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降低mRNA翻译起始区的稳定性原核非融合表达HAb18GEF 被引量：9
1
作者 张思河 邢金良 +1 位作者 姚西英 陈志南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期175-180,共6页
为在大肠杆菌中非融合表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段 (HAb18GEF) ,将HAb18GEF基因的cDNA插入原核表达载体pET2 1a +。通过计算机辅助设计 ,对重组的HAb18GEF pET2 1a +的mRNA翻译起始区 (TIR)的二级结构和密码子偏性同时进行预测。... 为在大肠杆菌中非融合表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段 (HAb18GEF) ,将HAb18GEF基因的cDNA插入原核表达载体pET2 1a +。通过计算机辅助设计 ,对重组的HAb18GEF pET2 1a +的mRNA翻译起始区 (TIR)的二级结构和密码子偏性同时进行预测。结果发现其存在稳定的茎环结构和许多稀有密码子。通过优化二级结构和优化密码子偏性二种策略分别来降低HAb18GEF pET2 1a +的mRNA翻译起始区 (TIR)的稳定性。在不改变氨基酸序列的前提下 ,利用密码子的简并性 ,通过非连续定点突变实现这两种优化。将突变前后的重组子经酶切鉴定和测序验证后 ,转化感受态JM10 9 DE3宿主菌后 ,随机挑菌 3 7℃下用IPTG诱导表达。SDS PAGE、间接ELISA、Westernblot和细胞分级分离法分析这些重组子的诱导表达情况。RNAdotblot对比分析优化前后目的基因mRNA的量。结果证明 ,成功地构建了HAb18GEF pET2 1a +及其二种优化突变体。仅优化TIR区二级结构或仅优化TIR区密码子偏性均能实现HAb18GEF蛋白的非融合表达 ,而未优化的重组子不表达任何HAb18GEF。非融合表达产物在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在 ,高达 2 9 3 %。由于过表达和细胞渗漏 ,培养基和周质腔中也可检测到少许的HAb18GEF。优化二级结构和优化密码子偏性二种策略的HAb18GEF的非融合? 展开更多
关键词 mrna 翻译起始区 非融合表达 HAbl8G胞外区 二级结构 密码子偏性 肝癌 粘附分子
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Yeast基因下游二级结构与多聚腺苷作用信号 被引量：3
2
作者 张静 石秀凡 刘次全 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期523-527,共5页
形成真核生物mRNA 3′末端的多聚腺苷 (poly (A) )作用涉及前体mRNA下游的三个元件 :效率元件(EE)、定位元件 (PE)以及实际的剪切和 poly (A)作用位点 ,实验研究提出了一些EE和PE的碱基序列组成 .对 180个Yeast基因下游 (终止密码子后 2... 形成真核生物mRNA 3′末端的多聚腺苷 (poly (A) )作用涉及前体mRNA下游的三个元件 :效率元件(EE)、定位元件 (PE)以及实际的剪切和 poly (A)作用位点 ,实验研究提出了一些EE和PE的碱基序列组成 .对 180个Yeast基因下游 (终止密码子后 2 0 0个碱基 )二级结构进行的详细分析显示 ,约 86 %的EE、 89%的PE与二级结构中碱基非配对的环 (发夹环、膨胀环、内环或多分支环 )区或连接单链区有关 .这个结果提示 ,反式因子对EE和PE的识别和作用在一定程度上有赖于EE和PE的二级结构特征 . 展开更多
关键词 yeast基因 多聚腺苷作用信号 mrna二级结构 蛋白质合成
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牛凝乳酶原基因在大肠杆菌中表达调控的研究 被引量：10
3
作者 王革 刘年娟 杨开宇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期162-167,共6页
Shine-Dalgarno序列与起始密码子之间的距离与组成对凝乳酸原基因表达有明显的影响,可导致其表达水平有15倍之差。SD序列至ATG之间为15bp不利于表达,表达质粒中SD-ATG在7-11bP之间都有可能获得高效表达;但决定因素不是简单的长度,而是RB... Shine-Dalgarno序列与起始密码子之间的距离与组成对凝乳酸原基因表达有明显的影响,可导致其表达水平有15倍之差。SD序列至ATG之间为15bp不利于表达,表达质粒中SD-ATG在7-11bP之间都有可能获得高效表达;但决定因素不是简单的长度,而是RBS附近可能的二级结构即△G的大小、SD序列及ATG中参与配对的碱基数目。将pTLC23中凝乳酶原cDNA3＇端非翻译区插入终止密码子TGA与转录终止子rrnBT_1T_2之间适当位置可提高凝乳酶原基因的表达,这可能是因为这段序列能形成由53个碱基对和8个碱基组成的稳定的mRNA二级结构,起到转录终止子的作用,而一般认为串联终止子对终止转录更为有效。 展开更多
关键词 凝乳酶原 基因表达 大肠杆菌 调控
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鸡IL-2全基因和去信号肽基因的酵母表达研究 被引量：1
4
作者 龚婷 李银聚 《郑州牧业工程高等专科学校学报》 2009年第3期1-6,共6页
