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蛛网膜下腔注射pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经病理性痛的镇痛效应 被引量：12
1
作者 徐玉英 张宏伟 +2 位作者 赵青赞 任秀花 臧卫东 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期218-221,262,共5页
目的:观察蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经痛的镇痛作用。方法:SD大鼠随机分为坐骨神经慢性压迫(CCI)组、CCI假手术组、实验组和空质粒组。CCI组和CCI假手术组,用于观察疼痛持续时间;实验组和空质粒组分别于CCI术后... 目的:观察蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE对大鼠神经痛的镇痛作用。方法:SD大鼠随机分为坐骨神经慢性压迫(CCI)组、CCI假手术组、实验组和空质粒组。CCI组和CCI假手术组,用于观察疼痛持续时间;实验组和空质粒组分别于CCI术后第15天蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE和空质粒pcDNA3.1(+)。测定各组注射质粒前后CCI模型鼠双后肢热痛阈(PWTL),观察纳洛酮对镇痛效应的影响,用放射免疫法检测脑脊液灌流液中脑啡肽(L-ENK)的含量,同时采用免疫组织化学方法测定两组大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的变化。结果:CCI术后7～33d,术侧PWTL明显低于对照侧。空质粒组注射前后热痛阈未见明显变化;与空质粒组相比,实验组大鼠蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE后的第3天产生明显的抗伤害效应(PTWL升高),持续镇痛长达18d,且镇痛效应能被纳洛酮翻转。实验组脑脊液灌流液L-ENK含量显著高于空质粒组。与空质粒组比较,实验组大鼠脊髓背角NR2B阳性蛋白表达明显受到抑制。结论:蛛网膜下腔注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hPPE能够减轻大鼠神经病理性疼痛的热痛敏行为。 展开更多
关键词 神经病理性疼痛 蛛网膜下腔注射 脑啡肽 NMDA受体2B亚单位 重组质粒pcdna3.1(+)-hPPE
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pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量：6
2
作者 詹升华 张徽 刘纯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期390-393,共4页
目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真... 目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。 展开更多
关键词 人促甲状腺激素受体 pcdna3.1 COS-7细胞 转染 动物模型
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日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP核酸疫苗的构建及其对家兔保护性免疫作用的研究 被引量：4
3
作者 刘彦 肖建华 +2 位作者 廖力 张愉快 曾谷清 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期299-302,314,共5页
目的　体外扩增日本血吸虫中国大陆株粘蛋白样蛋白抗原的部分基因序列 ,构建日本血吸虫pcDNA3 1(+) /MLP核酸疫苗 (SJP) ,免疫新西兰家兔 ,观察它在肌肉组织中的表达、及其对家兔的保护性免疫作用。方法　分子克隆常规操作构建SJP疫苗 ... 目的　体外扩增日本血吸虫中国大陆株粘蛋白样蛋白抗原的部分基因序列 ,构建日本血吸虫pcDNA3 1(+) /MLP核酸疫苗 (SJP) ,免疫新西兰家兔 ,观察它在肌肉组织中的表达、及其对家兔的保护性免疫作用。方法　分子克隆常规操作构建SJP疫苗 ,免疫家兔 ,家兔肌肉组织体外扩增查MLP基因 ,并通过免疫组化观察重组蛋白在局部肌组织中的表达 ;做血清抗体及细胞因子分析 ,计算减虫率及减卵率。结果　经酶切、PCR及测序鉴定表明所构建的SJP中含有目的基因序列 ;免疫家兔 8周后可以在免疫家兔肌肉中检测到MLP基因 ,免疫组化结果阳性 ;可诱导IgA、IgG1及INF -γ变化 ,减虫率为2 4 10 % ,减卵率为 2 8 10 %。结论　成功地构建了含目的基因的核酸疫苗SJP ,SJP免疫家兔后 ,肌组织有重组蛋白的表达 ,并可产生一定的免疫保护性作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 pcdna3.1(+)/MLP 核酸疫苗 构建 兔 保护性免疫 粘蛋白样蛋白基因
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pcDNA3.1（＋）-增强型绿色荧光蛋白在大鼠鞘内注射的表达 被引量：3
4
作者 徐玉英 曹靖 +2 位作者 任秀花 赵青赞 臧卫东 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期339-341,共3页
