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免疫球蛋白测定和免疫电泳在多发性骨髓瘤的诊断中的临床应用 被引量:1
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作者 杨奇 刘旻 +1 位作者 张丽翠 马雅静 《新疆医学》 2024年第1期61-64,共4页
目的探讨免疫球蛋白定量检测、免疫蛋白电泳和免疫固定电泳在多发性骨髓瘤(MM)诊断中的应用与价值。方法收集在2020年6月-2021年6月期间就诊于本院确诊为MM患者58例血清,检测血清免疫球蛋白定量[IgG,IgA,IgM,κ轻链(kappa light chain)... 目的探讨免疫球蛋白定量检测、免疫蛋白电泳和免疫固定电泳在多发性骨髓瘤(MM)诊断中的应用与价值。方法收集在2020年6月-2021年6月期间就诊于本院确诊为MM患者58例血清,检测血清免疫球蛋白定量[IgG,IgA,IgM,κ轻链(kappa light chain)和λ轻链(lambda light chain)],并进行血清蛋白电泳及免疫固定电泳,评价上述检测指标在MM诊断中的临床应用价值。结果58例MM患者中41人经蛋白电泳检测发现存在M蛋白,检出阳性率为70.7%,经免疫固定电泳检测后;54例检测阳性,阳性率93.1%,差异有统计学差异。另外IgG型32例(55.2%)、IgA型8例(13.8%)、IgM型3例(5.1%)、轻链型8例(13.8%),同时相应对类型的免疫球蛋白和轻链增高并伴其它组分免疫球蛋白及轻链降低。结论免疫球蛋白及轻链检测、免疫蛋白电泳是临床初筛多发性骨髓瘤的重要方法,而免疫固定电泳能够快速、准确的对MM进行诊断及分型,可作为MM常规检测方法之一。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 免疫蛋白电泳 固定电泳 临床价值
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赤点石斑鱼诺达病毒的纯化及其衣壳蛋白的Western-blot分析 被引量:9
2
作者 黄剑南 林蠡 +2 位作者 翁少萍 冯娟 何建国 《南方水产》 2005年第5期33-36,共4页
采用差速离心,蔗糖(10%~40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%~40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102~1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分... 采用差速离心,蔗糖(10%~40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%~40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102~1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分子量为37和31kDa,而以31kDa的蛋白为主。 展开更多
关键词 赤点石斑鱼诺达病毒 衣壳蛋白 纯化 western-blot分析
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黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的原核表达及其蛋白产物的Western-blot分析 被引量:5
3
作者 安玉麟 孙瑞芬 +2 位作者 张鹤龄 郭树春 闫素丽 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期84-87,共4页
为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(GOD)在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株3.758的葡萄糖氧化酶(GOD)基因定向克隆于原核表达载体pET-11a上,构建了融合表达的重组质粒pET/GO,转化E.coliBL21(DE3)plysS,用IPTG诱导,... 为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(GOD)在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株3.758的葡萄糖氧化酶(GOD)基因定向克隆于原核表达载体pET-11a上,构建了融合表达的重组质粒pET/GO,转化E.coliBL21(DE3)plysS,用IPTG诱导,超声波粉碎细菌细胞,SDS-PAGE电泳检测,GOD基因获得了表达,表达的融合蛋白相对分子质量为66.5 kDa。用市售葡萄糖氧化酶免疫家兔获得抗血清,酶联法(ELISA)测定其效价为106,West-ern-blot分析证明表达的融合蛋白与兔抗GOD血清有较强的特异性,为黑曲霉3.758葡萄糖氧化酶(GOD)抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉3.758 葡萄糖氧化酶基因 融合表达 抗血清 ELISA western-blot
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Western-blot法测定重组人纽表位肽12的抗原特异性 被引量:1
4
作者 邓灵福 祁超 +2 位作者 李文新 冯玉文 王莹莹 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2006年第1期79-81,共3页
利用Western-blot法测定重组人纽表位肽12的抗原特异性,结果显示目标蛋白有明显的显色带.本方法灵敏、准确、简单,适用于重组人纽表位肽12抗原特异性检测.
