目的:构建HP-PRRSV Hu N4株ORF7原核表达载体,诱导表达重组N蛋白。方法:本实验选取HP-PRRSV经典株Hu N4株,根据ORF7序列(EF635006)及原核表达载体PGEX-6p-1中的多克隆位点设计引物,进行ORF7基因的克隆和原核表达载体的构建;将重组载体...目的:构建HP-PRRSV Hu N4株ORF7原核表达载体,诱导表达重组N蛋白。方法:本实验选取HP-PRRSV经典株Hu N4株,根据ORF7序列(EF635006)及原核表达载体PGEX-6p-1中的多克隆位点设计引物,进行ORF7基因的克隆和原核表达载体的构建;将重组载体在原核表达体系中进行表达,通过SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达情况。结果:以HP-PRRSV Hu N4株c DNA为模板,PCR扩增出约为372 bp片段,经插入原核表达载体PGEX-6p-1,构建原核表达质粒PGEX-ORF7,鉴定后经1mmol/L IPTG在37℃下诱导,3 h后蛋白表达量最大;通过SDS-PAGE鉴定蛋白表达成功。结论:成功构建了HP-PRRS Hu N4株ORF7基因原核表达载体,以及进一步表达重组融合N蛋白;为进一步研究病毒的结构及功能奠定基础。展开更多
文摘为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(high pathogenic-porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)感染猪后其血清病毒载量和体重增长的变化规律,以大白猪和通城猪的高代横交群体中72头健康仔猪为研究对象进行HP-PRRSV人工感染,观察临床症状,并在感染前和感染后第4、7、11、14、21、28、35天进行空腹采血、体重称量、血清分离以及病毒载量检测。结果显示:在感染第0~4天体重增长速度缓慢,第4~21天体重一直呈负增长、第7~11天体重减少量达最大值、第21~35天体重呈正增长;病毒载量在感染第4天达到峰值并持续到第7天,第7~35天病毒载量逐渐下降至6.62 lg copies/mL;感染第7天出现死亡,死亡个体主要集中在7~14 d,在第10天出现死亡高峰,第19天后基本稳定;依据第14天存活与否,将试验猪分为抗病和易感2个组,抗病组的病毒载量在第4、7、11天均显著低于易感组(P<0.05),该组的体重增长量在第4~7、7~11、11~14天均显著高于易感组(P<0.05)。上述结果表明,在感染过程中体重增长和病毒载量2个性状可作为预测PRRS抗病性的指示性状。
文摘目的:构建HP-PRRSV Hu N4株ORF7原核表达载体,诱导表达重组N蛋白。方法:本实验选取HP-PRRSV经典株Hu N4株,根据ORF7序列(EF635006)及原核表达载体PGEX-6p-1中的多克隆位点设计引物,进行ORF7基因的克隆和原核表达载体的构建;将重组载体在原核表达体系中进行表达,通过SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达情况。结果:以HP-PRRSV Hu N4株c DNA为模板,PCR扩增出约为372 bp片段,经插入原核表达载体PGEX-6p-1,构建原核表达质粒PGEX-ORF7,鉴定后经1mmol/L IPTG在37℃下诱导,3 h后蛋白表达量最大;通过SDS-PAGE鉴定蛋白表达成功。结论:成功构建了HP-PRRS Hu N4株ORF7基因原核表达载体,以及进一步表达重组融合N蛋白;为进一步研究病毒的结构及功能奠定基础。
