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338例慢肝患者HBV PreS1-Ag、PreS2-Ag及PreS2-Ab与其血清标志物的相关性研究 被引量：11
1
作者 周祥海 《现代检验医学杂志》 CAS 2005年第1期43-45,共3页
目的探讨HBV感染者血清中PreS1-Ag、PreS2-Ag、PreS2-Ab与HBVM(HBsAg、HBeAg、HBaAb、HBcAb检测编号分别为1、3、4、5)三种主要模式(135阳性、145阳性、15阳性)之间的相关性。方法采用ELISA法同时检测338例HBV感染者血清中PreS1-Ag、Pre... 目的探讨HBV感染者血清中PreS1-Ag、PreS2-Ag、PreS2-Ab与HBVM(HBsAg、HBeAg、HBaAb、HBcAb检测编号分别为1、3、4、5)三种主要模式(135阳性、145阳性、15阳性)之间的相关性。方法采用ELISA法同时检测338例HBV感染者血清中PreS1-Ag、PreS2-Ag、PreS2-Ab,并以20例两对半全阴性的健康体检者血清作为对照,对其结果进行分析。结果HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag在135阳性组中检出率为94.7％,81.6％;在145阳性组中检出率为69.3％,57.7％;在15阳性组中检出率为69.6％,57.1％。二者在338例HBsAg阳性标本中总检出率为75.1％,59.8％,明显高于HBeAg的阳性率22.5％。PreS2-Ab在三种模式中的检出率均较低,但在145阳性组中检出率明显高于135和15阳性组。20例HBVM全阴模式的标本中均未检出阳性结果。结论HBVPreS1-Ag、PreS2-Ag在HBV感染者的血清中均具有较高的检出率,可作为HBV感染和复制的敏感指标,且优于HBeAg。HBsAg阳性的三组模式中PreS2-Ab的检出率均较低,结果表明:HBsAg阳性慢肝患者体内绝大部分均存在病毒复制的倾向,如将三者与两对半联合检测,对全面判断HBV感染的病毒复制、疗效观察及判断预后具有一定的指导意义,对无条件开展HBV-DNA测定的实验室可推广使用。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎HBV PRES1-AG pres2-Ag pres2-Ab HBV—M 相关性
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乙型肝炎病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体检测的意义 被引量：1
2
作者 郭翀 叶润 谢琼 《检验医学与临床》 CAS 2010年第7期585-586,共2页
目的分析乙型肝炎(下称乙肝)病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体检测的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对乙肝病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体进行检测。结果PreS2抗原在乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、HBeAg、抗-HBc阳性组和HBsAg、抗... 目的分析乙型肝炎(下称乙肝)病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体检测的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对乙肝病毒PreS2抗原及抗-PreS2抗体进行检测。结果PreS2抗原在乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、HBeAg、抗-HBc阳性组和HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性组的检出率分别为100%和83.3%,两组分别与抗-HBs、抗-HBc阳性或抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。抗-PreS2抗体在抗-HBs、抗-HBc阳性或抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性组的检出率为33.3%,与HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性组和HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论将PreS2抗原与抗-PreS2抗体作为常规检测,在观察乙型肝炎病毒的早期感染及患者预后判断方面有重要价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres2抗原 抗-pres2抗体.
