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问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及其应用 被引量:9
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作者 罗冬娇 严杰 +3 位作者 毛亚飞 李淑萍 罗依惠 李立伟 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第1期27-32,共6页
目的 :构建问号钩端螺旋体 (简称钩体 ) lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,了解钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因携带和表达情况及钩体患者的血清抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lip L32 / 1- li-p L4 1/ ... 目的 :构建问号钩端螺旋体 (简称钩体 ) lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,了解钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因携带和表达情况及钩体患者的血清抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lip L32 / 1- li-p L4 1/ 1融合基因 ,常规方法构建其原核表达系统。采用 SDS- PAGE检测目的重组蛋白 r L ip L32 / 1- r L ip L4 1/ 1表达情况。采用 Western blot鉴定 r Lip L32 / 1- r Lip L4 1/ 1的免疫原性。采用 PCR和 MAT分别检测 97株问号钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因及其表达情况。采用 EL ISA检测 2 2 8例钩体患者血清 lip L32和 lip L4 1基因产物的抗体。结果 :与报道的相关序列比较 ,lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 99.9%和99.8%。目的重组蛋白 r Lip L32 / 1- r Lip L4 1/ 1表达产量约为细菌总蛋白的 10 % ,主要以包涵体形式存在。r L ip L32 /1和 r Lip L4 1/ 1兔抗血清均能与 r L ip L32 / 1- r L ip L4 1/ 1结合。 97.9%和 87.6 %问号钩体野生株分别有 lip L32和 li-p L4 1基因。95 .9%和 84 .5 %问号钩体野生株分别与 r Lip L32 s和 r Lip L4 1s兔抗血清出现效价 ,为 1∶ 4~ 1∶ 12 8的MAT阳性结果。分别有 94 .7%~ 97.4 %和 78. 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号 lipl32基因 lipl41基因 序列同源性 核酸 序列同源性 氨基酸 基因表达 克隆 分子 lipl32/1-lipl41/1融合基因/免疫学
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问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定 被引量:3
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作者 姜久昆 林旭瑷 +1 位作者 严杰 薛峰 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2008年第6期585-591,621,共8页
目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增... 目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号/免疫学 细菌外膜蛋白质类/生物合成 细菌外膜蛋白质类/分离 外膜脂蛋白/属特异性抗原 lipl41/1/lipl41/2 抗原表位/预测 噬菌体展示 免疫学鉴定
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问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因的构建及其表达产物免疫性的鉴定(英文)
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作者 周金成 罗冬娇 严杰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期427-432,共6页
目的构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/2融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测... 目的构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/2融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rLipL32/1-LipL41/2表达情况。采用Western blot鉴定rLipL32/1-LipL41/2的免疫反应性。采用ELISA检测228例钩体病人血清中lipL32/1、lipL41/2基因和lipL32/1-lipL41/2融合基因表达产物的抗体。结果 lipL32/1-lipL41/2融合基因核苷酸和氨基酸序列与报道的相关序列相似性分别为99 .9 %和99 .8 %。rLi-pL32/1-LipL41/2表达量约为细菌总蛋白的10 %。rLipL32/1和rLipL41/2兔抗血清均能识别并与rLipL32/1-LipL41/2结合。97 .4 %、78 .5 %和99 .1 %病人血清rLipL32/1、rLipL41/2和rLipL32/1-LipL41/2抗体阳性。结论本研究成功地构建了问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统,rLipL32/1-LipL41/2不仅同时具有两个单一重组抗原的免疫反应性,且能提高钩体病人血清中抗体检测阳性率,可作为研制钩体属特异性基因工程疫苗或检测试剂盒的候选抗原。 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 lipl32基因 lipl41基因 融合基因 构建/表达 免疫性
