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提高人重组IL-6在真核细胞中表达的新途径 被引量:3
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作者 刘红涛 袁勇 +3 位作者 张颖妹 王应 狄春辉 马大龙 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第2期135-139,共5页
为提高IL-6在真核系统中的表达效率,我们在构建真核表达载体pcDNA3IL-6的基础上,用表达载体pCI中的CMV启动子和下游所带的β-球蛋白的第一个内含子,置换了pcDNA3中的CMV启动子,构建了一种新的表达载体,使IL-6的表达水平提高了7.5倍。此... 为提高IL-6在真核系统中的表达效率,我们在构建真核表达载体pcDNA3IL-6的基础上,用表达载体pCI中的CMV启动子和下游所带的β-球蛋白的第一个内含子,置换了pcDNA3中的CMV启动子,构建了一种新的表达载体,使IL-6的表达水平提高了7.5倍。此外,我们还研究了pAdVAntage共转染对IL-6表达的影响,使之表达水平提高了3.6倍。以上结果为细胞因子在真核系统中的高效表达提供了有益的经验。 展开更多
关键词 人重组IL-6 真核细胞 表达 基因转染 细胞因子
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4猪种Nramp1基因第6内含子多态性研究 被引量:3
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作者 赵生国 赵海 +2 位作者 潘虹 周艳红 滚双宝 《中兽医医药杂志》 2012年第5期34-37,共4页
天然抗性巨噬蛋白(Nramp)基因是与人、鼠的一些病原微生物的易感性和抗性有关的重要候选基因。为了研究猪Nramp1基因的多态性,利用PCR-RFLP技术检测了杜洛克、大白猪、长白猪和合作猪共270头个体Nramp1基因第6内含子NdeⅠ酶切位点多态... 天然抗性巨噬蛋白(Nramp)基因是与人、鼠的一些病原微生物的易感性和抗性有关的重要候选基因。为了研究猪Nramp1基因的多态性,利用PCR-RFLP技术检测了杜洛克、大白猪、长白猪和合作猪共270头个体Nramp1基因第6内含子NdeⅠ酶切位点多态性。结果表明,4个猪种群共检测到3种基因型(AA、AB和BB),其中AB基因型为杜洛克、大白猪和长白猪的优势基因型;AA基因型为合作猪的优势基因型。经卡方适合性检测,杜洛克、合作猪和长白猪处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),大白猪处于Hardy-Weinberg不平衡状态。多态信息含量分析显示,Nramp1基因的第6内含子NdeⅠ酶切位点在各猪种表现出中度多态性。 展开更多
关键词 Nramp1基因 6内含子 PCR-RFLP 多态性
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高山被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆、结构分析及其功能的研究 被引量:8
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作者 李明春 刘莉 +1 位作者 胡国武 邢来君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期220-227,共8页
从高山被孢霉ATCC1 62 66总DNA中扩增出大小为 1 374bp和 1 947bp的两条特异片段 ,序列分析表明后者在细胞色素b5和组氨酸Ⅰ之间含有一大小为 5 73bp的内含子和两条分别为 1 97bp和 82 8bp的外显子。推导的氨基酸二级结构分析表明 ,该... 从高山被孢霉ATCC1 62 66总DNA中扩增出大小为 1 374bp和 1 947bp的两条特异片段 ,序列分析表明后者在细胞色素b5和组氨酸Ⅰ之间含有一大小为 5 73bp的内含子和两条分别为 1 97bp和 82 8bp的外显子。推导的氨基酸二级结构分析表明 ,该基因有两个长的跨膜疏水区和 3个组氨酸保守区。分别根据D6D内含子及组氨酸Ⅱ区、Ⅲ区的序列设计引物 ,制备不同的探针与高山被孢霉的基因组杂交 ,证明在其基因组中确实存在两个Δ6 脂肪酸脱氢酶基因 ,其中一个基因含有内含子。把不含有内含子的核基因MAGL6 1克隆到的酿酒酵母表达载体pYES2 0中 ,转化到酿酒酵母INVSc1中。对筛选得到的酵母工程菌株进行脂肪酸GC分析 ,检测到了γ 亚麻酸 ,说明克隆的D6D基因MAGL6 1能在酿酒酵母中进行功能性表达。 展开更多
关键词 高山被孢霉 △^6-脂肪酸脱氢酶基因 基因组 内含子 功能 克隆 结构
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猪Nramp1基因内含子6的SNP多态性分析 被引量:1
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作者 付保强 彭帅 +3 位作者 顾亚荣 赵倩 杜倩 穆晓峰 《现代畜牧兽医》 2018年第10期21-24,共4页
