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重组融合人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达 被引量:13
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作者 金光泽 段作营 +2 位作者 张莲芬 金坚 李华钟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期595-601,共7页
构建编码人血清白蛋白-人白介素-2 C125A的重组表达质粒,在Pichia pastorisGS115中表达,获得具有较高IL-2活性的融合蛋白。设计并合成符合P.pastoris密码子偏好,且含有C125A突变的IL-2编码基因IL-2m,通过酶切连接方法将其与人血清白蛋白... 构建编码人血清白蛋白-人白介素-2 C125A的重组表达质粒,在Pichia pastorisGS115中表达,获得具有较高IL-2活性的融合蛋白。设计并合成符合P.pastoris密码子偏好,且含有C125A突变的IL-2编码基因IL-2m,通过酶切连接方法将其与人血清白蛋白(HSA)的编码基因连接为融合蛋白HSA-IL2m的编码基因。克隆到表达质粒pPIC9K中,电击转化P.pastorisGS115感受态细胞,获得重组P.pastorisGS115/pPHIm基因工程菌。摇瓶发酵获得分泌表达产物。结果:Western blot鉴定结果显示该融合蛋白与IL-2、HSA的抗体都能发生免疫反应。经脱盐、冻干制备的粗蛋白的IL-2生物学活性为1.51×106IU/mg。结论:在P.pastorisGS115中成功表达了具有人白介素-2生物学活性的HSA-IL2m融合蛋白。 展开更多
关键词 突变型人白介素-2 人血清白蛋白 毕赤酵母 融合蛋白
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人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量:6
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作者 郭泽峰 段作营 +2 位作者 张莲芬 金坚 李华钟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期82-86,共5页
目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichiapastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白。方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的c... 目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichiapastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白。方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来,克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19/IH。用EcoRI和NotI双酶切pMD19/IH和pPIC9K两种质粒,通过琼脂糖凝胶电泳分离,试剂盒纯化,将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒,利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH;CTLL-2/MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性。结果:成功构建了人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,融合蛋白得到了较理想的表达;重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100U/mL的生物学活性。结论:成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2/血清白蛋白融合蛋白,该研究结果未见文献报道。 展开更多
关键词 人白介素-2 人血清白蛋白 毕赤酵母 融合蛋白 表达
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原子吸收光谱法测定人血白蛋白制剂中的痕量铝 被引量:8
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作者 孙梅 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期113-116,共4页
目的:建立快速测定人血白蛋白制剂中痕量铝的新方法。方法:采用具有横向加热石墨炉原子化器系统和纵向塞曼效应背景校正的原子吸收光谱仪测定了人血白蛋白中的痕量铝。结果:本方法的特征量为39.7 pg,检出限为0.51 ng·mL^(-1),RSD ... 目的:建立快速测定人血白蛋白制剂中痕量铝的新方法。方法:采用具有横向加热石墨炉原子化器系统和纵向塞曼效应背景校正的原子吸收光谱仪测定了人血白蛋白中的痕量铝。结果:本方法的特征量为39.7 pg,检出限为0.51 ng·mL^(-1),RSD 为8.2%,回收率为90.2%~103.2%。结论:该方法操作简单,灵敏度高且结果准确可靠。 展开更多
关键词 石墨炉原子吸收光谱法 人血白蛋白 在线 痕量铝
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高效亲和色谱法测定丹皮酚与固定化人血清白蛋白结合域 被引量:4
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作者 于雪 张君才 卫引茂 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期688-692,共5页
利用亲和色谱,在模拟人体生理环境下(37℃、pH7.4),采用竞争置换法研究了丹皮酚(PAE)与固定化人血清白蛋白(HSA)的相互作用。通过对PAE的自我竞争分析及PAE与HSA上结合位点的标记物间的竞争置换分析,得到了PAE和HSA间的结合常数、结合... 利用亲和色谱,在模拟人体生理环境下(37℃、pH7.4),采用竞争置换法研究了丹皮酚(PAE)与固定化人血清白蛋白(HSA)的相互作用。通过对PAE的自我竞争分析及PAE与HSA上结合位点的标记物间的竞争置换分析,得到了PAE和HSA间的结合常数、结合位点数和结合域。结果表明:PAE在HSA分子中仅存在一类结合位点,结合常数为4.84×103L/mol,该结合位点为HSA上的SudlowsiteⅡ;通过对PAE与HSA相互作用的热力学研究,推断出二者间的作用力类型为氢键或范德华力。 展开更多
关键词 高效亲和色谱 竞争置换分析 丹皮酚 人血清白蛋白
