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miR-421和miR-196b-3p在胃癌癌前病变和早期胃癌诊断中的潜在价值 被引量:2
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作者 王文怡 余静恬 甘程 《检验医学与临床》 2024年第6期726-732,共7页
目的研究血浆miR-421和miR-196b-3p作为诊断胃癌癌前病变和早期胃癌新型潜在生物标志物的临床意义。方法(1)发现集:于2018年12月1日至12月31日采集早期胃癌患者(早期胃癌组)、癌前病变患者(癌前病变组)和健康志愿者(NC组)的血浆标本各3... 目的研究血浆miR-421和miR-196b-3p作为诊断胃癌癌前病变和早期胃癌新型潜在生物标志物的临床意义。方法(1)发现集:于2018年12月1日至12月31日采集早期胃癌患者(早期胃癌组)、癌前病变患者(癌前病变组)和健康志愿者(NC组)的血浆标本各3例,用作miRNA微阵列分析。借用TCGA数据证实候选miRNA在癌症组织中的表达。(2)验证集:于2019年1月1日至2023年1月1日共采集90例胃癌患者(胃癌组)、89例癌前病变患者(癌前病变组)和45例健康志愿者(NC组)的血浆标本。通过定量实时聚合酶链反应测定候选miRNA水平。比较各组候选miRNA及常规肿瘤标志物[铁蛋白、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA211、CA50、CA125、CA199、CA153、CA242、CA724]水平;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析比较候选miRNA与常规肿瘤标志物的诊断价值。结果(1)发现集:通过miRNA微阵列筛选,与NC组相比,miR-421和miR-196b-3p水平在早期胃癌组和癌前病变组明显上调(P<0.05)。TCGA数据证实,与正常胃黏膜相比,miR-421在胃癌组织中呈高表达(P<0.001)。(2)验证集:与NC组相比,癌前病变组和胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平明显上调(P<0.05),且胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平高于癌前病变组(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血浆miR-421对胃癌的诊断价值最高,曲线下面积(AUC)为0.931(95%CI:0.889~0.972),高于CEA、CA125、CA199、CA724、CA211、CA50诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-196b-3p诊断胃癌的AUC[0.804(95%CI:0.733~0.875)]也高于CEA、CA125、CA199和CA724诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-421和miR-196b-3p也可用于早期胃癌诊断,AUC分别为0.942(95%CI:0.886~0.997)和0.809(95%CI:0.708~0.910);血浆miR-421和miR-196b-3p诊断癌前病变的AUC分别为0.788(95%CI:0.714~0.863)和0.648(0.556~0.741),miR-421诊断癌前病变的AUC均高于miR-196b-3p、铁蛋白、CA50诊断癌前病变的AUC(P<0.05)。血浆miR-421和miR-196b-3p在胃癌Ⅰ期病例中的水平与Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ期相比,差异无统计学意义(P>0.05),但在胃癌发病早期(Ⅰ~Ⅱ期)的水平明显高于NC组和癌前病变组(P<0.05)。结论血浆miR-421和miR-196b-3p在早期胃癌患者中过表达,有希望成为诊断癌前病变和早期胃癌的新型生物标志物。 展开更多
关键词 早期诊断 癌前病变 mir-421 mir-196b-3p miRNA微阵列 胃癌
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miR-196b-5p促进成肌细胞增殖分化 被引量:2
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作者 吴玲玲 张小玉 +3 位作者 李晓 靳建军 杨公社 史新娥 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期435-446,共12页
MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,在动植物中参与转录后基因表达调控。大量研究表明,miRNA调控骨骼肌的发育,主要表现在肌卫星细胞的激活及增殖、分化、肌管的形成等生物学过程。本实验室... MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,在动植物中参与转录后基因表达调控。大量研究表明,miRNA调控骨骼肌的发育,主要表现在肌卫星细胞的激活及增殖、分化、肌管的形成等生物学过程。本实验室前期对大白猪背最长肌(longissimus dorsi,LD)和比目鱼肌(soleus muscle,Sol)进行miRNA测序,筛选鉴定到一个在不同骨骼肌中差异表达并且序列高度保守的miR-196b-5p,目前miR-196b-5p在骨骼肌方面的研究尚未见报道。本研究进一步设计合成miR-196b-5p mimics和inhibitor对C2C12细胞进行miR-196b-5p过表达及干扰表达,利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR检测、流式细胞术、免疫荧光染色等方法探究miR-196b-5p对成肌细胞增殖分化的影响,并利用生物信息学预测和双荧光素酶报告系统鉴定了miR-196b-5p的靶基因。结果显示,过表达miR-196b-5p显著增加细胞周期基因Cyclin B、Cyclin D和Cyclin E的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);流式细胞周期检测结果显示,过表达miR-196b-5p显著增加S期细胞比例(P<0.05),表明miR-196b-5p能够加快细胞周期进程;EdU染色结果显示,过表达miR-196b-5p显著促进细胞增殖能力;相反,抑制miR-196b-5p的表达可以显著减弱成肌细胞增殖能力。进一步的功能研究发现,过表达miR-196b-5p能够显著增加成肌标志基因MyoD、MyoG和MyHC的表达水平(P<0.05);MyHC免疫荧光染色结果显示miR-196b-5p可以促进成肌细胞肌管形成,表明miR-196b-5p可以促进成肌细胞分化。生物信息学预测和双荧光素酶实验证明miR-196b-5p可以靶向Sirt1基因,抑制该基因的表达。改变Sirt1表达,不能够挽救miR-196b-5p影响细胞周期的表型,可以减弱miR-196b-5p对成肌细胞分化的促进作用,表明miR-196b-5p通过靶向Sirt1促进成肌细胞分化。 展开更多