关键词 western-blot SDS-PAGE 抗原特异性
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Western-blot综合性实验在分子诊断学教学中的实施 被引量:2
5
作者 李江滨 谭荧飞 李育超 《科技创新导报》 2012年第36期142-142,共1页
对Western-blot综合性实验在分子诊断学教学中的实施情况进行探讨,并分析其教学中存在的问题及提出解决对策,为有关院校开设Western-blot实验教学提供参考。
关键词 western-blot 综合性实验 教学
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叶用莴苣幼苗幼叶总蛋白SDS-PAGE和Western-blot方法的优化 被引量:3
6
作者 李洋 韩莹琰 +1 位作者 范双喜 陈曙红 《中国农学通报》 CSCD 2012年第31期153-156,共4页
为建立一套适合叶用莴苣(Lactuca sativeL.)热激蛋白研究的SDS-PAGE和Western-blot方法。以叶用莴苣W7为材料,采用改进的TCA/Acetone法提取叶片蛋白,比较了2种电压下SDS凝胶分离蛋白质的效果,使用4℃保存2周的抗体稀释液,并且得到了较... 为建立一套适合叶用莴苣(Lactuca sativeL.)热激蛋白研究的SDS-PAGE和Western-blot方法。以叶用莴苣W7为材料,采用改进的TCA/Acetone法提取叶片蛋白,比较了2种电压下SDS凝胶分离蛋白质的效果,使用4℃保存2周的抗体稀释液,并且得到了较清晰的热激蛋白70和内参蛋白Rubisco条带,初步确定了叶用莴苣叶片热激蛋白的western-blot实验条件。 展开更多
关键词 叶用莴苣 热激蛋白 western-blot
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果梅CCoAOMT蛋白Western-blot体系建立与优化
7
作者 张勇 侍婷 +1 位作者 吴欣欣 高志红 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期977-982,共6页
[目的]本文旨在建立一套适合于果梅(Prunus mume)Western-blot的蛋白质提取和技术体系。[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较... [目的]本文旨在建立一套适合于果梅(Prunus mume)Western-blot的蛋白质提取和技术体系。[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较2种提取方法的优劣,并通过设置不同的蛋白上样量(20、30、40、50及60μg)、转膜时间(40、60及90 min)、一抗稀释比例(1∶500、1∶1 000、1∶2 000及1∶5 000)以及一抗孵育时间(室温1 h、室温2 h及4℃过夜)等组合,研究适合果梅花芽CCo AOMT蛋白Western-blot的最佳体系。[结果]成功建立了快速、灵敏、特异的Western-blot体系,确定了果梅花芽CCoAOMT蛋白的Western-blot试验条件。SDS上样缓冲液直接提取法提取蛋白快速、高效,最佳条件为以蛋白上样量30μg、转膜1 h、一抗稀释比例1∶1 000以及一抗孵育2 h。[结论]本试验建立了简单、快速和重复性好的SDS上样缓冲液直接提取法以及优化的上样量、转膜时间和抗体浓度等Western-blot体系,为梅等木本植物开展Western-blot研究提供依据。 展开更多
关键词 果梅 花芽 蛋白提取 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT) western-blot
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Western-blot方法分析人甲状腺及其肿瘤组织中bFGFs
8
作者 陈慧敏 李尧华 +1 位作者 刘玉和 陈奕桦 《吉林医学院学报》 1998年第1期13-14,共2页
目的:研究人甲状腺瘤的发生分期bFGFs基因异常表达的关系。方法:采用Western-blot方法对人甲状腺及其肿瘤组织来源的bFGFs进行分析研究。结果:人正常甲状腺组织来源的bFGFs分子量为17KD和18KD,... 目的:研究人甲状腺瘤的发生分期bFGFs基因异常表达的关系。方法:采用Western-blot方法对人甲状腺及其肿瘤组织来源的bFGFs进行分析研究。结果:人正常甲状腺组织来源的bFGFs分子量为17KD和18KD,而人甲状腺肿瘤组织来源的bFGFs为14KD、17KD和18KD。结论:14KDbFGFs的出现提示人甲状腺肿瘤的发生和发展可能与bFGFs的基因异常表达有关。 展开更多
关键词 western-blot 甲状腺肿瘤 bFGFs
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基于截短MOMP蛋白的绵羊流产衣原体抗体间接ELISA方法的建立 被引量:1
9
作者 刘欣钊 张芳毓 +9 位作者 魏天 王成宇 王思月 刘悦 曲可 朱日宁 鞠安琪 马惠海 张建峰 王永志 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第1期78-84,共7页
