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LRIG3基因沉默对神经胶质瘤细胞系GL15增殖及PCNA和Ki-67表达的影响 被引量:5
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作者 蔡明俊 谢蕊繁 +5 位作者 韩林 陈如东 王宝峰 叶飞 郭东生 雷霆 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-5,共5页
背景与目的:富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(leucine-rich repeats and immunoglobin-like domains3,LRIG3)是LRIG基因家族成员之一,在多种肿瘤中均有表达下调,但其作用尚不明了。本研究旨在探讨RNA干扰沉默LRIG3基因表达对神经... 背景与目的:富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(leucine-rich repeats and immunoglobin-like domains3,LRIG3)是LRIG基因家族成员之一,在多种肿瘤中均有表达下调,但其作用尚不明了。本研究旨在探讨RNA干扰沉默LRIG3基因表达对神经胶质瘤细胞系GL15增殖及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制。方法:用携带U6启动子和LRIG3特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的质粒载体pGenesil2-LRIG3-shRNA1、pGenesil2-LRIG3-shRNA2及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-negative shRNA(neg)转染胶质瘤细胞系GL15,G418筛选出稳定株,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测LRIG3表达的改变,应用噻唑蓝(MTT)法检测稳定转染后对GL15细胞增殖的影响,应用免疫组化SABC法检测对照组和实验组GL15细胞中PCNA和Ki-67的表达。结果:shRNA1及shRNA2组细胞LRIG3 mRNA水平与对照组相比分别下降了52.4%和63.8%,LRIG3蛋白水平分别下降了50.9%和67.4%。MTT结果显示实验组细胞增殖率高于对照组。对照组细胞PCNA阳性率为(35.40±5.69)%,shRNA1及shRNA2组细胞PCNA阳性率分别为(72.13±5.64)%和(81.93±5.23)%,差异均有统计学意义(P<0.01)。Ki-67阳性率在对照组细胞为(49.73±5.73)%,shRNA1及shRNA2组细胞分别为(82.27±5.50)%和(88.67±3.52)%,差异均有统计学意义(P<0.01)。Ki-67表达与PCNA表达呈正相关(r=0.932,P<0.001)。结论:下调LRIG3基因表达可促进胶质瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 gl15细胞 LRIG3 增殖细胞核抗原 KI-67核抗原
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EGF和AG1478对GL15细胞增殖、侵袭和GFAP表达的影响 被引量:6
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作者 席桂发 王宝峰 +3 位作者 王和平 叶飞 郭东生 雷霆 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2007年第4期302-306,共5页
目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路对人胶质母细胞瘤GL15细胞系细胞生物学特性影响的分子机制。方法Gimsa染色分析GL15细胞核型,甲基四唑兰(MTT)和Transwell分别检测表皮生长因子(EGF),AG1478对GL15细胞增殖和侵袭力的影响,逆转录... 目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路对人胶质母细胞瘤GL15细胞系细胞生物学特性影响的分子机制。方法Gimsa染色分析GL15细胞核型,甲基四唑兰(MTT)和Transwell分别检测表皮生长因子(EGF),AG1478对GL15细胞增殖和侵袭力的影响,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测EGF和AG1478作用后GL15细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA和蛋白表达。结果Gimsa染色表明EGFR所在的7号染色体过度扩增。外源性的EGF双向调节GL15细胞增生和生长,小剂量(50ng/ml,100ng/ml)EGF能促进细胞增生和提高细胞侵袭能力以及GFAPmRNA和蛋白表达,而大剂量(200ng/ml)则能降低其增殖和侵袭能力,AG1478则能明显拮抗EGF活性。结论GL15胶质母细胞瘤细胞系的生物学活性与EGFR所在的7号染色体过度扩增密切相关。EGF可双向调节GL15细胞系的生长,AG1478能不完全抑制EGFR的活性。EGFR是基因治疗胶质母细胞瘤的理想靶点。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 gl15细胞 胶质母细胞瘤 胶质纤维酸性蛋白
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内皮抑素质粒联合阿霉素对人脑胶质肉瘤GL15细胞株增殖和凋亡的影响 被引量:3
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作者 杨珉 牛洪泉 +1 位作者 郭东升 雷霆 《临床外科杂志》 2008年第6期411-413,共3页
目的探讨内皮抑素(ES)以及ES和阿霉素联合应用对人脑胶质肉瘤细胞株GL15增殖和凋亡的影响。方法通过质粒转染的方法,运用MTT法和流式细胞仪检测了ES以及ES和阿霉素联合应用对GL15细胞株增殖和凋亡的影响。结果MTT法检测表明阿霉素对转染... 目的探讨内皮抑素(ES)以及ES和阿霉素联合应用对人脑胶质肉瘤细胞株GL15增殖和凋亡的影响。方法通过质粒转染的方法,运用MTT法和流式细胞仪检测了ES以及ES和阿霉素联合应用对GL15细胞株增殖和凋亡的影响。结果MTT法检测表明阿霉素对转染pcDNA3.1 ES的GL15细胞的生长抑制作用明显增强,细胞增殖明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测表明,转染pcDNA3.1 ES后,G0/G1期细胞明显增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01);联合阿霉素治疗后,上述差异更加显著(P<0.01)。结论ES联合ADM可明显抑制人脑胶质肉瘤GL15细胞株的生长,二者联用可以产生协同抗瘤作用。 展开更多