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钩端螺旋体膜表面蛋白LipL41基因的克隆、序列分析及表达 被引量:1
4
作者 寇志华 孙树汉 +5 位作者 郭嬴军 陈祖欢 施柯 胡振林 张洪英 周凤娟 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期374-377,共4页
目的:进一步分析钩端螺旋体LipL-41的免疫原性。方法:通过PCR的方法,以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株(56609)的 DNA为模板,扩增目的基因 LipL41,克隆至 PcDNA3载体上,以自动测序仪测序后进行序列分析,然后克隆... 目的:进一步分析钩端螺旋体LipL-41的免疫原性。方法:通过PCR的方法,以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株(56609)的 DNA为模板,扩增目的基因 LipL41,克隆至 PcDNA3载体上,以自动测序仪测序后进行序列分析,然后克隆至原核表达载体pGEX-5T进行原核表达,Western印迹分析其免疫原性。珐票:获得长 1068 hp的片段,DNA序列分析表明该菌株的LipL41基因与文献报道具有很高的同源性(95.0%~99.4%),在大肠杆菌中获得了表达,并与抗钩端螺旋体血清反应。结论:该抗原为致病性钩端螺旋体所具有的保守性抗原成分,可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。 展开更多
关键词 免疫原性 钩端螺旋体 外膜蛋白 lipl41基因 原核表达 基因表达 基因克隆
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钩端螺旋体赖型017株外膜脂蛋白LipL41基因的克隆及原核表达 被引量:1
5
作者 李学敏 鲍朗 +3 位作者 胡昌华 谢勇恩 晏菊芳 张会东 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期341-343,448,共4页
目的 构建钩端螺旋体外膜脂蛋白 L ip L41基因的重组原核表达质粒 ,为进一步制备以 L ip L41为目的基因的亚单位疫苗提供实验依据。方法 根据钩端螺旋体 L.kirscneri RM5 2株外膜脂蛋白 L ip L41基因序列设计引物 ,以赖型钩端螺旋体 0... 目的 构建钩端螺旋体外膜脂蛋白 L ip L41基因的重组原核表达质粒 ,为进一步制备以 L ip L41为目的基因的亚单位疫苗提供实验依据。方法 根据钩端螺旋体 L.kirscneri RM5 2株外膜脂蛋白 L ip L41基因序列设计引物 ,以赖型钩端螺旋体 0 17株基因组 DNA为模板 ,进行 PCR扩增并 DNA测序 ,以质粒 p GEX1λT为载体 ,插入 L ip L41基因片段构建重组原核表达质粒 ,并检测 L ip L41的表达。结果 测序结果示所得片段为 L ip L41的编码序列 ,酶切及 PCR分析证实重组质粒构建成功 ,SDS- PAGE和 Western blotting分析重组质粒可高效表达蛋白质 L ip L41。结论  L ip L41基因的重组原核表达质粒构建成功 。 展开更多
关键词 钩端螺旋体赖型017株 lipl41基因 基因克隆 基因表达 膜脂蛋白
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赖型钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL41基因真核表达质粒的构建及表达 被引量:1
6
作者 朱海龙 鲍朗 +1 位作者 李学敏 张会东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期336-339,共4页
目的:构建赖型钩端螺旋体LipL41基因的真核重组表达质粒、并对其表达进行检测。方法:以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板PCR扩增目的基因,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1上。测序分析后酶切,并连接至真核表达质粒pcDNA3上,构建真核重... 目的:构建赖型钩端螺旋体LipL41基因的真核重组表达质粒、并对其表达进行检测。方法:以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板PCR扩增目的基因,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1上。测序分析后酶切,并连接至真核表达质粒pcDNA3上,构建真核重组表达质粒LipL41-pCDNA3。利用脂质体介导转染COS7细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR检测其表达。结果:PCR扩增出1 011 bp大小的目的片段,序列分析显示它与Leptospira kirschneri的LipL41基因成熟肽序列同源性高达98%。酶切鉴定证实真核重组表达质粒LipL41-pCD-NA3构建成功,RT-PCR检测显示,LipL41-pCDNA3转染组在大约1kb处出现特异的扩增带,而空质粒组无此条带。结论:LipL41的真核重组表达质粒构建成功,并可在哺乳动物细胞中表达。 展开更多
关键词 钩端螺旋体属 基因 lipl41 真核表达
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钩端螺旋体黄疸出血群赖株LipL41基因的克隆表达及鉴定
7
作者 阮萍 丁威 严杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期274-276,共3页
