去泛素化酶USP10通过稳定Smurf1抑制TGF-β/BMP信号通路

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作者 张新 李洪昌 +1 位作者 汪思应 张令强 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第4期760-769,共10页

目的 探究生理条件下去泛素化酶USP10调控的关键信号通路及分子机制。方法 利用GEO2R和Metascape对Usp10+/+和Usp10-/-新生小鼠肾组织基因芯片(GSE198574)差异表达基因和通路富集分析,使用免疫印迹实验和免疫组化技术检验核心转录因子... 目的 探究生理条件下去泛素化酶USP10调控的关键信号通路及分子机制。方法 利用GEO2R和Metascape对Usp10+/+和Usp10-/-新生小鼠肾组织基因芯片(GSE198574)差异表达基因和通路富集分析,使用免疫印迹实验和免疫组化技术检验核心转录因子的表达情况;进一步利用免疫印迹检测该信号通路,并通过基因芯片和免疫组化分析候选分子的表达情况;使用免疫共沉淀(Co-IP)和GST-pull down实验验证USP10与候选分子的相互作用,通过泛素化实验明确USP10对底物分子的调控机制;利用免疫印迹检测细胞增殖、凋亡相关蛋白p21、Cleaved-caspase 3的表达情况,使用CCK-8和克隆形成实验分析USP10对细胞增殖的影响。结果 Usp10-/-新生小鼠肾组织中TGF-β/BMP通路激活,USP10在小鼠体内缺失后导致Smad泛素相关因子1 (Smurf1)蛋白质水平降低,Smad1/5蛋白质水平上调,却不影响它们的转录水平;机制上,USP10与Smurf1存在相互作用,并依赖其去泛素化酶活性去除Smurf1多聚泛素化。Usp10敲除后促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达上调,并抑制细胞的增殖能力。结论 USP10通过去泛素化并稳定Smurf1,抑制TGF-β/BMP信号通路,从而维持小鼠组织器官和细胞增殖稳态。 展开更多

关键词 USP10 smurf1 Smad1/5 去泛素化 细胞增殖

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泛素连接酶SMURF1催化ADAR1的多聚泛素化修饰

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作者 周文淼 王红霞 +3 位作者 刘昆梅 刘菁 屈昱良 郭乐 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1630-1637,共8页

既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕... 既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕获并鉴定THP-1细胞中SMURF1的相互作用蛋白质集合物,发现在THP-1细胞中SMURF1可与222种蛋白质物理性结合,RNA腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)具有较高的肽段结合分数。构建SMURF1过表达载体并转染到HEK-293T细胞中,Co-IP和Western印迹检测验证外源性SMURF1与内源性ADAR1存在相互作用。qRT-PCR和Western印迹检测结果显示,在HEK-293T细胞中过表达SMURF1后ADAR 1 mRNA水平差异无统计学意义、蛋白质水平明显降低(P<0.05)。用放线菌酮(CHX)分别处理正常和过表达SMURF1的HEK-293T细胞,Western印迹检测显示,过表达SMURF1后ADAR1的半衰期缩短(P<0.05)。进一步在HEK-293T细胞中共转染泛素(Ub)过表达载体和SMURF1过表达载体,通过Co-IP和Western印迹检测结果证实,过表达SMURF1后ADAR1的多聚泛素化水平显著增加(P<0.05)。在蛋白酶体抑制剂(MG132)作用后,Western印迹检测结果表明,蛋白酶体降解途径受抑制后SMURF1对ADAR1的负调控作用减弱(P<0.05)。本研究表明,SMURF1可以与ADAR1相互作用,催化ADAR1的多聚泛素化修饰并介导其蛋白酶体途径降解,为探索SMURF1通过影响ADAR1蛋白质稳定性而具备的多种生物学功能提供理论基础。 展开更多

关键词 SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1 RNA腺苷脱氨酶1 泛素化 翻译后修饰

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脂溢性角化病皮损区Smurf1和Smurf2表达增强 被引量：4

3

作者 李颖 何威 +3 位作者 何云志 黄海 王亚丽 杨扬 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期911-914,共4页