为了建立检测绵羊流产衣原体MOMP(main outer membrane protein)蛋白抗体的间接ELISA方法,试验将编码MOMP蛋白的基因序列经密码子优化后进行基因合成,并克隆和原核表达截短蛋白,以该蛋白为抗原建立绵羊流产衣原体抗体的间接ELISA方法,... 为了建立检测绵羊流产衣原体MOMP(main outer membrane protein)蛋白抗体的间接ELISA方法,试验将编码MOMP蛋白的基因序列经密码子优化后进行基因合成,并克隆和原核表达截短蛋白,以该蛋白为抗原建立绵羊流产衣原体抗体的间接ELISA方法,优化该方法的反应条件,同时验证其特异性、敏感性和重复性,最后用该方法对临床待检羊血清进行检测,并与间接血凝试验试剂盒的检测结果进行比较。结果表明:截短蛋白MOMP201~390的表达、纯化效果最好。经探索,优化后的间接ELISA方法最优反应条件:抗原包被浓度为1 mg/L,37℃包被2 h,待检血清最佳稀释度为1∶100,血清和酶标二抗的最佳作用时间分别为45 min、60 min。建立的间接ELISA方法的敏感性较高,特异性和重复性较好,使用该方法从209份临床待检羊血清样本中检出47份阳性血清,与间接血凝试验试剂盒分别检测临床待检羊血清样本86份,总符合率为80.23%。说明基于截短蛋白MOMP201~390建立的绵羊流产衣原体抗体间接ELISA方法可用于绵羊流产衣原体临床血清抗体的检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 流产衣原体 原核表达 western-blot 间接ELISA 抗体检测
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柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(EtMIC1)基因的原核表达与重组蛋白的免疫原性分析
10
作者 张圳 王松 +3 位作者 孙铭飞 胡建和 王丹妮 朱惠丽 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第20期77-82,共6页
为了解原核表达柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(Eimeria tenella microneme 1,EtMIC1)重组蛋白的免疫原性,试验以柔嫩艾美耳球虫广东株孢子化卵囊为材料,首先采用PCR技术扩增去除信号肽的EtMIC1基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重... 为了解原核表达柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(Eimeria tenella microneme 1,EtMIC1)重组蛋白的免疫原性,试验以柔嫩艾美耳球虫广东株孢子化卵囊为材料,首先采用PCR技术扩增去除信号肽的EtMIC1基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组原核表达载体,然后将重组原核表达载体pET32a(+)-EtMIC1转化至大肠杆菌T7pLysY感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,最后对重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果表明:PCR扩增出大小为2055 bp的去信号肽EtMIC1基因片段,与预期结果一致;构建的重组原核表达载体pET32a(+)-EtMIC1可在大肠杆菌T7pLysY感受态细胞中表达,重组蛋白分子质量大小约为93 ku,主要表达在上清液中,可被自然感染抗柔嫩艾美耳球虫鸡血清和EtMIC1重组蛋白多克隆抗体特异性识别。说明试验成功表达了EtMIC1重组蛋白,原核表达的EtMIC1重组蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 EtMIC1 原核表达 免疫原性 SDS-PAGE分析 western-blot鉴定
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Pilot Studies on the Novel Hypothesis that TSPO (Peripheral Benzodiazepine Receptor) Is Involved in Benzodiazepine/“Z-Drug” Physical Dependence and/or Withdrawal
11
作者 Cheyenne Moffett Katherine J. Kost +4 位作者 Austen Thompson Joseph V. Pergolizzi Jr. Tally M. Largent-Milnes Robert B. Raffa Todd Vanderah 《Pharmacology & Pharmacy》 CAS 2023年第3期72-83,共12页
