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基质金属蛋白酶-7 mRNA hTERT表达与血清癌胚抗原及其他相关蛋白联合检测对肺癌患者的临床意义 被引量：1
1
作者 田保国 韩存芝 +3 位作者 李德龙 王艳 杜丽莉 裴毅 《中国药物与临床》 CAS 2014年第6期752-754,共3页
外周血循环癌细胞是导致肿瘤复发、转移的主要原因之一,本研究通过对肺癌患者外周血中基质金属蛋白酶（MMP）-7 mRNA、hTERT表达及癌胚抗原（CEA）及相关蛋白CA199、CYFRA211、鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）... 外周血循环癌细胞是导致肿瘤复发、转移的主要原因之一,本研究通过对肺癌患者外周血中基质金属蛋白酶（MMP）-7 mRNA、hTERT表达及癌胚抗原（CEA）及相关蛋白CA199、CYFRA211、鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胃泌素释放肽前体（ProGRP）的联合检测,进一步探讨检测方法的敏感性,及早发现肺癌患者复发与转移,为进一步治疗提供科学依据。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶 htert MRNA htert表达 胃泌素释放肽 鳞状上皮细胞 血清癌胚抗原 肿瘤复发 淋巴结转移 电化学发光法 试剂盒
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HPV16感染与端粒酶hTERT、P21^(waf)、Ki67表达在宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变组织中的关系及意义 被引量：3
2
作者 赵富玺 孙瑞芳 +1 位作者 王晋芬 陈向伟 《大同医学专科学校学报》 2005年第4期1-4,9,共5页
目的:探讨HPV16感染与端粒酶hTERT、Ki67、P21waf表达在人类宫颈鳞癌及其癌前病变中的关系及其意义。方法:利用组织芯片技术结合原位杂交技术和免疫组织化学方法研究130例正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤样变组织和宫颈鳞癌组织中HPV16感染... 目的:探讨HPV16感染与端粒酶hTERT、Ki67、P21waf表达在人类宫颈鳞癌及其癌前病变中的关系及其意义。方法:利用组织芯片技术结合原位杂交技术和免疫组织化学方法研究130例正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤样变组织和宫颈鳞癌组织中HPV16感染以及端粒酶hTERT、Ki67、P21waf表达的情况。结果:①在8/22CINⅠ、7/11CINⅡ、11/13CINⅢ、4/6原位癌,41/52宫颈鳞癌中为HPV16杂交信号阳性,CINⅢ、浸润性鳞癌与正常宫颈组织相比HPV16杂交信号阳性率差异有显著统计学意义(P均<0.05);②从CINⅡ、CINⅢ到浸润癌hTERT表达与正常组织相比,差异皆有显著统计学意义(P均<0.05),且细性程度逐渐增加。hTERT表达在各级癌及癌前病变组织中与HPV16型的感染率之间也呈现出正相关性(P<0.05,r=0.339);③P21waf在癌组织中的阳性率及强度都低于正常宫颈组织(P<0.05),且P21waf的表达与HPV16感染、hTERT表达之间具有负相关性(P<0.05,r=-0.337;P<0.05,r=-0.248);④与正常宫颈组织相比从CINⅡ到宫颈浸润性鳞癌Ki67的表达,其差异有显著统计学意义(P<0.05),但Ki67的表达与HPV16的感染不具有相关性(P>0.05),与hTERT表达之间具有相关性(P<0.05,r=0.398),与P21waf呈现出负的相关性(P<0.05,r=-0.446)。结论:HPV16感染与hTERT、P21waf、Ki67互相作用,共同影响宫颈鳞癌的发生发展。这些指标利于阐明HPV16的恶性转化机制以及为提高宫颈鳞癌及其癌前病变诊断率提供依据。 展开更多
关键词 宫颈鳞状细胞癌 宫颈上皮内瘤样变 人类乳头瘤病变 端粒酶 htert P21^waf Ki67 组织芯片 端粒酶htert HPV16感染 P21^waf 癌前病变组织 KI67表达 宫颈鳞状细胞癌 宫颈浸润性鳞癌 宫颈上皮内瘤样变 免疫组织化学方法
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pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究
3
作者 黄晓梅 张蕾 +6 位作者 左其生 施青青 李东 汤贝贝 张亚妮 宋九州 李碧春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1253-1259,共7页