关键词 mir-196b-5p 成肌细胞 增殖 分化 SIRT1
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miR-196b靶向ERG促进肺腺癌的增殖和迁移
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作者 刘邦卿 李剑锋 +2 位作者 刘晓辉 张劲男 梁金屏 《昆明医科大学学报》 CAS 2023年第10期83-91,共9页
目的探究miR-196b影响肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)进展的机制。方法通过TCGA数据库分析miR-196b在LUAD组织中的表达水平,利用TargetScan预测其下游靶基因并用双荧光素酶实验进行验证,qRT-PCR检测miR-196b和ETS相关基因(ETS-relate... 目的探究miR-196b影响肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)进展的机制。方法通过TCGA数据库分析miR-196b在LUAD组织中的表达水平,利用TargetScan预测其下游靶基因并用双荧光素酶实验进行验证,qRT-PCR检测miR-196b和ETS相关基因(ETS-related gene,ERG)在LUAD细胞系中的表达情况,MTT、划痕愈合和Transwell实验分别检测不同处理后LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化情况。结果miR-196b在LUAD中高表达(P=3.50e-17)并靶向负调控ERG,过表达miR-196b能够促进LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),回复实验证实miR-196b/ERG调控轴能够影响LUAD细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。结论miR-196b靶向ERG促进LUAD进展的分子机制,对开发LUAD新的临床治疗方法具有潜在意义。 展开更多
关键词 mir-196b ERG 肺腺癌 增殖 迁移
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miR-196b调控PI3K/Akt通路对宫颈癌细胞顺铂耐药的影响研究 被引量:4
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作者 张玉清 邢惠海 +2 位作者 刘立秋 王敬 徐书方(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第23期2865-2870,共6页
目的:探讨miR-196b对宫颈癌细胞顺铂耐药性及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法:体外培养人宫颈癌细胞株HeLa、顺铂耐药细胞株HeLa/DDP,检测HeLa、HeLa/DDP对顺铂的耐药性;将HeLa/DDP细胞分为:空白对照(仅用转染... 目的:探讨miR-196b对宫颈癌细胞顺铂耐药性及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法:体外培养人宫颈癌细胞株HeLa、顺铂耐药细胞株HeLa/DDP,检测HeLa、HeLa/DDP对顺铂的耐药性;将HeLa/DDP细胞分为:空白对照(仅用转染试剂处理)+DDP组、阴性对照(转染miR-196b NC)+DDP组、miR-196b inhibitor(转染miR-196b inhibitor)+DDP组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-196b水平,蛋白印迹(WB)法检测Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、PI3K、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的IC_(50),流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:与HeLa细胞相比,HeLa/DDP细胞miR-196b表达显著升高(P<0.05),随顺铂浓度增加(0.01、0.1、1、5、10、20、40、80、100μmol/L)HeLa/DDP、HeLa细胞活力下降,经计算HeLa对顺铂的IC_(50)为4.86μmol/L,HeLa/DDP对顺铂的IC_(50)为68.13μmol/L,与HeLa相比,HeLa/DDP对顺铂的IC_(50)显著升高(P<0.05);与空白对照+DDP组、阴性对照+DDP组比较,miR-196b inhibitor+DDP组HeLa/DDP细胞中miR-196b表达水平,Akt、p-Akt、PI3K、p-mTOR蛋白水平及顺铂IC_(50)显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:下调miR-196b表达可能通过下调PI3K/Akt通路相关蛋白表达,降低宫颈癌细胞对顺铂的耐药性。 展开更多
关键词 mir-196b 宫颈癌细胞 耐药性 顺铂 机制
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miR-196b慢病毒表达载体的构建和功能鉴定 被引量:4
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作者 刘玥 帅春 +2 位作者 尹虹 宋艳斌 马文丽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第5期674-678,共5页
目的构建携带miR-196b的慢病毒表达载体,为研究miR-196b在慢性粒细胞白血病中的功能及其对慢粒发生发展的作用奠定基础。方法以人骨髓细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-196b的前体序列,慢病毒表达载体plVTHM构建重组载体plVTHM-miR-19... 目的构建携带miR-196b的慢病毒表达载体,为研究miR-196b在慢性粒细胞白血病中的功能及其对慢粒发生发展的作用奠定基础。方法以人骨髓细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-196b的前体序列,慢病毒表达载体plVTHM构建重组载体plVTHM-miR-196b,并包装病毒和进行滴度测定。用病毒液感染K562细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,用流式细胞仪分选感染后绿色荧光蛋白阳性的K562细胞,再用实时荧光定量PCR测定细胞内miR-196b的表达水平。最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况。结果成功构建了plVTHM-miR-196b慢病毒表达载体;载体中绿色荧光蛋白有较好的表达活性;与对照组细胞相比,试验组miR-196b表达水平有显著提升(P<0.05);K562细胞稳定过表达miR-196b后增殖水平显著下降(P<0.05)。结论成功构建了miR-196b过表达载体,并在K562细胞内稳定高表达,miR-196b有抑制K562细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 mir-196b 慢病毒表达载体 载体构建
