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Regucalcin在肝、肾细胞中的作用 被引量：1
1
作者 徐洪 赵涵芳 《诊断学理论与实践》 2006年第2期172-174,共3页
关键词 肝脏细胞 肾皮质细胞 regucalcin
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人regucalcin cDNA高表达重组质粒的构建及其在原核细胞中的表达
2
作者 徐洪 胡亮 +2 位作者 倪培华 吴洁敏 赵涵芳 《检验医学》 CAS 北大核心 2006年第4期328-332,共5页
目的原核表达获得大量人regucalc in(RGN)蛋白。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)中扩增RGN全长cDNA,将扩增的产物连接于测序载体pMD18-T,测序鉴定准确后,进行酶切,将正确的RGN全长cDNA与原核表... 目的原核表达获得大量人regucalc in(RGN)蛋白。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)中扩增RGN全长cDNA,将扩增的产物连接于测序载体pMD18-T,测序鉴定准确后,进行酶切,将正确的RGN全长cDNA与原核表达载体pET42b(+)构建成重组质粒pET42b(+)-RGN。将pET42b(+)-RGN先转化入大肠杆菌DH5α,提取质粒经双酶切鉴定正确后,再转化入表达宿主大肠杆菌DE3菌株。对转化菌株进行诱导、破菌,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹分析,鉴定RGN融合蛋白质表达的正确性。RGN重组融合蛋白经N i2+亲和层析纯化,达电泳纯。结果构建了重组质粒pET42b(+)-RGN并获得高效表达,RGN重组融合蛋白经异丙基硫化-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后以包涵体形式存在,表达的蛋白质相对分子质量为34 000。结论人RGN蛋白在pET42b(+)原核表达载体可获得高效表达,为进一步了解RGN蛋白质的结构、功能及其抗体的制备等奠定了基础。 展开更多
关键词 regucalcin 克隆 原核表达
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人Regucalcin cDNA真核表达载体的构建及表达
3
作者 徐洪 胡亮 +2 位作者 倪培华 吴洁敏 赵涵芳 《中国实验诊断学》 2006年第6期624-628,共5页
目的构建人regucalcin(RGN)全长cDNA的真核表达载体,观察其在人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)中表达。方法用RT-PCR技术扩增获得人HK-2细胞RGN全长cNDA,将扩增的产物连接入pMD18-T克隆载体上,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提... 目的构建人regucalcin(RGN)全长cDNA的真核表达载体,观察其在人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)中表达。方法用RT-PCR技术扩增获得人HK-2细胞RGN全长cNDA,将扩增的产物连接入pMD18-T克隆载体上,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确,再用双酶切方法将RGN基因定向连接到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-RGN,将pEGFP-RGN转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确,再用双酶切方法将RGN基因与EGFP定向连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)-zeocin中,构建真核表达pcDNA3.1-RGN-EGFP-zeo的重组体,将pcDNA3.1-RGN-EGFP-zeo转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确,用脂质体转染入HK-2细胞,荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察pcDNA3.1-RGN-EGFP-zeo表达情况。结果RGN cDNA全长是897 bp,以此构建的pcDNA3.1-RGN-EGFP-zeo真核表达载体,经DNA测序与GenBank中的人RGN cDNA序列一致。荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察到pcDNA3.1-RGN-EGFP-zeo转染的细胞中有绿色荧光蛋白的表达。结论本实验成功构建了pcDNA3.1-RGN-EGFP-zeo真核表达质粒,并在HK-2细胞中表达。 展开更多
关键词 regucalcin 真核表达载体 转染
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Regucalcin在大鼠肾草酸钙结石形成过程中的表达 被引量：1
4
作者 杨东 蓝创歆 +5 位作者 陈康 陈东 曾滔 李舒珏 段小鹿 吴文起 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1640-1642,共3页
目的观察Regucalcin（RGN）在草酸钙结石大鼠肾脏和肾小管上皮细胞中的表达特点，探讨其在草酸钙结石形成过程中的作用及机制。方法采用1%乙二醇＋1%氯化铵自由饮用的传统方法构建大鼠肾草酸钙结石模型，通过偏光显微镜观察大鼠肾组织... 目的观察Regucalcin（RGN）在草酸钙结石大鼠肾脏和肾小管上皮细胞中的表达特点，探讨其在草酸钙结石形成过程中的作用及机制。方法采用1%乙二醇＋1%氯化铵自由饮用的传统方法构建大鼠肾草酸钙结石模型，通过偏光显微镜观察大鼠肾组织的晶体，并使用Western blot、实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、免疫组织化学（IHC）法检测RGN在草酸钙结石模型大鼠中的表达变化。使用不同浓度的一水草酸钙晶体（COM）刺激大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E，通过Western blot和FQ-PCR方法检测RGN的表达。结果偏光显微镜观察显示：造模组全部大鼠肾组织切片肾小管内均有草酸钙晶体沉积，而对照组大鼠肾脏未发现晶体。Western blot法检测大鼠肾皮质RGN的表达发现，造模组大鼠肾组织RGN表达明显低于正常对照组，其mRNA的相对表达量为6%（t＝21.459，P＝0.000）；IHC法也同样显示造模组大鼠肾皮质RGN的表达降低，而且以晶体黏附处的肾小管上皮细胞降低尤为明显。使用COM处理大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E后，检测RGN的表达发现，在不同浓度（0、25、50、100 μg/cm2）COM晶体处理后，RGN的表达均明显降低。COM 100 μg/cm2组mRNA的相对表达量为47.4%（t＝4.285，P＝0.013）。结论RGN有可能参与了大鼠肾草酸钙结石的形成和进展的调控。 展开更多