目的探讨脂溢性角化病皮损区Smad泛素化调节因子1和2(Smad ubiquitination regulatory factor1 and 2,Smurf1,2)的表达及其意义。方法采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和免疫组织化学技术分别检测脂溢性... 目的探讨脂溢性角化病皮损区Smad泛素化调节因子1和2(Smad ubiquitination regulatory factor1 and 2,Smurf1,2)的表达及其意义。方法采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和免疫组织化学技术分别检测脂溢性角化病皮损和对照正常皮肤中Smurf1和2的表达情况。结果与对照正常皮肤相比,脂溢性角化病皮损中Smurf1和2表达水平上调。结论脂溢性角化病皮损中Smurf1和2的过度表达可干扰转化生长因子β(transfor-ming growth factor-β,TGF-β)信号转导通路,可能使TGF-β抑制上皮增生的作用不能有效发挥,促进了脂溢性角化病表皮的过度增生。 展开更多

关键词 脂溢性角化病 smurf1 Smuf2 转化生长因子Β 信号通路

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补肾填精中药对骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1信号转导蛋白表达影响的实验研究 被引量：5

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作者 邓洋洋 郑洪新 +2 位作者 林庶茹 蒋宁 孙鑫 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2011年第4期307-311,295,共6页

目的通过观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1的表达变化,探索骨质疏松症的发病机理。方法实验采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时应用补肾填精作用的纳米钙补肾填精中药低、高剂量组,对模型大鼠给药干预12周,用... 目的通过观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1的表达变化,探索骨质疏松症的发病机理。方法实验采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时应用补肾填精作用的纳米钙补肾填精中药低、高剂量组,对模型大鼠给药干预12周,用骨疏康颗粒剂、盖天力作为阳性对照组,以及正常对照组、假手术对照组和模型空白组,并与补脾中药补中益气汤作比较;免疫组化SABC法检测股骨中的Smurf1蛋白活性表达。结果与正常组相比较,模空组Smurf1阳性表达显著下降,P<0.01;用药12周后,与模空组相比较,各用药组均可上调其表达情况,P<0.01。结论骨组织中Smurf1阳性表达降低可能是骨质疏松症发生的机制之一,补肾填精中药可能通过改善和调控股骨中Smurf1的表达,而起到防治骨质疏松症的作用。 展开更多

关键词 骨质疏松症 免疫组化法 smurf1

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Smurf1调节因子在骨形态发生蛋白诱导骨生成中的作用 被引量：3

5

作者 袁恒锋 何崇儒 +1 位作者 高金巍 徐卫东 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期783-785,共3页

骨形态发生蛋白(BMP)是明确具有诱导成骨作用的生长因子。其通过结合靶细胞表面受体,活化细胞内一系列Sm ad蛋白,经Sm ad蛋白介导,将信号转导至细胞核内,在一系列辅助因子的作用下,启动成骨基因的表达。细胞内源性Smurf1对这一整个过程... 骨形态发生蛋白(BMP)是明确具有诱导成骨作用的生长因子。其通过结合靶细胞表面受体,活化细胞内一系列Sm ad蛋白,经Sm ad蛋白介导,将信号转导至细胞核内,在一系列辅助因子的作用下,启动成骨基因的表达。细胞内源性Smurf1对这一整个过程起抑制作用。本文就Smurf1调节因子在骨形态发生蛋白诱导骨生成中的作用做一综述。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白质类 SMAD蛋白质类 smurf1

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SMURF1、RUNX3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义 被引量：1

6

作者 郭小卫 权明明 +2 位作者 张卓妮 张伟峰 戴岳楚 《浙江医学》 CAS 2015年第18期1522-1525,共4页

目的探讨SMURF1、RUNX3蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其与患者临床病理特征的相关性。方法采用免疫组化SP法检测60例PTC组织及20例正常甲状腺组织中SMURF1、RUNX3蛋白的表达,分析两者在PTC与正常甲状腺组织中的表达差异及其与PT... 目的探讨SMURF1、RUNX3蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其与患者临床病理特征的相关性。方法采用免疫组化SP法检测60例PTC组织及20例正常甲状腺组织中SMURF1、RUNX3蛋白的表达,分析两者在PTC与正常甲状腺组织中的表达差异及其与PTC患者临床病理特征的相关性。结果 PTC组织中SMURF1蛋白阳性表达率高于正常甲状腺组织,而RUNX3阳性表达率低于正常甲状腺组织(均P<0.01);SMURF1、RUNX3蛋白的表达与PTC患者的TNM分期、病理分级及淋巴结转移均相关(均P<0.05),而与患者性别、年龄及肿瘤大小等因素均无关(均P>0.05)。PTC组织中SMURE1的蛋白表达与RUNX3蛋白表达呈负相关(r=-0.564,P<0.05)。结论 SMURF1、RUNX3蛋白在PTC组织中表达异常,并呈负相关,提示两者可能相互作用,共同促进PTC发生、发展,两者可作为PTC分类和分期的辅助指标。 展开更多

