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真核表达hCAP-18／LL-37成熟肽对树突状细胞表面分子表达的影响 被引量：1
1
作者 袁红艳 王凤丽 +1 位作者 许娜 常雅萍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期482-486,共5页
目的:研究真核表达的人源阳离子抗菌肽-18(hCAP-18)成熟肽LL-37对树突状细胞(DCs)表面分子表达的影响。方法:通过基因克隆方法构建hCAP-18成熟肽LL-37真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,转染人胚肾HEK293细胞株,转染48 h后收获培养上清... 目的:研究真核表达的人源阳离子抗菌肽-18(hCAP-18)成熟肽LL-37对树突状细胞(DCs)表面分子表达的影响。方法:通过基因克隆方法构建hCAP-18成熟肽LL-37真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,转染人胚肾HEK293细胞株,转染48 h后收获培养上清,与体外以rh-GM-CSF、rh-IL-4联合培养定向诱导分化的不成熟DCs共培养48 h,收获DCs;流式细胞仪检测DCs表面分子CD40及HLA-DR的表达。结果:成功构建成熟肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,并实现在其真核细胞HEK293中的表达;流式细胞仪结果显示,pcDNA4/Myc-His-LL-37基因转染HEK293细胞培养上清刺激组DCs中CD40及HLA-DR的表达阳性率与对照组比较均明显升高(P<0.05)。结论:构建了真核表达的hCAP-18成熟肽LL-37,其可上调DCs表面分子CD40及HLA-DR的表达,促进DCs功能的成熟。 展开更多
关键词 hcap-18/ll-37 成熟肽 树突状细胞 表面分子
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人源抗菌肽LL-37/hCAP-18真核表达载体的构建及其在人乳腺癌细胞MCF-7中的表达 被引量：2
2
作者 韩艳非 袁红艳 +2 位作者 廖翔宇 刘超 常雅萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第11期945-947,共3页
目的构建人源抗菌肽LL-37/hCAP-18的真核表达载体,并在人乳腺癌细胞MCF-7中进行表达。方法以重组质粒pcDNA4.0-LL-37为模板,采用PCR法扩增LL-37/hCAP-18基因,连入pEGFP-c1质粒,构建真核表达载体pEGFP-c1-LL-37,瞬时转染人乳腺癌细胞MCF... 目的构建人源抗菌肽LL-37/hCAP-18的真核表达载体,并在人乳腺癌细胞MCF-7中进行表达。方法以重组质粒pcDNA4.0-LL-37为模板,采用PCR法扩增LL-37/hCAP-18基因,连入pEGFP-c1质粒,构建真核表达载体pEGFP-c1-LL-37,瞬时转染人乳腺癌细胞MCF-7,采用激光共聚焦显微镜观察重组质粒的转染效率,RT-PCR法检测目的基因的表达。结果所构建的抗菌肽LL-37/hCAP-18真核表达载体经双酶切和测序证明构建正确,在瞬时转染MCF-7细胞48h后,目的基因转染效率较高,约为40%,RT-PCR结果显示,重组质粒转染的细胞可扩增出339bp的目的基因条带。结论已成功构建了人源抗菌肽LL-37/hCAP-18的真核表达载体,并在人乳腺癌细胞中获得表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 ll-37/hcap-18 真核表达 MCF-7细胞
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hCAP-18/LL-37全长肽真核表达产物对树突状细胞分化成熟的影响 被引量：1
3
作者 袁红艳 许娜 +1 位作者 王凤丽 常雅萍 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第3期346-348,共3页
