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Direct-PCR检测柑橘黄龙病的快速制样方法研究 被引量:4
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作者 王华堂 曾鑫年 +1 位作者 薛培培 杨柳 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期733-738,共6页
【目的】开发一种适用于Direct-PCR快速简便、有效的柑橘黄龙病病原DNA提取方法。【方法】从样品制备、提取速度以及DNA纯度等方面,分别比较研究了2种Direct-PCR制样方法与普通试剂盒制样方法提取柑橘黄龙病病原DNA的优缺点,并利用优化... 【目的】开发一种适用于Direct-PCR快速简便、有效的柑橘黄龙病病原DNA提取方法。【方法】从样品制备、提取速度以及DNA纯度等方面,分别比较研究了2种Direct-PCR制样方法与普通试剂盒制样方法提取柑橘黄龙病病原DNA的优缺点,并利用优化的制样技术分别比较了柑橘黄龙病病原16S rDNA的扩增效果。【结果】其中一种Direct-PCR制样方法所提取的柑橘叶片样品经RT-qPCR检测可以检测出黄龙病病原;通过优化制样后,该方法所提取的样品还可以通过常规PCR进行黄龙病病原检测。【结论】开发了一种更为快速简便、有效的柑橘黄龙病病原DNA提取方法,可为大批量快速检测柑橘黄龙病提供技术支撑。 展开更多
关键词 柑橘 黄龙病病原 direct-pcr DNA提取
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Rapid DNA Extraction Methods for Direct-PCR Detection Citrus Huanglongbing
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作者 Wang Huatang Zeng Xinnian +1 位作者 Xue Peipei Yang Liu 《Plant Diseases and Pests》 CAS 2015年第3期1-4,29,共5页
[ Objective] This study aimed to develop a simple and effective DNA extraction method for citrus Huanglongbing pathogen detection. [ Method] From aspects of preparing procedure, prepare time and the quality of DNA, ad... [ Objective] This study aimed to develop a simple and effective DNA extraction method for citrus Huanglongbing pathogen detection. [ Method] From aspects of preparing procedure, prepare time and the quality of DNA, advantages and disadvantages of three sample preparation methods were compared, include two Direet-PCR extraction methods and one universal genomic DNA extraction kit method. In addition, PCR amplification effect on specific primers for 16S rDNA of "Candidatua Libefibacter asiaticus" (CLas) had also been evaluated. [ Result] The results showed that RT-qPCR detected CLas by using DNA obtained from one of Direct-PCR extraction method as templates. Under improved Direct-PCR extraction method, 16S rDNA of CLas could also be amplified by routine PCR. [ Conclusion] A simple and effective DNA extraction method of citrus Huanglongbing pathogen have been established, which provides technical supports for prepa- ration of large number of samples for detection of CLas. 展开更多
关键词 CITRUS "Candidatus Liberibacter asiaticus" direct-pcr DNA extraction