本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFPhTERT,并利用FuGENE^(?)HD转染鸡成纤... 本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFPhTERT,并利用FuGENE^(?)HD转染鸡成纤维细胞(DF-1),转染24 h后,荧光显微镜检测;再以80%BRL-CM(大鼠肝细胞条件培养基)与20%的ES基础培养液混合的条件培养基培养分离的cES:s,添加10μmol·L^(-1)维生素C,AKP染色以及相关表面抗原SSEA-1、SOX2和OCT4检测鉴定后,以G418筛选pEGFP-hTERT转染的cES:s,传代培养后荧光定量PCR检测相关干性基因的表达水平。结果表明:维生素C可以促进cESCs增殖,pEGFP—hTERT转染的DF-1细胞中可以检测到绿色荧光表达,pEGFP—hTERT转染的cESCs可持续传至10代以上,且仍保持未分化状态,干细胞表面特异性抗原检测呈阳性,且相关干性基因的表达水平差异不显著(P>0.05)。综上表明:pEGFP-hTERT转染的cESCs在80%BRL-CM结合外源因子的作用下,能够持续稳定传至10代且仍保持未分化状态,可应用于鸡胚胎干细胞的永生化和细胞系建立。 展开更多
关键词 pEGFP-htert htert基因 BRL-CM 鸡胚胎干细胞
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曲古抑菌素A对人胃腺癌SGC-7901细胞株增殖及其端粒酶hTERT—mRNA表达影响的研究 被引量：5
4
作者 刘立玺 石巍 +1 位作者 廖爱军 姚育红 《美国中华临床医学杂志》 2005年第2期132-134,共3页
目的探讨不同浓度的曲古抑菌素A(trichostatin A，TSA)对人胃腺癌SGC-7901细胞增生及其端粒酶hTERT-mRNA表达的作用。方法不同浓度的TSA与人胃腺癌SGC-7901细胞株共培养，MTT检测细胞增生，RT—PCR法检测细胞端拉酶hTERTH-mRNA的表达，... 目的探讨不同浓度的曲古抑菌素A(trichostatin A，TSA)对人胃腺癌SGC-7901细胞增生及其端粒酶hTERT-mRNA表达的作用。方法不同浓度的TSA与人胃腺癌SGC-7901细胞株共培养，MTT检测细胞增生，RT—PCR法检测细胞端拉酶hTERTH-mRNA的表达，同时用相差显微镜动态观察细胞形态及生长方式上的改变。结果TSA呈时间剂量依赖性抑制胃癌细胞株SGC-7901的生长，同时它也能显著减少hTERT-mRNA的表达，呈剂量依赖关系。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能抑制胃癌细胞株SGC-7901的hTERT-mRNA表达，进而抑制其生长，这可能是组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA抗肿瘤的另一机制。 展开更多
关键词 MRNA表达 端粒酶htert 人胃腺癌 曲古抑菌素A 影响的研究 细胞株增殖 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 SGC-7901细胞株 htert-mRNA 剂量依赖性抑制 胃癌细胞株 PCR法检测 剂量依赖关系 不同浓度 细胞增生 MTT检测 相差显微镜 TSA
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hTERT基因片段的克隆、表达和抗hTERT抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究 被引量：3
5
作者 SAID A.Saleh 孙建龙 +4 位作者 陈昭 黄建生 沈先荣 张伯生 任大明 《实验生物学报》 CSCD 2000年第3期229-235,共7页
端粒酶是一种重要的肿瘤生物学标志,其活性在生殖细胞、绝大多数肿瘤细胞和体外培养的永生细胞可以测知,但在大多数体细胞中不易测出。人端粒酶由两部分组成,包括hTERC和hTERT,hTERC在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达,而hTERT的表达似乎... 端粒酶是一种重要的肿瘤生物学标志,其活性在生殖细胞、绝大多数肿瘤细胞和体外培养的永生细胞可以测知,但在大多数体细胞中不易测出。人端粒酶由两部分组成,包括hTERC和hTERT,hTERC在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达,而hTERT的表达似乎受到严格的调控且和端粒酶活性一致。为了检测肿瘤细胞中端粒酶及hTERT的表达,我们制备了抗hTERT蛋白的特异性多克隆抗体。首先用RT-PCR方法克隆了hTERT cDNA的一个片段,将其连接到GST融合表达载体pGEX-5X-3后在大肠杆菌中融合表达。将纯化的融合蛋白抗原免疫动物,制备抗hTERT蛋白的多克隆抗体。不同的细胞抽提物用该抗体进行了Western blot分析,结果表明该抗体可特异识别端粒酶阳性细胞株中的hTERT及端粒酶,为端粒酶及hTERT的检测初步提供了一个简单有效的检测手段。 展开更多
关键词 htert基因片段 htert抗体 免疫检测 端粒酶
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RNA干扰技术靶向hTERT基因治疗肝癌的实验研究 被引量：30
6