关键词 甲状腺乳头状癌 smurf1 RUNX3

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SMURF1蛋白在人胃癌组织中的表达及其临床意义 被引量：3

7

作者 李莉 《海南医学院学报》 CAS 2014年第9期1167-1169,共3页

目的:研究SMAD泛素化调节因子1(SMURF1)蛋白在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测68例胃癌及对应癌旁组织中SMURF1蛋白表达情况,分析SMURF1蛋白表达与胃癌不同临床病理特征的相关性。结果:SMURF1蛋白在胃癌组织... 目的:研究SMAD泛素化调节因子1(SMURF1)蛋白在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测68例胃癌及对应癌旁组织中SMURF1蛋白表达情况,分析SMURF1蛋白表达与胃癌不同临床病理特征的相关性。结果:SMURF1蛋白在胃癌组织中的阳性率为76.5%(52/68),而在对应癌旁组织中的阳性率仅为26.5%(18/68),差异具有统计学意义(χ2=34.029,P=0.000)。胃癌组织中SMURF1蛋白表达与浸润深度(χ2=5.461,P=0.019)、淋巴结转移(χ2=9.141,P=0.002)和肿瘤分期(χ2=8.380,P=0.004)显著相关,而与性别、年龄和肿瘤大小无明显相关。结论:胃癌组织中SMURF1蛋白异常高表达,其高表达与胃癌侵袭转移密切相关,提示SMURF1在胃癌发生、发展中可能发挥重要作用。 展开更多

关键词 SMAD泛素化调节因子1(smurf1) 胃癌 侵袭

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miRNA-125a靶向调控SMURF1对结肠癌生物学行为的影响 被引量：1

8

作者 邢旻琰 何美文 +1 位作者 余佳泽 张超 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2019年第2期138-143,共6页

目的探讨miRNA-125a通过对靶基因SMURF1的调控在结肠癌中的影响。方法 qRT-PCR检测结肠癌患者血清中miRNA-125a和SMURF1表达水平并分析其与结肠癌相关临床指标的相关性;microRNA靶基因数据库预测miRNA-125a靶基因SMURF1并使用荧光素酶... 目的探讨miRNA-125a通过对靶基因SMURF1的调控在结肠癌中的影响。方法 qRT-PCR检测结肠癌患者血清中miRNA-125a和SMURF1表达水平并分析其与结肠癌相关临床指标的相关性;microRNA靶基因数据库预测miRNA-125a靶基因SMURF1并使用荧光素酶报告基因法验证其结合;qRTPCR和Western blot检测miRNA-125a模拟物对SMURF1mRNA及蛋白表达的影响;HE染色检测结肠癌组织中SMURF1的表达;CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞法检测miRNA-125a模拟物和SMURF1对SW480细胞增殖、迁移及周期的影响;构建结肠癌肿瘤异种移植小鼠模型,采用称重及PCNA染色检测miRNA-125a模拟物对小鼠体内肿瘤生长的影响。结果结肠癌患者血清中miRNA-125a表达水平与结肠癌相关临床指标呈负相关性,SMURF1表达水平与结肠癌相关临床指标呈正相关性。结肠癌组织中miRNA-125a的表达水平显著降低,miRNA-125a模拟物可抑制SMURF1的mRNA翻译及蛋白水平。结肠癌肿瘤组织中SMURF1表达水平明显升高,miRNA-125a模拟物可以抑制SW480细胞的增殖、迁移和S期细胞周期的聚集,然而这种抑制效果会因SMURF1表达升高而减弱。miRNA-125a模拟物抑制小鼠体内结肠癌生长及SMURF1的表达。结论 miRNA-125a通过下调SMURF1的表达在结肠癌的发展过程中发挥抑制作用,具有成为结肠癌诊断及治疗靶点的潜力。 展开更多