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基于直接TaqMan-PCR的无创检测脂质代谢相关SNP基因分型技术
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作者 孙元宏 谢吕 +1 位作者 范利华 郑直 《基础医学与临床》 CAS 2024年第6期858-865,共8页
目的建立一种基于直接TaqMan-PCR的无创多重单核苷酸多态性分型技术用于高通量检测与脂质代谢相关的rs688和rs964184位点,以满足风险人群快速筛查的需求。方法采用提取的DNA对设计的TaqMan探针进行PCR退火延伸温度和扩增程序的优化;将... 目的建立一种基于直接TaqMan-PCR的无创多重单核苷酸多态性分型技术用于高通量检测与脂质代谢相关的rs688和rs964184位点,以满足风险人群快速筛查的需求。方法采用提取的DNA对设计的TaqMan探针进行PCR退火延伸温度和扩增程序的优化;将口腔拭子放入样品处理液后进行短暂震荡和离心,取少量上清进行直接qPCR扩增分析;探索探针冻融稳定性和样品保存时间对分型结果的影响。结果本方法仅需对口腔拭子样本简单处理后即可进行qPCR分析,并且可在室温情况下保存4 d。优化后的方法能够较好地区分rs688和rs964184位点的野生纯合子、突变纯合子及杂合子。结论建立了一种快速便捷、高通量、低成本的SNP分型新技术,为大规模筛查携带易感基因的风险人群提供了高效且准确的新方法。 展开更多
关键词 直接PCR 核酸提取 SNP基因分型 高通量
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基于离心式微流控技术的直扩PCR法在流感病毒分型检测中的应用
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作者 刘秀卿 顾大勇 +2 位作者 李国丹 黄磊 周敏 《临床检验杂志》 2023年第11期801-806,共6页
目的建立一种基于离心式微流控技术的检测流感病毒分型的直扩PCR法。方法设计特异性引物探针,采用离心式微流控芯片对流感病毒不同分型进行直扩荧光PCR检测,进一步评价该方法灵敏度、特异性、重复性和线性关系;用该直扩荧光PCR法检测57... 目的建立一种基于离心式微流控技术的检测流感病毒分型的直扩PCR法。方法设计特异性引物探针,采用离心式微流控芯片对流感病毒不同分型进行直扩荧光PCR检测,进一步评价该方法灵敏度、特异性、重复性和线性关系;用该直扩荧光PCR法检测576例临床标本,并用核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行验证。结果离心式微流控直扩PCR法的总体最低检出限为500 copies/mL;与常见呼吸道病原体无交叉反应;精密度均小于4.34%;具有良好的线性关系(R^(2)均>0.98);576例临床标本中检出甲型流感病毒通用型75例,其中H1N126例,H3亚型49例;乙型流感病毒通用型74例,均为Victoria系。与对照试剂比较,离心式微流控PCR法在流感病毒不同分型的灵敏度、特异性、总符合率均高于92.9%,两种方法检出阳性率(IAV、H1N1、H1、H3、IBV和IBV-V)差异均无统计学意义(χ^(2)值分别为3.200、0.500、0.500、1.333、2.250、2.250,P均>0.05),具有极好的一致性(Kappa值均>0.96)。结论建立的离心式微流控直扩PCR法操作简便,灵敏度和特异性较高,可为流感病毒的临床诊断和流行病学调查提供有效的检测工具。 展开更多
关键词 流感病毒 分型 离心式微流控 直扩聚合酶链式反应
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易错PCR技术改造β-环糊精葡萄糖基转移酶的催化特性 被引量:3
5
作者 郑婉 刘振杨 +2 位作者 郑金珠 武国干 吴华伟 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第5期25-31,共7页
β-环糊精是一种环状多糖,可用于改变某些大分子化合物的理化性质,在食品、生物及医药等领域都具有很高的工业应用前景。通过利用β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase),使其作用于淀粉等含有葡萄糖基的多糖化合物,可转化生成β-环糊精。... β-环糊精是一种环状多糖,可用于改变某些大分子化合物的理化性质,在食品、生物及医药等领域都具有很高的工业应用前景。通过利用β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase),使其作用于淀粉等含有葡萄糖基的多糖化合物,可转化生成β-环糊精。该研究采用易错PCR技术对来源于Paenibacillus campinasensis的β-CGTase进行定向进化,得到酶活力高的突变体,并对突变体进行镍柱亲和纯化与酶学性质分析。实验最终获得了一株突变体Q280L,其酶活力与原始β-CGTase相比提高了42.10%,对β-环糊精的转化率提高了7.60%,最适反应pH值和稳定性均有所变化,底物亲和力提高46.13%。经序列比对及结构分析,发现突变体Q280L与野生β-CGTase相比,第280位氨基酸残基种类以及周围氢键发生变化。该试验结果表明,基于易错PCR技术对β-CGTase基因进行定向进化,可提高酶活力和改善酶学性质,为实现β-环糊精的工业生产提供参考意义。 展开更多