本研究以大白猪、长白猪和杜洛克猪为研究对象,通过构建DNA混合池并利用PCR产物直接测序的方法,对Nramp1基因内含子6的SNP多态性进行分析。结果发现,3个猪种在Nramp1基因内含子6中均有4个SNP位点,分别为C^(111)A、C^(225)T、G^(296)T和T... 本研究以大白猪、长白猪和杜洛克猪为研究对象,通过构建DNA混合池并利用PCR产物直接测序的方法,对Nramp1基因内含子6的SNP多态性进行分析。结果发现,3个猪种在Nramp1基因内含子6中均有4个SNP位点,分别为C^(111)A、C^(225)T、G^(296)T和T^(297)G。基因频率估算结果表明,等位基因C、C、G和T分别是4个SNP位点的优势等位基因。本研究结果可为猪免疫疾病研究和抗病分子育种提供理论基础。 展开更多
关键词 Nramp1基因内含子6 SNP位点
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刚地弓形虫醛缩酶基因及其内含子的分析 被引量:3
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作者 余南 何蔼 +2 位作者 李卓雅 郑斌 詹希美 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期580-583,共4页
目的刚地弓形虫醛缩酶是其速殖子入侵宿主细胞过程中的一个重要分子,本研究对该酶基因序列及其内含子进行实验和分析。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子基因组DNA和总RNA,采用PCR技术分别从基因组DNA和cDNA中扩增编码果糖1,6-二磷酸醛缩酶... 目的刚地弓形虫醛缩酶是其速殖子入侵宿主细胞过程中的一个重要分子,本研究对该酶基因序列及其内含子进行实验和分析。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子基因组DNA和总RNA,采用PCR技术分别从基因组DNA和cDNA中扩增编码果糖1,6-二磷酸醛缩酶的基因,并克隆到T载体上,经测序鉴定后对其基因组序列和cDNA序列进行比较分析。通过NCBI数据库资源对醛缩酶内含子的分布及大小进行比较分析。结果根据醛缩酶基因设计的引物从基因组DNA扩增得到的片段长度为1315bp,从cDNA扩增得到的片段为993bp。比对结果显示来源于基因组DNA的序列在对应于编码序列起始密码子下游109bp后有一个322bp的内含子。通过在线工具收集得到NCBI及EMBL数据库中来源于不同物种的32种醛缩酶数据,分析显示推断氨基酸序列具有保守性。结论编码刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)RH株果糖1,6-二磷酸醛缩酶基因编码区内存在一个322bp的内含子。醛缩酶氨基酸序列保守性较高。内含子在不同进化等级之间插入位置数目及大小两方面均存在明显的增加趋势。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 果糖1 6-二磷酸醛缩酶 内含子
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牦牛钙蛋白酶抑制蛋白基因部分片段PCR-RFLP多态性研究
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作者 金鑫燕 《青海畜牧兽医杂志》 2015年第3期1-3,共3页
钙蛋白酶抑制蛋白基因的产物参与肌肉生长过程中蛋白质的更新,在各肉畜中被认为显著影响肉的嫩度。本研究以牦牛钙蛋白酶抑制蛋白基因(CAST)内含子6(intron 6)为研究对象,采用RsaⅠ、ScaⅠ、Eco O109I(DraⅡ)、XmnⅠ共4种限制性内切酶... 钙蛋白酶抑制蛋白基因的产物参与肌肉生长过程中蛋白质的更新,在各肉畜中被认为显著影响肉的嫩度。本研究以牦牛钙蛋白酶抑制蛋白基因(CAST)内含子6(intron 6)为研究对象,采用RsaⅠ、ScaⅠ、Eco O109I(DraⅡ)、XmnⅠ共4种限制性内切酶对其进行限制性酶切多态性研究,结果表明,牦牛CAST基因第六内含子长度为1460bp,与普通牛和绵羊CAST基因该片段的同源性分别为99%和91.6%。酶切分析表明,RsaⅠ、ScaⅠ均在第469位置有一个酶切位点,Eco O109I(DraⅡ)在第387和1156位有两个酶切位点,这三种酶酶切均未发现多态性,XmnⅠ在该片段没有酶切位点,该结果与研究者对普通牛的研究不同,普通牛在该片段有XmnⅠ酶切位点并且有多态性。 展开更多
关键词 牦牛 钙蛋白酶抑制蛋白基因 内含子6 限制性酶切多态
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Molecular evidence suggests that the enigmatic Sulawesi endemic Geomalia heinrichi belongs in the genus Zoothera (Turdidae, Aves) 被引量:1
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作者 Urban OLSSON Per ALSTRM 《Chinese Birds》 CSCD 2013年第2期155-160,共6页
