羊布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的基因克隆、原核表达及其对小胶质细胞凋亡的影响

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作者 刘爱翠 刘静怡 +1 位作者 马巧丽 王振海 《宁夏医科大学学报》 2017年第6期667-671,F0003,共6页

目的本研究旨在构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的原核重组质粒pET-30a-omp31,表达并纯化Omp31融合蛋白,初步探讨布鲁氏菌外膜蛋白Omp31对小胶质细胞凋亡的影响。方法对羊种布鲁氏菌Omp31基因进行PCR扩增,并将其定向克隆到原核表达载体pET-30... 目的本研究旨在构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的原核重组质粒pET-30a-omp31,表达并纯化Omp31融合蛋白,初步探讨布鲁氏菌外膜蛋白Omp31对小胶质细胞凋亡的影响。方法对羊种布鲁氏菌Omp31基因进行PCR扩增,并将其定向克隆到原核表达载体pET-30a上,构建原核表达重组质粒pET-30a-omp31,表达、纯化布鲁氏菌Omp31融合蛋白,并用Omp31融合蛋白刺激小鼠小胶质细胞株BV2,利用流式细胞术分析其对小胶质细胞凋亡的影响。结果经过双酶切及测序验证证明成功构建了Omp31基因的原核表达载体pET-30a-omp31,将其进行蛋白的诱导表达、纯化,得到了较纯的Omp31融合蛋白,其融合蛋白的分子量为31kDa左右。将Omp31蛋白刺激小鼠小胶质细胞,发现不同浓度Omp31蛋白刺激组的细胞凋亡率均低于空白对照组(P<0.05)。结论通过基因克隆技术成功构建了Omp31基因的原核表达载体pET-30a-omp31,并对其进行蛋白诱导表达、纯化、复性后得到了Omp31融合蛋白,Omp31融合蛋白能够抑制小胶质细胞的凋亡。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 omp31基因 原核表达载体 omp31融合蛋白 细胞凋亡

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重组布氏杆菌BP26蛋白和OMP31蛋白作为间接ELISA诊断抗原的研究 被引量：13

2

作者 陈伟业 王淑杰 +6 位作者 王永 胡森 王清华 辛九庆 佟有恩 黄克和 步志高 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期518-521,582,共5页

目的传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂,存在较严重的交叉免疫反应性,导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白,在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原,且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种... 目的传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂,存在较严重的交叉免疫反应性,导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白,在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原,且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种属特异性。方法以大肠杆菌表达、纯化的BP26和OMP31重组蛋白为包被抗原,初步建立了检测血清特异抗体的间接ELISA方法,并以现地牛布氏杆菌普查检测血清100份为样本,与传统的试管凝集试验进行了比较研究。结果试管凝集试验血清样本阳性率为15%(15/100);BP26包被抗原ELISA检测判为阳性的12个样本中有11为试管凝集反应阳性,相对阳性率为73.3%,二者阳性符合率为92%(11/12);而采用OMP31为包被抗原,阳性检出率为0(图5)。结论被检测区域阳性牛主要感染布氏杆菌为牛种布氏杆菌(B.abortus天然缺失OMP31基因);BP26作为间接ELISA包被抗原用于牛布氏杆菌血清学检测具有良好的特异性及较好的敏感性。 展开更多

关键词 布氏杆菌BP26 omp31 间接ELISA 试管凝集试验

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羊布鲁氏菌BCSP31、OMP31、L7/L12基因的原核表达载体构建及表达 被引量：7

3

作者 司瑞 白文涛 +5 位作者 张芳琳 刘艳丽 胡刚 吴兴安 阎岩 徐志凯 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期961-964,共4页