目的研究人源阳离子抗菌肽(hCAP)-18/LL-37全长肽真核表达产物对树突状细胞分化成熟的影响。方法将已构建的hCAP-18/LL-37全长肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞株,在转染后48 h收获培养上清;人外周血单个核细胞分离,... 目的研究人源阳离子抗菌肽(hCAP)-18/LL-37全长肽真核表达产物对树突状细胞分化成熟的影响。方法将已构建的hCAP-18/LL-37全长肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞株,在转染后48 h收获培养上清;人外周血单个核细胞分离,体外定向诱导分化成树突状细胞(DC);将转染后收获的培养上清与体外培养的DC共同孵育,48 h收获DC,经流式细胞仪检测DC表面分子CD83、CD86、CD40及HLA-DR的表达。结果FCM结果显示:pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞培养上清与pcDNA4/Myc-His空载体转染细胞培养上清相比较,均可上调DC表面分子CD86、CD40及HLA-DR的表达。结论构建的hCAP-18/LL-37全长肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞株培养上清液均可上调DC表面分子CD86、CD40及HLA-DR的表达,促进DC的分化成熟。 展开更多
关键词 抗菌肽 hcap-18/ll-37 真核表达 树突状细胞
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hCAP-18/LL-37基因转染对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响
4
作者 许娜 袁红艳 +3 位作者 王凤丽 廖翔宇 刘超 常雅萍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1040-1043,I0011,共5页
目的:观察人源抗菌肽hCAP-18/LL-37基因转染对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用,探讨其抗肿瘤的可能机制。方法:将含hCAP-18/LL-37的真核表达质粒瞬时转染Lewis肺癌细胞,同时设正常对照组、转染空载体组和转染重组基因组,MTT比色检测Lewis... 目的:观察人源抗菌肽hCAP-18/LL-37基因转染对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用,探讨其抗肿瘤的可能机制。方法:将含hCAP-18/LL-37的真核表达质粒瞬时转染Lewis肺癌细胞,同时设正常对照组、转染空载体组和转染重组基因组,MTT比色检测Lewis肺癌细胞转染后48和72h的增殖活性,流式细胞术和荧光染色检测细胞凋亡。免疫细胞化学染色检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:转染重组基因组Lewis细胞增殖受到明显抑制,与转染空载体组比较,转染后48和72h的抑制率分别为3.51%和17.65%;流式细胞术检测转染重组基因组凋亡率为7.4%,正常对照组凋亡率为4.4%,转染空载体组凋亡率为5.2%;免疫细胞化学染色,转染重组基因组Lewis细胞Bax蛋白表达增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);Bcl-2蛋白表达减少,但与对照组比较差异无显著性(P<0.05)。结论:hCAP-18/LL-37基因瞬时转染Lewis肺癌细胞,可抑制肿瘤细胞生长、调控凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 hcap-18/ll-37 瞬时转染 癌 Lewis肺 细胞凋亡
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LL-37/hCAP-18基因克隆及其真核表达载体的构建
5
作者 杨应华 符碧 《海南师范学院学报（自然科学版）》 2004年第3期265-269,共5页
LL-37 hCAP-18是一种重要的多功能免疫分子.为探讨hCAP-18在基因治疗中的可行性,应用RT-PCR技术从人白血病细胞系J6-1细胞总RNA中成功扩增出560bp的hCAP-18基因编码区cDNA序列,构建了hCAP-18重组表达质粒phCAP-18.采用脂质体法将质粒phC... LL-37 hCAP-18是一种重要的多功能免疫分子.为探讨hCAP-18在基因治疗中的可行性,应用RT-PCR技术从人白血病细胞系J6-1细胞总RNA中成功扩增出560bp的hCAP-18基因编码区cDNA序列,构建了hCAP-18重组表达质粒phCAP-18.采用脂质体法将质粒phCAP-18瞬时转染COS-7细胞,Westernblot证实,hCAP-18能在COS-7细胞中表达. 展开更多
关键词 ll-37/hcap-18 CDNA克隆 真核表达