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HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化 被引量：4
3
作者 刘照惠 邵丽君 +5 位作者 李猛 金立杰 李利 谷丽娟 赵晓琳 杨屹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第6期435-438,共4页
目的优化HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达条件。方法通过改变重组质粒的宿主菌、培养基、诱导温度、诱导剂、诱导剂浓度、诱导时间等条件,利用SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件,分析以上条件改变对表达产物表达量的影响。将重... 目的优化HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达条件。方法通过改变重组质粒的宿主菌、培养基、诱导温度、诱导剂、诱导剂浓度、诱导时间等条件,利用SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件,分析以上条件改变对表达产物表达量的影响。将重组质粒连续传100代,检测融合蛋白的表达稳定性。结果重组质粒在大肠杆菌BL21菌株、GS培养基、28℃、0.5mmol/L IPTG或1.5mmol/L乳糖诱导4h时,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的43.5%。重组质粒传代100代,融合蛋白的表达稳定。结论已确定出了融合蛋白在大肠杆菌中表达的最佳条件。 展开更多
关键词 HBV pres2-MBP融合蛋白 大肠杆菌 表达条件
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乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立 被引量：4
4
作者 苏小平 姚玉成 +8 位作者 訾晓渊 赵书民 熊俊 李建秀 王新民 丁佳 许燕 余宏宇 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期168-171,共4页
目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。 方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder... 目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。 方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder)小鼠 ,再以免疫组织化学法分析乙型肝炎病毒蛋白在这些小鼠中的表达特性 ,PCR和免疫组化均阳性的转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配用于传代培育 ,并用 PCR法检测其子代小鼠。结果 :共注射受精卵 6 9枚。选取存活受精卵 5 8枚分别植入 4只假孕小鼠 ,产仔并存活 2 3只。经尾组织 DNA PCR筛选得到 5只整合 pre S2 - S基因的 founder小鼠 ,免疫组织化学法发现其中3只小鼠的肝脏中表达 HBs Ag,进而对其中表达较强的阳性鼠进行保种。结论 :所建立的乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因转基因小鼠品系具有表达乙肝病毒中蛋白的生物学特性 。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 MHBS 转基因小鼠 pres2-S基因
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HBV preS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建和表达 被引量：3
5
作者 郭晓兰 邓健康 +1 位作者 朱道银 唐恩洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期548-551,共4页
目的 :研究GM CSF和preS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用。方法 :采用PCR方法 ,扩增HBVpreS2 +S基因约 84 6bp的片段和rhGM CSF(包括甘氨酸接头 )基因 4 5 0bp的片段。通过T A克隆技术和基因定向克隆 ,构建融合基因的真核表达质粒pcDNA3.1... 目的 :研究GM CSF和preS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用。方法 :采用PCR方法 ,扩增HBVpreS2 +S基因约 84 6bp的片段和rhGM CSF(包括甘氨酸接头 )基因 4 5 0bp的片段。通过T A克隆技术和基因定向克隆 ,构建融合基因的真核表达质粒pcDNA3.1 S2S rhGM CSF ,并在HepG2细胞中表达。结果 :经酶切、PCR及DNA测序鉴定 ,融合基因表达质粒HB VpreS2S rhGM CSF成功地构建。将其转染HepG2细胞后 ,目的基因的转录通过RT PCR得到证实 ,而且表达的融合蛋白能与抗 HBs、抗 preS2和抗 GM CSF单克隆抗体 (mAb)均产生特异性反应。结论 :融合基因表达载体pcDNA3.1 S2S rhGM CSF的成功构建并表达 。 展开更多
关键词 HBV pres2 GM-CSF 融合基因
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HBV PreS2-MBP融合蛋白质粒构建及在大肠杆菌中的表达 被引量：2