目的构建羊布鲁氏菌外膜蛋白BCSP31、OMP31和L7/L12基因的重组表达质粒,并在原核系统中表达。方法根据羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白BCSP31、OMP31和抗原L7/L12蛋白基因序列设计引物,分别扩增出大小约为1kb、730bp和380bp的目的基因片断,插入p... 目的构建羊布鲁氏菌外膜蛋白BCSP31、OMP31和L7/L12基因的重组表达质粒,并在原核系统中表达。方法根据羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白BCSP31、OMP31和抗原L7/L12蛋白基因序列设计引物,分别扩增出大小约为1kb、730bp和380bp的目的基因片断,插入pGEM7Zf(+)中测序并进行分析。将3种基因片段亚克隆入pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用SDS-PAGE及Western-blot进行分析鉴定。结果SDS-PAGE结果表明3个目的蛋白均以融合蛋白的方式成功表达,在相对分子量57kDa、49kDa、38kDa处有表达条带,经薄层扫描分析,目的蛋白分别占全菌蛋白的42%、36%、40%。Western-blot证实3种融合蛋白均能被布鲁氏菌免疫兔血清识别。结论成功构建了3种蛋白的表达载体并进行了高效表达,3种蛋白均具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 羊布鲁氏菌 BCSP31蛋白 omp31蛋白 L7/L12蛋白 基因表达

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布鲁菌外膜蛋白Omp31原核表达及抗原性分析 被引量：5

4

作者 徐杰 王玉飞 +7 位作者 汪舟佳 乔凤 钟志军 杜昕颖 赵瑾 曲勍 高岚 陈泽良 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第1期17-20,共4页

克隆羊布鲁菌的外膜蛋白Omp31基因,在大肠埃希菌中表达、纯化,并对Omp31蛋白的抗原性进行分析。以羊布鲁菌的染色体DNA为模板,扩增Omp31基因,双酶切后克隆至pET32a上,在大肠埃希菌ER2566(DE3)中诱导表达,组氨酸结合树脂柱纯化,Western b... 克隆羊布鲁菌的外膜蛋白Omp31基因,在大肠埃希菌中表达、纯化,并对Omp31蛋白的抗原性进行分析。以羊布鲁菌的染色体DNA为模板,扩增Omp31基因,双酶切后克隆至pET32a上,在大肠埃希菌ER2566(DE3)中诱导表达,组氨酸结合树脂柱纯化,Western blot鉴定Omp31蛋白的抗原性。将Omp31克隆至载体pET32a,提取的重组质粒经PCR鉴定、双酶切鉴定和测序分析确定目的基因成功插入到了克隆载体中。将重组质粒转化于大肠埃希菌ER2566(DE3)中表达获得HIS融合蛋白,SDS-PAGE分析证明,表达产物为43 ku的融合蛋白。Western blot结果表明,表达的蛋白具有与布鲁菌外膜蛋白相同的抗原性。 展开更多

关键词 布鲁菌 omp31蛋白 原核表达 抗原性

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布鲁氏菌16MΔomp31基因缺失株的构建与鉴定 被引量：10

5

作者 王慧 张亚丽 +2 位作者 王远志 陈创夫 任晓丽 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第1期30-34,共5页

为了构建布鲁氏菌16MΔomp31基因缺失株,采用PCR方法分别从亲本株16 M上扩增omp31基因的侧翼看序列及枯草芽孢杆菌SacB基因,并将所得片段与pMD18-T载体相连并测序,利用双酶切的方法分别将其连入自杀载体pGEM-7zf+,获得亚克隆pGEM-7zf+-... 为了构建布鲁氏菌16MΔomp31基因缺失株,采用PCR方法分别从亲本株16 M上扩增omp31基因的侧翼看序列及枯草芽孢杆菌SacB基因,并将所得片段与pMD18-T载体相连并测序,利用双酶切的方法分别将其连入自杀载体pGEM-7zf+,获得亚克隆pGEM-7zf+-Δomp31-SacB。将所构建好的自杀载体通过电转化入布鲁氏菌16M感受态细胞中,经2次同源重组后筛选出16MΔomp31基因缺失株,并对获得缺失株进行遗传稳定性检测。结果显示:成功获得布鲁氏菌16MΔomp31基因缺失株,该缺失株在15代内未发生回复性突变。本研究为今后研究布鲁氏菌抗凋亡机制奠定基础。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 omp31基因 缺失株

