目的构建人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库,为抗肺癌药物的筛选和药物作用分子机理的研究奠定基础。方法提取人肺癌细胞A549λ总RNA,用DnaseⅠ处理后,采用RNA 5’末端移动反转录(switching mechanism at 5′end of RNA transcript,SMART...目的构建人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库,为抗肺癌药物的筛选和药物作用分子机理的研究奠定基础。方法提取人肺癌细胞A549λ总RNA,用DnaseⅠ处理后,采用RNA 5’末端移动反转录(switching mechanism at 5′end of RNA transcript,SMART)技术合成双链cDNA,切胶回收去除短片段,依次用蛋白酶K和SfiⅠ进行酶切,并与经过酶切的λTriplEx2载体连接后进行体外包装,得到初级文库。初级文库扩增后,测定扩增文库滴度,并通过PCR鉴定插入片段。结果构建的人肺癌细胞A549λ噬菌体初级文库库容为1.88×10^(7)pfu/mL,扩增文库滴度为2.50×10^(9)pfu/mL,插入cDNA片段为500~3000 bp。结论成功构建了人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库,为进一步筛选治疗肺癌的药物作用分子机理奠定了基础。展开更多
文摘目的构建人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库,为抗肺癌药物的筛选和药物作用分子机理的研究奠定基础。方法提取人肺癌细胞A549λ总RNA,用DnaseⅠ处理后,采用RNA 5’末端移动反转录(switching mechanism at 5′end of RNA transcript,SMART)技术合成双链cDNA,切胶回收去除短片段,依次用蛋白酶K和SfiⅠ进行酶切,并与经过酶切的λTriplEx2载体连接后进行体外包装,得到初级文库。初级文库扩增后,测定扩增文库滴度,并通过PCR鉴定插入片段。结果构建的人肺癌细胞A549λ噬菌体初级文库库容为1.88×10^(7)pfu/mL,扩增文库滴度为2.50×10^(9)pfu/mL,插入cDNA片段为500~3000 bp。结论成功构建了人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库,为进一步筛选治疗肺癌的药物作用分子机理奠定了基础。