目的 对钩体黄疸出血群赖株LipL4 1基因进行克隆、表达及鉴定。方法 采用高保真PCR ,从我国钩体黄疸出血群赖株基因组中扩增全长LipL4 1基因片段 ,并构建原核表达系统。结果 所克隆的LipL4 1基因核苷酸和氨基酸序列与已发表LipL4 1... 目的 对钩体黄疸出血群赖株LipL4 1基因进行克隆、表达及鉴定。方法 采用高保真PCR ,从我国钩体黄疸出血群赖株基因组中扩增全长LipL4 1基因片段 ,并构建原核表达系统。结果 所克隆的LipL4 1基因核苷酸和氨基酸序列与已发表LipL4 1基因序列 (GenbankL4 6 794 )同源性分别为 96 2 5 %和 98 87% ;所表达的目的蛋白经Westernblot证实为具有良好免疫反应性的广谱抗原。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 黄疸出血群赖株 lipl41 基因 克隆 表达 免疫反应性
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问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因原核表达及其产物免疫原性分析 被引量:4
8
作者 罗冬娇 邱晓枫 +4 位作者 王江 严谨 王海斌 周金成 严杰 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2008年第6期599-604,共6页
目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,优化目的产物表达条件并对表达产物免疫原性进行鉴定。方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因,并用常规基因工程方法建立其原... 目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,优化目的产物表达条件并对表达产物免疫原性进行鉴定。方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因,并用常规基因工程方法建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图象分析系统,检测目的重组蛋白rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2表达量。采用免疫双扩散试验及WesternBlot,鉴定rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2的免疫原性。结果:获得了序列正确的lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统E.coliBL21DE-3pET42a-lipL32/1-lipL21-ompL1/2。表达条件优化后的rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2产量为37.78mg/L,是优化前的3.7倍。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清免疫双扩效价为1∶4。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2抗血清能识别rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2以及rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2能与问号钩体56601株全菌兔抗血清以及黄疸出血群、流感伤寒群、波摩那群、秋季群问号钩体感染患者血清出现阳性杂交信号。结论:成功地构建了lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,表达产物具有良好的抗原性和交叉免疫反应性,可作为研制通用型问号钩体基因工程疫苗及通用型钩体病血清学检测的抗原。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号 抗原 细菌/分析 聚合酶链反应/方法 属特异性抗原 lipl32 /lipl21基因/OmpL1/2 融合基因/构建 原核表达 免疫原性/鉴定
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BF_3·Et_2O/MCM-41固体酸催化剂及其催化性能的研究 被引量:1
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作者 周仁贤 莫流业 +2 位作者 赵少芬 王月娟 郑小明 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1576-1577,共2页
A solid acid catalyst has been prepared by grafting Boron trifluoride on mesoporous molecular sieve MCM 41 and characterized by XRD and FTIR techniques. The XRD and FTIR results indicated that the BF 3·Et 2O inte... A solid acid catalyst has been prepared by grafting Boron trifluoride on mesoporous molecular sieve MCM 41 and characterized by XRD and FTIR techniques. The XRD and FTIR results indicated that the BF 3·Et 2O interlocks with the silicon groups of MCM 41 surface to form strong solid acid. The solid acid catalyst would effectively promote the opening of epichlorohydrin with isobutanol to form 1 isobutoxy 3 chloropropanol, and showed a nice activity and selectivity. 展开更多