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羊种布鲁氏菌M5-90 omp31蛋白原核表达 被引量：8

6

作者 张红星 陈创夫 +1 位作者 王远志 唐利燕 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第5期593-596,共4页

克隆、测序布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白基因OMP31,原核表达OMP31并对其检测。从羊种布鲁氏菌M5-90中PCR获得OMP31基因,连接到pBS-T克隆质粒并测序;将测序正确的基因片段克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a,进行SDS-PAGE,而后Western-blot... 克隆、测序布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白基因OMP31,原核表达OMP31并对其检测。从羊种布鲁氏菌M5-90中PCR获得OMP31基因,连接到pBS-T克隆质粒并测序;将测序正确的基因片段克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a,进行SDS-PAGE,而后Western-blot检测。结果M5-90疫苗株的OMP31基因序列与羊种布鲁氏菌参考株16M的同源性为99.03%;外膜蛋白基因OMP31在大肠杆菌表达后能够被Western-blot检测到。结论:表达的布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白OMP31可以被布鲁氏菌特异性血清识别,表现出良好的抗原性,为以后实验室诊断和疫苗的研究做好坚实的上游工作。 展开更多

关键词 羊种布鲁氏菌疫苗株M5-90 omp31基因 克隆 测序 Western—blot检测

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布鲁氏菌OMP25与OMP31蛋白的表达及其间接ELISA诊断试剂盒研制 被引量：5

7

作者 王海丽 董炳梅 +2 位作者 李芬 许崇友 王金良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期404-410,共7页

目的为建立布鲁氏杆菌间接ELISA检测方法。方法本研究根据GenBank中已登录猪种布鲁氏菌S2株全基因组序列,分别针对omp25和omp31设计一对引物,分别扩增并回收573 bp与783 bp目的基因片段,将其分别克隆入pET-28a原核表达载体中,构建重组质... 目的为建立布鲁氏杆菌间接ELISA检测方法。方法本研究根据GenBank中已登录猪种布鲁氏菌S2株全基因组序列,分别针对omp25和omp31设计一对引物,分别扩增并回收573 bp与783 bp目的基因片段,将其分别克隆入pET-28a原核表达载体中,构建重组质粒pET-OMP25与pET-OMP31,进行酶切鉴定与基因序列测定后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导表达,OMP25与OMP31蛋白主要以包涵体形式存在;将目的蛋白纯化,应用Western blot进行蛋白活性的检测。结果纯化的目的蛋白具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为包被抗原,在确定了OMP25与OMP31蛋白最佳配比为4∶1、抗原最佳包被浓度为10μg/mL、血清的最佳稀释倍数为1∶50倍稀释、临界值为0.314的基础上,建立羊布鲁氏菌病抗体间接ELISA诊断方法并组装成诊断试剂盒,并将试剂盒进行了特异性、敏感性、重复性、符合率试验、血清交叉反应性等检测。结论研制的羊布鲁氏菌病抗体ELISA诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性,可重复性,可应用于临床样本检测。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 OMP25 omp31 间接ELISA

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布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因克隆及番茄转化 被引量：2

8

作者 王晶妍 王建英 +4 位作者 玉花 赵宏宇 赵亮 辛翠花 王彬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期119-123,共5页