6
作者 邵丽军 刘照惠 +5 位作者 金立杰 李利 李猛 谷丽娟 赵晓林 杨屹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期255-258,共4页
目的在大肠杆菌pMALP2x系统中表达HBVPreS2MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化。方法利用DNA重组技术,将全长的HBVPreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMALP2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达产物经SDSPAGE和Westernblot检测,并经... 目的在大肠杆菌pMALP2x系统中表达HBVPreS2MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化。方法利用DNA重组技术,将全长的HBVPreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMALP2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达产物经SDSPAGE和Westernblot检测,并经阴离子交换层析、AmyloseResin亲和层析纯化。结果成功构建了重组载体pMALP2x/S2,诱导蛋白为MBP标记的可溶性的PreS2MBP融合蛋白,具有良好的抗原性,可经AmyloseResin亲和层析纯化。结论pMALP2x系统可成功表达PreS2MBP融合蛋白。 展开更多
关键词 HBV pres2-MBP融合蛋白 pMAL-P2x系统 原核表达 大肠杆菌
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乙型肝炎病毒preS2蛋白在转基因小鼠肝脏中的表达 被引量：2
7
作者 金艳花 訾晓渊 +8 位作者 姚玉成 熊俊 李建秀 苏小平 王新民 倪文君 丛文铭 杨康鹃 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期175-178,共4页
目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′... 目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠首建者 (founder)及后代 ;免疫组织化学法在蛋白水平检测 pre S2蛋白在这些小鼠中的表达 ;H- E染色分析转基因小鼠肝组织的病理学变化。结果 :经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后 ,共出生 15只新生小鼠 ,其中存活 7只 ,经 PCR检测后获得 2只 founder转基因小鼠 ,命名为 C5 7- Tg N (pre S/ St) SMMU。免疫组织化学检测发现转基因小鼠肝细胞质中有 pre S 2蛋白表达 ,H- E染色发现转基因小鼠肝组织中央静脉周围有淋巴细胞聚集。将这 2只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配 ,进行传代培育 ,PCR法筛选阳性转基因小鼠 ,目前已传至 F2 代。 结论 :本研究成功建立了稳定遗传 3′末端缺失的 pre S/ S基因并表达 pre S2蛋白的转基因小鼠 C5 7- Tg N((pre S/ St) SMMU,它将是体内研究 3′末端缺失的 pre S/ 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres2蛋白 转基因小鼠 preS/S基因 肝
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HBV preS2起始区反义核酸对人肝癌细胞在裸鼠体内生长的抑制作用 被引量：3
8
作者 刘素侠 孙汶生 +3 位作者 曹英林 马春红 丁培芳 韩丽辉 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2002年第2期130-133,共4页
PCR合成互补于HBVpre S2起始区的反义寡核苷酸 (as preS2 ) ,以HBVDNA转染的HepG2 2 15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型 ,通过连续用药、一次性用药、混合用药等三种途径研究其对人肝癌裸鼠模型的抑瘤生长及体内抗HBV作用。流式细胞术 (F... PCR合成互补于HBVpre S2起始区的反义寡核苷酸 (as preS2 ) ,以HBVDNA转染的HepG2 2 15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型 ,通过连续用药、一次性用药、混合用药等三种途径研究其对人肝癌裸鼠模型的抑瘤生长及体内抗HBV作用。流式细胞术 (FCM)分析asON诱导瘤细胞凋亡作用 ,ELLSA法检测反义核酸作用裸鼠血清中HBV抗原含量的变化。结果显示 ,一次性与混合用药组裸鼠均表现为成瘤潜伏期延长 ,成瘤率明显低于瘤细胞对照未用药组 (P <0 0 5 ) ,瘤体生长缓慢。裸鼠瘤内连续用药 ,在 48hFCM测凋亡峰值为 39 5 7%,S期细胞降低显著 ,生理盐水与无关序列对照分别为 7 92 %、10 89%,提示as preS2可能诱导S期细胞凋亡。as preS2对荷瘤鼠HBeAg和HB sAg的抑制率分别为 45 %和 6 5 %。提示 ,as preS2可有效抑制体内HBV抗原表达 ,对人肝癌裸鼠在体内的生长有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 反义寡核苷酸 流式细胞术 ELISA法 pres2基因 抗原表达 肝癌细胞