关键词 草酸钙结石 regucalcin 肾小管上皮细胞 损伤与黏附
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融合蛋白表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量：1
5
作者 李莉 高秀来 +2 位作者 宋一志 陆涛 景鹏 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第6期788-791,共4页
目的构建人类regucalc in重组原核表达载体。方法用RT-PCR的方法从人类肝癌细胞系HepG2中扩增出regucalc in基因cDNA序列,应用T克隆载体及pET-32 a(+)表达载体后,将质粒转化进入原核表达菌株进行表达。结果表达产物经SDS-PAGE电泳分析后... 目的构建人类regucalc in重组原核表达载体。方法用RT-PCR的方法从人类肝癌细胞系HepG2中扩增出regucalc in基因cDNA序列,应用T克隆载体及pET-32 a(+)表达载体后,将质粒转化进入原核表达菌株进行表达。结果表达产物经SDS-PAGE电泳分析后,在45 000处有一明显表达条带,与理论结果相符。结论成功构建融合表达载体Pet-regucalc in,并在原核细胞中表达出人类regucalc in-H is融合蛋白。 展开更多
关键词 RT—PCR regucalcin 基因表达 融合蛋白
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RT-PCR法检测污染物甲基汞对调钙质基因表达的抑制
6
作者 龚萍 吴琼 +1 位作者 张捷 龚有钰 《武汉大学学报（工学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期27-29,33,共4页
应用RT -PCR方法 ,通过用不同浓度的甲基汞对Hep2B细胞株进行不同时间长短的处理 ,检测其调钙质的mRNA表达水平 ,发现微量的甲基汞处理就可以引起细胞株细胞损伤 ,同时抑制调钙质mRNA的表达 ,进一步证实了在肝脏损伤的病理状态下调钙质... 应用RT -PCR方法 ,通过用不同浓度的甲基汞对Hep2B细胞株进行不同时间长短的处理 ,检测其调钙质的mRNA表达水平 ,发现微量的甲基汞处理就可以引起细胞株细胞损伤 ,同时抑制调钙质mRNA的表达 ,进一步证实了在肝脏损伤的病理状态下调钙质基因的表达减少 ,从而为检测环境中甲基汞的含量提供了一个可能的分子生物学手段 . 展开更多
关键词 甲基汞 RT-PCR法 Hep2B细胞株 调钙质 污染物
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谷胱甘肽复方注射液对免疫性肝纤维化大鼠肝组织钙调素表达的影响 被引量：2
7
作者 刘俊英 刘洋 +8 位作者 李涵 时朝辉 梁祖兰 王玲慧 张钰 赵媛 范玉梅 吴斌 于彦章 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期628-633,共6页
目的探讨免疫性肝纤维化大鼠肝组织中抗衰老标志蛋白钙调素(RGN)的表达变化,并观察谷胱甘肽复方注射液(CGII)对其的影响。方法应用猪血清腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,适时给予CGII干预。取大鼠肝组织行HE及Masson染色。荧光定量PCR和... 目的探讨免疫性肝纤维化大鼠肝组织中抗衰老标志蛋白钙调素(RGN)的表达变化,并观察谷胱甘肽复方注射液(CGII)对其的影响。方法应用猪血清腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,适时给予CGII干预。取大鼠肝组织行HE及Masson染色。荧光定量PCR和免疫组化检测肝组织中RGNmRNA及蛋白质表达。计量资料采用单因素方差分析,两两比较采用LDS检验,病理学半定量结果采用秩和检验分析。结果纤维化组大鼠肝组织RGNmRNA相对表达量为82.23±15.21及蛋白表达相对表达量为12.52±3.23,较正常组RGNmRNA(176.39±11.35)及蛋白水平(59.23±9.13)明显降低(P值均<0.01);CGII干预后大鼠肝纤维化程度较纤维化组明显减轻,随着肝纤维化程度减轻,干预组RGNmRNA和蛋白相对表达量分别为168.78±21.31、46.42±4.71与纤维化组及自然恢复组比较表达均增加,差异有统计学意义(P值均<0.01);而自然恢复组大鼠肝组织RGN的mRNA和蛋白相对表达量分别为86.23±17.16、14.34±5.16,均高于模型组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论RGN在猪血清所致大鼠肝纤维化肝组织表达降低,而CGII干预后随着纤维化程度的减轻,RGN的表达增加,提示该蛋白可能在肝纤维化发生发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 大鼠 免疫性肝纤维化 钙调素 谷胱甘肽复方注射液
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钙调素在肝脏疾病中的作用 被引量：2
8
作者 王伯栋 梁振兴 +7 位作者 蒋帅 王甲义 赵磊 胡伟 辛振龙 张静波 杨阳 屈延 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期67-70,共4页
钙调素（Regucalcin）是一种多功能蛋白,参与维持细胞内钙稳态,调节多种酶活性,抑制氧化应激以及调控细胞增殖凋亡.钙调素在肝脏中含量较高.在多种肝脏疾病中,钙调素基因及其蛋白表达水平发生改变.这些改变在肝脏疾病的发生发展中起到... 钙调素（Regucalcin）是一种多功能蛋白,参与维持细胞内钙稳态,调节多种酶活性,抑制氧化应激以及调控细胞增殖凋亡.钙调素在肝脏中含量较高.在多种肝脏疾病中,钙调素基因及其蛋白表达水平发生改变.这些改变在肝脏疾病的发生发展中起到重要作用.本文就钙调素在肝脏疾病中的作用进行综述. 展开更多
关键词 钙调素 肝损害 非酒精性脂肪性肝病 肝纤维化 肝癌
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