Con A、α-Galcer与LPS/D-Gal N诱导免疫性肝损伤小鼠NKT细胞功能改变的比较研究 被引量：1

1

作者 游佳 陈薇 +2 位作者 郑琦 陈靖 朱月永 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期489-491,523,583,共5页

目的:通过比较三种免疫性肝损伤模型小鼠NKT细胞功能改变情况,寻找一种在病理生理机制上更接近临床特点的免疫性肝损伤动物模型。方法:40只小鼠随机分为空白对照组、Con A模型组、α-Galcer模型组、LPS/D-Gal N模型组,每组10只。Con A... 目的:通过比较三种免疫性肝损伤模型小鼠NKT细胞功能改变情况,寻找一种在病理生理机制上更接近临床特点的免疫性肝损伤动物模型。方法:40只小鼠随机分为空白对照组、Con A模型组、α-Galcer模型组、LPS/D-Gal N模型组,每组10只。Con A模型组尾静脉注射ConA溶液(18 mg/kg),α-Galcer模型组腹腔注射α-Galcer溶液(40μg/kg),LPS/D-Gal N模型组腹腔注射LPS溶液(10μg/kg)和D-Gal N溶液(700 mg/kg)。造模完成后8 h,检测小鼠血清转氨酶ALT、AST水平,计算肝指数,采用HE染色法观察肝组织病理改变情况,流式细胞仪分析肝组织NKT细胞含量,Western blot法检测肝组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6蛋白表达情况。结果:与空白对照组比较,各模型组小鼠血清ALT、AST水平均显著升高(P<0.01),肝指数增加(P<0.01或P<0.05),肝组织病理损伤明显,NKT细胞含量显著增加(P<0.01或P<0.05),TNF-α、IFN-γ、IL-6表达均明显上调(P<0.01);各模型组之间比较,α-Galcer模型组血清ALT、AST含量显著低于Con A组(P<0.05),病理损伤也相对较轻,LPS/D-Gal N模型组NKT细胞含量明显低于其余两组(P<0.05)。结论:Con A、α-Galcer和LPS/D-Gal N诱导的免疫性肝损伤模型小鼠NKT细胞明显激活,介导炎症紊乱;其中,以Con A诱导的动物模型肝脏病理损伤及免疫紊乱最为明显,更符合疾病临床特点,可作为免疫性肝损伤的首选模型。 展开更多

关键词 免疫性肝损伤 小鼠 NKT细胞 Con A α-galcer LPS/D-Gal N

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同种异基因小鼠骨髓移植后NK-T细胞激活剂α-GalCer加速免疫和造血重建 被引量：1

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作者 刘景华 周凡 +5 位作者 窦立萍 刘彦琴 王吉刚 白颖 郭步云 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期1542-1547,共6页

造血干细胞移植后的并发症如感染、GVHD及疾病复发等均与免疫重建密切相关。本研究探讨一种特异的NK-T细胞激活剂α-galactosyleramide(α-GalCer)是否有加速移植后免疫和造血重建的作用。供鼠为C57BL/6小鼠,受鼠为BALB/c小鼠。实验组... 造血干细胞移植后的并发症如感染、GVHD及疾病复发等均与免疫重建密切相关。本研究探讨一种特异的NK-T细胞激活剂α-galactosyleramide(α-GalCer)是否有加速移植后免疫和造血重建的作用。供鼠为C57BL/6小鼠,受鼠为BALB/c小鼠。实验组在骨髓移植后立即腹腔注射α-GalCer,对照组在骨髓移植后立即腹腔注射DMSO。移植后观察小鼠体重、体位、活动性、毛发、腹泻及生存期;于第2、7、14、27、70天检测供者细胞嵌合体、脾单个核细胞数及CD3+、CD4+、CD8+、B220+、CD11c+、CD40+、CD86+、CD80+细胞的相对计数,并每周检测外周血白细胞及血红蛋白。结果表明:在移植后早期第2天,用药组脾脏单个核细胞计数及CD3+细胞、CD4+细胞比例均较对照组高,此时检测供者细胞嵌合体两组均完全为受者型,之后逐渐转变为供者型,在移植后第7-14天用药组供者细胞嵌合体较对照组明显增高。在移植后第27天,两组均完全为供者型,此后至第70天用药组脾脏单个核细胞计数及CD3+、CD4+、CD8+、B220+、CD40+、CD86+细胞比例均明显高于对照组,同时用药组造血重建较对照组加速。结论:同种异基因小鼠骨髓移植后α-GalCer的应用加速免疫和造血重建。 展开更多