作者 张鹏辉 涂植光 +3 位作者 杨明清 黄文方 邹琳 周亚莉 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期619-625,共7页
背景与目的:RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术,在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。目前,利用RNAi已抑制了包括cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内... 背景与目的:RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术,在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。目前,利用RNAi已抑制了包括cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个内源基因的表达。同时在艾滋病、病毒性肝炎等的治疗研究中也已取得一定进展。但对肝癌等恶性肿瘤中高表达的hTERT基因,国内外还未见相关研究报道。本研究利用RNAi技术,在体内外抑制hTERT基因表达,探讨RNAi对肝癌治疗的可行性。方法:设计干扰hTERT基因的小片段RNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT并导入肝癌SMMC7721细胞株和裸鼠移植瘤,在体内外诱导RNAi,采用流式细胞检测技术、RT-PCR法、免疫组化等同时检测RNAi治疗组和对照组hTERT基因表达及细胞增殖变化。结果:体外细胞实验显示,重组质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT导入肝癌SMMC7721细胞株3～7天后,肝癌细胞生长抑制率达37.5%;细胞周期相分布发生显著变化,S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加;hTERT的mRNA表达由99.4%下调到53.1%,hTERT蛋白表达由86.3%下调到46.6%。裸鼠体内实验结果显示,质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT注射裸鼠皮下移植瘤7天后,瘤体积明显缩小,hTERT的mRNA表达由99.1%下调到76.2%,hTERT蛋白表达由87.2% 展开更多
关键词 肝肿瘤 RNA干扰 htert 基因治疗 可行性 特异性
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榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及对端粒酶活性和hTERT表达影响的研究 被引量：14
7
作者 陈春美 杨卫忠 +5 位作者 王春华 石松生 易海波 黄勇 王锐 杨贤义 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期280-283,共4页
目的:探讨榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及其影响端粒酶活性及其催化亚单位人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的机制。方法:将榄香烯处理人脑胶质瘤U251细胞株后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,并求出半数抑制浓度(IC50),倒置显微镜和电镜... 目的:探讨榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及其影响端粒酶活性及其催化亚单位人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的机制。方法:将榄香烯处理人脑胶质瘤U251细胞株后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,并求出半数抑制浓度(IC50),倒置显微镜和电镜观察经榄香烯处理的U251细胞形态,流式细胞仪和原位末端标记技术检测细胞周期及细胞凋亡率的变化,免疫荧光技术观察凋亡小体,流式细胞仪测定bcl-2表达水平,端粒重复扩增(TRAP)法测定端粒酶活性的变化,RT-PCR检测bcl-2和hTERT的表达。结果:榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性,IC50为0.062mg/ml,倒置显微镜下可见榄香烯组细胞皱缩、变小,电镜下可见具有典型新月形核的凋亡细胞和凋亡小体,流式细胞仪检测榄香烯阻滞U251细胞周期中S期向G2/M期的转变过程,减少有丝分裂,并引起细胞凋亡,免疫荧光技术观察凋亡小体,TRAP法发现榄香烯可以降低端粒酶活性的变化,呈时间和剂量依赖型。RT-PCR分别证实榄香烯降低bcl-2和hTERT基因表达水平。结论:榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,并抑制U251细胞端粒酶的活性,榄香烯作用于胶质瘤的分子生物学机制可能通过抑制bcl-2表达,下调hTERT基因,降低端粒酶的活性,从而诱导细胞调亡。 展开更多