关键词 结肠癌 miRNA-125a smurf1

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Smurf1基因靶向RNAi慢病毒载体的构建及转染

9

作者 袁恒锋 何崇儒 +1 位作者 高金巍 徐卫东 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1147-1150,共4页

目的构建Smad泛素调节因子1(Smurf1)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,观察其转染骨肉瘤U20S细胞后对Smurf1基因表达的抑制作用,为后续研究奠定基础。方法构建Smurf1基因过表达质粒,同时针对Smurf1基因序列设计合成4条RNAi片段并构建R... 目的构建Smad泛素调节因子1(Smurf1)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,观察其转染骨肉瘤U20S细胞后对Smurf1基因表达的抑制作用,为后续研究奠定基础。方法构建Smurf1基因过表达质粒,同时针对Smurf1基因序列设计合成4条RNAi片段并构建RNAi慢病毒载体。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western印迹法进行外源筛靶,筛靶出成功的干扰质粒PSC2939。用慢病毒包装PSC2939后感染U20S细胞,进行内源验证,荧光定量PCR和Western印迹检测U20S细胞中Smurf1mRNA及蛋白的表达。结果经PCR及测序证实,Smurf1基因过表达载体及4种干扰载体均成功构建;Western印迹外源筛靶显示,PSC2939干扰载体能有效敲减目的基因的表达;慢病毒包装后的PSC2939干扰载体能有效抑制U20S细胞中Smurf1蛋白的表达,对Smurf1mRNA的抑制率达到60%以上。结论成功构建可供感染的Smurf1基因RNAi慢病毒载体,为进一步研究Smurf1基因在骨肉瘤细胞中的作用提供了有效的实验工具。 展开更多

关键词 RNA干扰 smurf1 骨肉瘤 慢病毒属

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慢病毒介导稳定敲低Smurf1细胞株的构建及对细胞迁移的影响

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作者 韦荣飞 郭静 +3 位作者 李梦媛 朱瑞敏 杨星九 高苒 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期46-51,共6页

目的构建慢病毒介导稳定敲低Smurf1的HeLa和A549细胞株并检测敲低Smurf1细胞迁移的影响。方法将包装好的Smurf1敲低慢病毒感染HeLa和A549细胞,7 d后进行嘌呤霉素抗性筛选阳性细胞,Western blot和qPCR检测敲低效果,并进行Transwell检测Sm... 目的构建慢病毒介导稳定敲低Smurf1的HeLa和A549细胞株并检测敲低Smurf1细胞迁移的影响。方法将包装好的Smurf1敲低慢病毒感染HeLa和A549细胞,7 d后进行嘌呤霉素抗性筛选阳性细胞,Western blot和qPCR检测敲低效果,并进行Transwell检测Smurf1敲低对细胞迁移的影响。结果利用干扰慢病毒系统成功构建稳定敲低Smurf1的HeLa和A549细胞株,稳定敲低Smurf1抑制细胞的迁移速率。结论敲低Smurf1抑制细胞迁移。 展开更多

关键词 smurf1 慢病毒 RNA干扰 细胞迁移

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miR-367-3p靶向SMURF1抑制BCG介导的巨噬细胞凋亡和自噬 被引量：3

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作者 姬文兰 王启源 +2 位作者 虞秀锋 胡萍 王亚梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期2195-2199,共5页

目的:本研究旨在探讨miR-367-3p对BCG介导的细胞凋亡和自噬途径的调控的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,RT-PCR检测miR-367-3p与SMURF1mRNA的表达;Westernblot检测SMURF1、凋亡相关蛋白及自... 目的:本研究旨在探讨miR-367-3p对BCG介导的细胞凋亡和自噬途径的调控的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,RT-PCR检测miR-367-3p与SMURF1mRNA的表达;Westernblot检测SMURF1、凋亡相关蛋白及自噬相关蛋白表达水平;菌落形成单位(CFU)计数检测BCG生存率;运用ELISA技术检测巨噬细胞凋亡率;双荧光素酶报告系统、RT-PCR及Westernblot法验证miR-367-3p与SMURF1之间的靶向调控关系。结果:BCG感染诱导巨噬细胞RAW246.7中miR-367-3p高表达,并呈时间依赖性。此外,下调miR-367-3p明显降低BCG感染的巨噬细胞的存活率,并促进巨噬细胞凋亡,同时下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达且上调促凋亡蛋白Bax的表达水平。另外,抑制miR-367-3p表达明显增加巨噬细胞中LC3-Ⅱ表达水平,同时降低p62的表达量,从而加强细胞的自噬水平。生物信息学分析显示SMURF1是miR-367-3p的靶基因。双荧光素酶报告系统、RT-PCR及Westernblot结果证实miR-367-3p可靶向作用于SMURF1-3′-UTR并负调控其表达。结论:下调miR-367-3p通过靶向调控SMURF1可促进巨噬细胞凋亡和自噬进程,进而介导了BCG的免疫逃逸从而抑制胞内BCG的生存,提示miR-367-3p有望成为结核感染的诊断标志物和治疗性疫苗的靶标,可为结核病的基因诊断和治疗提供参考。 展开更多