作为发展可食性疫苗的第一步,将猪源布鲁氏菌蛋白OMP31的编码基因转入番茄,获得了转基因番茄。利用不依赖于连接反应的克隆方法(ligation-independent cloning,LIC)构建了pJG045-Omp31植物表达载体,将此表达载体通过三亲融合法转入农杆... 作为发展可食性疫苗的第一步,将猪源布鲁氏菌蛋白OMP31的编码基因转入番茄,获得了转基因番茄。利用不依赖于连接反应的克隆方法(ligation-independent cloning,LIC)构建了pJG045-Omp31植物表达载体,将此表达载体通过三亲融合法转入农杆菌AGL-0中,用农杆菌介导的植物叶盘转化法转化番茄,并通过对再生植株的基因组中OMP31的编码基因扩增测序,最终筛选出5株转基因番茄。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 蛋白omp31编码基因 转基因番茄

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布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆、表达和免疫学特性的初步研究 被引量：2

9

作者 陈瑶 骆利敏 李明 《热带医学杂志》 CAS 2006年第2期120-123,共4页

目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP31的克隆、测序和表达,并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁氏菌基因组中获得OMP31基因连接入PMD-18T克隆质粒并测序,克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,构建重组质粒PGEX-4T-1/OMP31,在大肠杆菌中将该蛋白... 目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP31的克隆、测序和表达,并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁氏菌基因组中获得OMP31基因连接入PMD-18T克隆质粒并测序,克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,构建重组质粒PGEX-4T-1/OMP31,在大肠杆菌中将该蛋白表达。用Western-blot分析重组表达的GST-OMP31的免疫学特性。结果成功构建了PGEX-4T-1/OMP31原核表达载体并在大肠杆菌中表达了OMP31基因,布鲁氏菌免疫动物血清能特异性识别所表达的蛋白。结论成功表达了布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因,它可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应,为之后的抗原性以及免疫原性研究打下良好的基础。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白omp31 免疫 诊断

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布鲁氏菌L7/L12、OMP31基因的克隆、测序及免疫原性分析 被引量：4

10

作者 张广雷 苗利光 +3 位作者 刘艳环 李海涛 李庆超 庄风歧 《特产研究》 2009年第4期5-8,共4页

为研制鹿布鲁氏菌病工程疫苗,根据已发表的布鲁氏菌核糖体蛋白L7/L12、外膜蛋白OMP31基因设计两对引物进行扩增,PCR产物连接pGEM-Teasy载体,转化DH5α后测序,并进行基因分析。结果从布鲁氏菌疫苗株中克隆出L7/L12和OMP312个目的基因,同... 为研制鹿布鲁氏菌病工程疫苗,根据已发表的布鲁氏菌核糖体蛋白L7/L12、外膜蛋白OMP31基因设计两对引物进行扩增,PCR产物连接pGEM-Teasy载体,转化DH5α后测序,并进行基因分析。结果从布鲁氏菌疫苗株中克隆出L7/L12和OMP312个目的基因,同源分析L7/L12达97.1%,OMP31达100%,免疫原性分析可作为免疫优势抗原。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 核糖体蛋白L7/L12 omp31 同源性

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犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因的原核表达 被引量：1

11

作者 赵焜 姜平 +1 位作者 伊日盖 范伟兴 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第9期34-37,共4页

克隆了犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因并构建原核表达系统,并对表达产物进行了初步的血清学鉴定。利用PCR技术扩增犬布氏杆菌RM6/66参考株Omp31基因,然后将其克隆到pGEMT-easy载体上进行测序。测序正确后,将该基因插入到pET-32a载体中构... 克隆了犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因并构建原核表达系统,并对表达产物进行了初步的血清学鉴定。利用PCR技术扩增犬布氏杆菌RM6/66参考株Omp31基因,然后将其克隆到pGEMT-easy载体上进行测序。测序正确后,将该基因插入到pET-32a载体中构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达融合蛋白,Western blot分析融合蛋白的免疫反应性。结果构建了犬布氏杆菌Omp31基因的原核表达载体pET-Omp31,并且在大肠杆菌中成功表达融合蛋白,经Western Blot鉴定该蛋白能被犬布氏杆菌阳性血清所识别。犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31的表达成功,为犬布氏杆菌病血清学诊断方法的建立提供了基础资料。 展开更多