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中药小分子阿魏酸和丹皮酚与人血清白蛋白的竞争结合作用研究 被引量:13
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作者 雷根虎 刘丽亭 +2 位作者 戴小军 卫引茂 龚波林 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第1期55-61,共7页
用亲和色谱研究了两种中药小分子阿魏酸(FA)、丹皮酚(PAE)在人体生理条件缓冲溶液(pH7.4)条件下与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.从药物分子在蛋白质分子上有多种类型相互独立的结合位点的假定出发,应用Langmuir吸附模型和竞争置换分析... 用亲和色谱研究了两种中药小分子阿魏酸(FA)、丹皮酚(PAE)在人体生理条件缓冲溶液(pH7.4)条件下与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.从药物分子在蛋白质分子上有多种类型相互独立的结合位点的假定出发,应用Langmuir吸附模型和竞争置换分析研究了FA,PAE与HSA的竞争性相互作用.结果表明,FA,PAE与HSA之间存在一类位点,且FA与PAE竞争HSA上的indole位点(siteⅡ).根据热力学参数推测出FA,PAE与HSA之间的作用力主要为氢键作用.从FA,PAE竞争HSA上同一位点的角度,对中医用药中常将含有FA与含有PAE的中药配伍使用,以提高疗效的临床用药现象进行了解释. 展开更多
关键词 亲和色谱 人血清白蛋白 阿魏酸 丹皮酚 小分子-生物大分子相互作用
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人血清白蛋白与促红细胞生成素融合蛋白的构建及表达 被引量:3
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作者 黄迎春 苟兴华 +3 位作者 韩蕾 李德华 赵兰英 吴洽庆 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期317-321,共5页
目的构建重组人血清白蛋白促红细胞生成素融合蛋白(HSA-EPO)表达载体,用CHO细胞表达该重组蛋白。方法 PCR扩增出人血清白蛋白基因(HSA)和促红细胞生成素基因(EPO);合成编码多肽GS(GGGGS)3的DNA片段作为接头(Linker),采用重叠PCR的方法将... 目的构建重组人血清白蛋白促红细胞生成素融合蛋白(HSA-EPO)表达载体,用CHO细胞表达该重组蛋白。方法 PCR扩增出人血清白蛋白基因(HSA)和促红细胞生成素基因(EPO);合成编码多肽GS(GGGGS)3的DNA片段作为接头(Linker),采用重叠PCR的方法将Linker与EPO基因拼接成LEPO基因。HSA与LEPO基因通过BamHⅠ酶切位点相连成HSA-EPO融合基因;将该融合基因插入表达载体pCI-neo构建为表达质粒pCI-HLE。脂质体转染CHO细胞,以G418抗性筛选转染细胞。用PCR及Western blot方法鉴定被转染CHO细胞,以ELISA方法检测被转染CHO细胞表达情况。结果酶切及测序结果证实pCI-HLE构建成功。PCR检测表明融合基因已转入CHO细胞;Western blot结果表明融合基因成功表达,并具有EPO免疫原性。ELISA测活显示融合蛋白体外活性在86~637 IU/(mL.106.72 h)之间。结论 pCI-HLE真核表达载体可以在CHO细胞中成功表达具有EPO免疫原性的HSA-EPO融合蛋白,为开发长效EPO奠定基础。 展开更多
关键词 血清白蛋白 促红细胞生成素 融合蛋白 CHO细胞
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人血清白蛋白功能化的磁性纳米粒子对掌叶大黄的配体垂钓
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作者 熊静 任晓云 +2 位作者 丁立生 谢静 廖循 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期164-167,共4页
掌叶大黄是中国传统的药用植物,其主要活性成分为蒽醌类化合物.利用人血清白蛋白(Human serumalbumin,HSA)功能化的磁性纳米粒子(Magnetic nanoparticles,MNPs)为固相萃取材料,对掌叶大黄的水提取液进行配体垂钓研究,从中捕获到两个HSA... 掌叶大黄是中国传统的药用植物,其主要活性成分为蒽醌类化合物.利用人血清白蛋白(Human serumalbumin,HSA)功能化的磁性纳米粒子(Magnetic nanoparticles,MNPs)为固相萃取材料,对掌叶大黄的水提取液进行配体垂钓研究,从中捕获到两个HSA的配体;结合质谱鉴定其结构分别为大黄素和大黄酚.基于磁性纳米粒子的配体垂钓技术可为从传统药用植物中寻找HSA的小分子配体提供一个简便有效的方法. 展开更多
关键词 配体垂钓 磁性纳米粒子 人血清白蛋白 掌叶大黄 活性小分子
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静注人免疫球蛋白和人血白蛋白冲管液体安全量的测定 被引量:3
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作者 周红萍 严俊 陈晓瑾 《中国临床药学杂志》 CAS 2015年第6期363-366,共4页
目的测定静注人免疫球蛋白和人血白蛋白的冲管液体安全量。方法分别采用滴注和微泵注射2种方式进行冲管,速度分别为20、30、40、60滴·min^(-1)和10、30 m L·h^(-1)。紫外分光光度法测定不同时段冲管液的吸光度(A),比较浓度下... 目的测定静注人免疫球蛋白和人血白蛋白的冲管液体安全量。方法分别采用滴注和微泵注射2种方式进行冲管,速度分别为20、30、40、60滴·min^(-1)和10、30 m L·h^(-1)。紫外分光光度法测定不同时段冲管液的吸光度(A),比较浓度下降至1%或者相同时需要的冲管液体体积。结果冲管液药物浓度随冲管液体量增加而降低。冲至管路中药物浓度相同时,20滴·min^(-1)较其他滴速需要量增加,人血白蛋白需要量略大于静注人免疫球蛋白。滴注40 m L或微泵10 m L冲管,可使药液浓度下降至1%以下。冲管液中药物浓度下降至0.1 g·L^(-1)时,静注人免疫球蛋白和人血白蛋白静滴冲管需要的液体量分别为55 m L和65 m L,微泵冲管为12 m L和14 m L。A下降至0.1以下时,静注人免疫球蛋白和人血白蛋白静滴冲管需要的液体量分别为55 m L和65 m L,微泵冲管均为14 m L。结论滴注冲管时,分别冲管55 m L和65 m L可使静注人免疫球蛋白和人血白蛋白输液管中的浓度降至安全浓度。微泵冲管时,冲管14 m L均可使两者输液管中的浓度降至安全浓度。 展开更多
关键词 静注人免疫球蛋白 人血白蛋白 微泵注射 冲管体积
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