关键词 内皮抑素 增殖 凋亡 gl15细胞株
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内皮抑素对人脑胶质瘤GL15细胞株β-catenin和Cyclin D1表达的影响 被引量:1
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作者 杨珉 牛洪泉 +1 位作者 郭东升 雷霆 《临床外科杂志》 2008年第12期823-825,共3页
目的探讨内皮抑素对人脑胶质肉瘤细胞株GL15中β-catenin和Cyclin D1表达的影响。方法通过质粒转染的方法向GL15细胞中转染pcDNA3.1ES质粒,通过SABC免疫组织化学方法检测转染组与非转染组细胞中β-catenin和Cyclin D1表达。结果空白对... 目的探讨内皮抑素对人脑胶质肉瘤细胞株GL15中β-catenin和Cyclin D1表达的影响。方法通过质粒转染的方法向GL15细胞中转染pcDNA3.1ES质粒,通过SABC免疫组织化学方法检测转染组与非转染组细胞中β-catenin和Cyclin D1表达。结果空白对照组细胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分别为(0.3758±0.0371)和(0.4092±0.0417),而内皮抑素质粒转染组细胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分别为(0.2462±0.0275)和(0.2046±0.0357);空白对照组中β-catenin和Cyclin D1的平均光密度值均高于内皮抑素转染组,统计学分析表明在不同组别之间,β-catenin的平均光密度值有显著性差异,其中Cy-clin D1的平均光密度值有极显著性差异。结论内皮抑素在GL15细胞株中可以抑制β-catenin蛋白的过度表达和异位表达,并通过直接和间接的途径,抑制Cyclin D1蛋白的过度表达,从而发挥抑制肿瘤发展的作用。 展开更多
关键词 内皮抑素 质粒 gl15细胞株 Β-CATENIN CYCLIN D1
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IS201对GL15胶质瘤细胞FAK、ERK1/2蛋白表达及磷酸化的影响 被引量:1
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作者 刘彦廷 艾文兵 +1 位作者 肖宁 冯定坤 《中国神经肿瘤杂志》 2010年第3期193-197,共5页
背景与目的:之前已有研究证明,整合素参与调节细胞多种生物学效应;黏着斑激酶(FAK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达及磷酸化的水平与胶质瘤细胞恶性程度及其诊断、预后密切相关。本研究通过检测整合素αvβ3拮抗剂IS201对人GL15... 背景与目的:之前已有研究证明,整合素参与调节细胞多种生物学效应;黏着斑激酶(FAK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达及磷酸化的水平与胶质瘤细胞恶性程度及其诊断、预后密切相关。本研究通过检测整合素αvβ3拮抗剂IS201对人GL15胶质瘤细胞FAK、ERK1/2蛋白表达及其磷酸化的影响,探讨其意义。方法:用不同浓度的整合素αvβ3拮抗剂IS201处理GL15细胞,用Western印迹法检测细胞的FAK、ERK1/2表达量以及FAK、ERK1/2的磷酸化程度。结果:各实验组不同浓度的IS201均能明显降低FAK、ERK1/2的表达,对FAK、ERK1/2的磷酸化有明显的抑制作用。各实验组差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:IS201对人GL15胶质瘤细胞FAK、ERK1/2蛋白表达量及其磷酸化均起负性调节作用,对胶质瘤的细胞增殖和侵袭性生长等恶性生物学行为起抑制作用。 展开更多
关键词 整合素ΑVΒ3 拮抗剂 gl15胶质瘤细胞 黏着斑激酶 细胞外调节蛋白激酶
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胶质母细胞瘤细胞系GL15生物学特性的实验研究
6
作者 席桂发 王宝峰 +3 位作者 雷霆 郭东生 陈高 张建民 《华中医学杂志》 CAS 2008年第2期77-80,共4页
目的明确GL15细胞系的生物学特征并探讨表皮生长因子(EGF)对GL15细胞系生物学特征的影响。方法观察GL15细胞的形态和生长增殖特性,Giemsa染色分析核型,免疫细胞化学行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)染色,流式细胞仪分析... 目的明确GL15细胞系的生物学特征并探讨表皮生长因子(EGF)对GL15细胞系生物学特征的影响。方法观察GL15细胞的形态和生长增殖特性,Giemsa染色分析核型,免疫细胞化学行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)染色,流式细胞仪分析细胞周期,Transwell、MTT法检测EGF对GL15细胞生物学特征的影响,与U251MG和U373MG细胞系进行比较。结果GL15细胞为典型的胶质母细胞瘤形态,核型分析显示多条染色体均有扩增,其中EGF受体所在的7号染色体数目增加较为明显(4条7号染色体)。GFAP和PCNA分别在胞浆和胞核呈阳性表达。EGF可双向调节细胞增殖活性、侵袭性及GFAP蛋白表达。结论GL15细胞系保持了胶质母细胞瘤的生物学特征,是研究胶质母细胞瘤理想的细胞平台。该细胞系的生物学特性与EGF受体有紧密关系。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 gl15细胞系 核型 生物学特征
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Effect and Mechanism of Epidermal Growth Factor on Proliferation of GL15 Gliomas Cell Line 被引量:1
7
作者 王和平 郭东生 +4 位作者 叶飞 席桂发 王宝峰 陈坚 雷霆 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2006年第5期604-606,共3页
