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WTK1细胞在tk位点突变和DNA损伤与修复中的应用
1
作者
张建清
张立实
王瑞淑
《癌变．畸变．突变》
CAS
CSCD
2004年第1期1-4,共4页
背景与目的:为WTK1细胞在遗传毒理学可同时应用于基因突变和DNA损伤的研究提供实验依据。材料与方法:分别用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)和过氧化氢(H2O2)处理WTK1细胞,采用tk基因突变试验和单细胞凝胶电泳技术(single Cell GelElectrop...
背景与目的:为WTK1细胞在遗传毒理学可同时应用于基因突变和DNA损伤的研究提供实验依据。材料与方法:分别用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)和过氧化氢(H2O2)处理WTK1细胞,采用tk基因突变试验和单细胞凝胶电泳技术(single Cell GelElectrophoresis,SCGE)对细胞的tk位点突变和过氧化氢诱发的DNA损伤情况进行检测。结果:甲基磺酸甲酯可诱发WTK1细胞tk位点的突变,以诱发染色体畸变为主。过氧化氢诱发了WTK1细胞DNA的损伤,并有剂量反应关系。随着修复孵育时间的延长,彗星细胞尾长和彗星细胞出现率明显下降,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论:WTK1细胞可同时应用于tk基因突变和DNA损伤与修复的研究。采用该细胞株可对化合物进行基因突变和DNA损伤进行研究评价。
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关键词
W
tk
1细胞
tk
位点
突变
DNA损伤
DNA修复
下载PDF
职称材料
从伪狂犬病病毒中删除Cre/LoxP介导的报告基因
被引量：
2
2
作者
苏鑫铭
于春梅
+4 位作者
王敏秀
陈勇军
曹瑞兵
周斌
陈溥言
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期456-461,共6页
根据pEGFP-C1序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出两端各含一个同向LoxP位点的GFP表达盒,克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-G-LoxP。通过经典同源重组方法,得到表达GFP的TK基因缺失伪狂犬病毒重组毒株S03109。该重组病毒在转染了pOG231...
根据pEGFP-C1序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出两端各含一个同向LoxP位点的GFP表达盒,克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-G-LoxP。通过经典同源重组方法,得到表达GFP的TK基因缺失伪狂犬病毒重组毒株S03109。该重组病毒在转染了pOG231(表达Cre重组酶)的293T细胞上连续传代,筛选得到重组病毒株S0419。荧光显微镜观察、Western blot及PCR检测结果表明,S03109感染细胞后持续表达GFP,而S0419不表达GFP。PCR证实S0419为含单个LoxP位点的TK基因缺失病毒,并且在细胞培养上遗传稳定,测序结果(GenBank登录号AY822465)表明,在Cre重组酶的作用下,两个同向LoxP序列之间的GFP表达盒被正确除去。对BALB/c小鼠的半数致死量(LD50)及免疫保护实验结果表明,S03109和S0419对BALB/c小鼠的LD50值均大于3×105PFU,免疫BALB/c小鼠,攻毒后平均存活率分别为67.5%与70%。以上结果表明,利用Cre/LoxP位点特异性重组系统,成功去除了插入重组伪狂犬病病毒基因组中的GFP报告基因。
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关键词
疱疹病毒科
伪狂犬病病毒
tk
基因
CRE重组酶
LoxP序列
GFP
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职称材料
题名
WTK1细胞在tk位点突变和DNA损伤与修复中的应用
1
作者
张建清
张立实
王瑞淑
机构
深圳市疾病预防控制中心
四川大学公共卫生学院
出处
《癌变．畸变．突变》
CAS
CSCD
2004年第1期1-4,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.39770653)
文摘
背景与目的:为WTK1细胞在遗传毒理学可同时应用于基因突变和DNA损伤的研究提供实验依据。材料与方法:分别用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)和过氧化氢(H2O2)处理WTK1细胞,采用tk基因突变试验和单细胞凝胶电泳技术(single Cell GelElectrophoresis,SCGE)对细胞的tk位点突变和过氧化氢诱发的DNA损伤情况进行检测。结果:甲基磺酸甲酯可诱发WTK1细胞tk位点的突变,以诱发染色体畸变为主。过氧化氢诱发了WTK1细胞DNA的损伤,并有剂量反应关系。随着修复孵育时间的延长,彗星细胞尾长和彗星细胞出现率明显下降,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论:WTK1细胞可同时应用于tk基因突变和DNA损伤与修复的研究。采用该细胞株可对化合物进行基因突变和DNA损伤进行研究评价。
关键词
W
tk
1细胞
tk
位点
突变
DNA损伤
DNA修复
Keywords
W
tk
1 cells
tk site
mutation
DNA damage
DNA repair capacity
分类号
R994.6 [医药卫生—毒理学]
下载PDF
职称材料
题名
从伪狂犬病病毒中删除Cre/LoxP介导的报告基因
被引量：
2
2
作者
苏鑫铭
于春梅
王敏秀
陈勇军
曹瑞兵
周斌
陈溥言
机构
南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期456-461,共6页
文摘
根据pEGFP-C1序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出两端各含一个同向LoxP位点的GFP表达盒,克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-G-LoxP。通过经典同源重组方法,得到表达GFP的TK基因缺失伪狂犬病毒重组毒株S03109。该重组病毒在转染了pOG231(表达Cre重组酶)的293T细胞上连续传代,筛选得到重组病毒株S0419。荧光显微镜观察、Western blot及PCR检测结果表明,S03109感染细胞后持续表达GFP,而S0419不表达GFP。PCR证实S0419为含单个LoxP位点的TK基因缺失病毒,并且在细胞培养上遗传稳定,测序结果(GenBank登录号AY822465)表明,在Cre重组酶的作用下,两个同向LoxP序列之间的GFP表达盒被正确除去。对BALB/c小鼠的半数致死量(LD50)及免疫保护实验结果表明,S03109和S0419对BALB/c小鼠的LD50值均大于3×105PFU,免疫BALB/c小鼠,攻毒后平均存活率分别为67.5%与70%。以上结果表明,利用Cre/LoxP位点特异性重组系统,成功去除了插入重组伪狂犬病病毒基因组中的GFP报告基因。
关键词
疱疹病毒科
伪狂犬病病毒
tk
基因
CRE重组酶
LoxP序列
GFP
Keywords
Herpesviridae
pseudorabies virus
tk
gene
Cre recombinase
LoxP
site
GFP
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
WTK1细胞在tk位点突变和DNA损伤与修复中的应用
张建清
张立实
王瑞淑
《癌变．畸变．突变》
CAS
CSCD
2004
0
下载PDF
职称材料
2
从伪狂犬病病毒中删除Cre/LoxP介导的报告基因
苏鑫铭
于春梅
王敏秀
陈勇军
曹瑞兵
周斌
陈溥言
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
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