关键词 Paenibacillus campinasensis β-CGTase 定向进化 易错PCR 酶学性质
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兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫PCR检测靶标的筛选与单一、多重直接PCR检测方法的建立
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作者 肖洁 罗跃军 +6 位作者 陈浩 蒲家艳 何维 熊常明 郝哥 任永军 杨光友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4327-4337,共11页
旨在建立快速、简便的兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫直接PCR检测方法。首先克隆斯氏艾美耳球虫线粒体基因组mtDNA和3种兔球虫顶质体基因rpoB,结合GenBank中收录的其它兔球虫的相关序列进行比对分析,然后以种间差异明... 旨在建立快速、简便的兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫直接PCR检测方法。首先克隆斯氏艾美耳球虫线粒体基因组mtDNA和3种兔球虫顶质体基因rpoB,结合GenBank中收录的其它兔球虫的相关序列进行比对分析,然后以种间差异明显的序列为靶基因在其超变区设计多对特异性引物,同时对引物浓度等条件进行优化,并评价PCR方法的敏感性和特异性。本研究首次测定了斯氏艾美耳球虫线粒体基因组全序列和3种兔球虫顶质体基因rpoB的序列,斯氏艾美耳球虫mtDNA全长6277 bp,包括3个蛋白质基因,与其它6种兔球虫mtDNA序列相似率为93.90%~97.45%;斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫顶质体基因rpoB大小在500 bp左右,三者相似性达93.93%~95.30%。靶基因筛选结果表明3种兔球虫ITS与其它基因(rpoB和mtDNA)相比较具有种内保守和种间差异大的特点,更适合用于分子诊断;基于3种兔球虫ITS序列的引物中,Ps1、Pi2、Pm2在单一或多重检测时均具有良好的特异性和敏感性。本试验通过对艾美耳球虫PCR检测候选基因靶标(ITS、mtDNA和rpoB)进行序列分析,筛选ITS为兔球虫种间差异明显的检测靶标基因,在此基础上建立的单一直接PCR方法和多重直接PCR方法具有特异、敏感、操作简便的优点,可用于3种兔球虫的流行病学调查或兔球虫病临床诊断。 展开更多
关键词 斯氏艾美耳球虫 肠艾美耳球虫 大型艾美耳球虫 ITS 直接PCR
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Nested-PCR检测种传番茄细菌性溃疡病菌 被引量:6
7
作者 闵现华 刘箐 +6 位作者 韩跃武 文朝慧 王军平 刘姝彤 刘雅莉 宋蕤 施颖波 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期28-31,共4页
利用番茄溃疡病菌特异性引物对纯菌液、模拟带菌种子及自然感染种子提取液分别进行Direct-PCR和Nested-PCR检测。结果在纯菌液中,Direct-PCR的检测灵敏度为105cfu/mL,Nested-PCR为102cfu/mL;在模拟带菌种子提取液中,Direct-PCR的检测灵... 利用番茄溃疡病菌特异性引物对纯菌液、模拟带菌种子及自然感染种子提取液分别进行Direct-PCR和Nested-PCR检测。结果在纯菌液中,Direct-PCR的检测灵敏度为105cfu/mL,Nested-PCR为102cfu/mL;在模拟带菌种子提取液中,Direct-PCR的检测灵敏度为107cfu/mL,Nested-PCR为104cfu/mL;在自然感染种子提取液中,稀释104倍后Nested-PCR仍然可以检出。建立的番茄种子Nested-PCR检测技术,无需经过核酸提取步骤,可以在8 h内完成整个检测过程,方便快捷,成本低廉,可作为番茄种子带菌的常规检测方法。 展开更多
关键词 番茄溃疡病 番茄种子 direct-pcr NESTED-PCR
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草生欧文氏菌中酪氨酸酚裂解酶的体外定向进化及结构模拟
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作者 郭小雷 《化学与生物工程》 CAS 2023年第7期34-39,44,共7页