关键词 榄香烯 胶质瘤 细胞凋亡 bcl-2 端粒酶 htert
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CD82、hTERT蛋白的表达及HPV感染与阴茎癌的关系研究 被引量：11
8
作者 翟建坡 李鸣 +2 位作者 王其艳 魏东 许克新 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期817-822,共6页
目的:检测CD82、hTERT(人端粒酶逆转录酶)蛋白在阴茎癌组织中的表达情况以及阴茎癌组织中的HPV感染情况,以探讨其与阴茎癌病理分期和分级之间的相互关系以及在腹股沟淋巴结转移中的预测作用。方法:44例阴茎癌患者均接受阴茎部分/全切除... 目的:检测CD82、hTERT(人端粒酶逆转录酶)蛋白在阴茎癌组织中的表达情况以及阴茎癌组织中的HPV感染情况,以探讨其与阴茎癌病理分期和分级之间的相互关系以及在腹股沟淋巴结转移中的预测作用。方法:44例阴茎癌患者均接受阴茎部分/全切除和区域淋巴结切除或清扫术。应用免疫组化技术检测阴茎癌中CD82、hTERT蛋白的表达。同时应用PCR技术检测HPV感染情况。结果:CD82、hTERT和HPV DNA在阴茎癌中的阳性率分别为47.7%、38.6%和25.9%。扩增出的HPV DNA均为HPV16型。病理分级和hTERT蛋白的表达与阴茎癌腹股沟淋巴结转移呈正相关(P=0.032,P=0.041);CD82表达与病理分期亦呈正相关(P=0.045);病理分期、CD82表达和HPV-16 DNA阳性率与阴茎癌腹股沟淋巴结转移无相关性(P=0.627,P=0.094和P=0.633)。结论:病理分级和hTERT蛋白表达可能是预测阴茎癌区域淋巴结转移的独立预后因素,可为阴茎癌临床进展的风险及预后的判断提供参考。 展开更多
关键词 阴茎癌 淋巴结转移 CD82 htert HPV
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c-myc调节人端粒酶逆转录酶(htert)启动子活性的体外研究 被引量：10
9
作者 林勇 谢渭芬 +4 位作者 陈伟忠 张新 张兴荣 张忠兵 沈建伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期34-36,共3页
目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有... 目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有htert 80 0bp启动子的质粒TERTLuc(80 0 )在肿瘤细胞HepG2 中活性显著增强。外源性转录因子c myc可显著上调htert启动子的表达 ,其激活作用与剂量呈正相关。人工突变c myc结合位点明显降低htert启动子的活性。结论 :c myc可直接激活htert启动子的表达 ,是调节端粒酶活性的重要转录因子。 展开更多
关键词 C-MYC 人端粒酶逆转录酶 htert 启动子 基因调控 脂质体 肝癌细胞
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逆转录病毒介导反义hTERT对肺癌细胞的抑制作用 被引量：7
10
作者 田凤军 王智勇 +2 位作者 马俊义 赵云霞 卢炜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期545-549,共5页
背景与目的:抑制端粒酶活性可以抑制细胞端粒延长,进而抑制永生细胞的增殖。为了探讨以端粒酶为靶的肺癌基因治疗可能性,本实验观察反义人端粒酶逆转录酶组分(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)cDNA对A549肺癌细胞的端粒酶活... 背景与目的:抑制端粒酶活性可以抑制细胞端粒延长,进而抑制永生细胞的增殖。为了探讨以端粒酶为靶的肺癌基因治疗可能性,本实验观察反义人端粒酶逆转录酶组分(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)cDNA对A549肺癌细胞的端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用。方法:RT-PCR扩增hTERTmRNA5'起始端835bp的cDNA,分别正向和反向插入到逆转录病毒表达载体pLXSN质粒中,转染包装细胞PT67后获得重组病毒,病毒感染肺癌A549细胞。Westernblot检测hTERT蛋白表达,TRAP法检测端粒酶活性,倒置显微镜观察细胞形态变化和绘制细胞生长曲线了解细胞增殖情况,流式细胞仪和DNA片段电泳观察凋亡情况。结果:反义hTERT作用肺癌A549细胞后hTERT蛋白表达下降,端粒酶活性被抑制,细胞增殖受到抑制并出现明显的细胞凋亡。结论:反义hTERT对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用,抑制细胞生长,促进细胞凋亡,hTERT有可能成为肺癌基因治疗靶点。 展开更多
关键词 逆转录病毒 介导反义 htert 肺癌细胞 抑制作用