Benzodiazepines and other benzodiazepine receptor agonists, such as the “Z” drugs, are widely prescribed medications mainly used for treating anxiety and seizures, and for inducing sedation. Unfortunately, despite t... Benzodiazepines and other benzodiazepine receptor agonists, such as the “Z” drugs, are widely prescribed medications mainly used for treating anxiety and seizures, and for inducing sedation. Unfortunately, despite their popularity, benzodiazepine prescribing often exceeds recommendations and the consequences can be severe. On September 23, 2020, the United States FDA announced a new requirement for a Boxed Warning for benzodiazepines prescribing. Along with this announcement, the FDA stated that relevant information regarding the initiation, continuation, and discontinuation of benzodiazepines is lacking. Here, we describe initial pilot studies intended to investigate the questions 1) can animal models be developed that demonstrate benzodiazepine physical dependence and/or withdrawal symptoms, and 2) determine whether translocator protein (TSPO) plays a role in benzodiazepine dependence and/or withdrawal processes. The former was demonstrated, methodological limitations prevented the latter. 展开更多
关键词 BENZODIAZEPINE TSPO Rats In Vivo Tests western-blot Analysis
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针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响 被引量:18
12
作者 陈金生 宫庆娟 +4 位作者 黄秋兰 罗秀英 越宇 黄乔东 卢振和 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第15期2562-2565,共4页
目的:观察针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响,初步探讨其治疗带状疱疹的机制。方法:选择急性带状疱疹患者25例,随机分为药物治疗组(P组,n=13)和针灸治疗组(A组,n=12),选择12例正常人作为对照。P组采用抗病毒、营养神经和镇痛... 目的:观察针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响,初步探讨其治疗带状疱疹的机制。方法:选择急性带状疱疹患者25例,随机分为药物治疗组(P组,n=13)和针灸治疗组(A组,n=12),选择12例正常人作为对照。P组采用抗病毒、营养神经和镇痛药物治疗,A组在相同药物治疗基础上加针灸治疗。比较两组患者治疗前、治疗后7 d VAS评分和皮疹愈合时间;Western-blot法检测c-FLIP表达,比较正常对照组与急性带状疱疹患者及两组患者治疗前、后血液c-FLIP表达情况。结果:两组患者治疗后VAS评分较治疗前均明显减少(P<0.01),治疗后组间VAS评分比较差异无统计学意义,A组皮疹愈合时间短于P组(P<0.01);急性带状疱疹患者c-FLIP表达比正常人表达明显降低(P<0.01),A组治疗后较治疗前表达升高(P<0.01),P组治疗前、后表达无明显变化。结论:针灸可以调节急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达,促进皮疹愈合。这可能是针灸治疗带状疱疹的细胞免疫机制之一。 展开更多
关键词 针灸疗法 疱疹 带状 C-FLIP 细胞免疫 western-blot
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艾蒿、青蒿花粉变应原组分的研究 被引量:24
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作者 杨慧 刘志刚 +2 位作者 韩庆国 侯穗波 梁桂珍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期120-123,共4页