以来源于草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)的酪氨酸酚裂解酶(Eh-TPL)为目的基因,通过易错PCR定向进化技术构建突变体文库,利用高通量筛选方法获得了比酶活提高的突变体S20C和E202R,再通过定点突变得到突变体S20C/E202R/N161S。经摇瓶发... 以来源于草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)的酪氨酸酚裂解酶(Eh-TPL)为目的基因,通过易错PCR定向进化技术构建突变体文库,利用高通量筛选方法获得了比酶活提高的突变体S20C和E202R,再通过定点突变得到突变体S20C/E202R/N161S。经摇瓶发酵培养发现,突变体S20C/E202R/N161S比野生型Eh-TPL的比酶活提高了30.61%;酶学性质研究结果表明,突变体S20C/E202R/N161S的最适温度仍为37℃,最适pH值从8.2升至8.5,热稳定性、pH稳定性均得到明显提高;结构模拟结果表明,突变体S20C/E202R/N161S的三维结构无明显变化,突变位点附近氢键和表面电势有所变化。体外定向进化技术能有效提高Eh-TPL的催化效率,对酶法生产L-酪氨酸具有重要应用价值。 展开更多
关键词 易错PCR 定向进化 草生欧文氏菌 酪氨酸酚裂解酶 L-酪氨酸
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基因芯片对人乳头瘤病毒的快速检测和分型 被引量:50
9
作者 黄庆 府伟灵 +3 位作者 周玉 张雪 黄君富 陈斌 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期476-478,共3页
目的 针对HPV DNA亚型的异质性,建立HPV DNA亚型的基因芯片快速检测方法,为HPV感染病例提供诊断依据。方法 18 种HPV DNA亚型(HPV6、16、18、31、33、35、39、11、45、51、52、53、56、58、42、59、66、68)特异性探针,固定于硝酸纤维... 目的 针对HPV DNA亚型的异质性,建立HPV DNA亚型的基因芯片快速检测方法,为HPV感染病例提供诊断依据。方法 18 种HPV DNA亚型(HPV6、16、18、31、33、35、39、11、45、51、52、53、56、58、42、59、66、68)特异性探针,固定于硝酸纤维素膜制备成基因芯片,生物素标记引物经通用引物介导PCR(GD PCR)扩增HPV DNA, PCR产物与基因芯片经反向点杂交检测HPV亚型;同时采用荧光定量PCR检测HPV6、11、16 和18亚型。结果 31 例标本中,基因芯片的阳性检出率为74.2%,其中HPV6/18、HPV11/16、HPV33/58 和HPV6/11/33多重感染各1 例(3.2%);荧光定量PCR 阳性检出率为67.7%,与前种方法相比较,漏诊率为6.5%。结论 HPV分型基因芯片可1次检测HPV多种亚型,灵敏度高和特异性强,有利于对HPV多重感染的诊断。 展开更多
关键词 HPV 基因芯片 GD-PCR 反向点杂交
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DNATyper^(TM) 15试剂盒直接扩增检验纸质样本的研究 被引量:36
10
作者 张建 姜成涛 +4 位作者 赵兴春 白雪 赵蕾 姜伯玮 叶健 《刑事技术》 2011年第4期33-35,共3页
目的检验DNATyperTM15直接扩增系统的有效性。方法使用DNATyperTM15直接扩增系统对我国DNA数据库建库4种常见样本类型进行直接扩增检验。结果获得了血滤纸、公安部物证鉴定中心采血卡、博坤采血卡和FTA卡等样本类型的完整DNA分型。结论 ... 目的检验DNATyperTM15直接扩增系统的有效性。方法使用DNATyperTM15直接扩增系统对我国DNA数据库建库4种常见样本类型进行直接扩增检验。结果获得了血滤纸、公安部物证鉴定中心采血卡、博坤采血卡和FTA卡等样本类型的完整DNA分型。结论 DNATyperTM15直接扩增系统能够用于常见纸质样本的检验。 展开更多
关键词 DNA数据库 DNA检验 DNATyper^TM15 直接扩增
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直接PCR法检测血液中伊氏锥虫感染 被引量:5
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作者 陆绍红 陈睿 +2 位作者 楼涤 张乐 张雪娟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2006年第4期204-207,共4页
为建立伊氏锥虫动基体DNA(KinetoplastDNA,kDNA)的PCR扩增技术,血液直接PCR法检测伊氏锥虫的感染,本文以伊氏锥虫kDNA片段为靶扩增DNA设计引物,确定最适PCR反应条件,建立kDNA片段的PCR扩增技术,应用直接扩增缓冲液(Ampdirect)从感染小... 为建立伊氏锥虫动基体DNA(KinetoplastDNA,kDNA)的PCR扩增技术,血液直接PCR法检测伊氏锥虫的感染,本文以伊氏锥虫kDNA片段为靶扩增DNA设计引物,确定最适PCR反应条件,建立kDNA片段的PCR扩增技术,应用直接扩增缓冲液(Ampdirect)从感染小鼠的滤纸血标本直接PCR检测伊氏锥虫。结果发现,PCR扩增伊氏锥虫kDNA片段分子量为364bp,能检测的最小DNA量是0·06pg,与布氏锥虫、活动锥虫没有交叉反应。应用直接扩增缓冲液不需进行样本的DNA抽提,直接PCR能检测感染小鼠的早期滤纸血样本,敏感性高于镜检法。本实验建立的直接PCR法检测伊氏锥虫具有较高的敏感性和特异性,方法快捷,可进一步应用于伊氏锥虫病的早期诊断以及现场调查。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 直接PCR 动基体DNA(kDNA) 血液