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抗菌肽hCAP-18/LL-375’非翻译区的分析
6
作者 安莉莉 杨应华 吴克复 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期224-224,228,共2页
关键词 hcap-18/ll-37 5’非翻译区 白血病细胞系
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hCAP-18/LL-37基因转染对人肺癌细胞凋亡的影响
7
作者 陈凌昊 王柳行 许娜 《吉林医药学院学报》 2010年第5期261-263,共3页
目的探讨基因转染人源抗菌肽hCAP-18/LL-37对人肺癌细胞A549凋亡的影响。方法将含人hCAP-18/LL-37的真核表达质粒瞬时转染人肺癌细胞A549细胞,48 h后细胞免疫组化染色检测A549细胞中Caspase-3蛋白表达。结果重组基因瞬时转染A549细胞48 ... 目的探讨基因转染人源抗菌肽hCAP-18/LL-37对人肺癌细胞A549凋亡的影响。方法将含人hCAP-18/LL-37的真核表达质粒瞬时转染人肺癌细胞A549细胞,48 h后细胞免疫组化染色检测A549细胞中Caspase-3蛋白表达。结果重组基因瞬时转染A549细胞48 h后,免疫细胞化学染色与正常对照组细胞及转染空载体组细胞比较,转染重组基因组细胞Caspase-3蛋白表达增加。结论 展开更多
关键词 hcap-18/ll-37 瞬时转染 肺癌细胞 细胞凋亡
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hCAP-18/LL-37基因转染对RAW264.7细胞活化功能的影响
8
作者 刘超 袁红艳 +2 位作者 焦淑凡 余磊 常雅萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期153-156,共4页
目的探讨抗菌肽hCAP-18/LL-37基因转染对巨噬细胞RAW264.7活化功能的影响。方法将重组质粒pcD-NA4/Myc-His-hCAP-18/LL-37瞬时转染RAW264.7细胞,MTT法检测细胞的增殖活性;中性红吞噬试验检测细胞的吞噬能力;RT-PCR法分析细胞活化相关分... 目的探讨抗菌肽hCAP-18/LL-37基因转染对巨噬细胞RAW264.7活化功能的影响。方法将重组质粒pcD-NA4/Myc-His-hCAP-18/LL-37瞬时转染RAW264.7细胞,MTT法检测细胞的增殖活性;中性红吞噬试验检测细胞的吞噬能力;RT-PCR法分析细胞活化相关分子CD80、CD86、TLR4及细胞因子IL-1β、TNF-αmRNA的转录。结果 hCAP-18/LL-37基因转染可促进经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)处理的RAW264.7细胞的增殖活性与吞噬能力(P<0.05);可上调RAW264.7细胞CD80、CD86、TLR4、IL-1β、TNF-α基因mRNA的转录水平。结论 hCAP-18/LL-37基因转染可通过促进RAW264.7细胞增殖活性、吞噬能力及活化相关分子表达,调控巨噬细胞的活化功能。 展开更多
关键词 抗菌肽 hcap-18/ll-37 转染 巨噬细胞 活化 脂多糖类
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抗菌肽LL-37的研究进展 被引量：7
9
作者 王永东 《国际免疫学杂志》 CAS 2007年第1期47-51,共5页
抗菌肽是机体天然免疫的重要组成部分，LL-37是人体内发现的唯一一种Cathelicidin类抗菌肽，其前体肽hCAP-18主要由中性粒细胞释放，经丝氨酸蛋白酶3切割产生有活性的LL-37。LL-37的表达及活性作用受到体内、体外多种因素的影响。LL-37... 抗菌肽是机体天然免疫的重要组成部分，LL-37是人体内发现的唯一一种Cathelicidin类抗菌肽，其前体肽hCAP-18主要由中性粒细胞释放，经丝氨酸蛋白酶3切割产生有活性的LL-37。LL-37的表达及活性作用受到体内、体外多种因素的影响。LL-37除了直接杀菌作用外，还能调节免疫和炎症介质的释放、引起免疫细胞分化及趋化、伤口愈合、细胞因子和组氨酸释放、中和内毒京和抗肿瘤.LL-37的直接杀菌作用并不是它最重要的免疫方式，后几种作用才是LL-37参与免疫反应的主要途径。人们通过分析LL-37的结构，设计类似LL-37多肽的新型多肽，发现它们也有相似的免疫作用。 展开更多
关键词 抗菌肽ll-37 作用机制 类似ll-37多肽 hcap-18
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