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苦参素注射液与顺铂联合对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性及wtp53、hTERT mRNA表达的影响 被引量：10
11
作者 韦星 黄赞松 +3 位作者 黄岑汉 周喜汉 黄衍强 邓志华 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第11期1759-1761,共3页
目的:探讨苦参素注射液与顺铂(DDP)联合对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及wtp53、hTERTmRNA表达的影响。方法:采用MTT法测定细胞的增殖抑制率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,TRAP-ELISA检测端粒酶活性,半定量RT-PCR法检测wtp53和hT... 目的:探讨苦参素注射液与顺铂(DDP)联合对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及wtp53、hTERTmRNA表达的影响。方法:采用MTT法测定细胞的增殖抑制率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,TRAP-ELISA检测端粒酶活性,半定量RT-PCR法检测wtp53和hTERTmRNA表达。结果:苦参素注射液、DDP单独应用均能抑制SMMC-7721细胞增殖,两药联合具有单纯相加或协同作用,与DDP单药组相比,联合用药组的细胞抑制率明显增加(P<0.01),端粒酶活性显著下降(P<0.01),wtp53mRNA表达明显升高(P<0.01),hTERTmRNA表达明显减少(P<0.01)。结论:苦参素注射液和DDP联合应用具有单纯相加或协同抗肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用,其机制可能通过上调wtp53和下调hTERT基因表达,从而有效抑制端粒酶活性。 展开更多
关键词 肝肿瘤 苦参素 顺铂 SMMC-7721细胞 端粒酶 WTP53 htert
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胸腔积液中hTERT mRNACEA CA19-9检测及其意义 被引量：9
12
作者 赵年贵 叶小群 +2 位作者 杨维兰 邹叶青 颜春松 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期92-95,共4页
目的:探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、CEA、CA19-9在鉴别诊断良恶性胸腔积液的意义。方法:采用全自动化学发光法检测胸腔积液中CEA、CA19-9含量及RT-PCR检测胸腔积液中hTERT mRNA表达。结果:恶... 目的:探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、CEA、CA19-9在鉴别诊断良恶性胸腔积液的意义。方法:采用全自动化学发光法检测胸腔积液中CEA、CA19-9含量及RT-PCR检测胸腔积液中hTERT mRNA表达。结果:恶性组中hTERTmRNA、CEA、CA19-9阳性率显著高于良性组(P<0.05)。三者在恶性胸腔积液的敏感性(%)、特异性(%)和诊断符合率(%)分别为:hTERT mRNA:81.8/90.5/86.1,CEA:52.3/92.9/72.1,CA19-9:34.1/90.5/61.6。hTERT mRNA+CEA在恶性胸腔积液中诊断阳性率97.7%。结论:三者均有助于良恶性胸腔积液的鉴别诊断,而hTERT mRNA对于鉴别良恶性胸腔积液有更大的临床价值,CA19-9不宜作为首选指标;hTERT mRNA和CEA联合检测可以进一步提高恶性胸腔积液的阳性检出率,有助于提高其诊断价值。 展开更多
关键词 胸腔积液htert MRNA CEA CA19-9
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3种卵巢癌细胞中hTERT转录水平及其与端粒酶活性的相关性研究 被引量：6
13
作者 宋悦 孔北华 +2 位作者 刘培淑 马道新 江森 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期486-491,共6页