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香蕉束顶病毒PCR检测技术研究 被引量:21
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作者 肖火根 胡晋生 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期5-8,共4页
建立了聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒(BBTV),并报道了BBTV免疫捕捉PCR(IC-PCR)和直接结合PCR(DB-PCR)检测方法IC-PCR和DB-PCR分别能从4μ... 建立了聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒(BBTV),并报道了BBTV免疫捕捉PCR(IC-PCR)和直接结合PCR(DB-PCR)检测方法IC-PCR和DB-PCR分别能从4μg和0. 展开更多
关键词 香蕉 束顶病毒 免疫捕捉PCR 直接结合PCR
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种传番茄溃疡病菌直接PCR和免疫捕捉PCR检测方法之比较 被引量:9
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作者 闵现华 韩跃武 +6 位作者 刘箐 王军平 刘雅莉 文朝慧 刘姝彤 宋蕤 施颖波 《植物检疫》 北大核心 2010年第4期12-16,共5页
用PBS和种子研磨后的普通病原提取液稀释番茄溃疡病菌纯菌液,并以梯度纯菌液和带菌种子提取液作为模板进行直接PCR和免疫捕捉PCR,比较2种方法在纯菌液和带菌种子提取液中的检测灵敏度,找到一种高特异性、高灵敏度、简便快捷的方法用于... 用PBS和种子研磨后的普通病原提取液稀释番茄溃疡病菌纯菌液,并以梯度纯菌液和带菌种子提取液作为模板进行直接PCR和免疫捕捉PCR,比较2种方法在纯菌液和带菌种子提取液中的检测灵敏度,找到一种高特异性、高灵敏度、简便快捷的方法用于检测番茄种子携带的番茄溃疡病菌。结果显示在纯菌液中直接PCR灵敏度为104cfu/mL,免疫捕捉PCR为102cfu/mL;在带菌种子提取液中直接PCR灵敏度为106cfu/mL,免疫捕捉PCR为104cfu/mL;免疫捕捉PCR比直接PCR灵敏度高100倍,尤其在实际种子检测中优势更明显,而且检出时间短,重复性好。 展开更多
关键词 番茄溃疡病 番茄种子 直接PCR 免疫捕捉PCR
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免疫捕捉PCR和直接PCR技术检测单核细胞增生性李斯特菌比较研究 被引量:3
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作者 刘雅莉 刘箐 +6 位作者 刘芳 韩舜愈 王婧 夏俊芳 汪小波 樊学军 田绿波 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第20期243-248,共6页
将免疫学技术与分子生物学技术相结合,建立了免疫捕捉PCR(IC-PCR),并与传统的直接PCR(Direct-PCR)进行比较。结果显示:纯菌液中IC-PCR检测灵敏度(104CFU/mL)是Direct-PCR灵敏度(105CFU/mL)的10倍;模拟带菌实验结果表明:IC-PCR最低可检测... 将免疫学技术与分子生物学技术相结合,建立了免疫捕捉PCR(IC-PCR),并与传统的直接PCR(Direct-PCR)进行比较。结果显示:纯菌液中IC-PCR检测灵敏度(104CFU/mL)是Direct-PCR灵敏度(105CFU/mL)的10倍;模拟带菌实验结果表明:IC-PCR最低可检测到5×101个细菌/PCR反应体系(即104CFU/mL),检测限比Direct-PCR(5×103个细菌/PCR反应体系即106CFU/mL)高100倍;特异性实验、干扰实验结果表明IC-PCR可特异检测单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monaytogenes,LM),而和18株其他常见食源性致病菌无交叉反应。IC-PCR具有快速、经济、灵敏、特异等优点,是一种适合食品安全监管部门、食品企业的LM快速检测方法。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 免疫捕捉PCR 直接PCR
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猪圆环病毒2型快速直接PCR检测方法的建立与流行病学调查 被引量:7
15
作者 徐引弟 闫静娟 +5 位作者 焦文强 王治方 张青娴 朱文豪 李海利 王克领 《山西农业科学》 2018年第8期1374-1377,共4页