目的：构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）并观察其存大鼠体内的转染部位及表达时间。方法：构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-增强型绿色荧光蛋白后直接注射到正常大鼠的蛛网膜下腔，观察其存大鼠体内转染后的时空效应... 目的：构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）并观察其存大鼠体内的转染部位及表达时间。方法：构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-增强型绿色荧光蛋白后直接注射到正常大鼠的蛛网膜下腔，观察其存大鼠体内转染后的时空效应。结果：双酶切结果符合真核表达载体pcDNA3.1（＋）约5.4kb，EGFP约750bp，另外测序分析与文献报道结果完全一致；动物实验结果表明，鞘内注射24h后存大鼠的脑脊膜和脊神经的外膜上有EGFP表达，在14d达到高峰，4周后明显下降，第7周消失；在实验组大鼠的心、肝、脾、肺、肾及股四头肌均没有绿色荧光。对照组所有取材部位均没有绿色荧光。结论：重组质粒pcDNA3.1（＋）-EGFP通过直接注射法被成功转染至大鼠的蛛网膜下腔，且外源基因得到了表达。 展开更多
关键词 鞘内注射 增强型绿色荧光蛋白 真核表达 pcdna3.1
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重组突变型DNA聚合酶β表达载体pcDNA3.1-polβ的构建 被引量：3
5
作者 赵国强 刘栋 +5 位作者 赵勤 杨洪艳 金戈 赵继敏 高丽 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第4期480-483,共4页
目的 :构建含突变型 polβ基因重组表达载体。 方法 :从食管癌标本中提取总RNA ,反转录合成cDNA ,克隆入 pCDNA3.1质粒。以通用鉴定引物PCR扩增、小量提取质粒酶切鉴定重组质粒 ,并进行测序。 结果 :测序结果证实重组载体中的外源片段... 目的 :构建含突变型 polβ基因重组表达载体。 方法 :从食管癌标本中提取总RNA ,反转录合成cDNA ,克隆入 pCDNA3.1质粒。以通用鉴定引物PCR扩增、小量提取质粒酶切鉴定重组质粒 ,并进行测序。 结果 :测序结果证实重组载体中的外源片段序列与所选取的标本完全相符。结论 :成功构建了含突变型polβ基因重组表达载体 ,可应用于下游研究。 展开更多
关键词 重组突变型DNA聚合酶β 表达 载体 pcdna3.1-polβ 食管癌
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pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗对裸鼠肿瘤的作用 被引量：3
6
作者 马红兵 王西京 +7 位作者 胡海涛 狄政莉 夏辉 王铮 李琤 韩志楷 马洁 吴丛梅 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期7-10,15,共5页
目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种... 目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种JF305胰腺癌细胞的裸鼠体内,测定各组裸鼠体积以观察各种处理抑瘤效 应的差异,并用RT PCR检测放射治疗后48h各组肿瘤局部p16mRNA水平。结果:质粒注入后接受20GyX射线 照射组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于2Gy和10Gy照射组(P<0.05)。质粒注入量为20μg或30μg的 联合治疗组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于注入量为10μg的联合治疗组(P<0.05)。单纯接种 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组和接种pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组小鼠的肿瘤组织内有p16mRNA表达,且 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组的p16mRNA水平明显高于单纯pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组(P<0.05)。结 论:pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜射线照射剂量为20Gy,质粒注入量为20 μg;pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗的抗肿瘤作用明显优于单纯放射治疗或单纯基因治疗,这可能与辐射 激活Egr.1p基因后增强抑瘤基因p16的表达有关。 展开更多
关键词 pcdna3.1-Egr.1p-p16重组质粒 基因联合放射治疗 X射线 抗肿瘤作用 剂量 质粒注入量
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重组pcDNA3.1-hBMP-2转染人骨髓基质干细胞和对其增殖及血管内皮生长因子表达的影响 被引量：5
7
作者 李建军 王文军 +4 位作者 景元海 卜丽莎 杨绍娟 张文岚 徐莘香 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2004年第2期100-103,共4页