背景与目的:端粒酶在约90%的肿瘤细胞中有活性而在绝大多数正常细胞中受抑,催化亚单位端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)是端粒酶的重要组成部分,其表达的调控主要发生在转录水平。端粒酶、hTERT、hTERT启动... 背景与目的:端粒酶在约90%的肿瘤细胞中有活性而在绝大多数正常细胞中受抑,催化亚单位端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)是端粒酶的重要组成部分,其表达的调控主要发生在转录水平。端粒酶、hTERT、hTERT启动子三者之间密切相关。本研究探讨卵巢癌细胞系中hTERT启动子的活性及其与hTERTmRNA表达和端粒酶活性之间的关系。方法:应用脂质体转染法将hTERT核心启动子基因转入3种卵巢癌细胞OVCAR3、SKOV3、3AO及正常卵巢上皮细胞中,并用荧光素酶检测实验检测其中hTERT启动子的活性;应用RT-PCR半定量法检测这4种细胞中hTERTmRNA的表达水平;应用PCR-ELISA定量检测这4种细胞中端粒酶的活性。同时以端粒酶阳性的永生化人胚肾成纤维细胞HEK293作为阳性对照,以端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞HELF作为阴性对照。结果:OVCAR3、SKOV3、3AO细胞及正常卵巢上皮细胞中的hTERT启动子活性(视每种细胞中pGL3-control的启动子活性为100%)分别为31.4%、20.3%、17.7%和0.3%;hTERTmRNA的相对表达水平(视SKOV3的表达水平为1.00)分别为1.30、1.00、0.63和0;端粒酶活性分别为0.580、0.414、0.386和0.103(>0.200时定为阳性)。3种卵巢癌细胞中hTERT启动子活性、hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高。 展开更多
关键词 卵巢癌细胞 htert转录 端粒酶活性 相关性 研究
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枸杞多糖对小鼠移植性肝癌端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响 被引量：10
14
作者 张鸣号 王秀玉 +2 位作者 王秀梅 刘青 杨美玲 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2438-2440,共3页
目的探索枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠移植性肝癌端粒酶活性及其限速酶hTERT表达的影响。方法采用皮下接种法建立小鼠移植性肝癌模型,将96只小鼠随机分成正常对照组,模型组,LBP高、中、低(20,10,5 mg/kg·d... 目的探索枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠移植性肝癌端粒酶活性及其限速酶hTERT表达的影响。方法采用皮下接种法建立小鼠移植性肝癌模型,将96只小鼠随机分成正常对照组,模型组,LBP高、中、低(20,10,5 mg/kg·d)剂量组和环磷酰胺(20 mg/kg·d)组。观察LBP对小鼠肿瘤体积、抑瘤率的影响。PCR-TRAP-ELISA法检测端粒酶的活性,Western blot测定hTERT蛋白表达。结果 20,10,5 mg/kg·d的LBP能明显减小肿瘤细胞的体积和质量(P<0.05),抑瘤率分别为42.23%、25.10%和9.16%;同时,LBP(20,10mg/kg·d)能明显抑制肝癌组织hTERT蛋白表达(P<0.05),降低端粒酶的活性(P<0.05)。结论 LBP可通过抑制小鼠肝癌组织hTERT蛋白表达、降低端粒酶的活性,从而对小鼠移植性肝癌的生长起到抑制作用。 展开更多
关键词 枸杞多糖 H22肝癌细胞 端粒酶 htert
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hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用 被引量：8
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作者 孙玲 王峰 +4 位作者 孙慧 乐晓萍 葛秀峰 姜中兴 张钦宪 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期649-653,共5页
为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细... 为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖状态,应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性。结果发现反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,hTERT基因表达明显受抑,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示反义寡核苷酸10、20和30μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39,0.944±0.16,与未作用组(2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);正义寡核苷酸20μmol/L作用组(OD450-690值为2.376±0·65)与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。TRAP-PAGE检测表明hTERTASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmol/L作用组条带最少。结论hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖,下调端粒酶活性。 展开更多