为了解河南省猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学情况,参考Gen Bank的PCV2 ORF2的序列,设计1对引物,建立PCV2的快速直接PCR检测方法,并进行特异性和敏感性试验。运用该方法对2016年5月至2017年5月采集到的河南省共125份疑似猪圆环病毒2型的... 为了解河南省猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学情况,参考Gen Bank的PCV2 ORF2的序列,设计1对引物,建立PCV2的快速直接PCR检测方法,并进行特异性和敏感性试验。运用该方法对2016年5月至2017年5月采集到的河南省共125份疑似猪圆环病毒2型的病料进行PCV2检测,阳性样品测序,分析河南省PCV2的遗传变异情况。结果显示,建立的PCR检测方法快速、特异、敏感,适用于临床检测或流行病学调查;所检测的125份样品中,55份样品为PCV2阳性,阳性率高达44%。阳性结果序列分析显示,核苷酸序列同源性在88.7%~99.8%,42份在PCV2b基因群。结果表明,河南省PCV2感染率较高,PCV2b为流行血清亚型,病毒变异严重。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 直接PCR ORF2 序列分析
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PCR动力学数学模型在PCR产物直接核酸序列分析中的应用 被引量:6
16
作者 克丙申 齐法莲 +3 位作者 修方明 徐军 安娟 赵春文 《基础医学与临床》 CSCD 1997年第5期65-68,共4页
使用PCR动力学数学模型提供的PCR产物数量计算方法计算经PCR扩增获得的产物数量,纯化后用於PCR产物的核酸序列分析。由於PCR动力学数学模型提供了比较准确的产物数量计算,使测序模扳数量总能保持在比较适当的范围,因... 使用PCR动力学数学模型提供的PCR产物数量计算方法计算经PCR扩增获得的产物数量,纯化后用於PCR产物的核酸序列分析。由於PCR动力学数学模型提供了比较准确的产物数量计算,使测序模扳数量总能保持在比较适当的范围,因此测序结果的可读性、自显影条带的清晰度保持了较好的水平。提示了PCR动力学数学模型是基本正确的。说明准确的定量计算PCR产物数量对PCR产物直接核酸序列分析是有益的。 展开更多
关键词 PCR动力学 数学模型 核酸 序列分析
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PCR产物直接测序技术中影响因素的研究 被引量:14
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作者 徐祖元 包其郁 牛宇欣 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期548-550,共3页
探讨了PCR产物直接测序技术中的影响因素,结果表明:PCR产物特异性是影响其测序成败的关键因素,PCR反应只有产生惟一扩增产物时,其产物才能被用来直接测序;PCR反应体系残留混合物(dNTP、引物和盐离子等)对其测序质量有明显不利影响,PC... 探讨了PCR产物直接测序技术中的影响因素,结果表明:PCR产物特异性是影响其测序成败的关键因素,PCR反应只有产生惟一扩增产物时,其产物才能被用来直接测序;PCR反应体系残留混合物(dNTP、引物和盐离子等)对其测序质量有明显不利影响,PCR产物纯化后其测序质量能明显提高;同时,PCR产物大小不同,其测序反应的模板用量也不同,在一定长度范围内,最适模板用量随PCR产物长度增加而增加。 展开更多
关键词 PCR产物 直接测序技术 影响因素 聚合酶链反应 DNA自动测序仪
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套式PCR直接检测印度腥黑穗病菌冬孢子 被引量:18
18
作者 易建平 陶庭典 +3 位作者 潘良文 沈禹飞 印丽萍 郑建中 《植物检疫》 北大核心 2002年第4期197-200,共4页
用印度腥黑穗病菌冬孢子制备模板DNA ,利用印腥特异性引物T3 /T6,T3 /T4和套式PCR(nestPCR)扩增技术直接检测印腥冬孢子 ,检测的灵敏度可达 1个冬孢子。检测时间缩短为 1天。这种简单、快速、灵敏、实用和准确的PCR检测技术适用于口岸... 用印度腥黑穗病菌冬孢子制备模板DNA ,利用印腥特异性引物T3 /T6,T3 /T4和套式PCR(nestPCR)扩增技术直接检测印腥冬孢子 ,检测的灵敏度可达 1个冬孢子。检测时间缩短为 1天。这种简单、快速、灵敏、实用和准确的PCR检测技术适用于口岸印腥检疫的需要 ,解决了常规PCR检测中DNA制备需要萌发冬孢子和检测时间长的难题。 展开更多
关键词 套式PCR 直接检测 印度腥黑穗病菌 冬孢子 电泳图 小麦病害
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云南玉溪葡萄糖-6-磷酸脱氧酶缺乏症基因突变研究 被引量:4
19