关键词 犬布氏杆菌 外膜蛋白 omp31 原核表达

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宁夏布鲁氏菌Omp31基因序列特征分析 被引量：1

12

作者 高建炜 马学平 +5 位作者 王志翔 韩坤 张术斌 巨艳 陈丽莉 詹军 《宁夏医学杂志》 CAS 2015年第11期967-969,共3页

目的目的对宁夏布鲁氏菌Omp31基因序列进行分析,为菌株种型鉴定和试剂研究奠定基础。方法根据Genebank公布Omp31基因序列设计引物,采用PCR扩增、电泳检测、胶回收、纯化、送基因公司双向测序,用Contig Express软件对测序结果拼接,用DNAs... 目的目的对宁夏布鲁氏菌Omp31基因序列进行分析,为菌株种型鉴定和试剂研究奠定基础。方法根据Genebank公布Omp31基因序列设计引物,采用PCR扩增、电泳检测、胶回收、纯化、送基因公司双向测序,用Contig Express软件对测序结果拼接,用DNAstar软件进行结果分析。结果经PCR扩增测序得到Omp31基因全长序列大小为723 bp,编码240个氨基酸,与Genebank上羊种布鲁氏菌Omp31基因同源性达99.9%,氨基酸序列的同源性100%。通过遗传分析,分离株与参考菌亲缘关系相近,与羊种布鲁氏菌处在同一分枝。结论宁夏布鲁氏菌Omp31序列与发布的参考序列之间的同源性很高,而且与羊种布鲁氏菌处在同一分支。 展开更多

关键词 宁夏布鲁氏菌 omp31基因 序列分析

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猪型布鲁氏菌omp31基因的原核表达与亲和纯化

13

作者 杜志强 吴亚坤 +2 位作者 单生苗 刘晓燕 王建英 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期26-28,共3页

以猪型布鲁氏菌基因组作为模板进行基因序列的扩增,利用大肠杆菌原核表达系统进行重组表达,来研究外膜蛋白基因omp31的序列特性与重组表达情况。结果表明:猪型布鲁氏菌omp31基因的开放阅读框序列全长为723 bp,编码240个氨基酸。通过大... 以猪型布鲁氏菌基因组作为模板进行基因序列的扩增,利用大肠杆菌原核表达系统进行重组表达,来研究外膜蛋白基因omp31的序列特性与重组表达情况。结果表明:猪型布鲁氏菌omp31基因的开放阅读框序列全长为723 bp,编码240个氨基酸。通过大肠杆菌原核表达,成功表达出了目标重组蛋白,利用GSTtag亲和柱进行蛋白质纯化,重组蛋白分子量与预期的55.3 kD相一致。 展开更多

关键词 猪型布鲁氏菌 omp31基因 序列克隆 原核表达 纯化

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猪型布鲁氏菌Omp31基因的抗原表位预测与分析

14

作者 杜志强 刘丽娜 王建英 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期693-696,共4页

布鲁氏菌的外膜蛋白在维持细胞结构方面发挥着重要作用,其中,有些外膜蛋白与细菌本身的毒性相关,成为了重要的抗原决定簇相关分子。Omp31分子就是猪型布鲁氏菌的一个重要的抗原表位分子,在研制亚单位疫苗方面有重要作用。本论文以猪型... 布鲁氏菌的外膜蛋白在维持细胞结构方面发挥着重要作用,其中,有些外膜蛋白与细菌本身的毒性相关,成为了重要的抗原决定簇相关分子。Omp31分子就是猪型布鲁氏菌的一个重要的抗原表位分子,在研制亚单位疫苗方面有重要作用。本论文以猪型布鲁氏菌Omp31基因作为研究对象,利用DNAStar生物学软件对Omp31分子的立体结构、分子的表面可能性、亲水性、蛋白骨架区的柔韧性、分子的抗原指数进行了详细分析。结果显示:猪型布鲁氏菌Omp31分子一级结构的氨基酸序列中存在4段可能的抗原表位区段,其中,51～80氨基酸残基组成的区段和193～228氨基酸残基组成的区段的抗原指数较高,成为抗原决定簇的可能性很大。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 omp31基因 二级结构 抗原表位 预测

