目的 探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)加重神经性疼痛的作用机制。方法 在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活的BV-2细胞中干扰HMGB1表达,检测细胞凋亡、炎症因子分泌,以及JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平...目的 探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)加重神经性疼痛的作用机制。方法 在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活的BV-2细胞中干扰HMGB1表达,检测细胞凋亡、炎症因子分泌,以及JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平。检测LPS激活的BV-2细胞中JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平,并引入JAK2抑制剂探究JAK2/STAT3轴阻断对细胞的影响。建立HMGB1敲低的脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)大鼠模型,检测脊髓组织中通路蛋白表达和炎症因子分泌,评估SNL大鼠的机械痛敏阈值和热痛敏阈值。结果 LPS处理的BV-2细胞中HMGB1表达上调,干扰HMGB1表达显著抑制细胞凋亡和炎症反应。LPS处理激活JAK2/STAT3轴,且JAK2/STAT3轴激活是由HMGB1表达上调介导的。在SNL大鼠模型中,脊髓组织中HMGB1和通路蛋白表达增加,炎症反应加重,机械痛敏阈值和热痛敏阈值均降低。通过敲低HMGB1表达,观察到HMGB1和通路蛋白的表达下调,炎症减轻,神经性疼痛缓解。结论 HMGB1通过激活JAK2/STAT3轴加重神经性疼痛。展开更多
Objective: To investigate the regulation effect of protein kinase A on IL-6-induced STAT3 activation in myeloma cells. Methods: Two human myeloma cell lines-Sko-007 and U266 were pretreated with Forskolin, a protein k...Objective: To investigate the regulation effect of protein kinase A on IL-6-induced STAT3 activation in myeloma cells. Methods: Two human myeloma cell lines-Sko-007 and U266 were pretreated with Forskolin, a protein kinase A antagonist, and then stimulated by IL-6. The activation state of STAT3 in these two cells were examined by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Results: Although PKA pathway itself doesn抰 participate in IL-6 signal transduction in Sko-007 and U266 cells, activation of protein kinase A can inhibit IL-6-induced STAT3 activation in these two cell lines. Conclusion: There exists an inhibitory effect of protein kinase A on STAT3 activation in human myeloma cells treated by IL-6.展开更多
STAT3对细胞的生长、存活、增殖以及机体的发育都具有重要的作用. STAT3基因的失活可以引起多种疾病,而STAT3基因的过度激活又可以引发很多癌症. 为了对STAT3信号通路的调控做进一步的研究,采用酵母双杂交的方法,以STAT3蛋白全长作为诱...STAT3对细胞的生长、存活、增殖以及机体的发育都具有重要的作用. STAT3基因的失活可以引起多种疾病,而STAT3基因的过度激活又可以引发很多癌症. 为了对STAT3信号通路的调控做进一步的研究,采用酵母双杂交的方法,以STAT3蛋白全长作为诱饵蛋白,筛选了小鼠7天的胚胎文库. 得到了与STAT3相互作用的一个功能未知的蛋白质,将其命名为SIPAR (Stat3 interacting protein as a repressor). 免疫染色的实验结果表明,SIPAR是一种在核内分布为主,细胞质中也有少许分布的蛋白质. 荧光酶活性测定结果表明SIPAR对STAT3的转录活性具有抑制作用. 斑马鱼注射实验说明SIPAR基因表达严重影响了斑马鱼的正常发育.展开更多
为了探讨人单核细胞中,人单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)诱导信号转导激活转录因子3(signal transducers and activators of transcription 3,Stat3)磷酸化以及导致磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-a...为了探讨人单核细胞中,人单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)诱导信号转导激活转录因子3(signal transducers and activators of transcription 3,Stat3)磷酸化以及导致磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路途径在其中的作用,首先采用针对Stat3 705位酪氨酸和727位丝氨酸特异性抗体进行磷酸化时间和剂量的检测,发现MCP-1仅导致Stat3丝氨酸磷酸化并且呈剂量和时间依赖性,而酪氨酸并没有磷酸化.在此基础上,采用不同时间点的方法对MAPK途径成员细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38、JNK进行检测,发现MCP-1在人单核细胞中仅诱导ERK、p38活化并呈时间依赖性,而不能诱导激活JNK途径.为了确证ERK、p38途径在人单核细胞中参与MCP-1诱导的Stat3丝氨酸磷酸化,采用ERK、p38途径活化的小分子抑制化合物不同浓度处理单核细胞,对Stat3丝氨酸磷酸化检测发现,MCP-1通过ERK、p38两条途径参与Stat3丝氨酸磷酸化.这些结果表明,MCP-1在人单核细胞中仅诱导Stat3丝氨酸磷酸化而不是酪氨酸磷酸化;MAPK成员中ERK、p38两条途径均参与MCP-1诱导的Stat3丝氨酸磷酸化,而JNK途径没有活化参与Stat3丝氨酸磷酸化.展开更多