作者 潘宝龙 田兴亚 +2 位作者 张秀琴 黄尤光 李树德 《实用医学杂志》 CAS 2007年第21期3314-3317,共4页
目的:调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率,分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征,探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法:NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人,NBT定量酶活性,PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变,作P... 目的:调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率,分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征,探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法:NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人,NBT定量酶活性,PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变,作PCR-SSCP分析,最后用DNA测序分析和证实。结果:(1)450例当地居民筛查发现G6PD缺乏症患者48例(男31例,女17例)。(2)PCR-ARMS发现G1388A21例(43.75%)、G1376T4例(8.33%),未见A95G。(3)PCR-SSCP发现27例异常,PCR-DNA测序结果与PCR-ARMS结果吻合。2份未知突变样本测序分析证实为C1311T。(4)测序发现复合型突变:1例G1376T/IVS-11T93C,1例G1376T/C1311T和1例G1388A/IVS-11T93C。结论:(1)云南玉溪G6PD缺乏症发病率为10.67%,男性13.78%,女性7.56%;男、女性别比例1.82。(2)云南玉溪G6PD缺乏症基因突变以Gl388A突变最常见,其次是G1376T突变,两种突变共占52.08%,未发现A95G突变。(3)研究云南玉溪G6PD缺乏症基因突变型对指导优生、优育,预防该病的遗传传播,提高我省各地州人口素质具有一定的社会意义。对开展G6PD缺乏症的基因诊断具有一定的应用价值和指导意义。 展开更多
关键词 基因 突变 G6PD缺乏症PCR-ARMS PCR-SSCP PCR-DNA测序
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Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用 被引量:4
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作者 邹凯南 曹禹 +2 位作者 夏子芳 郑卫国 周怀谷 《法医学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期448-450,共3页
目的验证Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用价值。方法取FTA卡、滤纸上保存的建库血样和各类涉案生物性检材1948份,用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型检测,同时采用SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex... 目的验证Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用价值。方法取FTA卡、滤纸上保存的建库血样和各类涉案生物性检材1948份,用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型检测,同时采用SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex16试剂盒进行平行试验。对4个试剂盒相同基因座的分型进行比对,以确认Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的灵敏度和准确性。结果 Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的检测成功率为97.79%,同一样本在相同基因座与SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex16试剂盒的STR分型结果相同。结论利用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型,信息量大、结果准确可靠,可应用于法庭科学。 展开更多
关键词 法医遗传学 短串联重复序列 Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒
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