目的　构建人骨形成蛋白 - 2 (h BMP- 2 )真核表达载体 pc DNA3.1- h BMP- 2 ,转染人骨髓基质干细胞(MSCs) ,探讨基因转染对其增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。　方法　利用重组 DNA和基因克隆技术构建重组载体 pc DNA3.1- h ... 目的　构建人骨形成蛋白 - 2 (h BMP- 2 )真核表达载体 pc DNA3.1- h BMP- 2 ,转染人骨髓基质干细胞(MSCs) ,探讨基因转染对其增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。　方法　利用重组 DNA和基因克隆技术构建重组载体 pc DNA3.1- h BMP- 2 ;细胞培养和基因转染技术体外转染人 MSCs;免疫细胞化学、原位杂交和蛋白印迹法检测细胞 BMP- 2的表达 ;通过流式细胞仪和 VEGF探针原位杂交分析其对细胞增殖和 VEGF表达的影响。　结果　转染后细胞在 m RNA水平和蛋白质水平均表达 BMP- 2 ;转染后 S期细胞比例增多 ,提示细胞 DNA的合成增加 ;BMP- 2基因转染上调细胞 VEGF的表达。　结论　在脂质体介导下 ,pc DNA3.1- h BMP- 2转染 MSCs获得成功。基因转染后能促进细胞增殖并将通过使 VEGF的表达增加促进血管再生 ,为进一步骨缺损的基因治疗及构建组织工程骨奠定了实验基础。 展开更多
关键词 重组pcdna3.1-hBMP-2 基因转染 骨髓基质干细胞 细胞增殖 血管内皮生长因子 基因表达 骨形成蛋白-2 组织工程
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转化生长因子β2真核表达载体pcDNA3.1(+)/TGF-β2的构建及其在骨髓基质细胞的表达 被引量：6
8
作者 王卫国 娄思权 +1 位作者 郑多 夏家辉 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第7期19-23,共5页
目的 :构建人转化生长因子 β2的真核表达载体 pcDNA3.1(+) /TGF - β2 ,检测其转染骨髓基质细胞后的表达。方法 :用PCR方法从人胎盘cDNA文库DNA中扩增TGF - β2全长cDNA ,该基因片段两端设计了NheⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点。将所得片段... 目的 :构建人转化生长因子 β2的真核表达载体 pcDNA3.1(+) /TGF - β2 ,检测其转染骨髓基质细胞后的表达。方法 :用PCR方法从人胎盘cDNA文库DNA中扩增TGF - β2全长cDNA ,该基因片段两端设计了NheⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证实。利用重组DNA技术将TGF - β2的cDNA构建到真核表达载体 pcDNA3.1(+)上 ,酶切鉴定。通过脂质体介导的转染技术 ,将所构建的载体导入从骨髓中分离培养的基质细胞中 ,体外单层培养。分别于转染后 2 4h和 4周利用RT -PCR和Western -Blotting方法检测目的基因的表达情况。结果 :经琼脂糖凝胶电泳及测序证实 ,PCR获得的片段与GenBank中登记的TGF - β2cDNA序列完全相同。pcDNA3.1(+) /TGF - β2酶切片段的长度与理论大小相符。转染后不同时期的骨髓基质细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到TGF - β2的表达。结论 :pcDNA3.1(+) /TGF - β2真核表达载体构建成功 。 展开更多
关键词 人转化生长因子β2 真核表达载体 pcdna3.1(+)/TGF-β2 基因转染 骨髓基质细胞 基因表达 重组DNA
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真核表达载体pcDNA3.1-MAGE-1的构建 被引量：2
9
作者 何炜 张朝 +2 位作者 章茜 赵国强 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第4期586-587,共2页
目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与... 目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与结论:RT-PCR获得长度为927bp的阳性产物,经T载体和pcDNA3.1(+)真核表达载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实真核表达质粒pcDNA3.1-MAGE-1构建成功。 展开更多
关键词 MAGE—1 pcdna3.1(+) 真核表达载体
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日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP核酸疫苗对家兔的保护性免疫作用 被引量：2
10
作者 刘彦 肖建华 +3 位作者 廖力 曾谷清 张愉快 王可耕 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2004年第2期126-128,F002,共4页
