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Separation and Purification of Thrombin-like Enzymes by Affinity Adsorbents 被引量:2
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作者 杨青 Xu Xiaoming +4 位作者 Hu Xuejun Gao Xiaorong Dong Xinyan Su Zhiguo An Lijia 《High Technology Letters》 EI CAS 2001年第4期13-15,共3页
An affinity adsorbent, benzamidine Sepharose 4B, was used to separate and purify thrombin like enzymes. The p aminobenzamidine as a specific ligand was coupled to the matrix-Sepharose 4B. The recombinant thrombin like... An affinity adsorbent, benzamidine Sepharose 4B, was used to separate and purify thrombin like enzymes. The p aminobenzamidine as a specific ligand was coupled to the matrix-Sepharose 4B. The recombinant thrombin like enzyme-defibrase was used as a model in order to evaluate the efficiency of this biospecific affinity adsorbent. The homogeneity of the enzyme preparation was comfirmed as one band on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. 展开更多
关键词 Affinity chromatography LIGAND Benzamidine PURIFICATION Thrombin like enzyme
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血清凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物、可溶性fms样酪氨酸激酶-1水平与脓毒症患者病情进展和预后的关系
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作者 白娟 杨蓉 贺外信 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第16期1946-1951,共6页
目的探讨血清凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)、可溶性fms样酪氨酸激酶-1(sFlt-1)水平与脓毒症患者病情进展和预后的关系。方法选取2021年1月至2023年5月该院收治的脓毒症患者117例作为观察组,另选取同期在该院的体检健康志愿者42例作为... 目的探讨血清凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)、可溶性fms样酪氨酸激酶-1(sFlt-1)水平与脓毒症患者病情进展和预后的关系。方法选取2021年1月至2023年5月该院收治的脓毒症患者117例作为观察组,另选取同期在该院的体检健康志愿者42例作为对照组。脓毒症患者根据病情程度分为普通脓毒症组(60例)、脓毒性休克组(57例)。观察组根据治疗90 d后的预后情况分为死亡组和存活组。采用酶联免疫吸附试验法检测血清TAT、sFlt-1水平。通过Logistic回归分析脓毒症患者死亡的影响因素并建立基于TAT、sFlt-1的脓毒症患者预后预测模型,受试者工作特征(ROC)曲线分析指标对脓毒症患者死亡的预测价值。结果观察组血清TAT[(12.59±5.35)ng/mL]、sFlt-1[(28.58±4.05)ng/mL]水平高于对照组[分别为(2.65±0.88)ng/mL、(16.50±3.60)ng/mL],差异有统计学意义(t=19.386、17.065,P<0.001)。脓毒性休克组血清TAT[(15.09±4.99)ng/mL]、sFlt-1[(30.45±3.30)ng/mL]水平高于普通脓毒症组[分别为(10.22±4.57)ng/mL、(26.81±3.92)ng/mL],差异有统计学意义(t=5.503、5.429,P<0.001)。死亡组脓毒性休克占比、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、血乳酸、降钙素原、TAT、sFlt-1水平高于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒性休克、SOFA评分增加、APACHEⅡ评分增加和血乳酸、TAT、sFlt-1升高为脓毒症患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,预测模型预测脓毒症患者死亡的曲线下面积(AUC)为0.947,大于病情程度、SOFA评分、APACHEⅡ评分、血乳酸、TAT、sFlt-1单独预测的AUC(Z=6.525、4.414、4.835、3.787、3.956、3.507,P<0.001)。结论脓毒症患者血清TAT、sFlt-1水平升高与病情进展和预后不良密切相关,且基于TAT、sFlt-1建立的预测模型对脓毒症患者死亡有较高的预测价值。 展开更多