关键词 miR-367-3p 自噬 凋亡 smurf1

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Smurf1通过抑制LKB1的多聚泛素化而调控其蛋白稳定性 被引量：1

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作者 袁志 马林强 +2 位作者 程志 梁森 黄慧哲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1485-1491,共7页

目的:为了探寻肝脏激酶B1(liver kinase B1,LKB1)的上游调控分子,并研究其对LKB1的影响。方法:首先,利用UbiBrowser数据库预测LKB1可能的上游调控分子,并根据评分筛选出可能对LKB1具有调控作用的Smurf1基因。然后,构建Smurf1和LKB1相关... 目的:为了探寻肝脏激酶B1(liver kinase B1,LKB1)的上游调控分子,并研究其对LKB1的影响。方法:首先,利用UbiBrowser数据库预测LKB1可能的上游调控分子,并根据评分筛选出可能对LKB1具有调控作用的Smurf1基因。然后,构建Smurf1和LKB1相关过表达质粒,并转染HEK293T细胞,通过Western blot检测LKB1蛋白质表达的变化。最后,运用荧光定量PCR(qPCR)、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)探索Smurf1调控LKB1可能的分子机制。结果:①成功构建LKB1和Smurf1相关过表达质粒。②在HEK293T细胞中过表达0、0.5、1、2μg的野生型Smurf1时其对应的LKB1蛋白相对表达量分别为0.0262±0.0007、0.0727±0.0003、0.1301±0.0013、0.4315±0.0010。经单因素方差分析,其结果为F=79636.433,P=0.000。与0μg对照组相比,进一步采用LSD-t法分析,0.5、1、2μg各组P值分别为0.000、0.000和0.000。③在HEK293T细胞中过表达0、0.5、1、2μg的突变型Smurf1时其对应的LKB1的蛋白相对表达量分别为0.0180±0.0001、0.0530±0.0004、0.1250±0.0010、0.2004±0.0017。经单因素方差分析,其结果为F=12887.993,P=0.000。与0μg对照组相比,进一步采用LSD-t法分析,0.5、1、2μg各组P值分别为0.000、0.000和0.000。④以GAPDH为内参,未过表达Smurf1组和过表达Smurf1组中,LKB1的相对mRNA表达水平分别为1.0851±0.4125、2.3982±1.7669。经独立样本t检验统计分析,P=0.257。⑤以β-actin为内参,未经Smurf1处理组、野生型Smurf1(WT)处理组、突变型Smurf1(C699A)处理组中LKB1的相对泛素化水平分别为1.8238±0.0278、0.0881±0.0051、0.2127±0.0062。经单因素方差分析,其结果为F=6721.953,P=0.000。与未经Smurf1处理组相比,进一步采用LSD-t法分析,野生型Smurf1组和突变型Smurf1组各组P值分别为0.000和0.000。结论:这些结果表明Smurf1通过降低LKB1的多聚泛素化从而参与其蛋白稳定性的调节。 展开更多

关键词 smurf1 LKB1 多聚泛素化 稳定性

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补肾活血方对骨质疏松症大鼠Smurf1信号转导蛋白的影响 被引量：2

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作者 石树培 陈鹏 +5 位作者 林海仙 刘蔚楠 朱玮 韩海 郑春盛 杨直 《福建中医药》 2019年第3期38-40,共3页