目的　观察日本血吸虫 pc DNA3.1(+) /ML P(SJP)核酸疫苗对家兔的保护性免疫作用。方法　将 2 4只新西兰家兔随机分为 2组 ,每组 12只 ;实验组每只家兔 SJP的免疫剂量为5 0 0μg/次 ,后腿肌肉注射 ,对照组注射空质粒 pc DNA3.1(+) ;隔... 目的　观察日本血吸虫 pc DNA3.1(+) /ML P(SJP)核酸疫苗对家兔的保护性免疫作用。方法　将 2 4只新西兰家兔随机分为 2组 ,每组 12只 ;实验组每只家兔 SJP的免疫剂量为5 0 0μg/次 ,后腿肌肉注射 ,对照组注射空质粒 pc DNA3.1(+) ;隔周免疫 1次 ,共 4次 ,最后 1次免疫后 2周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染。尾蚴攻击感染 6 0 d后处死 ,观察肝脏病变 ,计算减虫率及减卵率 ,并做血清抗体及细胞因子分析。结果　 SJP免疫家兔可明显抑制肝脏虫卵肉芽肿的大小 ,肉芽肿数量减少 ,肝组织减卵率为 2 8.10 % ,并可诱导 Ig A、Ig G1 变化 ,诱生 INF-γ应答。结论　 展开更多
关键词 日本血吸虫 核酸疫苗 免疫保护 pcdna3.1(+)/MLP(SJP)
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重组体pcDNA3.1(+)-tyr的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达 被引量：2
11
作者 吉琼梅 朱振宇 +4 位作者 张海涛 李秀英 岳滔 李茜 马涧泉 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期358-362,共5页
[目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质... [目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质体法导入NIH3T3细胞,RT-PCR,酪氨酸酶活性测定及多巴染色法检测tyr的表达。[结果]成功克隆1.74kb的全长tyr cDNA片段,经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致,tyr准确克隆入pcDNA3.1(+)的多克隆位点,RT-PCR及酪氨酸酶活性测定等方法检测到转染了重组体的NIH3T3细胞中有tyr的表达。[结论]本实验成功构建了pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并成功导入NIH3T3细胞中表达。 展开更多
关键词 黑色素瘤 酪氨酸酶基因 基因表达 pcdna3.1(+)质粒 RT-PCR法
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猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的细胞免疫效应 被引量：2
12
作者 王媛媛 孙新 +6 位作者 方强 胡守锋 杨小迪 张莺莺 陈兴智 王雪梅 夏惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第4期262-265,共4页
目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN... 目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ含量。结果RT-PCR产物为单一条带,大小为456bp,与TSO45-4B大小一致。免疫小鼠第2周细胞因子含量达到较高水平,第4周达到最高水平,第8周开始下降。结论基于猪囊尾蚴保护性抗原TSO45-4B的DNA疫苗能在小鼠体内表达并有效诱导细胞免疫效应。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 pcdna 3 1-TSO45—4B 疫苗 RT—PCR 细胞免疫
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旋毛虫pcDNA3.1/Ts87重组质粒的构建和表达 被引量：2
13
作者 杨雅平 诸欣平 +4 位作者 杨静 张路平 徐旭娜 黄松 Pascal Boireau 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期93-95,共3页
目的 构建和表达旋毛虫重组质粒。方法 PCR法在旋毛虫抗原基因Ts87两端加上合适的酶切位点和KOZAK序列,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1/Ts87重组质粒。采用Lipofectamine介导的细胞外源DNA转染法,把重组质粒导入COS7细胞... 目的 构建和表达旋毛虫重组质粒。方法 PCR法在旋毛虫抗原基因Ts87两端加上合适的酶切位点和KOZAK序列,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1/Ts87重组质粒。采用Lipofectamine介导的细胞外源DNA转染法,把重组质粒导入COS7细胞。分别用肌肉注射和基因枪免疫小鼠。结果和结论 成功构建pcD-NA3.1/Ts87重组质粒,并在COS7细胞和BALB/c小鼠体内表达。 展开更多
关键词 旋毛虫病 疫苗 pcdna3.1/Ts87重组质粒 细胞外源DNA转染法 基因枪 COS7细胞
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pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro α真核表达质粒的构建及鉴定 被引量：1
14
作者 任玥欣 宋于刚 +5 位作者 陈学清 智发朝 钟世顺 南清振 武金宝 崔忠林 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第11期2623-2626,共4页