关键词 脓毒症 凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物 可溶性fms样酪氨酸激酶-1 预后
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一种蛇毒类凝血酶纯化新方法
3
作者 李秀琳 董敬 +1 位作者 刘阳 李爽 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第3期351-355,共5页
目的提供一种蛇毒类凝血酶的新纯化方法。方法蛇毒经预处理后,依次经过苯甲脒琼脂糖凝胶亲和色谱、阳离子交换色谱和疏水色谱后获得蛇毒类凝血酶,分别对活性、分子量及纯度进行检测,并与使用现有专利方法制备的蛇毒类凝血酶进行质量比... 目的提供一种蛇毒类凝血酶的新纯化方法。方法蛇毒经预处理后,依次经过苯甲脒琼脂糖凝胶亲和色谱、阳离子交换色谱和疏水色谱后获得蛇毒类凝血酶,分别对活性、分子量及纯度进行检测,并与使用现有专利方法制备的蛇毒类凝血酶进行质量比较。结果新方法制备的蛇毒类凝血酶与现有专利方法相比,分子量无明显差异,但新方法的比活力更高,且纯度更高,同时新方法的工艺稳定性更佳。结论新方法与现有专利方法相比,简化了工艺步骤,缩短了纯化周期,减少了过程环境暴露风险,可获得高纯度类凝血酶,工艺稳定性高,产品质量一致性好,利于临床安全用药。 展开更多
关键词 蛇毒类凝血酶 纯化 新方法
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结核性胸腔积液PAI、YKL⁃40和APTT水平改变及其临床价值
4
作者 王兴昌 孙丽琴 +4 位作者 李正国 席彩霞 杨婷 杨尚雪 王彬 《分子诊断与治疗杂志》 2024年第11期2190-2193,共4页
目的研究结核性胸腔积液(TPE)患者纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)、壳多糖酶3样蛋白1(YKL⁃40)和活化部分凝血酶时间(APTT)水平改变及其临床价值。方法选择2021年3月至2023年6月甘肃省武威肿瘤医院收治的128例胸腔积液患者作为研究对象,根据... 目的研究结核性胸腔积液(TPE)患者纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)、壳多糖酶3样蛋白1(YKL⁃40)和活化部分凝血酶时间(APTT)水平改变及其临床价值。方法选择2021年3月至2023年6月甘肃省武威肿瘤医院收治的128例胸腔积液患者作为研究对象,根据诊断分为TPE组(n=42)、恶性胸腔积液(MPE)组(n=48)、细菌性胸腔积液(BPE)组(n=38)。检测血浆PAI、YKL⁃40和APTT及胸水腺苷脱氨酶(ADA)、乳酸脱氢酶(LDH),比较组间各指标的差异,分析PAI、YKL⁃40、APTT与ADA、LDH的相关性以及PAI、YKL⁃40和APTT对TPE的诊断价值。结果三组血浆PAI、YKL⁃40的比较,TPE组>MPE组>BPE组,差异有统计学意义(F=11.392、9.382,P<0.05);三组血浆APTT水平的比较,TPE组<MPE组<BPE组,差异有统计学意义(F=7.785,P<0.05);TPE组患者血浆PAI、YKL⁃40、APTT水平与胸水ADA水平呈正相关(r=0.324、0.409,P<0.05),与胸水LDH水平呈负相关(r=-0.384、-0.342,P<0.05);血浆APTT水平与胸水ADA水平呈负相关(r=-0.375,P<0.05),与胸水LDH水平呈正相关(r=0.412,P<0.05);PAI、YKL⁃40和APTT诊断TPE的ROC曲线AUC分别为0.789、0.724、0.627,联合诊断TPE的ROC曲线AUC为0.859,联合诊断的AUC高于单独诊断(Z=5.492、6.029、7.114,P<0.05)。结论TPE患者血浆PAI及YKL⁃40水平增加、APTT水平降低,三项指标对TPE具有诊断价值。 展开更多
关键词 结核性胸腔积液 纤溶酶原激活物抑制剂 壳多糖酶3样蛋白1 活化部分凝血酶时间
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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文) 被引量:15
5
作者 杨青 胡学军 +4 位作者 许小明 高晓蓉 安利佳 苏志国 J.C.JANSON 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期390-393,共4页
根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇... 根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇瓶中培养 ,甲醇诱导分泌表达 .上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到 :QSepharoseFF和Benzamidine Sepharose 4BCL .与天然蛇毒类凝血酶一致 ,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性 ,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱 .此重组类凝血酶在 37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽 ,但在 0℃下很稳定 .该酶的最适pH为 8 0 . 展开更多
关键词 大连蛇岛 蝮蛇 类凝血酶基因 毕赤酵母 克隆 表达 分离纯化
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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因克隆与表达研究 被引量:6
6
