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毛尖紫萼藓GpPOD基因克隆及其表达载体的构建
6
作者 宋璐 沙伟 +2 位作者 张梅娟 刘博 安洪雪 《齐齐哈尔大学学报（自然科学版）》 2013年第4期5-9,共5页
本实验室已成功构建毛尖紫萼藓干旱胁迫cDNA文库。从中选取与抗旱相关的过氧化物酶基因,命名为GpPOD。通过RACE技术克隆获得序列全长。采用RT-PCR方法克隆GpPOD基因,连接到pMD-18T simple载体上,构建克隆载体pMD18T-GpPOD,将其插入表达... 本实验室已成功构建毛尖紫萼藓干旱胁迫cDNA文库。从中选取与抗旱相关的过氧化物酶基因,命名为GpPOD。通过RACE技术克隆获得序列全长。采用RT-PCR方法克隆GpPOD基因,连接到pMD-18T simple载体上,构建克隆载体pMD18T-GpPOD,将其插入表达载体PRI101-AN中,构建表达载体PRI101-GpPOD,然后将重组质粒导入根癌农杆菌EHA105中。重组质粒pMD18T-POD、PRI101-POD的DNA测序结果与原序列相似性高达99%,证明GpPOD基因成功连接到pMD-18T simple载体上,并已克隆到表达载体PRI101-AN中;农杆菌转化后的PCR电泳图谱在约581 bp左右得到清晰条带,证明重组质粒PRI101-GpPOD已成功转入农杆菌中。本实验为后续研究GpPOD基因的遗传转化奠定了良好基础。 展开更多
关键词 毛尖紫萼藓 GpPOD 克隆载体 表达载体 根癌农杆菌eha105
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农杆菌介导萱草植株CHS基因的转化 被引量：5
7
作者 郑楠 王霞霞 曹冬梅 《中国园艺文摘》 2015年第2期5-11,共7页
以萱草‘香宝’愈伤组织为外植体,以10 d为继代周期,将携有PSN1301-CHS的农杆菌EHA105菌株侵染受体材料,使CHS基因导入到萱草‘香宝’中。建立萱草遗传转化的适宜条件:抑菌剂以浓度为350 mg/L的羧苄青霉素为宜;潮霉素为转化子的筛选剂,2... 以萱草‘香宝’愈伤组织为外植体,以10 d为继代周期,将携有PSN1301-CHS的农杆菌EHA105菌株侵染受体材料,使CHS基因导入到萱草‘香宝’中。建立萱草遗传转化的适宜条件:抑菌剂以浓度为350 mg/L的羧苄青霉素为宜;潮霉素为转化子的筛选剂,25 mg/L为适宜的作用浓度;转化中宜选择预培养时间为2 d;农杆菌菌液浓度OD600在0.6左右,选用重悬液为MS+3%糖;侵染时间为15 min;在菌液和共培养基中同加100μmol/L的乙酰丁香酮;共培养基时间为2 d。 展开更多
关键词 大花萱草 '香宝’ 正交设计 农杆菌eha105 遗传转化
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山丹miR396a和miR396f表达载体构建及农杆菌的转化
8
作者 刘红 王文和 +2 位作者 张克 冷平生 何祥凤 《植物学研究》 2017年第6期422-428,共7页
为进一步探索miR396a和miR396f在百合中的基因功能和培育具有抗病性的百合,本试验首先从具有抗性的山丹中提取了它的的总DNA,利用PCR技术扩增到了山丹miR396a和miR396f前体片段,然后将获得的miR396a和miR396f前体片段通过BamHI酶和KpnI... 为进一步探索miR396a和miR396f在百合中的基因功能和培育具有抗病性的百合,本试验首先从具有抗性的山丹中提取了它的的总DNA,利用PCR技术扩增到了山丹miR396a和miR396f前体片段,然后将获得的miR396a和miR396f前体片段通过BamHI酶和KpnI酶双酶切后,分别构建到含有Ubiquitin (Ubi)启动子的UBI-pCANBIA1301表达载体中,最后将构建好的载体转化到易侵染百合的农杆菌EHA105菌株中,以期为miR396基因家族在百合中的功能验证和抗病百合的培育奠定基础。 展开更多
关键词 山丹 miR396 载体构建 农杆菌eha105
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