关键词 免疫重建 造血重建 骨髓移植 NK-T细胞激活剂 α-galcer

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α-GalCer改变供者T细胞迁移减轻急性移植物抗宿主病

3

作者 刘景华 周凡 +5 位作者 刘洋 张晓琳 李敏燕 刘彦琴 王吉刚 白颖 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期843-847,共5页

目的:本研究探讨NKT细胞激活剂α-Galactosyleramide(α-GalCer)减轻急性移植物抗宿主病的新机制。方法:建立同种异基因小鼠骨髓移植aGVHD模型,移植后实验组及对照组小鼠分别腹腔注射α-GalCer及其溶剂DMSO,从生存期、aGVHD临床评分及... 目的:本研究探讨NKT细胞激活剂α-Galactosyleramide(α-GalCer)减轻急性移植物抗宿主病的新机制。方法:建立同种异基因小鼠骨髓移植aGVHD模型,移植后实验组及对照组小鼠分别腹腔注射α-GalCer及其溶剂DMSO,从生存期、aGVHD临床评分及病理改变来评估两组小鼠aGVHD严重程度的不同。并通过体外迁移及体内迁移检测分析α-GalCer减轻aGVHD的机制。结果:α-GalCer降低同种异基因小鼠骨髓移植后aGVHD死亡率和临床评分,并减轻脏器aGVHD病理改变;α-GalCer通过改变供者T细胞的迁移—T细胞聚集于外周淋巴结,减少在脾脏、胸腺、外周血的潴留而减轻aGVHD。结论:同种异基因小鼠骨髓移植后α-GalCer通过改变供者T细胞迁移而减轻aGVHD。 展开更多

关键词 α-galcer 急性移植物抗宿主病 骨髓移植 T细胞 迁移

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CD4^+CD25^+调节性T细胞在α-GalCer预防T1D中的作用机制探讨

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作者 李卫鹏 袁超 +1 位作者 陶新全 王福庆 《放射免疫学杂志》 CAS 2009年第5期513-516,共4页

目的:研究CD4+CD25+调节性T细胞在α-GalCer预防NOD小鼠T1D中的作用机制。方法:流式细胞仪分析反复注射α-GalCer的NOD小鼠胰腺引流淋巴结(PLN)CD4+CD25+T细胞频率,CD4+CD25+T细胞中FoxP3+细胞的比例,CD4+CD25+FoxP3+T细胞的FoxP3平均... 目的:研究CD4+CD25+调节性T细胞在α-GalCer预防NOD小鼠T1D中的作用机制。方法:流式细胞仪分析反复注射α-GalCer的NOD小鼠胰腺引流淋巴结(PLN)CD4+CD25+T细胞频率,CD4+CD25+T细胞中FoxP3+细胞的比例,CD4+CD25+FoxP3+T细胞的FoxP3平均荧光强度(MFI);检测CD4+CD25+调节性T细胞的抑制功能。用Anti-CD25阻断CD4+CD25+调节性T细胞的功能。结果:α-GalCer处理过的小鼠的CD4+CD25+T细胞中FoxP3+细胞的比例增加,CD4+CD25+FoxP3+T细胞的FoxP3平均荧光强度(MFI)增强,CD4+CD25+Treg细胞的抑制功能增强。采用CD4+CD25+调节性T细胞功能阻断剂后,α-GalCer不能预防T1D的发生。结论:CD4+CD25+调节性T细胞在α-GalCer预防NOD小鼠T1D中数量增加、功能增强,且是必需的。 展开更多

关键词 CD4+CD25+调节性T细胞 平均荧光强度 转录因子FOXP3 环磷酰胺 α-galcer

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α-Galcer对小鼠NKT细胞超微结构的影响 被引量：3

5

作者 郭蓉姣 黄秀艳 +1 位作者 梁兆端 曾耀英 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期311-314,共4页

本实验观察在α-半乳糖神经鞘胺醇（α-Galcer）诱导下，小鼠NKT细胞超微结构的改变．分离小鼠脾脏单个核细胞，MTT法观察细胞对α-Galcer的药物敏感性，流式细胞术分选活化和未活化的NKT细胞，并用透射电镜观察NKT细胞超微结构．研究... 本实验观察在α-半乳糖神经鞘胺醇（α-Galcer）诱导下，小鼠NKT细胞超微结构的改变．分离小鼠脾脏单个核细胞，MTT法观察细胞对α-Galcer的药物敏感性，流式细胞术分选活化和未活化的NKT细胞，并用透射电镜观察NKT细胞超微结构．研究发现在24h，50～100ng／mL的α-Galcer作用下，实验组NKT细胞的增殖活性显著高于对照组（P〈0．05）．流式细胞术结果显示实验组活化NKT细胞百分率明显高于对照组（P〈0．05）．电子显微镜观察显示，活化的NKT细胞呈典型细胞活化改变，凋亡的NKT细胞，核固缩，致密形成新月小体，核膜破裂，凋亡小体形成．说明α-Galeer可促使小鼠NKT细胞活化，且活化的NKT细胞产生大量分泌小泡． 展开更多