作者 杨青 雷旭宇 +4 位作者 许建强 李民 苏志国 安利佳 杨克瑞斯特.杨森 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第2期156-159,共4页
根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚... 根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,获得单一条带,并表现较强的生色底物活性. 展开更多
关键词 大连蛇岛 蝮蛇 类凝血酶 基因克隆 基因表达 酵母表达系统 氨基酸序列 蛇毒
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重组巴曲酶在毕赤酵母中的高效表达 被引量:8
7
作者 李招发 于学玲 +2 位作者 黄金路 方宏清 陈惠鹏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期483-486,共4页
以毕赤酵母为表达系统,建立生产重组巴曲酶的技术工艺路线。通过递归式PCR的方法,人工合成了巴曲酶基因,将其插入pPIC9表达质粒中,转化至毕赤酵母GS115(his4),筛选出的表达株经甲醇诱导,表达了重组巴曲酶,并得以纯化。从每升发酵液中可... 以毕赤酵母为表达系统,建立生产重组巴曲酶的技术工艺路线。通过递归式PCR的方法,人工合成了巴曲酶基因,将其插入pPIC9表达质粒中,转化至毕赤酵母GS115(his4),筛选出的表达株经甲醇诱导,表达了重组巴曲酶,并得以纯化。从每升发酵液中可纯化得到10mg重组巴曲酶,其比活为238NIHunits/mg,分子量为30.55kD。重组巴曲酶在体外可使纤维蛋白凝固,在体内缩短小鼠出血时间。为开发重组的蛇毒类凝血酶止血剂打下了基础。 展开更多
关键词 毕赤酵母 重组巴曲酶 蛇毒类凝血酶 止血剂
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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量:6
8
作者 雷旭宇 杨青 +3 位作者 包永明 许建强 栾雨时 安利佳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第9期44-48,共5页
将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 (Gloshedobin)的基因克隆于表达载体pET 32a( + )中 ,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在 2 5℃下经 1mmol LIPTG诱导 6h ,SDS PAGE和蛋白质印迹分析表明 ,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细... 将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 (Gloshedobin)的基因克隆于表达载体pET 32a( + )中 ,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在 2 5℃下经 1mmol LIPTG诱导 6h ,SDS PAGE和蛋白质印迹分析表明 ,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细胞质中。针对金属螯合亲和层析分离某些含His 标签重组蛋白质时专一性不高 ,并且存在配基泄漏的缺陷 ,设计合成了以抗重组类凝血酶的鸡卵黄免疫球蛋白为配基的免疫亲和层析柱。通过疏水色谱OctylSepharoseFF ,IgY免疫亲和层析以及强阴离子交换色谱SourceQ等三步柱色谱分离纯化获得比活力为 45 4 7U mg的重组蛇毒类凝血酶 ,活力回收率为 34 8%。蛋白质印迹分析和纤维蛋白原凝结活性分析表明 。 展开更多
关键词 蝮蛇 类凝血酶 大肠杆菌 融合蛋白 蛋白质印迹 配基 ET 蛇类 蛇岛 重组蛋白质
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蛇毒类凝血酶研究进展 被引量:8
9
作者 林奕心 余晓东 +2 位作者 和七一 宋锡迅 李恒 《重庆师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第2期27-32,F0003,共7页
对有关蛇毒类凝血酶(SVTLEs)的分布分类、理化性质、酶学性质、结构特征、基因克隆表达、临床应用等方面的研究资料进行了概括和综述。结果发现:SVTLEs主要分布在蝮亚科和蝰科毒蛇的毒液中;根据SVTLEs水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度... 对有关蛇毒类凝血酶(SVTLEs)的分布分类、理化性质、酶学性质、结构特征、基因克隆表达、临床应用等方面的研究资料进行了概括和综述。结果发现:SVTLEs主要分布在蝮亚科和蝰科毒蛇的毒液中;根据SVTLEs水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度不同,可将其分为SVTLE-AB、SVTLE-A和SVTLE-B等3类;多数SVTLEs的分子量在30~50kD,含6个二硫键,pI较低,部分SVTLEs的pI较高;SVTLEs可水解TAME和BAEE,其活性可被DFP和PMSF所抑制,但不被胰蛋白酶trypsin及凝血活性中心His的专一抑制剂TLCK和EDTA抑制;对SVTLEs的一级结构和二级结构研究较多,对高级结构研究有待深入;很多SVTLEs基因在大肠杆菌中成功获得了表达,但表达物不能被糖基化和正确折叠,故没有活性或活性不高,而其在真核表达系统中表达活性较高;部分碳水化合物具有稳定SVTLEs结构及提高SVTLEs的酶活力的作用;SVTLEs的临床应用涉及心肌梗塞、缺血性中风、血栓性疾病等疾病的治疗。SV-TLEs未来的研究重点将集中于其在真核表达系统的表达和对其高级结构的解析。 展开更多