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血清PreS1、PreS2抗原在乙肝诊断中的价值 被引量：5
9
作者 邱黎霞 郭满盈 杨海燕 《实验与检验医学》 CAS 2009年第2期177-178,共2页
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染性疾病．可引起肝硬化及肝癌。我国是乙肝大国．平均感染率高达10％以上．以往通常用乙型肝炎病毒标志物（HBV—M1及HBV—DNA的检测结果来明确诊断及指导治疗。近年来研究发现Ⅲ．HBV外膜蛋白抗原P... 乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染性疾病．可引起肝硬化及肝癌。我国是乙肝大国．平均感染率高达10％以上．以往通常用乙型肝炎病毒标志物（HBV—M1及HBV—DNA的检测结果来明确诊断及指导治疗。近年来研究发现Ⅲ．HBV外膜蛋白抗原PreS1与PreS2的抗原性较强．对乙肝诊断具有一定的临床意义。本组对389例不同HBV标志物模式的标本进行了PreS1及PreS2抗原检测．并将结果进行比较和分析，旨在评价血清PreS1、PreS2抗原在乙肝临床诊断中的价值。 展开更多
关键词 PRES1 临床诊断 S2抗原 乙肝 乙型肝炎病毒标志物 血清 pres2 传染性疾病
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乙肝病毒PreS2基因在大肠埃希菌中的表达 被引量：2
10
作者 邵丽军 李猛 +1 位作者 张利芳 刘照惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第6期417-420,共4页
目的在大肠埃希菌(Escherichiacoli)中表达乙肝病毒前S2(HBVPreS2)蛋白,并对其进行鉴定和纯化。方法利用DNA重组技术,将全长的HBVPreS2基因克隆至pMAL-C2x[融合表达载体含麦芽糖结合蛋白(maltosebindingprotein,MBP)标签蛋白]质粒中,构... 目的在大肠埃希菌(Escherichiacoli)中表达乙肝病毒前S2(HBVPreS2)蛋白,并对其进行鉴定和纯化。方法利用DNA重组技术,将全长的HBVPreS2基因克隆至pMAL-C2x[融合表达载体含麦芽糖结合蛋白(maltosebindingprotein,MBP)标签蛋白]质粒中,构建pMAL-C2/S2表达载体,转化至E.coli,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式,依据其不同的表达形式采取适当的纯化方案,纯化产物经Westernblot和ELISA法检测反应原性,经Xa因子切割去除MBP标签蛋白。结果成功构建了表达载体pMAL-C2/S2,目的蛋白为PreS2-MBP,以包涵体和可溶性2种形式表达。纯化产物能与anti-HepatitisBvirusPreS2Antigen发生特异性反应。融合蛋白经Xa因子切割去除了MBP标签蛋白。结论在E.coli中成功表达了HBVPreS2蛋白,为进一步研制新型HBV预防及免疫治疗制剂打下了基础。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 表达 乙型肝炎病毒 pres2蛋白
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乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母系统的分泌表达 被引量：1
11
作者 徐丽宏 梁国栋 +5 位作者 付士红 宋宏 王大维 苏乃伦 夏国良 张智清 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期224-229,共6页
拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在PichiaPastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达。实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G41... 拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在PichiaPastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达。实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G418筛选多拷贝整合克隆,经甲醇诱导表达并用SDS-PAGE电泳及酶免疫法检测表达产物。经100个克隆筛选获得了表达量较高的表达菌株WC4。该菌株甲醇诱导后细胞上清10倍浓缩SDS-PAGE电泳检测显示,细胞上清中有特异蛋白条带,且第6天表达量最高,表达产物单体分子量为31kD左右。用美国雅培公司AUZYMEMONOCLONAL试剂盒估算表达量为2μg/100OD600细胞。上述结果表明,乙肝病毒表面抗原preS2+S基因在本系统中获得了分泌表达。同时检测了酵母细胞裂解液中特异蛋白质的表达,结果发现,自甲醇诱导后第一天即可检测到表达产物,而且除了第6天细胞外表达量高于细胞内外,其余各天的表达水平均表现为细胞内高于细胞外。以上结果提示,利用分泌型酵母表达系统表达乙肝病毒表面抗原在技术上可行,但表达产量偏低,一些蛋白滞留在细胞内未能分泌到培养基中。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 表面抗原pres2+S基因 酵母系统 分泌表达
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HBVpreS2-S基因诱发的体液免疫引起乙肝转基因小鼠肝组织损伤 被引量：1