关键词 NKT细胞 α-galcer 流式细胞术 超微结构

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腹腔注射α-GalCer对非酒精性脂肪性肝病的影响

6

作者 梁蕊 高翔 +3 位作者 滕景芳 王建国 程树杰 孟明 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2021年第6期672-681,共10页

探讨了腹腔注射α-GalCer对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响,为以iNKT细胞为靶点的NAFLD免疫学防治奠定基础.利用高脂饲料或蛋氨酸/胆碱缺乏饲料分别喂养C57BL/6J小鼠,建立非酒精性脂肪肝(NAFL)模型和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型.全... 探讨了腹腔注射α-GalCer对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响,为以iNKT细胞为靶点的NAFLD免疫学防治奠定基础.利用高脂饲料或蛋氨酸/胆碱缺乏饲料分别喂养C57BL/6J小鼠,建立非酒精性脂肪肝(NAFL)模型和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型.全自动生化分析仪分析小鼠外周血中TCH、TG、HDL、LDL、ALT及AST水平;H&E染色观察肝脏病理变化;流式细胞术检测肝脏iNKT、iNKT1、iNKT2细胞频率.与对照组相比,NAFL小鼠体质量升高,血清TCH、HDL、LDL及ALT水平升高,肝脏脂肪沉积增加;而NASH小鼠体质量降低,血清TCH、TG及LDL水平降低,肝脏脂肪沉积增加并伴有炎细胞浸润.腹腔注射α-GalCer后,NAFL小鼠血清TCH、HDL及LDL水平降低,肝脏脂肪沉积减少,肝脏iNKT2亚群比例增加;NASH小鼠血清ALT和AST水平升高,肝脏脂肪沉积减少,炎细胞浸润增加,肝脏iNKT1、iNKT2亚群比例增加,其中以iNKT1亚群增加为主.腹腔注射α-GalCer可以改善NAFL和NASH小鼠肝脏脂肪沉积;小鼠NAFLD发病不同阶段(NAFL或NASH)肝脏局部微环境的改变可能影响α-GalCer对肝脏iNKT细胞不同亚群的激活,为进一步研究NAFLD的发病机制及免疫学治疗策略提供了有价值的实验数据. 展开更多

关键词 非酒精性脂肪性肝病 非酒精性脂肪肝 非酒精性脂肪性肝炎 iNKT α-galcer

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α-Galcer尾根皮下注射对小鼠体内不同器官中iNKT细胞频率及亚群的影响 被引量：1

7

作者 王园园 叶闽 +4 位作者 张静雯 崔卓 李子琦 刘慧芳 孟明 《医学研究与教育》 CAS 2018年第2期17-25,共9页

目的探究单次和多次尾根部皮下注射α-Galcer对小鼠胸腺、脾脏和肝脏中恒定自然杀伤T细胞(invariant nature killer T cell,i NKT)频率和亚群的影响。方法 DBA/1小鼠随机分为三组:健康对照组(尾根部皮下注射0.3 m L PBS溶液)、单次注射... 目的探究单次和多次尾根部皮下注射α-Galcer对小鼠胸腺、脾脏和肝脏中恒定自然杀伤T细胞(invariant nature killer T cell,i NKT)频率和亚群的影响。方法 DBA/1小鼠随机分为三组:健康对照组(尾根部皮下注射0.3 m L PBS溶液)、单次注射α-Galcer组(尾根部皮下注射,2μg/只)、多次注射α-Galcer组(尾根部皮下注射,3次,每次间隔48 h,2μg/只)。FACS检测i NKT细胞频率及亚群。结果 (1)与健康对照组相比,单次及多次尾根部皮下注射α-Galcer后,小鼠胸腺、脾脏、肝脏中i NKT频率均显著提高(P<0.05)单次注射α-Galcer组小鼠胸腺和脾脏中的i NKT频率峰值显著高于多次注射α-Galcer组i NKT频率最大值(P<0.05)。(2)胸腺:α-Galcer组i NKT1亚群的频率在第2天已明显高于健康对照组(P<0.05),至第4天时达最大值;i NKT2亚群的频率始终显著高于健康对照组(P<0.05),第8天达最大值,之后下降。脾脏:α-Galcer组i NKT1亚群的频率以健康对照值为轴,呈现先抑后扬的的趋势,第4天降至低谷,第6天升至高峰;相反,i NKT2亚群的频率,始终高于健康对照组,在第4天上升达峰值,随后迅速下降,在第6天达最小值。肝脏:α-Galcer组i NKT1亚群的频率始终低于健康对照组,呈现逐渐增高的趋势;i NKT2亚群的频率围绕健康对照值呈现小幅升降,在第6天下降到最小值,又在第8天上升至最大值(10.13%±0.03%)。结论单次及多次尾根部皮下注射α-Galcer均能诱导体内i NKT细胞增殖,但单次注射诱导的i NKT频率更高;单次尾根部皮下注射α-Galcer可诱导i NKT亚群的变化,且各器官中的亚群变化趋势有较大差异。 展开更多