关键词 蛇毒 类凝血酶 SVTLEs 凝血活性 蛋白结构
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新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin止血作用的实验研究 被引量:8
10
作者 唐松山 王晓华 +3 位作者 张娟辉 杨志勇 刘菁 祁荣 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2005年第7期781-786,共6页
目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果.方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果.结果:静脉注射Agacutin 0.01~0.05U·kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均... 目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果.方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果.结果:静脉注射Agacutin 0.01~0.05U·kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%~60.5%),给药后30 min药效达高峰,药效持续24h.与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血粘度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致.试验结果显示,Agacutin对部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性、血小板体外聚集、优球蛋白凝固时间均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性.腹腔注射Agacutin0.5~2 U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%~66%).结论:Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白且不激活凝血因子Ⅱ和XIII,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成血栓形成. 展开更多
关键词 类凝血酶 止血剂 尖吻蝮蛇蛇毒 Agacutin
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五步蛇蛇毒类凝血酶N端的部分氨基酸序列 被引量:7
11
作者 杜晓燕 朱洪 +2 位作者 蒋克贤 俞鹤年 周元聪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第2期184-185,共2页
从五步蛇蛇毒中纯化得到的类凝血酶 ,在SDS PAGE及IEF均为一条带 ,且分子质量约 38ku ,等电点约为 4 0。测定该酶N端 1 5个氨基酸的序列是VIGGVECDINEHRFL 。
关键词 蛇类 蛇毒 五步蛇 类凝血酶 N端 序列 氨基酸
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在大肠杆菌中表达蝮蛇毒类凝血酶基因gloshedobin 被引量:6
12
作者 黄星 杨青 +1 位作者 闫明 刘铮 《过程工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期22-27,共6页
将大连蛇岛蝮蛇毒腺中的类凝血酶基因gloshedobin克隆到pET-32a(+)上,构建了T7启动子控制的大肠杆菌表达质粒,并考察了质粒的稳定性. 采用IPTG诱导,以融合蛋白的形式进行表达,得到以包涵体形式存在的类凝血酶. 通过实验对诱导时间、诱... 将大连蛇岛蝮蛇毒腺中的类凝血酶基因gloshedobin克隆到pET-32a(+)上,构建了T7启动子控制的大肠杆菌表达质粒,并考察了质粒的稳定性. 采用IPTG诱导,以融合蛋白的形式进行表达,得到以包涵体形式存在的类凝血酶. 通过实验对诱导时间、诱导温度及诱导剂浓度进行了优化,并采用正交实验考察了金属离子对表达的影响,结果表明Fe3+, Co2+对类凝血酶的表达有促进作用. 展开更多
关键词 蛇毒类凝血酶 包涵体 基因表达 金属离子 正交实验 融合蛋白
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五步蛇蛇毒的分离纯化及综合利用 被引量:4
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作者 付大雁 赵伟 +1 位作者 郭锴 俞军 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期98-99,107,共3页
五步蛇蛇毒冻干粉经过SephadexG-75分子筛层析,使纤溶酶和类凝血酶初步分离;DEAE阴离子交换层析对2种酶进一步分离纯化,分别得到了纤溶酶和类凝血酶。2种酶在HPLC图谱上均呈单一峰,在SDS-PAGE图谱上均为单一条带,纤溶酶分子量大约为24.1... 五步蛇蛇毒冻干粉经过SephadexG-75分子筛层析,使纤溶酶和类凝血酶初步分离;DEAE阴离子交换层析对2种酶进一步分离纯化,分别得到了纤溶酶和类凝血酶。2种酶在HPLC图谱上均呈单一峰,在SDS-PAGE图谱上均为单一条带,纤溶酶分子量大约为24.1kDa,类凝血酶分子量大约为14.4kDa,与以往报道相符。酶的总活力回收率大大提高,纤溶酶的活力回收率达23.9%,类凝血酶的活力回收率达34.5%。实现了对蛇毒的综合利用,为进一步开发利用蛇毒探索了一条有效的途径。 展开更多