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miR-196b通过调控BACH1对绒毛膜癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用机制研究 被引量:1
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作者 张雪梅 高琴 杨学 《中国性科学》 2022年第5期101-105,共5页
目的探讨miR-196b/BTB-CNC同源体1(BACH1)分子轴对绒毛膜癌细胞增殖、侵袭和迁移的调控机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人绒毛膜癌JEG-3细胞中miRNAs的表达水平,双荧光素酶报告基因验证miR-196b和BACH1的靶向性。... 目的探讨miR-196b/BTB-CNC同源体1(BACH1)分子轴对绒毛膜癌细胞增殖、侵袭和迁移的调控机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人绒毛膜癌JEG-3细胞中miRNAs的表达水平,双荧光素酶报告基因验证miR-196b和BACH1的靶向性。外源性调节miR-196b和BACH1的表达水平后,通过噻唑蓝(MTT)和Transwell实验分别检测JEG-3细胞增殖、侵袭和迁移;通过流式细胞术检测JEG-3细胞的凋亡率;通过Western blotting检测JEG-3细胞中BACH1的表达。结果qRT-PCR结果显示,JEG-3细胞中miR-196b、miR-495、miR-218及miR-378-5p异常低表达(P<0.05),且miR-196b的表达水平最低。双荧光素酶报告基因结果显示,BACH1是miR-196b的靶基因(P<0.05)。过表达miR-196b或敲降BACH1可显著抑制JEG-3细胞增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡(P<0.05);进一步同时敲降miR-196b和BACH1后,JEG-3细胞增殖、侵袭、迁移水平及凋亡率与对照(NC)组差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-196b靶向下调BACH1抑制JEG-3细胞增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡。 展开更多
关键词 绒毛膜癌 mir-196b bTb-CNC同源体1 增殖 侵袭 迁移 凋亡
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miR-196b、miR-25在儿童急性髓细胞白血病中的表达及临床意义
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作者 徐丽华 胡绍燕 +2 位作者 岑建农 杨乃超 洪丹 《实用临床医药杂志》 CAS 2014年第24期11-15,共5页
目的探讨初诊AML患儿miR-196b、miR-25的表达及其临床意义。方法从骨髓标本库中随机抽取2012-2013年收集的20例初诊AML以及20例非白血病对照标本,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-196b、miR-25的相对表达量。结果 miR-196... 目的探讨初诊AML患儿miR-196b、miR-25的表达及其临床意义。方法从骨髓标本库中随机抽取2012-2013年收集的20例初诊AML以及20例非白血病对照标本,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-196b、miR-25的相对表达量。结果 miR-196b的相对表达量在患者和对照组间有显著差异(P<0.05);在危险度分组中,miR-196b在高危组、中危组和低危组有显著差异(P<0.05);在WBC<10万/mm3和≥10万/mm3组间,miR-196b表达有显著差异(P<0.05);在一疗程缓解组/未缓解组,miR-25表达有显著差异(P<0.05);在染色体核型预后良好组/预后不良组间,miR-196b表达水平具有显著差异(P<0.05),核型不良组miR-196b表达水平增高;而miR-25呈低表达现象,差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论 miR-196b在初诊AML患儿中明显高表达,高表达的miR-196b与不良预后相关;miR-25的表达水平增高提示着良好的早期治疗反应和预后。这些miRNAs有望成为儿童AML早期诊断、治疗及判断预后的独特生物标记物。 展开更多
关键词 mir-196b mir-25 急性髓细胞白血病 儿童
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miR-196b通过LRIG2调控宫颈癌细胞增殖和凋亡生物学特性的分子机制
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作者 李娜 宋泓 王茜 《现代科学仪器》 2021年第4期92-97,共6页
目的:探讨miR-196b对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法:运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski和正常宫颈细胞株Ect1/E6E7中miR-196b和LRIG2 mRNA的表达水平;将宫颈癌SiHa细胞... 目的:探讨miR-196b对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法:运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski和正常宫颈细胞株Ect1/E6E7中miR-196b和LRIG2 mRNA的表达水平;将宫颈癌SiHa细胞分为miR-con组(转染miR-con)、miR-196b组(转染miR-196b mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-196b组(转染miR-196b inhibitor)、miR-196b+si-con组(共转染miR-196b和si-con)、miR-196b+si-LRIG2组(共转染miR-196b和si-LRIG2)、miR-con+WT-LRIG2组(共转染miR-con和WT-LRIG2)、miR-con+MUT-LRIG2组(共转染miR-con和MUT-LRIG2)、miR-196b+WT-LRIG2组(共转染miR-196b和WT-LRIG2)、miR-196b+MUT-LRIG2组(共转染miR-196b和MUT-LRIG2)。