探讨信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在体内是否存在相互作用,并观察其作用如何影响肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis...探讨信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在体内是否存在相互作用,并观察其作用如何影响肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的转录活性.采用聚合酶链反应技术,从人Flag-p38和Flag-细胞外信号蛋白调节激酶2(extracellular-signal regulated protein kinase 2,ERK2)中扩增出p38和ERK2基因,将其插入载体pcDNA3-HA中;用Westernblot方法在293T细胞中检测其表达后应用免疫共沉淀技术检测STAT3蛋白与p38/ERK2蛋白之间是否存在相互作用.然后应用报告基因技术检测这种相互作用如何影响TNF-α的转录表达,并在应用RNA干扰技术将STAT3通路抑制后,观察TNF-α启动子转录活性如何变化.酶切和测序结果表明,扩增的p38和ERK2基因序列正确,大小为1080bp,在293T细胞中正确表达大小约40ku的p38和ERK2蛋白.免疫共沉淀实验结果证实,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白在体内相互作用.下游基因TNF-α荧光素酶活性实验显示,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白复合物协同升高TNF-α的活性,应用STAT3的干扰RNA后其活性则明显下降.该研究表明,STAT3和p38/ERK2蛋白在体内存在相互作用,STAT3与p38、STAT3与ERK2均对TNF-α的表达发挥协同效应,在阻断STAT3通路后,STAT3与p38、STAT3与ERK2对TNF-α表达的协同效应将明显降低.展开更多
基金This work was supported by the national natural Science Foundation of China (No. 39925019)
文摘Objective: To investigate the regulation effect of protein kinase A on IL-6-induced STAT3 activation in myeloma cells. Methods: Two human myeloma cell lines-Sko-007 and U266 were pretreated with Forskolin, a protein kinase A antagonist, and then stimulated by IL-6. The activation state of STAT3 in these two cells were examined by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Results: Although PKA pathway itself doesn抰 participate in IL-6 signal transduction in Sko-007 and U266 cells, activation of protein kinase A can inhibit IL-6-induced STAT3 activation in these two cell lines. Conclusion: There exists an inhibitory effect of protein kinase A on STAT3 activation in human myeloma cells treated by IL-6.
文摘STAT3对细胞的生长、存活、增殖以及机体的发育都具有重要的作用. STAT3基因的失活可以引起多种疾病,而STAT3基因的过度激活又可以引发很多癌症. 为了对STAT3信号通路的调控做进一步的研究,采用酵母双杂交的方法,以STAT3蛋白全长作为诱饵蛋白,筛选了小鼠7天的胚胎文库. 得到了与STAT3相互作用的一个功能未知的蛋白质,将其命名为SIPAR (Stat3 interacting protein as a repressor). 免疫染色的实验结果表明,SIPAR是一种在核内分布为主,细胞质中也有少许分布的蛋白质. 荧光酶活性测定结果表明SIPAR对STAT3的转录活性具有抑制作用. 斑马鱼注射实验说明SIPAR基因表达严重影响了斑马鱼的正常发育.
基金funding support from the National Natural Science Foundation of China(No.81473617)the Science and Technology Department of Hunan Province(No.2017SK50310)the Hunan Education Department’s Science&Research Project(No.16K066)。
文摘为了探讨人单核细胞中,人单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)诱导信号转导激活转录因子3(signal transducers and activators of transcription 3,Stat3)磷酸化以及导致磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路途径在其中的作用,首先采用针对Stat3 705位酪氨酸和727位丝氨酸特异性抗体进行磷酸化时间和剂量的检测,发现MCP-1仅导致Stat3丝氨酸磷酸化并且呈剂量和时间依赖性,而酪氨酸并没有磷酸化.在此基础上,采用不同时间点的方法对MAPK途径成员细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38、JNK进行检测,发现MCP-1在人单核细胞中仅诱导ERK、p38活化并呈时间依赖性,而不能诱导激活JNK途径.为了确证ERK、p38途径在人单核细胞中参与MCP-1诱导的Stat3丝氨酸磷酸化,采用ERK、p38途径活化的小分子抑制化合物不同浓度处理单核细胞,对Stat3丝氨酸磷酸化检测发现,MCP-1通过ERK、p38两条途径参与Stat3丝氨酸磷酸化.这些结果表明,MCP-1在人单核细胞中仅诱导Stat3丝氨酸磷酸化而不是酪氨酸磷酸化;MAPK成员中ERK、p38两条途径均参与MCP-1诱导的Stat3丝氨酸磷酸化,而JNK途径没有活化参与Stat3丝氨酸磷酸化.
文摘探讨信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在体内是否存在相互作用,并观察其作用如何影响肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的转录活性.采用聚合酶链反应技术,从人Flag-p38和Flag-细胞外信号蛋白调节激酶2(extracellular-signal regulated protein kinase 2,ERK2)中扩增出p38和ERK2基因,将其插入载体pcDNA3-HA中;用Westernblot方法在293T细胞中检测其表达后应用免疫共沉淀技术检测STAT3蛋白与p38/ERK2蛋白之间是否存在相互作用.然后应用报告基因技术检测这种相互作用如何影响TNF-α的转录表达,并在应用RNA干扰技术将STAT3通路抑制后,观察TNF-α启动子转录活性如何变化.酶切和测序结果表明,扩增的p38和ERK2基因序列正确,大小为1080bp,在293T细胞中正确表达大小约40ku的p38和ERK2蛋白.免疫共沉淀实验结果证实,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白在体内相互作用.下游基因TNF-α荧光素酶活性实验显示,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白复合物协同升高TNF-α的活性,应用STAT3的干扰RNA后其活性则明显下降.该研究表明,STAT3和p38/ERK2蛋白在体内存在相互作用,STAT3与p38、STAT3与ERK2均对TNF-α的表达发挥协同效应,在阻断STAT3通路后,STAT3与p38、STAT3与ERK2对TNF-α表达的协同效应将明显降低.