根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计三条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429bp的ChIL-2全长基因cDNA和363bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA。分别克隆到酵母表达载体pPICZαA中,并分别转化巴斯... 根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计三条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429bp的ChIL-2全长基因cDNA和363bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA。分别克隆到酵母表达载体pPICZαA中,并分别转化巴斯德毕赤酵母X-33中,经甲醇诱导,SDS-PAGE检测,在28kD和24kD处有两条清晰的蛋白带,相同条件下pPICZαA-△SIL-2表达量较高。RNAstructure软件分析表明,pPICZαA-IL-2的序列形成了较为稳定的二级结构,不利于翻译,证明信号肽序列的存在对ChIL-2基因在酵母细胞中的表达有一定的影响。 展开更多
关键词 鸡IL-2 信号肽 酵母表达 mrna二级结构
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颗粒裂解肽抗菌结构域在大肠杆菌中表达水平的分析
5
作者 周鹏 查向东 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期48-52,共5页
为实现颗粒裂解肽抗菌结构域的高效表达并避免其对宿主菌的毒性,研究设计了共表达阴离子配体重组生产阳离子抗菌肽的方法。结果证明该方法可有效提高阳离子抗菌肽的表达产量。同时研究分析了颗粒裂解肽不同抗菌结构域在同一原核表达载体... 为实现颗粒裂解肽抗菌结构域的高效表达并避免其对宿主菌的毒性,研究设计了共表达阴离子配体重组生产阳离子抗菌肽的方法。结果证明该方法可有效提高阳离子抗菌肽的表达产量。同时研究分析了颗粒裂解肽不同抗菌结构域在同一原核表达载体pACYCDuet-1中表达水平的实验数据。通过计算机程序对mRNA二级结构的模拟分析,计算并比较出其二级结构生成自由能之间的差异,提出了预测颗粒裂解肽抗菌结构域在E.coli中表达水平的几点依据,参考这些依据可以对不同抗菌肽基因进行改造以获得高效表达。 展开更多
关键词 阳离子抗菌肽 阴离子配体 共表达 二级结构 翻译起始区
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运用翻译起始区结构优化实现广谱抗病毒蛋白PA在大肠杆菌中的高效表达
6
作者 李秋烨 谢德健 +6 位作者 史姝 蔡秀怡 谭志霞 张彦 沈文龙 叶湘漓 赵志虎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期53-63,共11页
大肠杆菌是重要的生物工程宿主系统,约1/3上市蛋白质类生物技术药物由大肠杆菌重组生产。但是,密码子偏性所致目的蛋白表达水平较低、不具备真核生物部分翻译后修饰等多种因素,限制了大肠杆菌系统的广泛应用。广谱抗病毒蛋白,对类似新... 大肠杆菌是重要的生物工程宿主系统,约1/3上市蛋白质类生物技术药物由大肠杆菌重组生产。但是,密码子偏性所致目的蛋白表达水平较低、不具备真核生物部分翻译后修饰等多种因素,限制了大肠杆菌系统的广泛应用。广谱抗病毒蛋白,对类似新冠的新突发再发传染性疾病的高效防控具有重要意义。为了实现广谱抗病毒蛋白PA在大肠杆菌中的高效表达、拓展其应用潜能,通过密码子优化、结合mRNA翻译起始区(translation initiation region,TIR)二级结构最小自由能(minimum free energy,MFE)预测等,对PA在大肠杆菌中的表达水平进行了研究。结果发现:密码子的优化,可以实现PA在大肠杆菌中的表达,但是总体表达水平并不是十分理想。TIR二级结构MFE的大小与表达水平高低密切相关,通过密码子的同义突变进而改变TIR局部二级结构、MFE大小,可以进一步提高或降低PA的表达水平,从而从正反两个方面证实全局密码子的优化结合TIR局部二级结构驱动的MFE调整,是实现PA在大肠杆菌中高效表达的一种现实、有效策略,对蛋白质类生物技术药物在原核系统中的高效表达与规模化生产,具有重要应用价值。 展开更多
关键词 大肠杆菌 原核表达 翻译起始区 mrna二级结构 密码子优化
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藤壶cp19k基因mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响 被引量：1
7
作者 徐臻臻 刘青 +5 位作者 付文亮 李伍举 邢薇薇 王园园 徐东刚 刘中成 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第6期401-405,共5页
目的探究藤壶cp19k基因5′端mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响。方法通过对3个藤壶物种的cp19k基因(balcp19k、mrcp19k、bicp19k)序列进行分析,并利用大肠杆菌密码子偏好性对其进行优化,将优化后的3个基因序列利用BioSun软件分析... 目的探究藤壶cp19k基因5′端mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响。方法通过对3个藤壶物种的cp19k基因(balcp19k、mrcp19k、bicp19k)序列进行分析,并利用大肠杆菌密码子偏好性对其进行优化,将优化后的3个基因序列利用BioSun软件分析其5′端和3′端的mRNA二级结构和自由能。利用大肠杆菌原核表达系统对3个基因进行表达,并通过SDS-PAGE观察蛋白表达情况。结果3个基因的3′端mRNA二级结构和自由能差异较小;5′端mRNA二级结构相比,balcp19k结构相对简单,自由能较高,mrcp19k和bicp19k二级结构较稳定,自由能较低。SDS-PAGE及Western印迹结果显示,Balcp19k蛋白有表达,而Mrcp19k蛋白和Bicp19k蛋白无表达。结论cp19k基因5′端mRNA二级结构稳定且自由能低不利于蛋白表达。此结果为藤壶cp19k的进一步研究奠定了基础,也为其他外源基因在原核系统中表达提供了借鉴。 展开更多
关键词 cp19k 藤壶胶 基因表达 mrna二级结构 自由能 大肠杆菌 仿生材料
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