采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测荧光活性。结果:相较于正常宫颈细胞株Ect1/E6E7,宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski中miR-196b的表达水平显著升高,LRIG2的表达水平显著降低(P<0.05);干扰miR-196b可抑制SiHa细胞增殖促进细胞凋亡;抑制Bcl-2、CDK4和Cyclin D1蛋白的表达,促进Bax、Caspase-3蛋白的表达。miR-196b靶向调控LRIG2的表达。抑制LRIG2表达能逆转干扰miR-196b对SiHa细胞的抑制增殖、促进凋亡的作用以及对AKT信号通路中PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达的抑制作用。结论:miR-196b可抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与LRIG2及AKT信号通路有关,将可为宫颈癌的预防和治疗提供新靶点。 展开更多
关键词 mir-196b LRIG2 宫颈癌 增殖 凋亡
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Overexpression of miR-196b and HOXA10 characterize a poor-prognosis gastric cancer subtype 被引量:11
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作者 Jae Yun Lim Sun Och Yoon +5 位作者 So-Young Seol Soon Won Hong Jong Won Kim Seung Ho Choi Ju-Seog Lee Jae Yong Cho 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2013年第41期7078-7088,共11页
AIM:To identify molecular biologic differences between two gastric adenocarcinoma subgroups presenting different prognoses through the analysis of microRNA and protein expression.METHODS:Array technologies were used t... AIM:To identify molecular biologic differences between two gastric adenocarcinoma subgroups presenting different prognoses through the analysis of microRNA and protein expression.METHODS:Array technologies were used to generate1146 microRNAs and 124 proteins expression profiles of samples from 60 patients with gastric cancer.For the integrative analysis,we used established mRNA expression data published in our previous study.Whole mRNA expression levels were acquired from microarray data for 60 identical gastric cancer patients.Two gastric adenocarcinoma subgroups with distinct mRNA expression profiles presented distinctly different prognoses.MicroRNA and protein expression patterns were compared between gastric cancer tissue and normal gastric tissue and between two different prognostic groups.Aberrantly expressed microRNA,associated mRNA,and protein in patients with poor-prognosis gastric cancer were validated by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction and immunochemistry in independent patients.RESULTS:We obtained the expression data of 1146microRNAs and 124 cancer-related proteins.Four microRNAs were aberrantly expressed in the two prognostic groups and in cancer vs non-cancer tissues(P<0.05).In the poor-prognosis group,miR-196b,miR-135b,and miR-93 were up-regulated and miR-29c*was down-regulated.miR-196b expression positively correlated with Homeobox A10(HOXA10)expression(r=0.726,P<0.001),which was significantly increased in poor-prognosis patients(P<0.001).Comparing gastric cancer with non-cancer tissues,46/124 proteins showed differential expression(P<0.05);COX2(P<0.001)and cyclin B1(P=0.017)were clearly overexpressed in the poor-prognosis group.CONCLUSION:Co-activation of miR-196b and HOXA10characterized a poor-prognosis subgroup of patients with gastric cancer.Elucidation of the biologic function of miR-196b and HOXA10 is warranted. 展开更多