关键词 HL-60细胞 htert 反义寡核苷酸 端粒酶活性
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hTERT启动子调控osm基因表达在体外的抑癌作用 被引量：5
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作者 杨义军 郑晓飞 +3 位作者 朱捷 吕星 罗瑛 孙志贤 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期575-578,共4页
背景与目的:肿瘤基因治疗中基因特异表达具有重要意义,构建特异表达载体是肿瘤基因治疗的基础。本研究探讨端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子调控抑瘤素(oncostatinM,osm)基因在端粒酶阳性肿瘤细胞中表... 背景与目的:肿瘤基因治疗中基因特异表达具有重要意义,构建特异表达载体是肿瘤基因治疗的基础。本研究探讨端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子调控抑瘤素(oncostatinM,osm)基因在端粒酶阳性肿瘤细胞中表达的特异性,以及osm对肿瘤细胞增殖的影响。方法:构建phTERT-osm表达载体,瞬时转染肿瘤细胞;采用RT-PCR法检测外源基因表达,用MTT法检测osm基因表达对肿瘤细胞生长的影响。结果:hTERT启动子调控osm基因在端粒酶阳性HepG2细胞中明显表达,而在正常人胚肺成纤维细胞(humanembryoniclungfibroblast,HEL)中未见表达。osm的表达对端粒酶阳性HepG2、HeLa、Glc和A549细胞的增殖有明显的抑制作用,抑制率为12.4%～46.0%;而对端粒酶阴性的HEL细胞没有明显的影响。结论:hTERT启动子在端粒酶阳性肿瘤细胞中能明显激活phTERT-osm载体表达osm,并抑制肿瘤细胞的生长。 展开更多
关键词 htert基因 启动子 osm基因 抑癌基因 端粒酶 肿瘤杀伤基因 靶向性表达 基因治疗
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hTERT转染神经干细胞端粒酶活性及hTERT mRNA检测 被引量：7
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作者 刘学强 杨辉 +4 位作者 何家全 宋业纯 邱克军 王彬 吕胜青 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1292-1294,共3页
目的以逆转录病毒PLXSN为载体,将hTERT基因转染入体外培养的人神经干细胞,检测神经干细胞端粒酶活性及hTERT mRNA表达情况,为建立永生化神经干细胞系提供一种新的思路。方法体外扩增人神经干细胞及基因转染后,应用PCR-ELISA法检测神经... 目的以逆转录病毒PLXSN为载体,将hTERT基因转染入体外培养的人神经干细胞,检测神经干细胞端粒酶活性及hTERT mRNA表达情况,为建立永生化神经干细胞系提供一种新的思路。方法体外扩增人神经干细胞及基因转染后,应用PCR-ELISA法检测神经干细胞端粒酶活性,荧光定量PCR法检测hTERT mRNA表达情况。结果通过逆转录病毒介导的hTERT基因转染人神经干细胞后,端粒酶活性明显升高,持续表达,hTERT mRNA也早期呈高水平表达,但继之下降,维持在一个较低水平。结论转染hTERT基因后的神经干细胞具有表达高水平端粒酶活性,并稳定表达,这为建立基因工程的永生化神经干细胞系奠定了基础。而hTERT mRNA则逐渐下降,并维持在一个较低水平,不能作为检测神经干细胞增殖和分化能力的指标。 展开更多
关键词 神经干细胞 端粒酶 htert 转染
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食管癌和淋巴结转移组织中c-myc,hTERT和c-MET蛋白的表达 被引量：6
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作者 秦艳茹 李永欣 +8 位作者 王立东 范宗民 李吉林 何欣 高珊珊 焦新英 冯常炜 张延瑞 刘宾 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第1期34-36,共3页
