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p27^(kip1)基因在大鼠自体静脉移植中的表达
1
作者 郎晓讴 刘明辉 +2 位作者 杨德华 冀慎泉 段志泉 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期128-130,共3页
目的:观察p27kip1基因在静脉移植模型中的动态表达及与内膜增生的关系。方法:建立大鼠自体静脉移植动物模型,分别于术后1,2,3,7,14,28d取材。Verhoeff染色观察各时间点内膜厚度及管壁厚度;RT-PCR、原位杂交、Western blot检测p27kip1mRN... 目的:观察p27kip1基因在静脉移植模型中的动态表达及与内膜增生的关系。方法:建立大鼠自体静脉移植动物模型,分别于术后1,2,3,7,14,28d取材。Verhoeff染色观察各时间点内膜厚度及管壁厚度;RT-PCR、原位杂交、Western blot检测p27kip1mRNA及蛋白的变化,免疫组化(SABC)法检测p27kip1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:术后7d内膜明显增厚,14d内膜增厚达到高峰(P<0.01)。p27kip1蛋白在正常对照血管可见表达,术后3d内无表达,术后7d开始表达,14d明显增高,28d达到高峰(P<0.01)。mRNA的表达于术后7d出现增高,持续表达至28d,其间各时间点之间表达无明显差异。PCNA的表达于术后7～14d达到高峰。结论:p27kip1基因的表达可能是抑制移植静脉内膜增生的环节之一,其可能成为治疗移植血管狭窄、闭塞的目的基因。 展开更多
关键词 基因表达 静脉 移植
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环加氧酶2基因的原核表达、抗体制备及其在肝癌中的表达 被引量：1
2
作者 古春芳 孟佳 +1 位作者 吴建国 朱应 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期197-201,共5页
用PCR技术扩增环加氧酶2(COX-2)基因的C末端777 bp的片段,插入到pET-28b(+)中,构建原核表达载体.转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导产生包涵体形式his-COX-2融合蛋白.用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化融合蛋白,获得纯度较高的原核表达蛋白.... 用PCR技术扩增环加氧酶2(COX-2)基因的C末端777 bp的片段,插入到pET-28b(+)中,构建原核表达载体.转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导产生包涵体形式his-COX-2融合蛋白.用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化融合蛋白,获得纯度较高的原核表达蛋白.纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA及West-ern blotting分别检测抗体.用此抗体Western blotting检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达.ELISA及Westernblotting结果显示免疫家兔所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价,并能够特异性的识别真核细胞中的环加氧酶2.用此抗体检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达,证实肝癌组织中伴随有环加氧酶2的大量表达.同时所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价和特异性,为进一步研究环加氧酶2的功能提供了条件. 展开更多
关键词 环加氧酶2(COX-2) 原核表达 抗体制备 肝癌
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SVM在基因表达数据分类中的研究和应用 被引量：2
3
作者 詹超 胡江洪 《计算机技术与发展》 2006年第3期107-109,共3页
介绍了一种使用基因芯片实验产生的基因表达数据对功能基因进行分类的方法,该方法是以支持向量机(SVM)理论为基础的。文中描述了径向基函数SVM,与其它SVM相比,径向基函数SVM在基因分类中有更好的性能。SVM的理论基础是统计学习理论,它... 介绍了一种使用基因芯片实验产生的基因表达数据对功能基因进行分类的方法,该方法是以支持向量机(SVM)理论为基础的。文中描述了径向基函数SVM,与其它SVM相比,径向基函数SVM在基因分类中有更好的性能。SVM的理论基础是统计学习理论,它不仅结构简单,而且技术性能高,泛化能力强,在基因表达式分类中表现出有很多优点,成为热点研究方向。 展开更多
关键词 基因微序列 基因表达式 支向量机 核函数 模式分类
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帕金森病PINK1蛋白真核表达载体pcDNA3．1-myc／PINK1的构建及其在COS-7细胞中的表达
4
作者 张玉虎 刘越存 +1 位作者 李少华 王丽娟 《中国医师杂志》 CAS 2009年第12期1598-1600,共3页
目的构建帕金森病PINK1基因真核表达载体pcDNA3．1-mye／PINK1，检测其转染COS-7细胞后的表达。方法用PCR方法从人cDNA文库DNA中扩增PINK1全长cDNA，该基因片段两端设计了EcoR I和BamH I限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证... 目的构建帕金森病PINK1基因真核表达载体pcDNA3．1-mye／PINK1，检测其转染COS-7细胞后的表达。方法用PCR方法从人cDNA文库DNA中扩增PINK1全长cDNA，该基因片段两端设计了EcoR I和BamH I限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证实。利用重组DNA技术将PINK1的cDNA构建到真核表达载体pcDNA3．1-myc—his（-）B上，酶切鉴定。通过脂质体介导的转染技术将所构建的载体导入COS-7细胞中，体外培养，于转染48h后利用RT—PCR和Western Blotting方法检测目的基因的表达情况。主要观察指标：（1）PINK1基因cDNA扩增产物检测。（2）pcDNA3．1-myc／PINK1重组体酶切鉴定。（3）Western—blotting。结果经琼脂糖凝胶电泳及测序证实，PCR获得的片段与GenBank中登记的PINK1序列完全相同；pcDNA3．1-myc／CHIP酶切片段的长度与理论大小相符；转染48h后的COS-7细胞可检测到PINK1蛋白的表达。结论PINK1蛋白真核表达载体构建成功，在COS-7细胞中可获得表达。 展开更多
关键词 帕金森病/遗传学 基因表达 遗传载体 转染 细胞 培养的
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人血小板生成素基因乳腺特异表达载体的构建和表达 被引量：1
5
作者 刘茵 颜景斌 +3 位作者 王强 方彧聃 潘树标 黄英 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期283-288,共6页
目的为了获得能在转基因动物乳汁中高效表达人血小板生成素(TPO)的特异表达载体。方法将山羊β-乳球蛋白基因5′端上游-3.9kb和-1.9kb调控序列及β-酪蛋白启动子分别与人TPO基因连接,构建了pB3.9T、pB1.9T和pPT3个乳腺特异表达载体。将... 目的为了获得能在转基因动物乳汁中高效表达人血小板生成素(TPO)的特异表达载体。方法将山羊β-乳球蛋白基因5′端上游-3.9kb和-1.9kb调控序列及β-酪蛋白启动子分别与人TPO基因连接,构建了pB3.9T、pB1.9T和pPT3个乳腺特异表达载体。将上述载体分别进行瞬间转染和稳定整合筛选实验,从mRNA及蛋白水平检测TPO基因的表达。结果BLG3.9、BLG1.9和P1A33种调控元件都可以启动人TPO在乳腺细胞中特异表达。瞬时转染时3种载体表达水平依次为pPT>pB3.9T>pB1.9T。但当外源基因稳定整合入细胞基因组后,TPO表达量持续升高,且pB3.9T表达量明显超过另外两种载体。结论证实了BLG转录子去阻遏和激活转变调节的存在,可能在其5′端-3.9kb与-1.9kb之间存在这一调节区域。并且与BLG1.9相比,BLG3.9能更有效地启动人TPO基因在乳腺细胞中的表达,也说明在-3.9至-1.9kb之间可能存在特殊的增强序列。 展开更多
关键词 血小板生成素 山羊β-乳球蛋白启动子(BLG) 山羊β-酪蛋白启动子 表达载体
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