关键词 Gastric cancer Gene expression Microarray MicroRNA mir-196b HOMEObOX A10
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儿童急性髓系白血病中miR-196b表达及预后意义 被引量:3
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作者 徐丽华 岑建农 +4 位作者 何海龙 沈宏杰 杨乃超 颜青 胡绍燕 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1145-1149,共5页
目的通过检测miR-196b在初诊急性髓系白血病(AML)患儿中的表达,评估miR-196b在儿童AML中的临床意义。方法从标本库中抽取52例初诊AML患儿骨髓,利用q RT-PCR方法检测miR-196b表达水平(结果以2-ΔΔCt表示),并与同期30例非白血病患儿标本... 目的通过检测miR-196b在初诊急性髓系白血病(AML)患儿中的表达,评估miR-196b在儿童AML中的临床意义。方法从标本库中抽取52例初诊AML患儿骨髓,利用q RT-PCR方法检测miR-196b表达水平(结果以2-ΔΔCt表示),并与同期30例非白血病患儿标本对照。结果单核系组(M4、M5)的miR-196b表达水平高于非单核系组(M1、M2、M3、M6、M7)和对照组,而非单核系组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。miR-196b表达水平在t(15;17)组最低,11q23(MLL)组最高,差异有统计学意义(P<0.01)。使用NCCN2013预后分组标准,预后良好组miR-196b表达低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.01)。首疗程缓解组miR-196b表达明显低于首疗程未缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。WBC≥100×109/L组miR-196b表达水平高于WBC<100×109/L组,差异有统计学意义(P<0.01)。miR-196b表达水平与初诊时血小板计数呈显著正相关(r=0.302,P=0.030)。结论 miR-196b表达水平在初诊AML预后不良组明显增高,高水平的miR-196b与低缓解率和较差的预后相关。miR-196b有望成为AML患儿治疗新靶点。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 儿童
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红系细胞发育相关miR-196b的靶基因预测及意义
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作者 丁谨 刘芳 +1 位作者 胡彩艳 施继禹 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第48期12-15,共4页
目的预测红系细胞发育相关miR-196b的靶基因,并探讨其作用机制。方法应用miRbase数据库查找多物种已知的miR-196b成熟序列,比对后分析其在多物种间的保守性。应用miRanda、miRDB、Targetscan7.1、PITA和miRWalk数据库对miR-196b的靶基... 目的预测红系细胞发育相关miR-196b的靶基因,并探讨其作用机制。方法应用miRbase数据库查找多物种已知的miR-196b成熟序列,比对后分析其在多物种间的保守性。应用miRanda、miRDB、Targetscan7.1、PITA和miRWalk数据库对miR-196b的靶基因进行预测,筛选重复率较高的靶基因。应用Cytoscape3.3.0和KEGG对重复率较高的靶基因进行GO分类富集分析和信号通路富集分析。查阅文献,再次筛选与红系细胞发育相关的靶基因,采用Targetscan7.1和RNA22分析其与miR-196b的结合情况。结果 22个物种具有miR-196b成熟序列,序列比对发现miR-196b在多物种间高度保守。靶基因预测结果显示,共得到5 004个miR-196b的靶基因,其中重复率较高的靶基因有302个。GO分类富集分析结果显示,miR-196b靶基因在生物学过程显著富集于发育过程、细胞过程和定位等,在分子功能显著富集于蛋白结合和物质转运等,在细胞组分显著富集于细胞突起和细胞器膜等(P均<0.05)。结合信号通路富集分析结果,筛选出43个与红系细胞发育相关miR-196b的靶基因,其信号通路富集于Ras信号通路、c AMP信号通路和PI3K-Akt信号通路等(P均<0.05)。结合文献,最终筛选出与红系细胞发育相关的miR-196b靶基因有5个,分别为GATA1、Cdkn1b、Pld1、Cdh1和Ntrk2,其中GATA1、Cdkn1b和Cdh1可与miR-196b直接结合。结论红系细胞发育相关miR-196b的靶基因可能为GATA1、Cdkn1b、Pld1、Cdh1和Ntrk2;miR-196b可能通过对上述靶基因的直接或间接作用激活相应信号通路,在红系细胞的发育过程中发挥生物学作用。 展开更多
关键词 红系细胞 mir-196b 靶基因 生物信息学
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miR-196b海绵吸附慢病毒载体的构建及其在骨髓基质细胞系ST2中的表达
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作者 杨威利 王珊 +1 位作者 王宝利 李晓霞 《天津医药》 CAS 2017年第7期695-698,共4页
目的构建miR-196b海绵吸附慢病毒载体,为研究miR-196b在骨髓基质细胞系中的功能奠定基础。方法根据miR-196b的成熟体序列设计与之互补的串联的六重复序列设计成引物,通过PCR反应将该六重复序列亚克隆至pUC19质粒中,再经酶切连接至pLVX-s... 目的构建miR-196b海绵吸附慢病毒载体,为研究miR-196b在骨髓基质细胞系中的功能奠定基础。方法根据miR-196b的成熟体序列设计与之互补的串联的六重复序列设计成引物,通过PCR反应将该六重复序列亚克隆至pUC19质粒中,再经酶切连接至pLVX-shRNA2慢病毒载体,利用293T细胞将构建成功的miR-196b海绵吸附慢病毒载体进行病毒包装和滴度测定,pLVX-shRNA2慢病毒作为对照组,miR-196b海绵吸附慢病毒作为实验组,将其感染ST2细胞,观察感染效率,并通过Western blotting检测miR-196b靶基因叉头框蛋白O1(FoxO1)的蛋白水平。结果酶切鉴定和测序结果正确,慢病毒包装所测滴度为1×108PFU/mL,将其感染靶细胞,其感染效率达80%。Western blotting结果显示,与对照组相比,其靶基因FoxO1蛋白表达水平有明显增加(P<0.05)。结论成功构建了miR-196b海绵吸附慢病毒载体,并能有效吸附内源性的miR-196b,从而发挥其抑制作用。 展开更多
