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λRed技术构建肺炎克雷伯氏菌sRNA-sgrS基因缺失突变株 被引量：2
1
作者 王雪萌 修宝林 +1 位作者 吕雨泽 葛菁萍 《黑龙江大学工程学报》 2020年第4期81-88,共8页
肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)以葡萄糖为底物进行发酵生产2,3-丁二醇(2,3-butanetriol,2,3-BD)的过程中,糖磷酸胁迫非编码小RNA(sugar-phosphate stress sRNA,sRNA-sgrS)通过调控菌体内葡萄糖浓度来解除菌体的应激效应。通过... 肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)以葡萄糖为底物进行发酵生产2,3-丁二醇(2,3-butanetriol,2,3-BD)的过程中,糖磷酸胁迫非编码小RNA(sugar-phosphate stress sRNA,sRNA-sgrS)通过调控菌体内葡萄糖浓度来解除菌体的应激效应。通过λRed同源重组技术,将构建的同源重组片段sgrS A1-EGFP-sgrS A2,经过酶切、纯化后,通过电转化将重组片段转入到含有pKD46质粒的野生型菌株K.pneumoniae HD79及突变型菌株K.pneumoniae HD79-02(△ldh,△ack)的感受态细胞中。经过荧光显微镜观察筛选阳性转化子,经过PCR验证K.pneumoniae HD79及K.pneumoniae HD79-02 sRNA-sgrS基因缺失重组菌株构建成功。利用λRed技术构建肺炎克雷伯氏菌sRNA-sgrS基因缺失突变株,可为后续探究菌体内外葡萄糖浓度对菌株产量2,3-BD的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 sRNA-sgrS基因 λred同源重组技术 基因突变 肺炎克雷伯氏菌
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克雷伯氏菌产1,3-丙二醇ldhA基因缺失菌株的构建 被引量：7
2
作者 陈利飞 李猛 +1 位作者 马春玲 杨建楼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期121-126,共6页
克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)甘油歧化发酵生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,乳酸是氧化途径最主要的副产物,乳酸的产生和积累,不仅限制了菌体本身的生长,而且严重影响了1,3-丙二醇的转化率。利用λRed重组技术对Klebsiella pneumo... 克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)甘油歧化发酵生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,乳酸是氧化途径最主要的副产物,乳酸的产生和积累,不仅限制了菌体本身的生长,而且严重影响了1,3-丙二醇的转化率。利用λRed重组技术对Klebsiella pneumonia中的酶乳酸脱氢酶基因(ldhA)进行改造。在λRed重组系统作用下,将带有300 bp的线性同源片段ldhA1-Cm-ldh A2与基因组DNA的同源重组,经过抗性筛选和PCR鉴定最终获得了ldhA基因缺失菌株K.pneumonia2-1ΔldhA。经过24 h发酵可知,乳酸最大产出浓度由原来的10.16 g/L降为0.49 g/L,1,3-PD由原来的78.83 g/L增长为85.76 g/L,甘油转化率由60.64%增长到65.97%,提高了5.33%。 展开更多
关键词 克雷伯氏菌 ldhA基因 λred同源重组 1 3-丙二醇
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克雷伯氏菌产1,3-丙二醇aldH基因缺失菌株的构建 被引量：2
3
作者 杨建楼 郑海杰 +2 位作者 马春玲 王瑞明 陈利飞 《中国酿造》 CAS 北大核心 2016年第4期56-60,共5页