目的 对艾蒿、青蒿花粉变应原进行分离、鉴定。方法 采用不同的提取方式得到艾蒿、青蒿花粉的粗浸液 ,通过饱和 (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分离蛋白质组分 ,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量 (Mr... 目的 对艾蒿、青蒿花粉变应原进行分离、鉴定。方法 采用不同的提取方式得到艾蒿、青蒿花粉的粗浸液 ,通过饱和 (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分离蛋白质组分 ,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量 (Mr) ;采用Western blotting鉴定 2种花粉的主要及次要变应原。结果 艾蒿、青蒿花粉分别分离到二十和十多种蛋白质组分。其中艾蒿花粉的组分中有 9种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合 ,Mr 为 6 2 0 0 0、4 30 0 0、380 0 0的蛋白条带的结合率最高。青蒿花粉的组分中有 11种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合 ,Mr 为 4 30 0 0、380 0 0的蛋白条带结合率最高。结论 艾蒿花粉的主要变应原Mr 分别为 6 2 0 0 0、4 30 0 0和 380 0 0 ,青蒿花粉的主要变应原Mr 分别为 4 30 0 0和 380 0 0 ;2种花粉变应原组分存在很大相似性 。 展开更多
关键词 青蒿花粉 艾蒿花粉 SDS-PAGE western-blotting
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人TNFAIP1基因在常见细胞系中的表达 被引量:7
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作者 杨利平 周爱冬 +4 位作者 李红 张文峰 吴艳阳 张健 韩梅 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期918-922,共5页
TNFAIP1蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α诱导的蛋白,TNFAIP1蛋白可能参与DNA复制、合成、细胞凋亡以及人类各种疾病的发生等重要过程,但对该基因确切功能和作用机制研究不多。该文利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系... TNFAIP1蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α诱导的蛋白,TNFAIP1蛋白可能参与DNA复制、合成、细胞凋亡以及人类各种疾病的发生等重要过程,但对该基因确切功能和作用机制研究不多。该文利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系的表达情况,发现在COS7以及NIH3T3细胞系中高表达,而在HeLa、HepG2、SW480、PanC1、MCF7等癌细胞系中低表达。由此推测TNFAIP1可能在癌症的发生中起到一定的作用。如果把TNFAIP1基因克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,转染到HeLa细胞系中,发现过表达TNFAIP1可促进HeLa细胞的凋亡。 展开更多
关键词 TNFAIP1 肿瘤坏死因子Α 实时定量PCR western-blot
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茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析 被引量:12
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作者 余梅 江昌俊 +4 位作者 房婉萍 叶爱华 王朝霞 李叶云 朱林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期2983-2991,共9页
【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达,了解茶树花蕾的发育机理,利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到... 【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达,了解茶树花蕾的发育机理,利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到花蕾发育晚期阶段特异表达的、在花蕾发育中可能起重要作用的14-3-3基因,通过RT-PCR和Western-blot方法研究该基因转录水平和蛋白质表达水平的特点。【结果】在测定的大约1110个茶树花蕾cDNA片段中,122个(10.9%)是差异性表达的,其中87个在发育晚期特异表达,包括茶树14-3-3蛋白基因(GenBank登录号:DQ444463),其全长为1072bp,包含1个由783个核苷酸组成的ORF,编码260个氨基酸,5′非翻译区和3′非翻译区分别有67和222个核苷酸,该基因与其它植物的14-3-3蛋白基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面均有着比较高的相似性。RT-PCR和Western-blot分析表明该基因在茶树的晚期发育花蕾中特异表达。【结论】14-3-3蛋白仅存在于茶树发育晚期的花蕾中。cDNA-AFLP技术能用于茶树花蕾不同发育时期的基因分离研究。 展开更多
关键词 茶树 差异表达基因 14-3-3蛋白 CDNA-AFLP western-blot
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小麦和荞麦过敏原的分离与免疫学特性初步鉴定 被引量:7