关键词 微RNAS RNA干扰 mir-196b 慢病毒感染 骨髓基质细胞 海绵吸附慢病毒载体
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颅骨缺损山羊模型中miR-196b调节破骨细胞分化的作用机制
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作者 崔阳 张春阳 +2 位作者 杨文典 朱东 李鲁 《医学研究杂志》 2016年第8期59-62,共4页
目的研究miR-196b在调节破骨细胞分化过程中的作用机制。方法通过构建山羊颅骨缺损模型,分别选取颅骨缺损山羊的颅骨组织和发育正常山羊的颅骨组织作为样本。将收集样本进行基因测序分析,得到两样本中明显差异表达的miRNAs。以这些差异... 目的研究miR-196b在调节破骨细胞分化过程中的作用机制。方法通过构建山羊颅骨缺损模型,分别选取颅骨缺损山羊的颅骨组织和发育正常山羊的颅骨组织作为样本。将收集样本进行基因测序分析,得到两样本中明显差异表达的miRNAs。以这些差异表达的miRNA为对象进行KEGG pathway功能分析,并通过靶基因预测软件预测miR-196b的靶基因,研究miR-196b在破骨细胞分化过程中的作用及其与靶基因的关系。结果 miR-196b在颅骨缺损组中呈高表达(P<0.05),两样本中差异表达的miRNA在破骨细胞分化通路中富集,miR-196b调控的靶基因参与破骨细胞分化的调控通路。结论高表达的miR-196b参与破骨细胞分化通路中对AKT、JNK、STAT2等靶基因的调控过程。其作用可能对骨组织的代谢产生影响。 展开更多
关键词 mir-196b 破骨细胞 调控通路 靶基因
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LncRNA XIST负调控miR-196b对急性髓系白血病细胞KG1a生物行为的影响
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作者 王筝 马杏凡 +2 位作者 万春超 张岚 王静波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1318-1323,共6页
目的:探讨lncRNA X染色体失活特异性转录因子(XIST)对急性髓系白血病细胞KG1a增殖和凋亡的影响及其相关作用机制。方法:收集北京航天中心医院2017年1月至2019年5月收治的41例急性髓系白血病患者,以及20例符合缺铁性贫血国际标准的患者... 目的:探讨lncRNA X染色体失活特异性转录因子(XIST)对急性髓系白血病细胞KG1a增殖和凋亡的影响及其相关作用机制。方法:收集北京航天中心医院2017年1月至2019年5月收治的41例急性髓系白血病患者,以及20例符合缺铁性贫血国际标准的患者作为对照组。将KG1a细胞分为pcDNA、pcDNA-XIST、pcDNA-XIST+miR-NC和pcDNA-XIST+miR-196b共4组。实时荧光定量PCR检测XIST和miR-196b表达水平,CCK-8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测cleaved-caspase3、pro-caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测XIST和miR-196b的靶向关系。结果:急性髓系白血病组患者骨髓细胞中lncRNA XIST表达水平明显低于缺铁性贫血组(P<0.001)。KG1a细胞pcDNA-XIST组lncRNA XIST表达水平、G_(0)/G_(1)期细胞所占比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3和Bax的表达水平较pcDNA组均明显升高(均P<0.001),而miR-196b表达水平、细胞活性、S期细胞比例、pro-caspase3和Bcl-2表达水平均明显降低(均P<0.001)。pcDNA-XIST+miR-196b组细胞活性、S期细胞所占比例、pro-caspase3和Bcl-2表达水平较pcDNA-XIST组均明显升高(均P<0.001),而G_(0)/G_(1)期细胞所占比例、细胞凋亡率、cleaved-caspase3和Bax表达水平均明显降低(均P<0.001)。结论:过表达lncRNA XIST通过下调miR-196b表达抑制急性髓系白血病细胞KG1a增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 lncRNA XIST mir-196b 急性髓系白血病 增殖 凋亡
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miR-196b在宫颈癌组织中的表达意义及其与HPV18的相关性研究 被引量:4
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作者 李会影 徐明鑫 徐明研 《中国肿瘤外科杂志》 CAS 2019年第5期366-369,共4页
目的研究miR-196b在宫颈癌组织中的表达水平及其与人类乳头瘤病毒(HPV)18感染的关系.方法选取2016年1月至2018年1月牡丹江医学院附属红旗医院收治的80例宫颈癌患者.利用实时定量PCR法检测所有宫颈癌组织标本及对应正常黏膜组织中miR-196... 目的研究miR-196b在宫颈癌组织中的表达水平及其与人类乳头瘤病毒(HPV)18感染的关系.方法选取2016年1月至2018年1月牡丹江医学院附属红旗医院收治的80例宫颈癌患者.利用实时定量PCR法检测所有宫颈癌组织标本及对应正常黏膜组织中miR-196b的表达情况,采用液基薄层细胞学技术检测患者HPV感染情况,并据此将80例患者分为HPV18阳性组(44例)与HPV18阴性组(36例),分析miR-196b表达水平与HPV18感染、临床病理参数及患者生存期之间的关系.采用Cox多因素回归分析宫颈癌的危险因素.结果宫颈癌组织的miR-196b表达量明显高于正常黏膜组织[(0.875±0.132)vs.(0.514±0.294)],差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中miR-196b高表达率为76.25%(61/80),低表达率为23.75%(19/80);HPV18阳性组的miR-196b高表达率明显高于HPV阴性组(90.9%vs.58.3%),ⅡB~Ⅲ分期的miR-196b高表达率明显高于Ⅰ~ⅡA分期(91.8%vs.61.3%),差异有统计学意义(P<0.05).生存分析显示miR-196b高表达且HPV18阳性患者的生存期明显短于miR-196b低表达且HPV18阴性患者或单独miR-196b高表达患者(P<0.05);Cox多因素回归分析显示病理分期高、有淋巴转移、有远处转移、miR-196b高表达且HPV18阳性为宫颈癌的高危因素.结论 miR-196b高表达的患者往往预示其HPV18感染风险大,且患者预后结局较差、生存时间短,可通过检测miR-196b表达情况及评价HPV感染风险为临床针对性治疗提供参考. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒18 宫颈肿瘤 mir-196b