关键词 α-galcer iNKT细胞亚群 尾根部皮下注射

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NKT细胞激活剂α-Galcer对小鼠肺肿瘤细胞生长的影响 被引量：1

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作者 田雨 王娜 +3 位作者 宋天姣 曹倩文 王姗 郑全辉 《华北理工大学学报（医学版）》 2016年第4期323-325,共3页

①目的探讨自然杀伤性T细胞(NKT)特异激活剂α-半乳糖苷神经酰胺(α-Galcer)对小鼠肺肿瘤细胞生长的影响。②方法体外培养小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),经腋部皮下注射雌性C57BL/6小鼠制备肺肿瘤模型。将LLC接种小鼠进一步分为实验组和对照... ①目的探讨自然杀伤性T细胞(NKT)特异激活剂α-半乳糖苷神经酰胺(α-Galcer)对小鼠肺肿瘤细胞生长的影响。②方法体外培养小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),经腋部皮下注射雌性C57BL/6小鼠制备肺肿瘤模型。将LLC接种小鼠进一步分为实验组和对照组。实验组小鼠腹腔注射α-Galcer,对照组小鼠注射等量溶剂二甲基亚砜(DMSO)。LLC接种两周后处死小鼠,观察肿瘤生长情况及流式细胞仪检测小鼠外周NKT细胞变化。③结果 LLC细胞接种两周后,实验组小鼠肺肿瘤重量明显小于对照组,而实验组小鼠外周NKT细胞数量显著高于对照组。④结论α-Galcer通过促进NKT细胞数量的增加,抑制小鼠肺肿瘤的生长。 展开更多

关键词 NKT细胞 α-半乳糖苷神经酰胺 肺肿瘤细胞

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α-Galcer干预自身免疫疾病研究新进展 被引量：1

9

作者 郭丽萍 王元 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2006年第12期757-759,共3页

自身免疫疾病是机体针对自身抗原发生免疫反应而导致的多系统疾病，发病原因可能与调节性T细胞有关。尽管人们对于调节性T细胞的免疫调节机制有所了解，但是大多数调节性T细胞亚型的抗原特异性仍不清楚，因此很难利用这些细胞的免疫调... 自身免疫疾病是机体针对自身抗原发生免疫反应而导致的多系统疾病，发病原因可能与调节性T细胞有关。尽管人们对于调节性T细胞的免疫调节机制有所了解，但是大多数调节性T细胞亚型的抗原特异性仍不清楚，因此很难利用这些细胞的免疫调节活性达到治疗目的。 展开更多