目的:构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα. 方法:据GeneBank中大鼠MCP-1和GroαcDNA序列设计并合成引物,提取急性胰腺炎模型大鼠总RNA,RT-PCR 扩增,并将扩增产物TA克隆至pGEM-T easy载体,然后分别双酶切pGEM-M... 目的:构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα. 方法:据GeneBank中大鼠MCP-1和GroαcDNA序列设计并合成引物,提取急性胰腺炎模型大鼠总RNA,RT-PCR 扩增,并将扩增产物TA克隆至pGEM-T easy载体,然后分别双酶切pGEM-MCP-1和pGEM-Groα回收目的片段再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+). 结果:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro α真核表达质粒构建完成后,用限制性内切酶、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定,证实其构建成功. 结论:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒构建成功,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备急性胰腺炎pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-GroαDNA疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 pcdna3.1(+)-MCP-1 pcdna3.1(+)-Gmoα 真核表达质粒 构建 鉴定 急性胰腺炎
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真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B的改构与应用 被引量：6
15
作者 钱晓龙 周建光 《生物技术通讯》 CAS 2010年第2期158-162,共5页
目的:对真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B进行改构,以简化目的基因克隆的步骤。方法:用事先设计好的2条寡核苷酸链互相退火,替换pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中NotⅠ与HindⅢ间的部分;利用改构的真核表达载体,分别构建亲环蛋白A... 目的:对真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B进行改构,以简化目的基因克隆的步骤。方法:用事先设计好的2条寡核苷酸链互相退火,替换pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中NotⅠ与HindⅢ间的部分;利用改构的真核表达载体,分别构建亲环蛋白A、胆绿素还原酶B和过氧化氢酶基因的重组真核表达载体,瞬时转染293T细胞后,用His标签抗体验证其表达。结果:测序结果证实已将预想的序列替换至pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中相应位置,改构为质粒pcDNA3.1(-)reconstruct;利用改构的真核表达载体表达了相应的目的基因。结论:改构的真核表达载体pcDNA3.1(-)reconstruct可以简化融合myc和His标签的目的基因克隆的过程,并且增加了限制性位点的可选择性。 展开更多
关键词 pcdna3.1-myc-his(-)B 改构 多克隆位点 pcdna3.1(-)reconstruct 限制酶位点 目的基因
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pcDNA3.1(+)/人前脑啡肽原基因真核表达载体的构建 被引量：3
16
作者 李静 杨保仲 +3 位作者 王维 洛珉 聂丽霞 方爱莉 《中国药物与临床》 CAS 2010年第10期1126-1127,共2页
目前慢性疼痛及癌症晚期疼痛的治疗方法仍主要依靠三阶梯药物疗法,三阶梯药物中以外源性镇痛药吗啡为主,其不良反应大,成瘾性高,限制了其大量使用,因此研究新的镇痛药及新的镇痛方法成为最近研究的热点。20世纪50年代以来,人们着力于研... 目前慢性疼痛及癌症晚期疼痛的治疗方法仍主要依靠三阶梯药物疗法,三阶梯药物中以外源性镇痛药吗啡为主,其不良反应大,成瘾性高,限制了其大量使用,因此研究新的镇痛药及新的镇痛方法成为最近研究的热点。20世纪50年代以来,人们着力于研究新的镇痛物质,之后内源性镇痛物质[1]的发现及基因克隆技术[2]的应用为开辟新的镇痛研究奠定了基础。 展开更多
关键词 pcdna3.1(+) 基因真核表达载体 前脑啡肽原 三阶梯药物疗法 内源性镇痛物质 基因克隆技术 镇痛药 治疗方法
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牛DKK2基因pcDNA3.1表达载体的构建 被引量：2
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作者 陶虎 熊琪 +5 位作者 李晓峰 索效军 张年 杨前平 刘洋 陈明新 《湖北农业科学》 2015年第22期5751-5753,5760,共4页