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5-氮杂-2’-脱氧胞苷和4-苯基丁酸对慢性粒细胞白血病细胞的miR-196b表达水平有协同作用
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作者 刘玥 帅春 +3 位作者 李杰生 尹虹 宋艳斌 马文丽 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期521-524,共4页
目的探讨慢性粒细胞白血病细胞中影响miR-196b表达水平的表观遗传学因素。方法分别采用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-dc)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂4-苯基丁酸(PBA)和两者联合处理K562细胞,采用实时定量PCR(Real-... 目的探讨慢性粒细胞白血病细胞中影响miR-196b表达水平的表观遗传学因素。方法分别采用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-dc)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂4-苯基丁酸(PBA)和两者联合处理K562细胞,采用实时定量PCR(Real-time PCR)检测miR-196b的表达水平变化。结果 PBA的半数抑制浓度为1.58mmol/L。和正常人骨髓细胞miR-196b的表达水平相比,Aza组、PBA组和阴性对照组miR-196b的表达水平显著降低且基本一致,Aza+PBA组miR-196b的表达水平和正常人表达水平基本一致。结论单独使用5-Aza-2’-dc或PBA不能使K562细胞中miR-196b的表达恢复正常,两者联合使用共同处理K562细胞,可使miR-196b的表达恢复正常,表明K562细胞中miR-196b的表达水平和基因组甲基化及组蛋白乙酰化均有关系。 展开更多
关键词 甲基化 组蛋白乙酰化 K562细胞 实时定量聚合酶链反应
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miR-196b-5p在食管鳞癌癌组织中的表达及作用机制
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作者 尹周亮 张波 +1 位作者 张健 徐建峰 《浙江医学》 CAS 2021年第3期274-278,共5页
目的探讨miR-196b-5p在食管鳞癌癌组织中的表达情况,评估miR-196b-5p作为食管鳞癌潜在生物标志物的可能性,并进一步分析其作用机制。方法收集2015至2019年浙江省台州医院收治的病理学检查确诊为食管鳞癌的24例患者的癌组织及相应癌旁(... 目的探讨miR-196b-5p在食管鳞癌癌组织中的表达情况,评估miR-196b-5p作为食管鳞癌潜在生物标志物的可能性,并进一步分析其作用机制。方法收集2015至2019年浙江省台州医院收治的病理学检查确诊为食管鳞癌的24例患者的癌组织及相应癌旁(距离肿瘤≥2 cm)正常组织标本。采用qRT-PCR法检测miR-196b-5p表达水平。ROC曲线评估miR-196b-5p诊断食管鳞癌的效能,并收集癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达汇编(GEO)数据进行验证。进一步比较不同临床特征食管鳞癌患者癌组织中miR-196b-5p表达水平。基于TCGA数据库,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集方法初步分析miR-196b-5p的相关信号通路。结果qRT-PCR检测结果、TCGA数据库和GEO数据库中食管鳞癌患者癌组织miR-196b-5p表达水平均明显高于癌旁正常组织(均P<0.01)。miR-196b-5p水平诊断食管鳞癌的灵敏度为0.79,特异度为0.92,最佳截断值为1.542,AUC为0.891(95%CI:0.767~0.962)(P<0.01);根据TCGA数据计算,灵敏度为0.86,特异度为0.85,最佳截断值为5.310,AUC为0.832(95%CI:0.748~0.897)(P<0.01);根据GEO数据计算,灵敏度为0.89,特异度为0.96,最佳截断值为0.012,AUC为0.946(95%CI:0.900~0.975)(P<0.01),T3~4期食管鳞癌患者癌组织中miR-196b-5p表达水平高于T1~2期食管鳞癌患者(P<0.05)。食管鳞癌癌组织miR-196b-5p低表达(≤1.898)患者3年生存率为55.3%,明显高于miR-196b-5p高表达(>1.898)患者的0.0%(P<0.05)。KEGG富集结果提示差异基因显著富集于有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、Wnt、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)等多条通路(均P<0.05)。结论食管鳞癌癌组织中miR-196b-5p表达水平明显高于癌旁正常组织,或可作为食管鳞癌筛选的潜在生物标志物。miR-196b-5p可能通过参与调控多条信号通路,在食管鳞癌中起致癌作用。 展开更多
关键词 mir-196b-5p 食管鳞癌 生物标志物 信号通路
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LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p调控卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性分子作用机制 被引量:4
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作者 赵国立 张海金 陈鉴 《中国妇幼保健》 CAS 2020年第4期749-754,共6页