关键词 自身免疫疾病 α-galcer 调节性T细胞 免疫调节机制 免疫调节活性 多系统疾病 抗原特异性 T细胞亚型

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CD24调节iNKT细胞介导的小鼠急性肝损伤的实验研究

10

作者 汪河 海蕾 张学军 《天津医科大学学报》 2023年第4期391-397,共7页

目的:探讨小鼠急性肝损伤中CD24分子对不变的自然杀伤T(iNKT)细胞的调控作用。方法:小鼠腹腔注射α-半乳糖甘油酰胺(α-GalCer)特异活化iNKT细胞,诱导小鼠急性肝损伤。HE染色观察小鼠肝脏炎症损伤程度,血清学方法检测转氨酶变化,免疫荧... 目的:探讨小鼠急性肝损伤中CD24分子对不变的自然杀伤T(iNKT)细胞的调控作用。方法:小鼠腹腔注射α-半乳糖甘油酰胺(α-GalCer)特异活化iNKT细胞,诱导小鼠急性肝损伤。HE染色观察小鼠肝脏炎症损伤程度,血清学方法检测转氨酶变化,免疫荧光染色观察肝内iNKT细胞的数量变化,流式细胞术检测肝内总iNKT细胞、iNKT细胞亚型数量、比例及iNKT细胞活性的变化,定量-PCR(Q-PCR)检测肝组织中iNKT细胞相关细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的表达。结果:注射α-GalCer后,CD24基因敲除(CD24-/-)小鼠肝脏炎性细胞浸润比野生型(WT)小鼠少(F=10.10,P<0.01),血清谷丙转氨酶(ALT)水平比WT小鼠低(F=10.11,P<0.01)。免疫荧光染色结果表明,正常生理状态及α-GalCer模型中,CD24-/-小鼠肝内iNKT细胞数量显著低于WT小鼠(F=13.27,P<0.01)。流式细胞术分析发现,正常生理状态下,CD24-/-小鼠肝内总iNKT细胞和其亚型的数量显著低于WT小鼠(F=6.841,P<0.05);注射α-GalCer后,小鼠肝内总iNKT细胞数量显著增多(F=33.01,P<0.001);进一步分析iNKT细胞亚型发现,NKT1、NKT2细胞数明显增多(F=37.12、40.55,均P<0.05),但CD24-/-小鼠仍低于WT小鼠(F=40.07、12.53,均P<0.05),NKT17细胞无变化(P>0.05)。Q-PCR结果表明,注射α-GalCer后,CD24-/-小鼠肝组织中IFN-γ和IL-4 mRNA表达水平明显低于WT小鼠(F=14.34、19.77,均P<0.01),流式细胞术检测胞内细胞因子结果表明,α-GalCer模型中,CD24-/-小鼠iNKT细胞分泌的IFN-γ和IL-4明显低于WT小鼠(F=25.600、5.574,均P<0.05)。结论:肝内iNKT细胞与小鼠急性肝损伤密切相关,CD24分子可以通过调节肝内iNKT细胞的数量和活性影响急性肝损伤进程。 展开更多

关键词 CD24分子 α-galcer INKT细胞 肝损伤

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脐血与外周血NKT细胞的体外扩增及其表型比较 被引量：2

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作者 刘嬿 范华骅 +5 位作者 阮鸣 高跞 聂晓绚 杨懿铭 陆华中 高峰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期128-132,共5页

为了建立体外有效扩增脐血与外周血天然杀伤T细胞(NKT细胞)的方法并研究其表型的差异,分别采用单加IL-2及同时加IL-2和α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)的方法,从人脐血单个核细胞(UCB-MNC)和人外周血单个核细胞(PB-MNC)中扩增NKT细胞;用... 为了建立体外有效扩增脐血与外周血天然杀伤T细胞(NKT细胞)的方法并研究其表型的差异,分别采用单加IL-2及同时加IL-2和α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)的方法,从人脐血单个核细胞(UCB-MNC)和人外周血单个核细胞(PB-MNC)中扩增NKT细胞;用流式细胞检测技术测定NKT细胞(TCR Vα24+TCR Vβ11+)的比例及其它表型特征。结果显示:UCB-MNC在第7天时,其TCR Vαβ+NKT细胞的扩增量占淋巴细胞的(24.48±4·19)%,是原来的(8.74±4.37)×102倍(P<0.01),而且大多不表达NK1.1(CD161);TCR Vβ11+较TCRVα24+高表达;第14天时,PB-MNC中的TCR Vαβ+NKT细胞扩增量占淋巴细胞的(11.1±3.61)%,是原来的(3·72±2·01)×102倍(P<0.01),且NK1.1高表达,TCR Vβ11+与TCR Vα24+表达率基本一致。结论:α-Galcer对NKT细胞有特异的扩增功能,且脐血NKT的扩增效率较外周血高。以表型划分,脐血中的NKT细胞多为NK1.1-,而外周血多为NK1.1+,是一种新的NKT细胞亚型。 展开更多

关键词 脐血 外周血 NKT细胞 α-galcer 细胞表型

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免疫调节剂CH2b对葡萄糖-6-磷酸异构酶混合肽段诱导的类风湿性关节炎小鼠的影响 被引量：2

12

作者 刘嘉琳 张雪娇 +3 位作者 杨飞 娄永富 孟明 陈冬志 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1094-1098,共5页