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猪型布鲁氏菌Omp31抗原表位基因的性质分析

15

作者 杜志强 程佳 王建英 《四川师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期631-634,共4页

布鲁氏菌病是一种由革兰氏阴性小杆菌:布鲁氏菌(Brucella)引起的,主要在动物中以流产和发热为表现特征的疾病.以猪型布鲁氏菌病Omp31抗原表位基因作为研究对象,对基因的种间同源性、亚型分类、结构性质、抗原表位性质等信息进行了分析,... 布鲁氏菌病是一种由革兰氏阴性小杆菌:布鲁氏菌(Brucella)引起的,主要在动物中以流产和发热为表现特征的疾病.以猪型布鲁氏菌病Omp31抗原表位基因作为研究对象,对基因的种间同源性、亚型分类、结构性质、抗原表位性质等信息进行了分析,并且作出了相关预测.随着预测方法的不断完善,将会对布鲁氏菌病其它抗原表位基因的研究提供帮助,从而为该疾病的防疫、治疗提供理论依据,同时也可以促进相关疫苗的研制. 展开更多

关键词 布鲁氏菌 omp31抗原表位基因 序列对比 结构预测 抗原性质分析

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布鲁杆菌优势抗原OMP31和BP26的B细胞表位筛选

16

作者 吴静波 丘金浪 +3 位作者 翁云层 廖卿宇 王文敬 黎诚耀 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第S1期70-70,共1页

目的筛选BP26和OMP31蛋白的B淋巴细胞线性表位,并探索该表位及其抗体在布病检测中的价值。方法构建BP26和OMP31蛋白的原核表达系统,表达、纯化重组BP26(rBP26)和OMP31蛋白(rOMP31),并以rBP26和rOMP31分别免疫BALB/c小鼠,制备能特异性结... 目的筛选BP26和OMP31蛋白的B淋巴细胞线性表位,并探索该表位及其抗体在布病检测中的价值。方法构建BP26和OMP31蛋白的原核表达系统,表达、纯化重组BP26(rBP26)和OMP31蛋白(rOMP31),并以rBP26和rOMP31分别免疫BALB/c小鼠,制备能特异性结合天然OMP31和BP26蛋白的单克隆抗体;合成BP26和OMP31蛋白的重叠16肽作为抗原,多肽ELISA测定单抗;与KLH偶联的16肽作为ELISA检测抗原,检测羊的血清。结果获得纯度90%以上的rBP26和rOMP31,并制备28株能稳定分泌抗rBP26单抗,5株稳定分泌抗rOMP31单抗的杂交瘤细胞株,其中分别有11株和1株能与多肽结合, 展开更多

关键词 omp31 BP26 布鲁杆菌 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 优势抗原 原核表达系统 布病 线性表 特异性

原文传递

布鲁氏菌外膜蛋白omp31基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在巨噬细胞中的表达 被引量：6

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作者 黄小强 王慧 +4 位作者 葛阳春 诸婷婷 王远志 陈创夫 杜军伟 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第4期444-447,共4页

为了构建一种具有指示作用的融合表达蛋白,将布鲁氏菌外膜蛋白omp31基因与EGFP基因融合后观察融合表达蛋白在巨噬细胞中的表达情况。从灭活的绵羊种布鲁氏菌019株菌液中获得omp31基因片段,克隆入融合表达载体pTY,构建重组质粒pTY-omp31... 为了构建一种具有指示作用的融合表达蛋白,将布鲁氏菌外膜蛋白omp31基因与EGFP基因融合后观察融合表达蛋白在巨噬细胞中的表达情况。从灭活的绵羊种布鲁氏菌019株菌液中获得omp31基因片段,克隆入融合表达载体pTY,构建重组质粒pTY-omp31,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,通过激光共聚焦显微镜观察融合蛋白能够在细胞内的表达。研究结果显示:重组质粒pTY-omp31经酶切及测序鉴定证明构建正确,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7得到了成功表达。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 omp31基因 巨噬细胞RAW264 7