目的通过观察摘除卵巢所致骨质疏松症模型中肾脏组织的Smurf1蛋白表达量的变化,研究补肾活血方治疗骨质疏松症的作用机制。方法采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法制备骨质疏松症的模型,应用补肾活血方干预模型大鼠,以戊酸雌二醇作为阳性... 目的通过观察摘除卵巢所致骨质疏松症模型中肾脏组织的Smurf1蛋白表达量的变化,研究补肾活血方治疗骨质疏松症的作用机制。方法采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法制备骨质疏松症的模型,应用补肾活血方干预模型大鼠,以戊酸雌二醇作为阳性对照组,以正常大鼠及假手术组作为标准的对照组,观察各组大鼠肾脏组织中的Smurf1 mRNA和蛋白表达变化。结果空白模型组中Smurf1 mRNA及蛋白的表达较空白组和假手术组显著降低(P<0.01);治疗12周后,各用药组Smurf1 mRNA及蛋白表达均较空白模型组显著上调(P<0.01)。结论补肾活血方可能通过调控雌性大鼠中Smurf1 mRNA及蛋白的表达,对骨质疏松症起到防治的作用。 展开更多

关键词 骨质疏松症 补肾活血 smurf1

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去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨、肾、下丘脑中Smurf1信号转导蛋白的活性变化研究 被引量：6

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作者 邓洋洋 孙鑫 +2 位作者 李佳 尚德阳 郑洪新 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期574-578,共5页

目的:观察去卵巢骨质疏松症(OP)模型大鼠股骨、肾、下丘脑中Smurf1在细胞中的定位和活性变化,探讨肾虚OP病机的分子生物学机制。方法:实验采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚OP模型,同时应用纳米钙补肾中药低、高剂量,对模型大鼠... 目的:观察去卵巢骨质疏松症(OP)模型大鼠股骨、肾、下丘脑中Smurf1在细胞中的定位和活性变化,探讨肾虚OP病机的分子生物学机制。方法:实验采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚OP模型,同时应用纳米钙补肾中药低、高剂量,对模型大鼠灌胃干预12周,用骨疏康颗粒剂、盖天力、补中益气汤干预模型大鼠作为阳性对照组,以及正常组、假手术对照组和模型组;免疫组化SABC法检测股骨、肾、下丘脑中的Smurf1蛋白活性表达。结果:Smurf1在股骨中的表达结果:与正常组比较,模型组表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,各用药组可上调其表达,其中补肾中药低、高剂量组、补中益气汤组有显著差异(P<0.01)。在肾中表达的结果:与正常组比较,模型组表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,各用药组均可上调其表达情况(P<0.01)。在下丘脑中的表达结果:与正常组比较,模型组表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,各用药组均可下调其表达情况(P<0.01)。结论:肾虚OP模型大鼠股骨、肾中Smurf1的表达降低,下丘脑中表达水平升高,可能是肾虚OP发生的机制之一。纳米钙补肾中药可能通过改善和调控股骨、肾、下丘脑中Smurf1表达,而起到防治原发性OP的作用。 展开更多

关键词 骨质疏松症 补肾 smurf1 纳米钙

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泛素连接酶Smurf1促进Smurf2的Nedd化修饰

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作者 刘超 李海文 +2 位作者 韦荣飞 谢萍 张令强 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期86-89,共4页

目的探讨泛素连接酶Smad泛素化相关因子2(Smad ubiquitination-related factor 2,Smurf2)Nedd化修饰的机制。方法梯度过表达Nedd8检测Smuff2的蛋白水平变化,免疫共沉淀(IP)和Western印迹分析Smurf2的Nedd化修饰,GST融合蛋白沉降技术(GST... 目的探讨泛素连接酶Smad泛素化相关因子2(Smad ubiquitination-related factor 2,Smurf2)Nedd化修饰的机制。方法梯度过表达Nedd8检测Smuff2的蛋白水平变化,免疫共沉淀(IP)和Western印迹分析Smurf2的Nedd化修饰,GST融合蛋白沉降技术(GST-pulldown)验证相互作用,分析Smurf1 C426A基因敲入(knock in)小鼠体内Smurf2在淋巴、脾、肝和肺组织的蛋白表达水平。结果 Smurf2可发生Nedd化修饰,过表达Nedd8可导致Smurf2蛋白水平下调,Smurf1和Smurf2能相互作用,且Smurf1可使Smurf2的Nedd化修饰增强。在Smurf1 C426A基因敲入小鼠的组织细胞中Smurf2蛋白水平上调。结论 Smurf1能促进Smurf2的Nedd化修饰。 展开更多