12
作者 刘红 姚玉成 +4 位作者 葛军辉 李建秀 苏娟 张钦宪 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期159-163,共5页
目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。 方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小... 目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。 方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)体内 ,不同时间点静脉采血检测小鼠血清 HBs Ag、抗 HBs抗体、前 S2抗原、前 S2抗体、转氨酶、尿素氮和肌酐的变化 ,并处死动物检查肝、脾、肾、肠、肺和肌肉组织的病理学改变。 结果 :DNA免疫正常小鼠后 8～14周 ,抗 HBs抗体的浓度维持在 130～ 14 0 m IU/ ml;免疫后小鼠抗血清转移到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)后 2、4、7和 14 d,小鼠血清中未检测到 HBs Ag和前 S2抗原 ,抗 HBs抗体持续阳性 ,前 S2抗体 14 d时转阴 ;AL T2、4 d升高 ,7d恢复到正常 ;AST14 d内始终高于正常值 ,4 d时达高峰 ;尿素氮异常 ,γ- GT与肌酐正常。转基因小鼠肝脏出现急性乙型肝炎的改变 ,初期 (2 d、4 d)血窦内和汇管区有淋巴细胞浸润 ,4 d肝细胞开始肿胀 ;中期 (7d)全小叶出现肝细胞气球样变 ,肝小叶内出现肝细胞点灶性坏死伴单个核细胞浸润 ,汇管区轻度单个核细胞的浸润 ;后期 (14 d)时肝细胞肿胀明显减轻 。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres2-S基因 体液免疫 转基因小鼠 乙型肝炎
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HBV PreS2+S/IFN-α融合基因真核表达载体的构建及其表达 被引量：3
13
作者 陈红梅 白雪帆 +3 位作者 潘蕾 李光玉 韦三华 黄长形 《中国病毒学》 CSCD 2002年第4期312-314,共3页
构建含HBVPrdS2 +S和IFN α融合基因的真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN α并在真核细胞中进行表达。应用重叠延伸剪切技术 (splicingbyoverlappingextension ,简称SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段S2S/IFN α ,回收后直接克隆到 pcDNA3.1V5 ... 构建含HBVPrdS2 +S和IFN α融合基因的真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN α并在真核细胞中进行表达。应用重叠延伸剪切技术 (splicingbyoverlappingextension ,简称SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段S2S/IFN α ,回收后直接克隆到 pcDNA3.1V5 /HisTOPOTA克隆载体 ,得到真核重组载体pcDNA3.1.S2S/IFN α。然后用脂质体法转染VeroE6细胞。对重组载体进行了限制性酶切及PCR鉴定 ,证明连接正确 ;经间接免疫荧光检测证实该重组载体能在真核细胞中表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN α的成功构建及在VeroE6细胞中的有效表达 。 展开更多
关键词 HBV pres2+S/INF-α融合基因 真核表达载体 乙型肝炎病毒 Α-干扰素 基因表达
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HBV PreS2S/Fc融合基因真核表达载体的构建及表达 被引量：1
14
作者 陈红梅 白雪帆 +2 位作者 黄长形 李光玉 洪沙 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第5期1081-1084,共4页
目的:构建含HBV PreS2S和Fc融合基因的真核表达载体pcDNA3 S2S/Fc并在真核细胞中进行表达. 方法:应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,简称SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段S2S/ Fc,回收后克隆到pGEM-T Easy TA克隆载... 目的:构建含HBV PreS2S和Fc融合基因的真核表达载体pcDNA3 S2S/Fc并在真核细胞中进行表达. 方法:应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,简称SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段S2S/ Fc,回收后克隆到pGEM-T Easy TA克隆载体,获得合适的酶切位点,再采用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA3中,得到真核重组载体pcDNA3 S2S/Fc.然后用脂质体法转染SP2/0细胞. 结果:对重组载体进行了限制性酶切鉴定及测序分析,汪明连接正确;经间接免疫荧光捡测证实该重组载体能在真核细胞中表达插入的外源性基因编码的融合蛋白. 结论:真核表达载体pcDNA3 S2S/Fc的成功构建及在SP2/0 细胞中的有效表达,为进一步探讨HBV感染的特异性免疫治疗提供了实验依据. 展开更多