目的:探究前期合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂CH2b对葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose-6-phosphate isomerase,GPI)混合肽段诱导的类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)小鼠发病的影响。方法:h GPI325-339、h GPI469-483多肽片段与完... 目的:探究前期合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂CH2b对葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose-6-phosphate isomerase,GPI)混合肽段诱导的类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)小鼠发病的影响。方法:h GPI325-339、h GPI469-483多肽片段与完全弗氏佐剂充分乳化后,于DBA/1小鼠尾根部多点皮下注射,并用百日咳毒素加强免疫。然后分别用α-半乳糖神经酰胺(α-Gal Cer)和CH2b对模型小鼠进行干预,监测各组小鼠体重变化和足踝关节肿胀变化情况,关节组织苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察炎细胞浸润情况,流式细胞技术(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)检测全血中i NKT细胞频率变化,微量样本多指标流式蛋白定量技术(Cytometric bead array,CBA)检测血清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-4、IFN-γ水平。结果:与GPI混合肽段诱导的模型组相比,α-Gal Cer和免疫调节剂CH2b均可显著改善模型小鼠的体重增长缓慢、关节肿胀情况(P<0.05);炎性细胞浸润减少;且二者均可以显著提高RA小鼠体内i NKT细胞的频率,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);α-Gal Cer、CH2b组可以降低模型小鼠炎症高峰期TNF-α、IL-6、IFN-γ水平,两组结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论:免疫调节剂CH2b通过激活i NKT细胞影响炎性细胞因子的分泌,缓解GPI混合肽段诱导的关节炎。 展开更多

关键词 免疫调节剂CH2b α-galcer 葡萄糖-6-磷酸异构酶 INKT细胞

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CD1d四聚体检测NKT细胞 被引量：2

13

作者 刘景华 窦立萍 +1 位作者 王莉莉 于力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期82-83,共2页

目的:建立一种检测小鼠NKT细胞的方法。方法:首先将α-GalCer负载于空的CD1d四聚体上。将α-GalCer溶于1000mL/L的DMSO中,配成浓度为0.1g/L,之后震荡α-GalCer液,37℃,12h,用之前超声水浴37℃,10min,取12mol/L的上述α-GalCer液加入到1m... 目的:建立一种检测小鼠NKT细胞的方法。方法:首先将α-GalCer负载于空的CD1d四聚体上。将α-GalCer溶于1000mL/L的DMSO中,配成浓度为0.1g/L,之后震荡α-GalCer液,37℃,12h,用之前超声水浴37℃,10min,取12mol/L的上述α-GalCer液加入到1mol/L的四聚体溶液中,将上述二者的混合液37℃,避光,孵育24～48h。然后应用流式细胞术(FCM)检测正常的和腹腔注射α-GalCer5μg3d后的小鼠的脾脏及骨髓中共表达α-GalCer/CD1d四聚体及CD3的NKT细胞。结果:在正常小鼠脾脏及骨髓的淋巴细胞中NKT细胞的比例分别为1.2%和1.6%;腹腔注射α-GalCer5μg3d后小鼠脾脏的淋巴细胞中NKT细胞有轻度的增加,比例为2%和2.7%。结论:CD1d四聚体是检测小鼠NKT细胞的有效工具。 展开更多

关键词 CD1d四聚体 NKT细胞 α-galcer

原文传递

不同来源的树突状细胞对扩增脐血NKT的影响 被引量：1

14

作者 刘嬿 范华骅 +4 位作者 阮鸣 高跞 杨懿铭 聂晓绚 高峰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期399-401,共3页

目的比较不同来源的DC对扩增脐血NKT的影响。方法分别以外周血和脐血为来源诱生DC,在-αGalcer和IL-2的联合刺激下,对脐血中的NKT进行扩增。用流式细胞检测技术分析不同来源DC的表型区别,并对它们扩增的NKT细胞(TCR Vα24+TCR Vβ11+)... 目的比较不同来源的DC对扩增脐血NKT的影响。方法分别以外周血和脐血为来源诱生DC,在-αGalcer和IL-2的联合刺激下,对脐血中的NKT进行扩增。用流式细胞检测技术分析不同来源DC的表型区别,并对它们扩增的NKT细胞(TCR Vα24+TCR Vβ11+)进行鉴定。结果在14 d的培养时间里,由PB-DC参与的TCR Vαβ+NKT细胞的扩增量占淋巴细胞的(20.8±5.25)%,是原来的(8.22±2.75)×102倍;而由CB-DC参与的TCR Vαβ+NKT为(11.26±5.63)%,是原来的(4.66±2.12)×102倍;未加DC组,单用-αGalcer和IL-2,NKT的最终扩增量也达到了(10.84±4.00)%。3组较原来都呈现显著性扩增(P<0.01),其中以PB-DC参与的NKT扩增组效率最高(P<0.001)。经流式检测,PB来源的DC,其表面CD1d表达明显高于CB来源的DC(P<0.001),而共刺激分子则较脐血DC低。结论-αGalcer对NKT细胞有特异地扩增功能;NKT的扩增效率与DC细胞之间有着密切的关联,以外周血为来源的DC,其协同刺激脐带血NKT的扩增功能较脐血DC强。 展开更多