关键词 BF3·Et2O/MCM-41 环氧氯丙烷 异丁醇 缩合反应 1-异丁氧基-3-氯异丙醇 固体酸催化剂 催化性能
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HIV-1 SF_2株env基因(gp41)的克隆构建及其原核表达 被引量:1
10
作者 董梅 鲁晓青 +1 位作者 陈向伟 王斌 《山西医科大学学报》 CAS 2001年第6期481-483,共3页
目的 克隆并在大肠杆菌中表达HIVgp4 1。 方法 应用PCR技术 ,纯化HIV 1SF2 株外膜蛋白env基因 (gp4 1) ,并重组入原核高效表达载体 pBV2 2 0 ,在大肠杆菌HB10 1中进行表达。 结果 SDS PAGE电泳结果表明 ,在 4 4 0 0 0处有一条蛋白表... 目的 克隆并在大肠杆菌中表达HIVgp4 1。 方法 应用PCR技术 ,纯化HIV 1SF2 株外膜蛋白env基因 (gp4 1) ,并重组入原核高效表达载体 pBV2 2 0 ,在大肠杆菌HB10 1中进行表达。 结果 SDS PAGE电泳结果表明 ,在 4 4 0 0 0处有一条蛋白表达带。Westernblot证明 ,4 4 0 0 0蛋白带可与HIV 1阳性血清发生特异性反应。结论 该重组表达 gp4 1的融合蛋白 ,可为HIV 1gp4 1。 展开更多
关键词 HIV-1SF2 HIV包膜蛋白质gp41 PBV220 原核表达 基因 克隆 大肠杆菌
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转染E1B55K基因提高Hep2细胞包装肠腺病毒Ad41的能力
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作者 韩炳娟 郭丽 +4 位作者 屈建国 王敏 王健伟 鲁茁壮 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期258-264,共7页
人F组腺病毒Ad40、Ad41难以在体外培养的细胞中传代,被称为难养腺病毒(Fastidious adenovirus)。本研究观察了在Hep2细胞表达Ad41 E1B55K基因对Ad41复制的促进作用。从Ad41阳性粪便标本中用PCR的方法获得E1B55K基因,构建真核表达载体,转... 人F组腺病毒Ad40、Ad41难以在体外培养的细胞中传代,被称为难养腺病毒(Fastidious adenovirus)。本研究观察了在Hep2细胞表达Ad41 E1B55K基因对Ad41复制的促进作用。从Ad41阳性粪便标本中用PCR的方法获得E1B55K基因,构建真核表达载体,转染Hep2细胞,筛选单克隆,用RT-PCR检测了E1B55K基因的表达。用引起293细胞完全CPE比较产毒量的方法对所得细胞克隆进行初步筛选,获得一株产毒相对较强的细胞Hep2-E1B#4。与对照细胞Hep2、Hep2-DNA3相比,等量Ad41接种Hep2-E1B#4产生的细胞病变效应(CPE)程度明显加深。用免疫细胞化学的方法测定产毒的感染滴度,等量Ad41接种后,Hep2-E1B#4产生的子代腺病毒滴度大于对照的9倍;半定量PCR测得Hep2-E1B#4子代病毒基因组拷贝数约为对照细胞的4倍。结果说明转染E1B55K基因促进了Ad41在Hep2细胞的复制,获得的Hep2-E1B#4细胞株可用于Ad41的分离、培养和体外扩增。 展开更多
关键词 Ad41 E1B55Kgene HEP2 病毒复制
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PXJ-41/M2-1转染人肺腺癌PAa细胞及其稳定表达
12
作者 夏永宏 陈杭薇 《华北国防医药》 2003年第1期2-4,F003,共4页
目的 探讨外源性呼吸道合胞病毒 (RSV)M 2 1基因在人肺腺癌PAa细胞中获得稳定表达的可行性。 方法 将携有RSVM 2 1基因的真核表达载体PXJ 41/M 2 1,在脂质体介导下 ,导入人肺腺癌PAa细胞株。通过G418筛选获得阳性克隆 ,并继续培... 目的 探讨外源性呼吸道合胞病毒 (RSV)M 2 1基因在人肺腺癌PAa细胞中获得稳定表达的可行性。 方法 将携有RSVM 2 1基因的真核表达载体PXJ 41/M 2 1,在脂质体介导下 ,导入人肺腺癌PAa细胞株。通过G418筛选获得阳性克隆 ,并继续培养 ,用RT PCR及免疫组织化学方法检测M 2 1在人肺腺癌PAa细胞内的稳定表达情况。 结果 经RT PCR方法扩增到M 2 162 0bp特异性条带。免疫组织化学证实 ,转染PXJ 41/M 2 1后的PAa细胞内有M 2 1蛋白的表达。 结论 在脂质体介导下 ,M 2 1可导入PAa细胞内并获得稳定表达。 展开更多
关键词 PXJ-41/M21转染 肺腺癌 PAa细胞 稳定表达 基因表达 基因转染
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HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达及抗原性研究 被引量:2
13
作者 袁作为 帅光泽 +2 位作者 张君 胡接力 郑建 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期2281-2285,共5页
目的构建HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达载体,诱导表达HIV抗原,为HIV快速诊断和蛋白疫苗研究提供材料基础。方法用PCR方法对HIV-1包膜蛋白gp41和HIV-2包膜蛋白gp36基因序列进行全长、截短扩增,分别或以融合表达方式克隆入原核表达载体pQ... 目的构建HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达载体,诱导表达HIV抗原,为HIV快速诊断和蛋白疫苗研究提供材料基础。方法用PCR方法对HIV-1包膜蛋白gp41和HIV-2包膜蛋白gp36基因序列进行全长、截短扩增,分别或以融合表达方式克隆入原核表达载体pQE30、pET32a(+)及pGST-MOLUC,重组质粒经异丙基硫代半乳糖苷(isopro-pyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,并经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和纯化HIV跨膜糖蛋白抗原,对获得的纯化抗原进行Western blot检测,利用HIV抗原制备ELISA检测试剂盒,并分析HIV临床样本。结果成功构建了HIV包膜蛋白的原核表达载体,利用亲和层析纯化得到了纯度较高的HIV包膜蛋白;Western blot分析结果证实表达纯化的HIV跨膜蛋白gp41(aa.538~718)、gp36(aa.533~764)以及gp41-gp36均能和HIV阳性血清反应;ELISA试剂盒检测临床样本显示,特异性达95%以上,灵敏度达100%。结论获得了有生物学活性的HIV截短包膜蛋白,并可用于HIV快速检测试剂盒的研发。 展开更多