DKK2基因是Wnt信号通路的关键抑制因子,在胚胎发育、颗粒细胞生成等过程中发挥重要作用。扩增了牛DKK2基因CDS序列,构建了DKK2基因pc DNA3.1真核表达载体;为进一步验证载体在细胞内的表达效果,将表达质粒瞬时转染CHO细胞,利用q RT-PCR和... DKK2基因是Wnt信号通路的关键抑制因子,在胚胎发育、颗粒细胞生成等过程中发挥重要作用。扩增了牛DKK2基因CDS序列,构建了DKK2基因pc DNA3.1真核表达载体;为进一步验证载体在细胞内的表达效果,将表达质粒瞬时转染CHO细胞,利用q RT-PCR和Western blot检测DKK2的表达情况。结果表明,在CHO细胞中转染DKK2基因的真核表达载体质粒,其m RNA和蛋白质表达量均显著上升,表明已成功构建了DKK2基因表达载体,为下一步开展DKK2基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛 DKK2基因 pcdna3.1表达载体 细胞转染 基因超表达
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pcDNA3.1表达载体转染对细胞生长的影响 被引量：1
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作者 余鹰 周鸣 +3 位作者 曹利 唐珂 李伟芳 李桂源 《生物技术》 CAS CSCD 2001年第1期1-3,共3页
为了探讨真核表达载体转染对细胞生长的影响，通过脂质体介导将ｐｃＤＮＡ３．１（＋）表达载体ＤＮＡ转染鼻咽癌细胞系 ＨＮＥ１，Ｇ４１８筛选后，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定稳定表达细胞株，以 ＨＮＥ１细胞为对照，观察ｐｃＮＡ３．... 为了探讨真核表达载体转染对细胞生长的影响，通过脂质体介导将ｐｃＤＮＡ３．１（＋）表达载体ＤＮＡ转染鼻咽癌细胞系 ＨＮＥ１，Ｇ４１８筛选后，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定稳定表达细胞株，以 ＨＮＥ１细胞为对照，观察ｐｃＮＡ３．１（＋）／ＨＮＥ１克隆细胞的生物学特性；结果显示，在ｐｃＤＮＡ３．１（＋）／ＨＮＥ１阳性克隆中，一株细胞克隆培养过程中发生自溶性死亡，一株细胞生长明显受到抑制，另一株细胞生长无明显影响，揭示在宿主细胞中ｐｃＤＮＡ３.１（＋）ＤＮＡ与宿主基因组ＤＮＡ发生了随机整合，从而表现不同的细胞生物学改变。 展开更多
关键词 真核表达系统 pcdna3.1(+)载体 整合 哺乳动物细胞
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阿尔茨海默病pcDNA3.1/APP595/596质粒的构建研究 被引量：2
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作者 吴志国 冯莉 肖波 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第14期2146-2149,共4页
目的构建人类阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白(APP)真核表达质粒,为深入研究该病发病机制提供基础。方法从原始质粒克隆模板中,利用PCR方法扩增目的基因APP695cDNA,将目的基因和目的载体pcDNA3.1分别酶切;纯化酶切产物后定向连接,并将其转... 目的构建人类阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白(APP)真核表达质粒,为深入研究该病发病机制提供基础。方法从原始质粒克隆模板中,利用PCR方法扩增目的基因APP695cDNA,将目的基因和目的载体pcDNA3.1分别酶切;纯化酶切产物后定向连接,并将其转化细菌感受态细胞,对生长出的克隆行PCR鉴定,PCR鉴定为阳性的克隆送测序并行比对分析。结果应用DNAStar软件对阳性克隆测序结果与GenBank中APP基因序列比对,证实原序列中的错义突变G已被突变回C,第4位点碱基定点突变完成。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/APP595/596,为建立阿尔茨海默病转基因细胞模型奠定基础。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 pcdna3.1/APP595/596质粒 淀粉样前体蛋白
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气肿疽pcDNA3.1-CctA质粒在小鼠体内免疫应答的研究 被引量：1
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作者 陈竞 崔林泽 +4 位作者 齐强 张皓 李成辉 于建华 金鑫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第21期123-125,共3页
为了检测pcDNA3. 1-CctA质粒的免疫效果,试验将pcDNA3. 1-CctA质粒转染至Vero细胞,48 h后提取细胞蛋白进行Western-blot检测,正确表达气肿疽梭菌细胞毒素A（CctA）基因后用质粒免疫动物,检测特异性抗体免疫球蛋白G2a（IgG2a）、免疫球蛋... 为了检测pcDNA3. 1-CctA质粒的免疫效果,试验将pcDNA3. 1-CctA质粒转染至Vero细胞,48 h后提取细胞蛋白进行Western-blot检测,正确表达气肿疽梭菌细胞毒素A（CctA）基因后用质粒免疫动物,检测特异性抗体免疫球蛋白G2a（IgG2a）、免疫球蛋白G1（IgG1）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）的表达水平。结果表明：pcDNA3. 1-CctA质粒成功在Vero细胞中表达CctA蛋白;pcDNA3. 1-CctA质粒可有效刺激小鼠的体液免疫及细胞免疫应答,能在一定程度上提高机体的细胞免疫水平。 展开更多
关键词 气肿疽梭菌 pcdna3.1-CctA 小鼠 特异性抗体 表达水平 免疫应答
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