目的 探讨LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p表达对卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 运用qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910、OVCAR3和正常卵巢上皮细胞HOSE中miR-196b-5p和TUG1的表达水平... 目的 探讨LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p表达对卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 运用qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910、OVCAR3和正常卵巢上皮细胞HOSE中miR-196b-5p和TUG1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证TUG1可能的靶基因。建立TUG1抑制表达、miR-196b-5p过表达及si-TUG1和anti-miR-196b-5p共转染的SKOV3细胞株,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞不同剂量X射线照射后的存活情况,曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数。结果 正常卵巢上皮细胞HOSE相比,卵巢癌细胞SKOV3、HO8910及OVCAR3中miR-196b-5p的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),TUG1的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-196b-5p是TUG1的靶基因。TUG1抑制表达或miR-196b-5p过表达均促进SKOV3细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)并增加其放射敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-196b-5p表达可部分逆转抑制TUG1表达对SKOV3细胞促进凋亡和增强放射敏感性作用。结论 TUG1可负性调控miR-196b-5p的表达,抑制TUG1表达,可促进卵巢癌细胞凋亡,增加细胞放射敏感性。 展开更多
关键词 LncRNA TUG1 mir-196b-5p 卵巢癌 细胞凋亡 放射敏感性
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miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中的表达及其临床意义 被引量:8
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作者 兰鸿波 潘杰 +1 位作者 卢星榕 池畔 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2013年第4期400-405,共6页
目的研究miR-196b和HoxB8在结直肠癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系,并探讨在结直肠癌组织中miR-196b与靶基因HoxB8表达的关系。方法用实时荧光定量PCR技术检测30例结直肠癌组织及对应的正常黏膜组织中miR-196b mRNA和HoxB8 mRN... 目的研究miR-196b和HoxB8在结直肠癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系,并探讨在结直肠癌组织中miR-196b与靶基因HoxB8表达的关系。方法用实时荧光定量PCR技术检测30例结直肠癌组织及对应的正常黏膜组织中miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA的表达量,用Western blot法检测HoxB8蛋白的表达。结果 miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中的表达量均高于其在对应的正常黏膜组织中的表达量(P<0.05)。miR-196b mRNA的表达与结直肠癌的淋巴结转移、肿瘤分期(Ⅰ+Ⅱ与Ⅲ+Ⅳ)及远处转移均有关(P<0.05),而与肿瘤部位、大小、大体类型、浸润深度、组织分化程度、患者的年龄及性别均无关(P>0.05);HoxB8mRNA的表达与结直肠癌的上述临床病理特征均无关(P>0.05)。miR-196b mRNA与HoxB8 mRNA的表达存在负相关(r=-0.458,P<0.05),而与HoxB8蛋白的表达无明显相关性(r=-0.236,P>0.05)。结论 miR-196bmRNA及HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中均呈高表达,miR-196b mRNA的高表达与结直肠癌的发生、发展及预后有关。miR-196b可能通过与靶基因HoxB8 mRNA的3′非编码区结合抑制HoxB8 mRNA的表达。 展开更多
关键词 结直肠癌 mir-196b Hoxb8 实时荧光定量PCR WESTERNbLOT
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Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定
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作者 向星宇 马文丽 +3 位作者 宋艳斌 姜茂竹 王妮莎 郑文岭 《热带医学杂志》 CAS 2010年第5期513-515,F0002,共4页
目的构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法以正常人外周血DNA为模板,PCR扩增得到目的基因。通过HpaⅠ/XhoⅠ双酶切及其后的连接将其插入Lentilox3.7(pLL-3.7)质粒中。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLL-3.7-mir-196b、pCM... 目的构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法以正常人外周血DNA为模板,PCR扩增得到目的基因。通过HpaⅠ/XhoⅠ双酶切及其后的连接将其插入Lentilox3.7(pLL-3.7)质粒中。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLL-3.7-mir-196b、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒系统共感染HEK-293FT细胞,包装生产慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染HEK293FT细胞,以检测病毒滴度,并用实时定量PCR检测慢病毒感染后Hsa-mir-196b的表达变化。结果 PCR及测序结果证明成功构建了pLL-3.7-mir-196b重组质粒。所得慢病毒上清滴度为(7.2±1.1)×107TU/ml。感染慢病毒的239FT细胞中,Hsa-mir-196b的表达量相对于未感染细胞提高了约24倍。结论成功构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体。 展开更多
关键词 Hsa-mir-196b 慢病毒 肿瘤
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