关键词 HIV-1包膜蛋白gp41 HIV-2包膜蛋白gp36 重组 抗原性
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铁氮共改性MCM-41活化过硫酸盐去除地下水中1,2-二氯乙烷
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作者 孟宪荣 闫兴雨 +2 位作者 魏晨军 施维林 许伟 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期265-274,共10页
采用一步水热法将氨基(—NH_(2))和铁(Fe)共同引入到介孔材料MCM-41中,合成改性介孔材料Fe-NH_(2)-MCM-41,构建Fe-NH_(2)-MCM-41/过二硫酸盐(persulfate,PDS)体系去除水中1,2-二氯乙烷(1,2-DCA).利用扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射(XRD... 采用一步水热法将氨基(—NH_(2))和铁(Fe)共同引入到介孔材料MCM-41中,合成改性介孔材料Fe-NH_(2)-MCM-41,构建Fe-NH_(2)-MCM-41/过二硫酸盐(persulfate,PDS)体系去除水中1,2-二氯乙烷(1,2-DCA).利用扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射(XRD)、BET比表面积测试法和傅里叶红外(FTIR)对材料进行表征,考察了PDS投加节点、pH、阴离子和腐殖酸对Fe-NH_(2)-MCM-41/PDS体系去除1,2-DCA的影响,并利用电子自旋共振(EPR)和自由基猝灭实验确定反应活性物种,揭示反应机理.结果显示:—NH_(2)和Fe的引入均使材料具有了PDS活化能力,而—NH_(2)和Fe同时引入则进一步强化了材料的活化性能,使1,2-DCA去除率提高了37.3%.Fe-NH_(2)-MCM-41/PDS体系对pH具有较宽的适用范围,在pH为3~9范围内对1,2-DCA去除率稳定在55%左右.该体系还具有良好的抗离子干扰能力,地下水常见阴离子在较低和较高浓度条件下均对Fe-NH_(2)-MCM-41/PDS体系去除1,2-DCA影响较小,Cl-具有轻微促进作用,NO_(3)-、SO_(4)^(2−)呈轻微抑制作用;腐殖酸(HA)浓度较高时才抑制1,2-DCA的降解,地下水中HA(浓度一般为0.1~10 mg·L^(-1))不足以对Fe-NH_(2)-MCM-41/PDS体系降解1,2-DCA起到明显的抑制作用.自由基及EPR测试证明Fe-NH_(2)-MCM-41/PDS体系降解1,2-DCA主要机制为自由基反应机制,主要活性物种为S0_(4)^(·-)、·OH和O_(2)^(·-). 展开更多
关键词 MCM-41 铁氮共改性 高级氧化技术 过硫酸盐 1 2-二氯乙烷
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Mo-MCM-41催化环戊烯烯丙型氧化的研究
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作者 曾蕾 胡俐萍 +1 位作者 彭兰 周崇文 《化学试剂》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期727-732,共6页
研究了负载钼MCM-41和MCM-48分子筛对环戊烯烯丙型氧化的催化性能。两种介孔材料中,2-环戊烯-1-酮均为主要产物,副产物是少量的环戊烯氧化物和1,2-环戊二醇。实验显示钼MCM-48由于含钼量较高,表现出比钼MCM-41更高的反应活性,使用极性溶... 研究了负载钼MCM-41和MCM-48分子筛对环戊烯烯丙型氧化的催化性能。两种介孔材料中,2-环戊烯-1-酮均为主要产物,副产物是少量的环戊烯氧化物和1,2-环戊二醇。实验显示钼MCM-48由于含钼量较高,表现出比钼MCM-41更高的反应活性,使用极性溶剂(如N,N-二甲基甲酰胺和甲醇)2-环戊烯-1-酮选择性降低,极性溶剂诱发双键氧化,生成较多的环戊烯氧化物。钼基固体催化剂,MCM-41和MCM-48再循环使用,对2-环戊烯-1-酮的选择性几乎没有改变。 展开更多
关键词 Mo-MCM-41 Mo-MCM-48 烯丙型氧化 环戊烯 2-环戊烯-1-酮
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1,2,3,9-四氢-9-甲基-4H-咔唑-4-酮合成新工艺的研究 被引量:2
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作者 胡仙超 吴伟军 +3 位作者 孙楠 莫卫民 陈国升 冯青 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第1期19-21,共3页
以N-甲基苯胺为原料,采用硝化生成N-亚硝基-N-甲基苯胺,再还原生成α-甲基-α-苯肼(PH),最后在HMCM-41分子筛的催化下与1,3-环己二酮(CH)环合,得到目标产物1,2,3,9-四氢-9-甲基-4H-咔唑-4-酮(CAR).重点对环合反应的反应温度、催化剂浓... 以N-甲基苯胺为原料,采用硝化生成N-亚硝基-N-甲基苯胺,再还原生成α-甲基-α-苯肼(PH),最后在HMCM-41分子筛的催化下与1,3-环己二酮(CH)环合,得到目标产物1,2,3,9-四氢-9-甲基-4H-咔唑-4-酮(CAR).重点对环合反应的反应温度、催化剂浓度、投料比和反应溶剂进行了考察,得到了环合反应温度为60℃,催化剂浓度(PH/catalyst)为0.3,投料比(CH/PH)为1.2,溶剂为甲醇的较优工艺条件,环合反应的收率为65.3%.反应后的产品用适量的丙酮-水重结晶得到无色针状的产物CAR,含量≥99.0%(HPLC). 展开更多
