目的体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1(specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X rec...目的体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1(specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的最佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组。结果川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P<0.05)。川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA。对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P<0.05)。结论川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达。展开更多
目的研究沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)与泡沫细胞移出动脉粥样硬化斑块相关调控通路肝X受体(liver X receptor,LXR)-趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)和促炎症信号核因子-κB(nuclear factor kapp...目的研究沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)与泡沫细胞移出动脉粥样硬化斑块相关调控通路肝X受体(liver X receptor,LXR)-趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)和促炎症信号核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的相关性。方法体外培养人单核细胞株U937细胞,构建泡沫细胞模型;分别用SIRT1激动剂SRT1720和RNA干扰等方法使SIRT1高表达或抑制其表达,观察SIRT1和其下游靶分子LXR、CCR7以及促炎因子NF-κB、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达变化。结果在泡沫细胞模型中,SRT1720使SIRT1蛋白表达水平升高,LXR和其靶分子CCR7蛋白水平无显著变化,而NF-κB以及其靶分子TNF-α蛋白表达水平显著下降。在加入SRT1720的基础上再用RNA干扰抑制SIRT1的表达,结果表明RNA干扰使SIRT1的表达水平显著下降,LXR和其靶分子CCR7表达也随之下降;与此同时,NF-κB及其下游靶基因TNF-α表达水平显著升高。结论在泡沫细胞中SIRT1可能是LXR-CCR7以及NF-κB信号通路的上游,并且有可能通过上调LXR-CCR7信号通路,抑制NF-κB炎症信号来参与调节泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块中移出。展开更多
文摘目的体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1(specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的最佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组。结果川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P<0.05)。川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA。对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P<0.05)。结论川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达。