关键词 HBV pres2S/Fc融合基因 真核表达 载体 乙型病毒性肝炎
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HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌不同部位的表达 被引量：1
15
作者 刘照惠 邵丽军 +1 位作者 金立杰 李利 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第3期17-19,共3页
目的:分析比较HBV PreS2蛋白在大肠杆菌细胞周质和细胞质中的融合表达情况。方法:构建大肠杆菌细胞周质中融合表达HBV PreS2蛋白的载体pMAL-P2x/S2和细胞质中融合表达载体pMAL-C2x/S2,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western Blot检测,分... 目的:分析比较HBV PreS2蛋白在大肠杆菌细胞周质和细胞质中的融合表达情况。方法:构建大肠杆菌细胞周质中融合表达HBV PreS2蛋白的载体pMAL-P2x/S2和细胞质中融合表达载体pMAL-C2x/S2,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western Blot检测,分析HBV PreS2-MBP融合蛋白在菌体不同部位的表达情况及表达产物的存在形式。结果:细胞周质中表达的融合蛋白有一部分被降解了,而细胞质中表达出了完整的融合蛋白。细胞质中表达的融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在。结论:HBV PreS2-MBP融合蛋白适合在大肠杆菌细胞质中表达。 展开更多
关键词 HBV pres2-MBP融合蛋白 原核表达 pMAL-P2x pMAL-C2x
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乙型肝炎病毒PreS2蛋白研究进展 被引量：1
16
作者 吉萍 牛明福 +2 位作者 邵勇 高丽华 胡显文 《生物技术通讯》 CAS 2011年第4期569-571,共3页
乙型肝炎病毒(HBV)外膜蛋白包括S蛋白、PreS1蛋白和PreS2蛋白,它们是HBV包膜的主要成分,可诱导机体产生相应的抗体。PreS2蛋白在HBV侵入肝细胞的过程中起着非常重要的作用,对于防治HBV的感染有重要意义。我们简要综述了有关PreS2蛋白的... 乙型肝炎病毒(HBV)外膜蛋白包括S蛋白、PreS1蛋白和PreS2蛋白,它们是HBV包膜的主要成分,可诱导机体产生相应的抗体。PreS2蛋白在HBV侵入肝细胞的过程中起着非常重要的作用,对于防治HBV的感染有重要意义。我们简要综述了有关PreS2蛋白的研究,介绍了PreS2蛋白的各项功能。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres2蛋白 进展
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preS2荧光融合蛋白的表达及其对人端粒酶逆转录酶启动子的激活作用 被引量：1
17
作者 栾芳 张炳昌 +3 位作者 王勇 范卫华 成士清 马春红 《实用检验医师杂志》 2011年第3期137-141,共5页
目的探讨乙型肝炎病毒编码的preS2蛋白对人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子的激活作用.方法PCR扩增人preS2基因,构建preS2与绿色荧光蛋白融合表达的载体pEGFP-preS2,共转染后通过荧光显微镜检测融... 目的探讨乙型肝炎病毒编码的preS2蛋白对人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子的激活作用.方法PCR扩增人preS2基因,构建preS2与绿色荧光蛋白融合表达的载体pEGFP-preS2,共转染后通过荧光显微镜检测融合基因的表达.将pEGFP-preS2和hTERT全长启动子报告质粒pGL3B-TRTP共转染HepG2细胞,48 h后裂解细胞,双荧光检测分析preS2对hTERT启动子的激活作用.结果荧光显微镜检测证实pEGFP-preS2可在体外有效表达preS2融合蛋白,双荧光试验表明preS2可显著激活hTERT启动子,此激活作用具有剂量依赖性.结论成功构建preS2绿色荧光融合表达载体,并初步证实其对hTERT启动子的激活作用,为进一步探讨肝癌发生中hTERT表达调控机制奠定基础. 展开更多
关键词 pres2蛋白 HTERT启动子 转录调控 激活作用
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乙型肝炎病毒感染者PreS1-Ag、PreS2-Ag与HBV测定分析 被引量：1
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作者 金明林 黎明新 《中国医药导报》 CAS 2008年第31期77-78,共2页
目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者PreS1-Ag和PreS2-Ag与HBV-M之间的关系。方法:用ELISA法对316例HBV感染者血清进行PreS1-Ag和PreS2-Ag及HBV-M检测。结果:对照组的血清PreS1-Ag和PreS2-Ag与HBV-M为阴性,而HBV感染者血清PreS1-Ag和PreS2... 目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者PreS1-Ag和PreS2-Ag与HBV-M之间的关系。方法:用ELISA法对316例HBV感染者血清进行PreS1-Ag和PreS2-Ag及HBV-M检测。结果:对照组的血清PreS1-Ag和PreS2-Ag与HBV-M为阴性,而HBV感染者血清PreS1-Ag和PreS2-Ag在三种主要模式中的检出率分别为88.8%,76.3%;70.3%,55.4%;68.2%,55.7%。结论:PreS1-Ag和PreS2-Ag更敏感地反映了HBV的感染和复制程度,对乙肝血清标志物检测起重要的补充作用。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 PreS1-A pres2-Ag