关键词 1 2 3 9-四氢-9-甲基-1H-咔唑-4-酮 环合 HMCM-41
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单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定 被引量:1
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作者 刘秀侠 杨雄 陈红英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期177-183,共7页
为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得... 为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测发现,2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD、29 kD。变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA检测表明,制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER抗原都有特异性结合活性。 展开更多
关键词 HIV-1 GP41 MPER 2F5 4E10 单链抗体
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应用斑点金免疫渗滤试验快速同步检测抗HIV-1,HIV-2IgG抗体 被引量:2
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作者 翟建新 王业富 +3 位作者 段炼炼 徐争辉 万志香 杨永 《中国病毒学》 CSCD 2006年第2期116-120,共5页
应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸。通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C)。这5种抗原蛋白首先... 应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸。通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C)。这5种抗原蛋白首先被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,其中的病毒抗体通过免疫反应与抗原结合,再加胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(SPA),待其渗过膜片后,洗涤,即可形成肉眼可见的红色斑点。用已确证的21份HIV阳性血清(其中包括1份HIV-1标准阳性血清和1份HIV-2标准阳性血清)和30份阴性血清进行了试验,结果表明该快速检测方法与ELISA方法无显著差异。该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5分钟。与传统的的ELISA法相比,具有方便快速,成本低廉,应用范围广等优点。同时,此HIV快速诊断试纸可以同步检测并区分针对HIV-1和HIV-2感染的不同检测标志物(抗P24、GP41、GP120和GP36抗体),这对提高快速检测的灵敏度和准确性,以及对判断HIV感染者是否临近或已进入AIDS期有着较高的应用价值。 展开更多
关键词 HIV-1/2 斑点金免疫渗滤试验(DIGFA) 融合蛋白 P24 GP41
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黄连温胆汤调控SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路干预2型糖尿病模型大鼠的作用机制 被引量:4
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作者 熊秋迎 邹海虹 +3 位作者 王雨豪 胡珊 肖星华 朱金华 《中药药理与临床》 CSCD 北大核心 2023年第12期2-7,共6页
目的:基于SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路研究黄连温胆汤对2型糖尿病模型大鼠的干预机制。方法:选择SPF级SD雄性大鼠80只,先随机分10只为正常对照组,其余大鼠以高糖高脂乳剂10 mL/kg灌胃,监测血糖1次/w, 8 w后,腹腔注射STZ 35 mg/kg诱导2... 目的:基于SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路研究黄连温胆汤对2型糖尿病模型大鼠的干预机制。方法:选择SPF级SD雄性大鼠80只,先随机分10只为正常对照组,其余大鼠以高糖高脂乳剂10 mL/kg灌胃,监测血糖1次/w, 8 w后,腹腔注射STZ 35 mg/kg诱导2型糖尿病模型,5 d后选取空腹血糖值大于11.10 mmol/L造模成功的大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍0.25 g/kg组和黄连温胆汤3、6、12 g/kg组。各组灌胃给予相应的药物或生理盐水,1次/d,连续给药4 w后,取材检测。生化试剂检测大鼠葡萄糖耐量(OGTT)、血脂全套指标;气相色谱法测定大鼠结肠内容物短链脂肪酸(SCFAs)含量;ELISA法检测大鼠结肠组织GLP1、PYY的含量;RT-qPCR法检测大鼠结肠组织G蛋白偶联受体41(Gpr41)、Gpr43、胰高血糖素样肽-1(Glp1)、肽YY(Pyy) mRNA的表达;Western blot法检测大鼠结肠组织GPR41、GLP1、PYY蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠OGTT试验中血糖含量明显升高,血脂中TC、TG、LDL-C、HbA1c含量显著升高,HDL-C含量显著下降(P<0.01);结肠内容物SCFAs中乙酸、丙酸、正丁酸的含量均显著下降(P<0.01);结肠组织GLP1、PYY含量显著降低,Gpr41、Gpr43、Glp1、Pyy mRNA和GPR41、GLP1、PYY蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,黄连温胆汤3、6、12 g/kg组和二甲双胍0.25 g/kg组大鼠OGTT血糖含量明显降低,血脂中TC、TG、LDL-C、HbA1c含量明显降低,HDL-C含量明显升高(P<0.05或P<0.01);结肠内容物乙酸、丙酸、正丁酸的含量明显升高(P<0.05或P<0.01);结肠组织GLP1、PYY含量明显升高,Gpr41、Gpr43、Glp1、Pyy mRNA和GPR41、GLP1、PYY蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:黄连温胆汤抗2型糖尿病作用机制可能与增加SCFAs,调控SCFAs-GPR41/43-GLP1信号通路,促进GLP1、PYY的分泌,降低体内血糖、血脂,改善机体胰岛素抵抗相关。 展开更多