该研究利用λRed重组技术对克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)中的乙醛脱氢酶(ald H)基因进行敲除,成功构建缺失菌株K.pneumonia2-1Δald H,与原始菌株相比,缺失菌株K.pneumonia2-1Δald H发酵液中乙醇产量由原来的7.24 g/L降为0.47 g/L... 该研究利用λRed重组技术对克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)中的乙醛脱氢酶(ald H)基因进行敲除,成功构建缺失菌株K.pneumonia2-1Δald H,与原始菌株相比,缺失菌株K.pneumonia2-1Δald H发酵液中乙醇产量由原来的7.24 g/L降为0.47 g/L,降低了93.51%;1,3-丙二醇产量由原来的78.83 g/L增长至82.55 g/L,提高了4.72.%;甘油转化率由60.64%增长至63.50%,提高了2.86%。缺失菌株K.pneumonia2-1Δald H 50 L发酵罐小试试验中,1,3-丙二醇的产量为78.13 g/L,乙醇产量为0.50 g/L。 展开更多
关键词 克雷伯氏菌 1 3-丙二醇 aldH基因 λred同源重组
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大肠杆菌BL21(DE3)氨基葡萄糖代谢调控相关基因的敲除及glmS在其中的表达研究 被引量：3
4
作者 涂宇鹏 何京桦 +1 位作者 乐科易 严维耀 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期796-802,共7页
氨基葡萄糖(Glucosamine,GlcN)是一类广泛使用的保健品,对于人类软骨再生及关节炎的临床治疗都具有良好的疗效.为构建以代谢工程为基础的氨基葡萄糖生产菌株,采用λRed同源重组系统将大肠杆菌BL21(DE3)中甘露糖—磷酸转移酶系统操纵子(m... 氨基葡萄糖(Glucosamine,GlcN)是一类广泛使用的保健品,对于人类软骨再生及关节炎的临床治疗都具有良好的疗效.为构建以代谢工程为基础的氨基葡萄糖生产菌株,采用λRed同源重组系统将大肠杆菌BL21(DE3)中甘露糖—磷酸转移酶系统操纵子(manXYZ)和乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)转运和代谢特异性系统操纵子(nagBACD-nagE)进行双剔除.随后构建含新型氨基葡萄糖合成酶基因(glmS)的表达载体pETG,并将它转化该双操纵子剔除菌株.结果表明,改造后的菌株不能以GlcN或GlcNAc作为碳源进行代谢生长.表达GlmS菌株的上清液经Ni-NTA亲和层析纯化,其酶活性达8.63U/mg,表明该菌株已具备发酵生产GlcN的初步特性. 展开更多
关键词 大肠杆菌BL21(DE3) 氨基葡萄糖 λred同源重组 氨基葡萄糖合成酶 代谢工程
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大肠杆菌O157∶H7Ⅲ型分泌系统的缺陷突变株对HeLa细胞黏附能力的影响 被引量：1
5
作者 王玉瑞 廖翔 +3 位作者 周围 戴红梅 宋婷 梁龙 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期795-798,共4页
目的构建O157∶H7 EDL933菌株Ⅲ型分泌系统(T3SS)缺陷突变株ΔescR,感染HeLa细胞后检测其黏附能力。方法通过重叠延伸PCR扩增出中间为卡那霉素抗性基因,两侧为escR基因上下游同源序列的重组线性DNA片段,电击转入含pKD46的EDL933感受态... 目的构建O157∶H7 EDL933菌株Ⅲ型分泌系统(T3SS)缺陷突变株ΔescR,感染HeLa细胞后检测其黏附能力。方法通过重叠延伸PCR扩增出中间为卡那霉素抗性基因,两侧为escR基因上下游同源序列的重组线性DNA片段,电击转入含pKD46的EDL933感受态细胞中,escR基因被kan基因替换而缺失。绘制野生株与ΔescR生长曲线,并利用免疫荧光观察两株细菌对HeLa细胞的黏附能力。结果获得缺陷突变株ΔescR,相较于野生株,该突变株在DMEM(10%FBS)培养基中生长速度以及对HeLa细胞的黏附能力明显下降。结论 T3SS结构蛋白escR基因的缺失破坏了EDL933 T3SS的形成,影响了该菌株黏附能力,其构建为后续研究T3SS奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 0157:H7 Ⅲ型分泌系统 escR基因 HELA细胞 λred同源重组
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