16
作者 冼静雯 吴海强 +1 位作者 简晓莉 刘志刚 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期799-803,共5页
为了提取、分离小麦(Triticum aestivum)和荞麦(Fagopyrum esculentum)的主要过敏原并对其免疫学特性进行鉴定,以磷酸盐缓冲液(PBS)制备小麦和荞麦总蛋白粗提液,通过SDS-PAGE分析总蛋白组成,利用麦类食品过敏患者血清中的IgE能特异性结... 为了提取、分离小麦(Triticum aestivum)和荞麦(Fagopyrum esculentum)的主要过敏原并对其免疫学特性进行鉴定,以磷酸盐缓冲液(PBS)制备小麦和荞麦总蛋白粗提液,通过SDS-PAGE分析总蛋白组成,利用麦类食品过敏患者血清中的IgE能特异性结合过敏原的特性,通过免疫印迹(Western-Blotting)鉴定其中的过敏原成分,然后用离子交换层析(DE-52)对总蛋白进行初步分离,并用Western-Blotting鉴定分离后组份的免疫学特性。SDS-PAGE分析显示,小麦蛋白条带共有18条,其中主要条带有12条(55、42、39、36、29、27、23、21、18、15、12、9 kD);荞麦蛋白条带共有17条,其中主要条带有8条(55、44、36、32、22、16、13、10kD)。Western-Blotting鉴定表明,小麦阳性条带有9条(36、32、29、26、23、18、15、12、9 kD),其中23 kD的过敏原特异性最强;荞麦阳性条带有5条(55、36、32、292、2 kD),其中22 kD的过敏原特异性最强。DE-52阴离子交换层析分离后经Western-Blotting分析显示,分离后过敏原的相对含量均有显著提高,且依然具有较强的免疫学活性,如经纯化后荞麦22 kD的过敏原相对含量由10.73%提高到21.07%。初步鉴定出小麦的主要过敏原为23 kD蛋白,而荞麦的主要过敏原为22 kD蛋白。 展开更多
关键词 小麦 荞麦 过敏原 western-blotting 免疫学特性
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达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究 被引量:10
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作者 单喜双 岳华梅 +3 位作者 陈细华 叶欢 杨晓鸽 李创举 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期307-314,共8页
为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone,GH)基因的功能,合成了达氏鲟垂体SMART c DNA,克隆得到GH全长c DNA序列。达氏鲟GH全长c DNA序列为1008 bp,由52 bp的5′端非编码区(Untranslated region,UTR)、编码214个氨... 为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone,GH)基因的功能,合成了达氏鲟垂体SMART c DNA,克隆得到GH全长c DNA序列。达氏鲟GH全长c DNA序列为1008 bp,由52 bp的5′端非编码区(Untranslated region,UTR)、编码214个氨基酸的645 bp开放阅读框(Open reading frame,ORF)和311 bp的3′UTR构成。运用GH氨基酸序列构建进化树分析发现,达氏鲟与两栖类、爬行类和哺乳类的一致性要高于真骨鱼类。实时荧光定量PCR结果表明,达氏鲟GH m RNA主要在垂体和下丘脑中表达,且垂体中GH的表达量约为下丘脑的110倍;Western-blot研究结果与q RT-PCR一致,仅在垂体和下丘脑中检测到生长激素蛋白,且垂体中GH的表达量远高于下丘脑。免疫荧光定位结果显示,GH主要定位于垂体中部,下丘脑中也有少量荧光信号;苏木精-伊红组织切片染色研究表明,GH主要是由嗜酸性的生长激素分泌细胞分泌。研究为深入研究脊椎动物生长激素基因的进化和人工养殖达氏鲟的生长调控提供了基础。 展开更多
关键词 达氏鲟 生长激素 q RT-PCR western-blot 荧光免疫组化
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吡那地尔及二氮嗪对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌KATP通道蛋白表达的影响 被引量:5
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作者 陈磊 解卫平 +1 位作者 金宇 王虹 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期308-311,315,共5页