目的:探讨食管癌和淋巴结转移组织中c-myc、hTERT和c-MET的表达。方法:利用组织微阵列技术,采用免疫组化ABC法,测定58例食管癌及其相应的癌旁组织、8例转移淋巴结组织中c-myc、hTERT和c-MET的表达。结果:癌旁、癌及淋巴结转移组织中c-my... 目的:探讨食管癌和淋巴结转移组织中c-myc、hTERT和c-MET的表达。方法:利用组织微阵列技术,采用免疫组化ABC法,测定58例食管癌及其相应的癌旁组织、8例转移淋巴结组织中c-myc、hTERT和c-MET的表达。结果:癌旁、癌及淋巴结转移组织中c-myc阳性率分别为7%,66%,75%;hTERT阳性率分别为0%,48%,75%;c-MET阳性率分别为7%,34%,75%;癌旁和癌组织间c-myc和hTERT的表达差异有统计学意义(P<0.05),癌旁和癌组织间,以及癌和淋巴结转移灶之间c-MET的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。食管癌组织中c-myc与hTERT的表达呈正相关(r=0.411,P=0.002),c-myc与c-MET的表达不相关(r=0.211,P=0.146)。结论:c-myc、hTERT和c-MET的高表达可能与食管癌发生发展相关,c-myc可能参与了hTERT的激活过程,c-MET的高表达可能参与了食管癌淋巴结的转移过程。 展开更多
关键词 食管肿瘤 癌 c—myc htert C-MET
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吴茱萸碱和小檗碱对HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响 被引量：9
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作者 常金荣 文彬 +2 位作者 王汝俊 陈蔚文 王建华 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期6-8,共3页
目的:探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细... 目的:探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡变化,RT-PCR法检测hTERT的表达。结果:吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测表明吴茱萸碱和盐酸小檗碱能够诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性;并且端粒酶hTERT表达降低,具有剂量依赖关系。结论:吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用可能通过下调端粒酶hTERT基因表达,降低端粒酶的活性,从而诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 吴茱萸碱 小檗碱 HT29细胞 凋亡 htert
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三氧化二砷诱导Raji细胞凋亡过程中端粒酶活性和hTERT、bcl-2基因表达的研究 被引量：9
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作者 何冬梅 张洹 +1 位作者 刘革修 余卫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1422-1423,1430,共3页
目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Raji细胞凋亡并初步探讨端粒酶活性、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及bcl-2基因表达之间的关系。方法:通过姬姆萨染色来观察细胞的凋亡;以RT-PCR分析bcl-2、hTERT基因的mRNA表达水平;利用半定量多聚酶... 目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Raji细胞凋亡并初步探讨端粒酶活性、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及bcl-2基因表达之间的关系。方法:通过姬姆萨染色来观察细胞的凋亡;以RT-PCR分析bcl-2、hTERT基因的mRNA表达水平;利用半定量多聚酶链反应-酶联免疫反应(PCR-ELISA)方法检测As2O3处理Raji细胞前后端粒酶活性的改变。结果:2μmol/LAs2O3能诱导Raji细胞凋亡,2μmol/LAs2O3作用于Raji细胞8h、12h、24hhTERTmRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异(P<0.05),12h、24hbcl-2mRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异。2μmol/LAs2O3作用48h后,Raji细胞中端粒酶活性即出现下降,作用72h、96h,端粒酶的活性明显受到抑制,吸光度分别为0.829、0.328、0.291,分别与空白对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论:As2O3诱导Raji细胞凋亡过程中,端粒酶活性下调与hTERT、bcl-2基因mRNA表达下降有关。 展开更多
关键词 三氧化二砷 RAJI细胞 端粒 末端转移酶 htert基因 BCL-2基因 细胞凋亡
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