关键词 泛素蛋白连接酶类 泛素 免疫沉淀法 smurf1 SMURF2 Nedd8 nedd化

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泛素连接酶Smurf1与接头蛋白TRAF1相互作用并介导其泛素化降解 被引量：1

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作者 奚慎立 卢克峰 +1 位作者 张令强 贺福初 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2010年第6期501-504,共4页

目的研究泛素连接酶Smurf1与接头蛋白TRAF1之间的相互作用,并检测TRAF1蛋白水平是否受Smurf1调控。方法在HEK293T细胞中共表达TRAF1与Smurf1,通过免疫共沉淀测定二者结合,并检测与Smurf1共表达时TRAF1蛋白水平变化,最后用AP-1报告基因测... 目的研究泛素连接酶Smurf1与接头蛋白TRAF1之间的相互作用,并检测TRAF1蛋白水平是否受Smurf1调控。方法在HEK293T细胞中共表达TRAF1与Smurf1,通过免疫共沉淀测定二者结合,并检测与Smurf1共表达时TRAF1蛋白水平变化,最后用AP-1报告基因测定TRAF1功能是否受Smurf1调控。结果 TRAF1可以特异性地与Smurf1相互作用,其在细胞内的蛋白水平可以被Smurf1所降低,而且TRAF1在AP-1报告基因中的抑制功能可以被Smurf1逆转。结论 TRAF1与Smurf1相互作用导致TRAF1在细胞内的蛋白水平降低而且在AP-1通路中的抑制作用减弱。 展开更多

关键词 TRAF1 smurf1 蛋白质相互作用 蛋白质降解 泛素蛋白连接酶类 免疫沉淀法 受体 肿瘤坏死因子 Ⅰ型

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SMURF1对雌激素受体α阳性乳腺癌细胞增殖影响的分子机制及其对乳腺癌患者预后的影响 被引量：5

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作者 李洪波 匡黎 《医学分子生物学杂志》 CAS 2020年第1期79-84,共6页

目的探讨SMURF1对雌激素受体α阳性乳腺癌细胞增殖的影响及其分子机制,进一步探讨其表达水平与乳腺癌患者预后的相关性.方法首先采用体外实验探索SMURF1同ERα表达的关系,与此同时收集湖北医药学院附属国药东风医院2012年2月至2018年3... 目的探讨SMURF1对雌激素受体α阳性乳腺癌细胞增殖的影响及其分子机制,进一步探讨其表达水平与乳腺癌患者预后的相关性.方法首先采用体外实验探索SMURF1同ERα表达的关系,与此同时收集湖北医药学院附属国药东风医院2012年2月至2018年3月肿瘤科收治的89例乳腺癌病例的临床及病理资料进行回顾性分析.长期对患者进行随访,确定SUMRF1在乳腺癌患者中的表达与预后的相关性.结果体外研究表明敲低SMURF1将减少ERα阳性细胞在体外和体内的增殖,SMURF1敲低显著降低乳腺癌细胞中ERα靶基因的表达.远期随访无复发或转移的乳腺癌患者组织中SMURF1蛋白质、SMURF1 mR-NA水平均低于有复发的患者;无复发或转移的乳腺癌患者组织中ERα蛋白质水平显著低于有复发或转移的乳腺癌患者,两组差异有统计学意义(t=18.361,P<0.01);乳腺癌复发患者组织中SMURF1 mRNA表达水平显著高于未复发患者组织,差异具有显著统计学意义(t=13.512,P<0.001)同时相关性分析表明,SMURF1蛋白质水平的表达同ERα蛋白质水平具有正相关性(r=1.356,P<0.001).结论SUMRF1的表达有可能影响ERα的信号途径,同时与乳腺癌患者的预后有一定的相关性,SUMRF1的表达水平低者的生存期限更长.SMURF1和ERα信号在支持乳腺癌生长方面可能具有调控作用.靶向SMURF1可能是ERα阳性乳腺癌治疗的一种有前途的策略.同时SMURF1未来有可能作为预测患者预后的有效临床指标. 展开更多