关键词 综合利用 分离纯化 五步蛇 蛇毒 SDS-PAGE图谱 SEPHADEX 阴离子交换层析 类凝血酶 酶分子量 纤溶酶 回收率 DEAE HPLC 开发利用 冻干粉 分子筛 活力
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蕲蛇蛇毒中一个新的类凝血酶的分离纯化与表征 被引量:6
14
作者 赖伟苹 郭春腾 +3 位作者 邓文汉 卢菀华 宁千年 饶平凡 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第1期64-67,共4页
使用DEAE SephadexA 5 0、POROS 5 0HS及POROS 2 0PI等色谱分离技术 ,从蕲蛇粗毒中分离提纯得到 1个具有凝血活力的组分 ,经SDS PAGE和PAGE检测均为一条带 ,非还原条件下相对分子质量 2 4 .3kDa,还原条件下相对分子质量 33.0kDa ;其凝... 使用DEAE SephadexA 5 0、POROS 5 0HS及POROS 2 0PI等色谱分离技术 ,从蕲蛇粗毒中分离提纯得到 1个具有凝血活力的组分 ,经SDS PAGE和PAGE检测均为一条带 ,非还原条件下相对分子质量 2 4 .3kDa,还原条件下相对分子质量 33.0kDa ;其凝血活力为 91 .0NIHu mg.该组分不具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,肝素不影响该组分的凝血活性 ,EDTA部分抑制其活性 ,苯甲基磺酰氟 (PMSF)则会产生不可逆抑制作用 .该酶N 末端氨基酸序列为VIGGNGXDINEHRFLVAFF 。 展开更多
关键词 蕲蛇蛇毒 类凝血酶 分离纯化 表征 N-末端氨基酸序列
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尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶在兔体内的药物动力学 被引量:20
15
作者 魏京娜 王晴川 刘广芬 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期213-215,共3页
本文采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测(ELISA)技术,研究家兔一次快速iv 75,150及300μg/kg的凝血酶样酶(thrombin—like enzymes,TLEs)后24 h内血浆药物代谢动力学。结果表明,TLEs在家兔的血浆浓度时间过程以三室模型模拟较为合适,三种... 本文采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测(ELISA)技术,研究家兔一次快速iv 75,150及300μg/kg的凝血酶样酶(thrombin—like enzymes,TLEs)后24 h内血浆药物代谢动力学。结果表明,TLEs在家兔的血浆浓度时间过程以三室模型模拟较为合适,三种剂量的各参数的均数之间经F检验除中央室表观分布容积外无显著差别。其t_(1/2α)为3.86~5.12min,t_(1/2β)为43.3~59.8min,t_(1/2γ)为17.6~19.5h。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇毒 凝血酶样酶 药物动力学
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尖吻蝮蛇毒中一种新类凝血酶的分离纯化 被引量:12
16
作者 翟宁 陈正杰 +1 位作者 冯军 赵文杰 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期601-603,共3页
用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分。经Superdex75HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%。SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k。该组分的凝血酶比活为41.... 用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分。经Superdex75HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%。SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k。该组分的凝血酶比活为41.5u/mg,精氨酸酯酶比活为14.29u/mg,但不激活血浆凝血因子ⅩⅢ。EDTA不能抑制其凝血活性,而苯甲磺酰氟则产生不可逆抑制作用。结果表明该酶是一种新尖吻蝮蛇毒类凝血酶。 展开更多
关键词 类凝血酶 尖吻蝮蛇毒 柱色谱
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长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶制品的生化分析 被引量:5
17
作者 杨帆 郭慧云 +2 位作者 许航 曹海石 刘兰英 《吉林大学自然科学学报》 CAS CSCD 1999年第2期79-82,共4页
对长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的理化及酶学性质进行系统研究. 结果表明, 该酶为一分子量为38 000, 等电点为450 并对温度有很高稳定性的糖蛋白, 该酶的最适p H 值为80,其活力可被 D F P 和 P M S F抑制.