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布鲁氏菌OMP31 T-B联合表位抗原的免疫应答分析 被引量：1

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作者 江晓明 张峰波 +4 位作者 朱玥洁 甫拉提.热西提 李智伟 庞盼 丁剑冰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1617-1620,共4页

目的:研究OMP31表位的抗原性和免疫应答特点,为布鲁氏菌表位疫苗的研制奠定基础。方法:利用生物信息软件筛选OMP31 T-B联合优势抗原表位,进一步合成肽段。用OMP31肽段免疫BALB/c小鼠,采用ELISA检测小鼠血清中特异性Ig G1和Ig G2a抗体水... 目的:研究OMP31表位的抗原性和免疫应答特点,为布鲁氏菌表位疫苗的研制奠定基础。方法:利用生物信息软件筛选OMP31 T-B联合优势抗原表位,进一步合成肽段。用OMP31肽段免疫BALB/c小鼠,采用ELISA检测小鼠血清中特异性Ig G1和Ig G2a抗体水平,ELISPOT检测脾淋巴细胞中IFN-γ阳性的T淋巴细胞活化情况。结果:用OMP31合成肽段免疫BALB/c小鼠4次后,小鼠血清中Ig G1和Ig G2a抗体水平升高,小鼠脾淋巴细胞集落形成单元(SFU)增高。结论:OMP31 TB联合表位抗原能增强小鼠Th1免疫应答和体液免疫应答,可以作为布鲁氏菌病的候选疫苗。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 omp31 表位疫苗 免疫应答

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布鲁氏菌内蒙古分离株omp31基因的克隆与序列分析 被引量：3

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作者 陆静 关平原 +3 位作者 乌日罕 特木尔巴根 马立峰 菊花 《畜牧与饲料科学》 2009年第10期15-17,共3页

对三株布鲁氏菌内蒙古分离株的omp31基因进行克隆与序列分析。参照GenBank中布鲁氏菌的omp31基因序列,设计一对特异性引物,用PCR方法扩增布鲁氏菌omp31基因,对PCR产物进行克隆、测序,将测定序列拼接后与GenBank中获得的参考毒株omp31基... 对三株布鲁氏菌内蒙古分离株的omp31基因进行克隆与序列分析。参照GenBank中布鲁氏菌的omp31基因序列,设计一对特异性引物,用PCR方法扩增布鲁氏菌omp31基因,对PCR产物进行克隆、测序,将测定序列拼接后与GenBank中获得的参考毒株omp31基因序列进行了比较。结果显示,三株布鲁氏菌分离株的omp31基因开放阅读框核苷酸序列同源性均为100.0%;与Brucella ceti B14/94、Brucella neotomae 5K33、Brucella suis1330三个参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性最高,为100.0%;与Brucella canisRM6/66、Brucella melitensis183、Brucella melitensis16M三个参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性为99.9%;与Brucella melitensis Rev1参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性为99.6%;与Brucella ovis ATCC25840参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性最低,为98.8%。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 omp31 序列分析

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猪型布鲁氏菌omp31基因的克隆与原核表达 被引量：1

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作者 刘丽娜 杜志强 王建英 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第2期32-33,共2页

以猪型布鲁氏菌的omp31基因作为研究对象,通过构建原核表达载体,对重组蛋白进行诱导表达和亲和纯化。结果表明:omp31基因可以在大肠杆菌中正确表达,重组蛋白的亲和纯化效果良好。

关键词 布鲁氏菌 omp31基因 克隆 原核表达

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