The taxonomic status of the Sulawesi endemic Geomalia heinrichi has long been debated, and it has variously been treated as a babbler (Timaliidae) or a turdid (Turdidae). We estimated the phylogeny of 43 taxa in the f... The taxonomic status of the Sulawesi endemic Geomalia heinrichi has long been debated, and it has variously been treated as a babbler (Timaliidae) or a turdid (Turdidae). We estimated the phylogeny of 43 taxa in the family Turdidae based on the mitochondrial cytochrome b gene and the nuclear myoglobin intron 2 and ornithine decarboxylase introns 6–7. Geomalia heinrichi was shown to be part of the Zoothera clade with high support. We propose that Geomalia is transferred to Zoothera under the name Zoothera heinrichi. 展开更多
关键词 Bayesian inference cytochrome b myoglobin intron 2 (myo) ornithine decarboxylase (ODC) introns 6–7 taxonomy
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碳源对manA基因突变大肠杆菌代谢的影响 被引量:1
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作者 李晓霞 王欢 +2 位作者 孙京利 张红星 谢远红 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期103-110,共8页
ManA基因编码的甘露糖-6-磷酸异构酶在大肠杆菌中催化D-甘露糖和D-果糖的异构化,促进大肠杆菌对碳源的代谢吸收。本文通过研究manA基因突变大肠杆菌对碳源的利用和编码糖代谢基因情况,探讨甘露糖-6-磷酸异构酶对大肠杆菌糖代谢的影响。... ManA基因编码的甘露糖-6-磷酸异构酶在大肠杆菌中催化D-甘露糖和D-果糖的异构化,促进大肠杆菌对碳源的代谢吸收。本文通过研究manA基因突变大肠杆菌对碳源的利用和编码糖代谢基因情况,探讨甘露糖-6-磷酸异构酶对大肠杆菌糖代谢的影响。采用Ⅱ型内含子逆转录突变方法构建manA基因突变大肠杆菌,分析manA基因突变大肠杆菌对不同碳源的利用情况和manA基因突变对大肠杆菌糖代谢相关基因表达的影响,结果显示,大肠杆菌BL21(DE3)ΔmanA以甘露糖、果糖为碳源时,菌株生长受到显著抑制;以淀粉为碳源时,BL21(DE3)ΔmanA菌株的生长显著优于野生型大肠杆菌;以葡萄糖为碳源时,manA基因突变对大肠杆菌的生长无显著影响。通过基因表达分析,发现大肠杆菌BL21(DE3)ΔmanA中甘露糖代谢相关基因的表达显著性降低;果糖代谢途径中6-磷酸果糖激酶Ⅰ亚基的编码基因(pfkA)显著下调表达;水解淀粉的α-淀粉酶编码基因(malS)显著性上调表达。ManA基因突变影响大肠杆菌甘露糖、果糖和淀粉代谢途径中相关基因的表达,从而影响大肠杆菌对碳源的利用。 展开更多
关键词 甘露糖-6-磷酸异构酶 Ⅱ型内含子逆转录突变 基因突变 糖代谢
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社区人群中白细胞介素-6基因单核苷酸多态性与其血清水平的关系 被引量:2
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作者 谢高强 赵连成 +2 位作者 任福秀 史平 武阳丰 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2014年第5期1055-1059,共5页
目的研究中国社区一般人群中白细胞介素-6(IL-6)基因单核苷酸多态性与其血清水平的关系。方法 2005年,在1431名北京社区人群中进行心血管流行病学调查,检测IL-6基因单核苷酸多态性(SNP)(rs1800796、rs1524107、rs2066992),同时检测血清I... 目的研究中国社区一般人群中白细胞介素-6(IL-6)基因单核苷酸多态性与其血清水平的关系。方法 2005年,在1431名北京社区人群中进行心血管流行病学调查,检测IL-6基因单核苷酸多态性(SNP)(rs1800796、rs1524107、rs2066992),同时检测血清IL-6的浓度,测量血压、体重指数、空腹血脂、血糖,询问吸烟史、饮酒史和疾病史。结果在1431名社区人群中,rs1800796、rs1524107、rs2066992的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。