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表达乙肝病毒preS2S蛋白的荷瘤小鼠模型的建立
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作者 何芳 唐红 +2 位作者 刘丽 刘聪 赵连三 《华西医学》 CAS 2008年第1期96-98,共3页
目的:建立能表达乙肝病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,为研究HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用提供简便易行的研究模型。方法:以免疫印迹法验证SP2/0-S2S细胞中有HBVpreS2S抗原的稳定表达,将SP2/0-S2S... 目的:建立能表达乙肝病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,为研究HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用提供简便易行的研究模型。方法:以免疫印迹法验证SP2/0-S2S细胞中有HBVpreS2S抗原的稳定表达,将SP2/0-S2S细胞种植到BALB/c小鼠胁部皮下(荷瘤),观察能否生长成瘤,以及成瘤的时间、肿瘤大小和荷瘤后小鼠的生存时间;以免疫组织化学法检测小鼠肿瘤组织HBVpreS2S抗原的表达。以不表达preS2S抗原蛋白的SP2/0-CMV细胞荷瘤小鼠作为阴性对照。结果:荷瘤后3天～1周,SP2/0-S2S细胞可在小鼠皮下形成实体肿瘤,成瘤率为100%,肿瘤细胞中有preS2S抗原表达,荷瘤后小鼠的平均生存时间为16±1天;与不表达preS2S抗原蛋白的SP2/0-CMV细胞荷瘤小鼠相比,成瘤率、成瘤时间、肿瘤大小及生存时间差异。结论:建立了能表达HBVpreS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,可用于HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用的实验研究。同时也建立了不表达preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,可用作阴性对照。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres2S抗原 BALB/C小鼠 SP2/0细胞
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不同佐剂对preS2/S乙型肝炎疫苗免疫原性的影响
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作者 徐艳玲 徐晓霞 +6 位作者 王宇 谷丽娟 杨明 隋红 高湛翱 刘令九 赵小琳 《微生物学免疫学进展》 2013年第6期30-34,共5页
目的探讨不同佐剂对preS2/S乙型肝炎疫苗免疫原性的影响。方法将BALB/C小鼠随机分为6组:铝佐剂组(S+Al和S2/S+Al)、细胞因子佐剂组(S2/S+CK1、S2/S+CK2和S2/S+CK3)及阴性对照组(NG),用相应抗原腹腔免疫各组小鼠,1 mL/只,分别于免疫后2、... 目的探讨不同佐剂对preS2/S乙型肝炎疫苗免疫原性的影响。方法将BALB/C小鼠随机分为6组:铝佐剂组(S+Al和S2/S+Al)、细胞因子佐剂组(S2/S+CK1、S2/S+CK2和S2/S+CK3)及阴性对照组(NG),用相应抗原腹腔免疫各组小鼠,1 mL/只,分别于免疫后2、4和6周采血,分离血清,ELISA法检测血清中抗-HBs抗体和preS2抗体水平;WST-1法检测淋巴细胞增殖情况。结果免疫后2周,铝佐剂组(S+Al和S2/S+Al)抗体水平较高,阳转率达100%,而细胞因子佐剂组抗-HBs抗体水平均较低,S2/S+CK2及S2/S+CK3组抗体阳转率为0,与NG组比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫后4周,细胞因子佐剂组抗-HBs抗体水平升高明显,铝佐剂组S2/S+Al抗体水平显著高于S+Al(P<0.05);免疫后6周,细胞因子佐剂组抗体水平高于铝佐剂组,其中S2/S+CK1组抗体水平较高。免疫后2周,各组小鼠血清中抗-preS2抗体均达到较高水平,各组间差异均无统计学意义(P>0.05);免疫后4周和6周,抗体水平均有所下降,但下降不明显;铝佐剂组S+Al和S2/S+Al抗-preS2抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。免疫后4周,各组小鼠淋巴细胞刺激指数铝佐剂组(S+Al和S2/S+Al)低于细胞因子佐剂组,且差异有统计学意义(P<0.05),其中S2/S+CK1组淋巴细胞增殖水平较高。结论不同佐剂的preS2/S乙型肝炎疫苗均能诱导较高水平的抗-HBs和抗-preS2抗体,细胞因子佐剂组淋巴细胞增殖水平显著高于铝佐剂组,为新型乙型肝炎疫苗和治疗性乙型肝炎疫苗的研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 乙型肝炎pres2 S抗原 乙型肝炎疫苗 体液免疫 细胞免疫 佐剂
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