The effects of epidermal growth factor (EGF) on proliferation of G15 glioma cells and the possible mechanisms were investigated. GFAP and EGFR expression was detected by immunohistochemical method. After the cells w... The effects of epidermal growth factor (EGF) on proliferation of G15 glioma cells and the possible mechanisms were investigated. GFAP and EGFR expression was detected by immunohistochemical method. After the cells were treated with EGF at different concentrations, cell count method was used to determine the proliferation of glioma cells, cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry (FCM), and laser scan confocal microscope (LSCM) was used to measure the cytoplasmic free calcium. The results showed that GFAP was diffusedly expressed in GLI5 cells and EGFR was over-expressed. EGF at doses of ≤ 1 ng/mL could significantly stimulate cell proliferation, cells in phase G0/G1 decreased, and those in phase S increased. EGF at doses of 10 and 100ng/ml could inhibit the cell proliferation significantly, and the apoptosis ratio in high dose of EGF group was higher than in control group. EGF could significantly induce a quick rise of intracellular free calcium, but the peak value of intracellular free calcium activated by high dose of EGF was higher than by low dose of EGF. It was suggested that EGF had a dual effect on gliomas: low dose of EGF could stimulate the cell proliferation of gliomas, but high dose of EGF could induce the cell apoptosis and inhibit the proliferation of gliomas, which might be contributed to the difference of intracellular free calcium. 展开更多
关键词 epidermal growth factor gl15 cell line PROLIFERATION intracellular free calcium APOPTOSIS
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高温时效对G115钢蠕变-疲劳裂纹扩展行为的影响
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作者 赵欣 陈正宗 唐正焮 《金属热处理》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期26-31,共6页
在保载时间600 s,初始应力强度因子范围为23 MPa·m^(0.5)条件下,研究了G115钢在650℃时效1000、2000和3000 h后的蠕变-疲劳裂纹扩展行为。结果表明,随着时效时间的增加,时效后G115钢蠕变-疲劳裂纹扩展速率da/dN显著增加,导致裂纹... 在保载时间600 s,初始应力强度因子范围为23 MPa·m^(0.5)条件下,研究了G115钢在650℃时效1000、2000和3000 h后的蠕变-疲劳裂纹扩展行为。结果表明,随着时效时间的增加,时效后G115钢蠕变-疲劳裂纹扩展速率da/dN显著增加,导致裂纹扩展寿命降低。然而,时效时间的变化对裂纹扩展机制无显著影响,均为伴随大量蠕变损伤的穿晶主导混合断裂模式。沿边界Laves相的快速形核和长大、固溶作用的降低是导致时效后G115钢蠕变-疲劳裂纹扩展寿命降低的主要原因。 展开更多
关键词 G115钢 高温时效 蠕变-疲劳 裂纹扩展
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正火温度对G115钢组织及650℃强度的影响 被引量:8
9
作者 李海昭 梁军 +1 位作者 周超 徐连勇 《金属热处理》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期173-177,共5页
在1030-1120℃温度区间,对G115钢进行不同温度的正火处理随后进行780℃×3 h回火,并对其进行显微组织和650℃拉伸性能研究。拉伸结果表明:随正火温度的升高,650℃强度呈现“M”形变化特征。组织观察发现,1030℃时,晶粒重结晶未完... 在1030-1120℃温度区间,对G115钢进行不同温度的正火处理随后进行780℃×3 h回火,并对其进行显微组织和650℃拉伸性能研究。拉伸结果表明:随正火温度的升高,650℃强度呈现“M”形变化特征。组织观察发现,1030℃时,晶粒重结晶未完全完成;随正火温度由1065℃升至1095℃,G115钢原奥氏体平均晶粒尺寸由38.40μm,减小至34.45μm左右,在1075℃至1095℃出现“平台”;当温度升至1120℃时,原奥氏体平均晶粒尺寸为67.64μm,长大明显。对不同正火温度试样扫描电镜(SEM)的背散射电子(BSE)观察,均发现较多的富W和Fe元素的Laves相。Laves相的尺寸和尺寸超过1000 nm Laves相所占的比例呈现“W”形变化特征。650℃强度随正火温度的变化规律主要与大尺寸的Laves相相关。 展开更多
关键词 正火处理 G115钢 LAVES相 原奥氏体晶粒尺寸 高温强度
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