关键词 脐带血 外周血 DC细胞 NKT细胞 α-galcer

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NKT细胞亚群 被引量：2

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作者 张勇 王福庆 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期81-84,共4页

经典的NKT细胞是一类表面既具有T细胞又具有NK细胞标志的T细胞亚群.与普通T细胞相比,1.NKT细胞不受经典MHC I类分子限制,而受非经典MHC I类分子、CD1d分子限制,不识别蛋白质抗原,而是识别脂类抗原;2.NKT细胞的TCR库非常局限,一个物种的... 经典的NKT细胞是一类表面既具有T细胞又具有NK细胞标志的T细胞亚群.与普通T细胞相比,1.NKT细胞不受经典MHC I类分子限制,而受非经典MHC I类分子、CD1d分子限制,不识别蛋白质抗原,而是识别脂类抗原;2.NKT细胞的TCR库非常局限,一个物种的NKT细胞只有一种TCRα链和3-4种TCRβ链;3.受刺激后,NKT细胞能迅速产生大量的细胞因子,如IFN-γ和/或IL-4[1,2]. 展开更多

关键词 NKT细胞 T细胞亚群 分类 CDld-α-galcer四聚体技术 分离 鉴定 性质 分布 功能

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真核表达hCD1d二聚体的纯化及其对iNKT细胞的刺激效应

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作者 杨敬 吕燕霞 +2 位作者 翁秀芳 梁智辉 吴雄文 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期21-26,66,共7页

目的建立真核表达的人CD1d(hCD1d)二聚体的纯化方法,并制备人工抗原提呈细胞,研究其对iNKT细胞的刺激效应。方法提取pFastBacTMDual+[β2m+CD1d/IgG1-Fc]昆虫杆状病毒质粒并转染至sf9细胞中,收集病毒感染上清,通过ELISA法鉴定融合蛋白中... 目的建立真核表达的人CD1d(hCD1d)二聚体的纯化方法,并制备人工抗原提呈细胞,研究其对iNKT细胞的刺激效应。方法提取pFastBacTMDual+[β2m+CD1d/IgG1-Fc]昆虫杆状病毒质粒并转染至sf9细胞中,收集病毒感染上清,通过ELISA法鉴定融合蛋白中人IgG-Fc、人CD1d和人β2m等组分并测定hCD1d二聚体浓度。探索保持hCD1d二聚体完整构象的亲和层析条件,对hCD1d二聚体进行纯化和浓缩。应用加载α-GalCer的hCD1d二聚体制备人工抗原提呈细胞刺激健康个体外周血单个核细胞(PBMC),检测Th1、Th2、Th17细胞因子分泌水平与iNKT细胞的扩增效率。结果收集的第4代病毒感染上清中目的蛋白表达量较高。抗Ig-Fc抗体ELISA、抗CD1d抗体与抗β2m抗体双抗夹心ELISA检测显示sf9细胞表达的hCD1d二聚体构象正确,两种方法检测的蛋白浓度分别为(1.05±0.20)μg/mL和(0.85±0.01)μg/mL。亲和层析纯化结果显示用pH2.5的0.1 mol/L柠檬酸可较好地实现hCD1d二聚体有效纯化。健康个体iNKT细胞经人工抗原提呈细胞刺激3 d后主要产生Th1型细胞因子,上清中IFN-γ、TNF-α含量分别为(1876.26±96.73)pg/mL和(1186.25±98.63)pg/mL,明显高于对照组(79.98±18.52)pg/mL和(29.96±4.43)pg/mL,差异具有统计学意义(均P<0.01),其余Th2型(IL-4)、Treg型(IL-10)和Th17型(IL-17)细胞因子未见明显升高,差异均无统计学意义(均P>0.05),与iNKT细胞接收刺激后分泌细胞因子谱基本一致。健康个体PBMC接受刺激后,iNKT细胞迅速扩增,刺激第7天iNKT细胞占PBMC(4.17±0.76)%,而未包被hCD1d二聚体的微球对照组iNKT细胞占PBMC的比例仅为(0.41±0.09)%。这些结果说明包被有hCD1d二聚体的人工抗原提呈细胞可特异性地刺激iNKT细胞分泌Th1型细胞因子并有效扩增。结论成功制备hCD1d二聚体,并建立基于人工抗原提呈细胞的iNKT细胞有效的刺激与扩增体系,为后续对iNKT细胞深入研究打下了基础。 展开更多