关键词 黄连温胆汤 2型糖尿病 短链脂肪酸 G蛋白偶联受体41/43 胰高血糖素样肽-1 肽YY
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Evolutionary Implication of Outer Membrane Lipoprotein-Encoding Genes ompL1,lipL32 and lipL41 of Pathogenic Leptospira Species 被引量:1
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作者 K. Vedhagiri K. Natarajaseenivasan +4 位作者 P. Chellapandi S.G. Prabhakaran Joseph Selvin S. Sharma P. Vijayachari 《Genomics, Proteomics & Bioinformatics》 SCIE CAS CSCD 2009年第3期96-106,共11页
Leptospirosis is recognized as the most widespread zoonosis with a global distribution. In this study, the antigenic variation in Leptospira interrogans and Leptospira borgpetersenii isolated from human urine and fiel... Leptospirosis is recognized as the most widespread zoonosis with a global distribution. In this study, the antigenic variation in Leptospira interrogans and Leptospira borgpetersenii isolated from human urine and field rat kidney was preliminarily confirmed by microscopic agglutination test using monoclonal antibodies, and was further subjected to amplification and identification of outer membrane lipoproreins with structural gene variation. Sequence similarity analysis revealed that these protein sequences, namely OmpL1, LipL32 and LipL41, showed no more homologies to outer membrane lipoproteins of non-pathogenic Leptospira and other closely related Spirochetes, but showed a strong identity within L. interrogans, suggesting intra-specific phylogenetic lineages that might be originated from a common pathogenic leptospiral origin. Moreover, the ompL1 gene showed more antigenic variation than lipL32 and lipL41 due to less conservation in secondary structural evolution within closely related species. Phylogenetically, ompL1 and lipL4l of these strains gave a considerable proximity to L. weilii and L. santaro- sai. The ompI,1 gene of L. interrogans clustered distinctly from other pathogenic and non-pathogenic leptospiral species. The diversity of ompL genes has been an- alyzed and it envisaged that sequence-specific variations at antigenic determinant sites would result in slow evolutionary changes along with new serovar origination within closely related species. Thus, a crucial work on effective recombinant vaccine development and engineered antibodies will hopefully meet to solve the therapeutic challenges. 展开更多
关键词 Leptospiru OMPL1 lipl32 lipl41 PHYLOGENY antigenic variation
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