目的:研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌ATP敏感钾通道(KATP)蛋白表达的影响及KATP开放剂吡那地尔及二氮嗪的作用。方法:SD雄性大鼠35只随机分成对照组、低氧组、吡那地尔干预组[吡那地尔2.0mg/(kg·d),ig]、二氮嗪干预组[二氮嗪1.5mg... 目的:研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌ATP敏感钾通道(KATP)蛋白表达的影响及KATP开放剂吡那地尔及二氮嗪的作用。方法:SD雄性大鼠35只随机分成对照组、低氧组、吡那地尔干预组[吡那地尔2.0mg/(kg·d),ig]、二氮嗪干预组[二氮嗪1.5mg/(kg·d),ig]、5-羟癸酸(5-HD)+二氮嗪干预组[5-HD3.0mg/(kg·d),ig;二氮嗪1.5mg/(kg·d),ig],每组7只。将低氧组和各干预组大鼠放入常压低氧舱内[O2(10.0%±0.5%)],每周6天,每天6h4周后测定平均肺动脉压(mPAP)并采用Western-blot技术,分析各组肺动脉主干平滑肌KATP蛋白表达。结果:①慢性低氧组大鼠的mPAP显著高于正常对照组,吡那地尔干预组肺动脉压较低氧组显著下降,二氮嗪干预组加重慢性低氧所致的肺动脉压力升高,5-HD+二氮嗪干预组的mPAP显著低于二氮嗪干预组,P均<0.05。②低氧组调节亚基磺酰脲受体2B(SUR2B)蛋白水平显著低于正常组,吡那地尔干预组SUR2B显著高于低氧组,二氮嗪干预组SUR2B蛋白水平显著低于低氧组,5-HD+二氮嗪干预组SUR2B显著高于二氮嗪干预组,与低氧组亦有显著统计学差异,P均<0.05。各组内向整流性孔区6.1(Kir6.1)蛋白没有显著差异(P<0.05)。结论:慢性低氧抑制KATP通道蛋白的表达,而吡那地尔能提高表达,对慢性低氧所致的肺动脉高压和肺血管壁重构具有较好的预防和逆转作用;二氮嗪能加重低氧性肺动脉压升高,并抑制KATP通道蛋白的表达。 展开更多
关键词 KATP 吡那地尔 二氮嗪 western-blot
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血管紧张素II对血管内皮细胞三种转录因子作用的影响 被引量:6
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作者 王华 斯琴 +3 位作者 王小明 郭恒怡 李素敏 吴其夏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期196-199,共4页
目的和方法 :分别采用凝胶迁移率改变法 (EMSA)和Western -blot的方法从基因转录水平探讨AngII对血管内皮细胞株ECV30 4的影响。结果 :(1)EMSA结果表明 ,AngII组核抽提物与 3种探针的结合活性均高于正常对照组 ,与NF -κB ,SP - 1和AP ... 目的和方法 :分别采用凝胶迁移率改变法 (EMSA)和Western -blot的方法从基因转录水平探讨AngII对血管内皮细胞株ECV30 4的影响。结果 :(1)EMSA结果表明 ,AngII组核抽提物与 3种探针的结合活性均高于正常对照组 ,与NF -κB ,SP - 1和AP - 1探针结合活性分别为正常对照组的 10 98倍 ,3 97倍和 1 33倍 ,说明AngII对血管内皮细胞的作用机制可能与NF -κB ,SP - 1和AP - 1等转录因子的转录活性增加有关。进一步证实NF -κB ,AP -1在内皮细胞功能失调发病机制中的重要作用 ,同时发现转录因子SP - 1也可能参与此过程。 (2 )Western -blot结果表明 ,AngII处理后细胞核内NF -κB含量明显增加 ,提示AngII能够增加血管内皮细胞转录因子NF -κB的核转位 ,进一步验证了EMSA的结论。而细胞核内SP - 1和AP - 1的含量较对照组略有增加 ,提示AngII对SP - 1和AP - 1的核转位无明显影响而可能主要是促进转录因子与相应顺式调控元件的结合活性。结论 :AngII对内皮细胞 3种重要的转录因子的活性有不同程度的影响 。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 转录因子 血管内皮细胞 EMSA western-blot 基因转录
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鸡IL-18成熟蛋白基因变构体毕赤酵母表达载体的构建及表达 被引量:4
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作者 刘一尘 张春杰 +5 位作者 程安春 程相朝 汪铭书 李银聚 吴庭才 易明林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期502-506,共5页
为使鸡IL-18成熟蛋白基因在真核系统中高效表达,对其进行定点突变,将酵母低频密码子突变为偏嗜性密码子,构建了鸡IL-18成熟蛋白变构基因真核重组表达载体pPICZαA-MChIL18*,并将其转化入P.pastorisX-33。重组菌株X-33/pPICZαA-MChIL18... 为使鸡IL-18成熟蛋白基因在真核系统中高效表达,对其进行定点突变,将酵母低频密码子突变为偏嗜性密码子,构建了鸡IL-18成熟蛋白变构基因真核重组表达载体pPICZαA-MChIL18*,并将其转化入P.pastorisX-33。重组菌株X-33/pPICZαA-MChIL18*经甲醇诱导后,表达产物的上清液经SDS-PAGE检测,结果在约23 000处有目的条带,与预期的相对分子质量一致,占总蛋白的45%,对其进行Western-blot检测,结果与兔抗鸡IL-18多克隆抗体发生特异性免疫反应。结果表明,鸡IL-18成熟蛋白变构基因在毕赤酵母中成功的进行了表达。 展开更多
关键词 鸡IL-18 定点突变 毕赤酵母表达系统 SDS-PAGE western-blot
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