rs1800796 C/C、C/G和G/G基因型携带者IL-6升高(中位数以上)的比例分别为51.1%、50.7%和42.6%(p=0.138),调整年龄、性别后,rs1800796 G/G基因型(与G/C+C/C相比)OR值(95%可信区间)为0.71(0.50-0.998),内含子区域的rs1524107 C/C基因型(与T/T相比)、rs2066992 G/G基因型(与T/T相比)携带者OR值均为0.83(0.58-1.19)。单倍体型分析显示,rs1800796、rs1524107、rs2066992位点的CTT单倍体型OR值为1.17(1.003-1.37)。结论社区人群中IL-6基因rs1800796位点及其与rs1524107、rs2066992位点的CTT单倍体型与血清IL-6升高密切相关,提示CTT单倍体型可能是血清IL-6升高的遗传性标记之一。 展开更多
关键词 血清白介素-6 基因多态 启动子 内含子
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HPV18 Utilizes Two Alternative Branch Sites for E6*I Splicing to Produce E7 Protein 被引量:2
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作者 Ayslan Castro Brant Vladimir Majerciak +1 位作者 Miguel Angelo Martins Moreira Zhi-Ming Zheng 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期211-221,共11页
Human papillomavirus 18(HPV18) E6 and E7 oncogenes are transcribed as a single bicistronic E6 E7 pre-mRNA. The E6 ORF region in the bicistronic E6 E7 pre-mRNA contains an intron. Splicing of this intron disrupts the E... Human papillomavirus 18(HPV18) E6 and E7 oncogenes are transcribed as a single bicistronic E6 E7 pre-mRNA. The E6 ORF region in the bicistronic E6 E7 pre-mRNA contains an intron. Splicing of this intron disrupts the E6 ORF integrity and produces a spliced E6*I RNA for efficient E7 translation. Here we report that the E6 intron has two overlapped branch point sequences(BPS) upstream of its 30 splice site, with an identical heptamer AACUAAC, for E6*I splicing. One heptamer has a branch site adenosine(underlined) at nt 384 and the other at nt 388. E6*I splicing efficiency correlates to the expression level of E6 and E7 proteins and depends on the selection of which branch site. In general, E6*I splicing prefers the 30 ss-proximal branch site at nt 388 over the distal branch site at nt 384. Inactivation of the nt 388 branch site was found to activate a cryptic acceptor site at nt 636 for aberrant RNA splicing. Together, these data suggest that HPV18 modulates its production ratio of E6 and E7 proteins by alternative selection of the two mapped branch sites for the E6*I splicing, which could be beneficial in its productive or oncogenic infection according to the host cell environment. 展开更多
关键词 Human papillomavirus 18 (HPV18) HPV splicing Branch point E6 E7 E6 intron HPV oncogenes
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