关键词 smurf1 雌激素受体 乳腺癌

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Smurf1抑制剂对失重性骨丢失的预防作用研究 被引量：2

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作者 丁祎 唐丽 +2 位作者 王小璐 张令强 崔宇 《军事医学》 CAS 2021年第8期585-589,597,共6页

目的探讨Smurf1小分子抑制剂A01对失重性骨丢失的预防作用。方法采用体外实验,以BMP-2刺激成骨细胞1 h,加入A01继续培养24 h,RT-PCR检测成骨基因表达水平。体内实验利用尾吊小鼠模拟失重性骨丢失,将24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术... 目的探讨Smurf1小分子抑制剂A01对失重性骨丢失的预防作用。方法采用体外实验,以BMP-2刺激成骨细胞1 h,加入A01继续培养24 h,RT-PCR检测成骨基因表达水平。体内实验利用尾吊小鼠模拟失重性骨丢失,将24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组(Sham)、尾吊组(HLU-Control)、尾吊给予A0150 mg/kg组(HLUA01-50)和100 mg/kg组(HLU-A01-100),治疗5周后通过影像学(micro-CT)、生物力学、组织学染色及基因表达水平检测,评估灌胃A01对小鼠骨丢失的预防及药物作用机制。结果体外结果显示,2和10μmol/L A01均可提高成骨基因碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-1α)和骨钙素(OCN)的表达水平。体内实验结果显示,A01防止HLU小鼠骨量的丢失,改善骨强度,增加骨矿化沉积率,防止骨小梁数量减少,提高骨组织成骨基因的表达水平。结论Smurf1小分子抑制剂A01通过促进骨形成,有效预防失重性骨丢失。 展开更多

关键词 失重性骨丢失 BMP通路 smurf1抑制剂 成骨作用 基因表达 碱性磷酸酶 骨钙素 药物治疗

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补肾中药对肾虚骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的mRNA表达影响 被引量：16

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作者 尚德阳 邓洋洋 +1 位作者 孙鑫 郑洪新 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期3629-3633,共5页

目的:探讨摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒剂、... 目的:探讨摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究补肾中药防治疗效及其作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚骨质疏松症模型,采用具有补肾壮骨益精作用的补肾中药(高、低剂量)对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组。用RT-PCR法检测肾虚骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达。结果:与模空组相比较,补肾中药高、低剂量组可不同程度上调骨、肾组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达水平(P<0.01),并明显下调在下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达水平(P<0.01),其中,补肾中药高剂量组效果最佳(P<0.05,P<0.01)。结论:骨质疏松症的发生,可能与骨、肾、下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达的异常变化有关;补肾中药通过调控骨、肾、下丘脑组织中Smurf1/Smurf2的m RNA表达,对于骨质疏松症有一定的防治作用。 展开更多

关键词 骨质疏松症 肾虚 Smad泛素调节因子1 Smad泛素调节因子2 补肾中药

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HECT类泛素连接酶Smurf1自身调控机制的研究

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作者 沈珊 郭兴 +2 位作者 卢克峰 张令强 范礼斌 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期91-94,103,共5页

目的泛素连接酶Smurf1在胚胎发育、骨形成调控和细胞极性控制中具有重要的生理功能,但是其自身的泛素化降解机制尚不清楚。本论文拟研究Smurf1分子间自我调控的机制,以期揭示一种新的泛素连接酶调控方式。方法通过免疫共沉淀实验确证了S... 目的泛素连接酶Smurf1在胚胎发育、骨形成调控和细胞极性控制中具有重要的生理功能,但是其自身的泛素化降解机制尚不清楚。本论文拟研究Smurf1分子间自我调控的机制,以期揭示一种新的泛素连接酶调控方式。方法通过免疫共沉淀实验确证了Smurf1分子间存在相互作用,体内泛素化、半衰期及降解实验研究了Smurf1的自身泛素化降解。结果 Smurf1存在分子间相互作用和泛素化降解,这种分子间的相互调控是由C2和WW结构域介导。结论 Smurf1分子间存在自我泛素化修饰及蛋白酶体依赖的降解,是一种新的HECT类泛素连接酶的调控机制。 展开更多

关键词 泛素化 泛素蛋白连接酶类 HECT smurf1 活性调控 分子间相互作用 转染

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