关键词 hCD1d二聚体 亲和层析 α-galcer INKT细胞 细胞因子

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NKT细胞与移植免疫

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作者 陈杰（综述） 陈勇（综述） 龚建平（审校） 《国际移植与血液净化杂志》 2007年第1期41-44,共4页

NKT细胞是一种特殊类型的T淋巴细胞，同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记，具有较为恒定的TCRα和独特的CDld限制性，通过调节Th1和Th2细胞发育参与免疫调节，在诱导免疫耐受过程中起重要作用。

关键词 NKT细胞 α-galcer CDld限制性 免疫耐受

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NKT细胞与移植免疫

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作者 陈杰 陈勇 龚建平 《国际移植与血液净化杂志》 2006年第6期40-43,共4页

诱导移植器官的特异性免疫耐受是克服免疫排斥的主要发展方向,也是当前器官移植领域研究的热点问题。NKT细胞是一种特殊类型的T淋巴细胞,同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记,具有较为恒定的TCRα和独特的CDld限制性,通过调节Th1和Th2细胞发... 诱导移植器官的特异性免疫耐受是克服免疫排斥的主要发展方向,也是当前器官移植领域研究的热点问题。NKT细胞是一种特殊类型的T淋巴细胞,同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记,具有较为恒定的TCRα和独特的CDld限制性,通过调节Th1和Th2细胞发育参与免疫调节,在诱导免疫耐受的过程中起重要作用。 展开更多

关键词 NKT细胞 α-galcer CDld限制性 免疫耐受

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小鼠NKT细胞体外扩增的初步研究 被引量：1

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作者 郭蓉姣 黄秀艳 +1 位作者 梁兆端 曾耀英 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第6期541-543,共3页

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术... 目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性。结果脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Gal-cer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强。在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC33.8%(P<0.05)。结论在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%。在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%。 展开更多

关键词 NKT细胞 α-galcer IL-2

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结核病患者外周血iNKT细胞数量与功能缺陷 被引量：1

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作者 冯显红 谭晓晟 +1 位作者 周平 翁秀芳 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期533-538,567,共7页

目的通过对比分析结核病患者与健康个体外周血中恒定自然杀伤T细胞(invariant nature killer T cells,iNKT)的比例、表型以及功能,认识iNKT细胞在结核病患者体内的功能状态,为探讨基于iNKT细胞的干预措施在结核病防治中的应用奠定基础... 目的通过对比分析结核病患者与健康个体外周血中恒定自然杀伤T细胞(invariant nature killer T cells,iNKT)的比例、表型以及功能,认识iNKT细胞在结核病患者体内的功能状态,为探讨基于iNKT细胞的干预措施在结核病防治中的应用奠定基础。方法收集武汉市新洲区人民医院收治的21例结核病患者及14例健康体检者外周血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。对PBMC进行细胞表面染色,用流式细胞仪分别测定iNKT细胞的比例和表面分子CD69、CD62L、CD122以及CD161的表达;用丙二醇甲醚醋酸酯/离子霉素(phorbol-12-myristate-13-acetate/Ionomycin,PMA/ION)刺激PBMC,通过胞内细胞因子染色,测定iNKT细胞潜在的合成分泌IFN-γ和IL-4的能力;并用α-半乳糖神经酰胺(α-Galactosylceramide,α-GalCer)刺激培养1周,测定结核病患者iNKT细胞的反应性及扩增效率。结果相对于健康个体,结核病患者外周血中的iNKT细胞百分比明显降低;结核病患者iNKT细胞的CD69表达水平显著高于健康个体,而其CD62L、CD122及CD161的表达量与健康个体无明显差异;结核病患者和健康个体的iNKT细胞在PMA/ION刺激后分泌IFN-γ和IL-4的能力无明显差异;然而结核病患者的iNKT细胞对α-GalCer的反应能力明显减弱,表现为被α-GalCer刺激后的扩增能力低于健康个体。结论结核病患者体内iNKT细胞的数量与功能异常,提示恢复iNKT细胞数量与功能是促进iNKT细胞抗结核效应的关键因素。 展开更多

关键词 结核病 INKT细胞 表型 功能 α-galcer

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