关键词 长白白眉蝮蛇 蛇毒 类凝血酶 酶学性质 生化分析
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降纤酶研究进展 被引量:13
18
作者 罗晓清 杨化新 金少鸿 《中国药事》 CAS 2008年第11期1008-1013,共6页
降纤酶(Defibrase)是从尖吻蝮蛇Agkistrodon acutus和长白山白眉蝮蛇Agkistrodon halys ussuriensis蛇毒中提取分离得到的一种类凝血酶。具有显著的去纤、降粘、溶栓等作用,广泛地应用于临床治疗和预防心脑血管血栓性疾病。对降纤酶的... 降纤酶(Defibrase)是从尖吻蝮蛇Agkistrodon acutus和长白山白眉蝮蛇Agkistrodon halys ussuriensis蛇毒中提取分离得到的一种类凝血酶。具有显著的去纤、降粘、溶栓等作用,广泛地应用于临床治疗和预防心脑血管血栓性疾病。对降纤酶的生化性质与结构、生产制备、药理作用与临床应用以及质量分析与控制等方面的研究进行了综述。 展开更多
关键词 降纤酶 类凝血酶 结构 生产 质量分析
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尖吻蝮蛇类凝血酶基因的克隆及生物信息学分析 被引量:4
19
作者 张艳宇 马平 +5 位作者 陆一鸣 吕丽萍 姜升阳 周锡鹏 孙树汉 许金波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期542-547,共6页
为了获得蛇毒类凝血酶基因,本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5'和3'保守性序列设计了引物;通过RT-PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段,将该cDNA重组到pMD18-T载体中,利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析。... 为了获得蛇毒类凝血酶基因,本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5'和3'保守性序列设计了引物;通过RT-PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段,将该cDNA重组到pMD18-T载体中,利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析。结果表明:该特异性片段中有一个783bp的开放阅读框架,其编码蛋白质序列与蛇的类凝血酶序列有98.5%的同源性,也具有蛇毒类凝血酶的典型特征。结论:本实验获得了一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶基因。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇 蛇毒类凝血酶 RT-PCR 生物信息学
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尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究——Ⅲ.蛇毒凝血酶止血效应的研究 被引量:9
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作者 何丽芬 肖昌华 +1 位作者 董馥明 杨连玺 《Zoological Research》 CAS CSCD 1990年第4期331-335,共5页
将纯化得到的蛇毒凝血酶(TLE_3、TLE_4),经家兔体内实验表明,2—3凝血酶单位/kg体重剂量能显著地使家兔全血凝血时间缩短1/3—1/2。药后1小时即有促凝作用,以2—4小时凝血(止血)效应最强,12小时已消失。与Holleman, W. H.等自美洲矛头... 将纯化得到的蛇毒凝血酶(TLE_3、TLE_4),经家兔体内实验表明,2—3凝血酶单位/kg体重剂量能显著地使家兔全血凝血时间缩短1/3—1/2。药后1小时即有促凝作用,以2—4小时凝血(止血)效应最强,12小时已消失。与Holleman, W. H.等自美洲矛头蝮蛇毒中得到的蛇毒凝血酶(Hemocoagulase)相似。经家兔及家犬实验性创伤止血实验表明,对创伤出血有止血作用。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇 凝血酶样酶 蛇毒凝血酶
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