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番鸭呼肠孤病毒σB和σNS基因克隆及序列分析 被引量：5
1
作者 林锋强 胡奇林 +4 位作者 欧阳岁东 陈仕龙 程晓霞 王劭 朱小丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期672-675,共4页
参考GenBank番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,DRV)σB和σNS基因序列设计合成引物,对番鸭呼肠孤病毒MW9710株σB和σNS基因进行RT-PCR扩增,并对PCR产物进行了克隆和测序。结果显示扩增产物分别为1154bp和1113 bp,与预期的目的片... 参考GenBank番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,DRV)σB和σNS基因序列设计合成引物,对番鸭呼肠孤病毒MW9710株σB和σNS基因进行RT-PCR扩增,并对PCR产物进行了克隆和测序。结果显示扩增产物分别为1154bp和1113 bp,与预期的目的片段大小一致。核苷酸序列经BLAST软件分析表明：番鸭呼肠孤病毒MW9710株σB基因与番鸭呼肠孤病毒法国89026株同源性为88．1%；氨基酸同源性为94．0%：σNS基因与法国89026株和89330株同源性分别为93．8%和93．1%；氨基酸同源性为95．9%和95．1%。而σB和σNS基因与禽呼肠孤病毒的同源性约为60%～80%。表明番鸭呼肠孤病毒是不同于禽呼肠孤病毒的独立基因群。 展开更多
关键词 番鸭呼肠孤病毒 σb基因 σNS基因 序列分析
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一株新型鸭呼肠孤病毒的致病性及其σB基因进化情况分析 被引量：2
2
作者 张博 陈立功 +7 位作者 郭康康 孟利佳 崔欢 武华 阴雅洁 张诚 王迎春 董世山 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期83-87,165,共6页
为了研究新型鸭呼肠孤病毒(novel Duck reovirus,NDRV)的致病性及其σB基因进化情况,试验采集河北地区病鸭的病变组织,经处理后接种SPF鸡胚进行病毒分离,鉴定该病毒的血凝特性,采用DNAStar等分子生物学软件对NDRVσB基因进行分析,以Reed... 为了研究新型鸭呼肠孤病毒(novel Duck reovirus,NDRV)的致病性及其σB基因进化情况,试验采集河北地区病鸭的病变组织,经处理后接种SPF鸡胚进行病毒分离,鉴定该病毒的血凝特性,采用DNAStar等分子生物学软件对NDRVσB基因进行分析,以Reed-Muench法计算分离病毒的鸡胚半数致死量(ELD50),并研究该病毒对雏鸭的致病性。结果表明:用处理的第3代尿囊液接种9日龄鸡胚,鸡胚在48小时时开始死亡,死亡高峰集中在60小时,鸡胚主要病变表现为全身出血、水肿和肝脏坏死。分离毒株不能凝集SPF鸡红细胞。PCR扩增得到大小约为1162 bp的目的条带,分离病毒与GenBank中16株参考病毒核苷酸序列同源性为66.2%~99.5%,其中与NDRV Duck/N-DRV-XT18/China/2018参考株的核苷酸序列同源性最高为99.5%。分离病毒对鸡胚的半数致死量为1×10^(-5.67) ELD_(50)/0.2 mL,可致健康雏鸭死亡,剖检可见脾脏组织中散在分布大量坏死灶,坏死灶区域淋巴细胞变性、坏死,组织丧失固有结构;肝脏组织中肝细胞脂肪变性,局灶性肝细胞坏死。说明从河北地区病鸭组织中分离的病毒为NDRV,将其命名为CH-HB株,该病毒具有传播迅速、地域性等特征。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离 鉴定 σb基因 致病性 分析
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禽呼肠孤病毒99G株σB编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 被引量：1
3
作者 张云 郝雪 +1 位作者 耿宏伟 郭东春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期407-411,共5页
采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒（ARV）99G株σB编码基因，序列分析表明，99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90％～99％，而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60％；用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载... 采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒（ARV）99G株σB编码基因，序列分析表明，99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90％～99％，而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60％；用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载体pGEX-6p-1中，构建了重组表达质粒pGEX-σB；鉴定后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导，σB基因在大肠杆菌中得到了高效表达，表达的融合蛋白占总蛋白的41．46％，融合蛋白的分子质量为66ku，主要以包涵体形式存在；Western-blot结果显示，该融合蛋白能与抗ARV阳性血清发生特异性反应，表明重组蛋白具有良好的反应原性，可用于禽呼肠孤病毒病诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σb基因 原核表达
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禽呼肠孤病毒σB和σC蛋白在昆虫细胞中的共表达 被引量：3
4
作者 王盛 谢芝勋 +9 位作者 沈文康 谢丽基 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 邓显文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期1334-1341,共8页
本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒(ARV)σB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达σB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定。根据NCBI数据库中ARVσB和σC基因序列设计引物,将两个基因克隆至pFast-Dual载体,转... 本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒(ARV)σB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达σB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定。根据NCBI数据库中ARVσB和σC基因序列设计引物,将两个基因克隆至pFast-Dual载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭杆粒。通过转染sf9细胞,筛选到含有σB和σC基因的重组病毒。将重组病毒感染sf9细胞,通过优化接毒量和收获时间等参数,确定最佳表达条件,在sf9细胞中高效共表达σB和σC蛋白。Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测结果表明,成功在sf9细胞中共表达了ARVσB和σC蛋白,并具有很好的生物学活性。本试验结果为开发鉴别诊断试剂以及ARV颗粒疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒(ARV) σb基因 σC基因 杆状病毒表达系统 SF9细胞
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番鸭呼肠孤病毒S基因组的克隆与序列分析 被引量：7
5
作者 耿宏伟 郭东春 +2 位作者 刘明 胡奇林 张云 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期305-311,共7页
对番鸭呼肠孤病毒S12和S14毒株S基因组（S1-4）中σA、σB、σNS和σC蛋白基因进行了克隆和测序。序列分析表明：鸭呼肠孤病毒（DRV）与禽呼肠孤病毒（ARV）的σA和σNS基因的核苷酸同源性分别为76．0％～77．1％和78．4％～79．6％，... 对番鸭呼肠孤病毒S12和S14毒株S基因组（S1-4）中σA、σB、σNS和σC蛋白基因进行了克隆和测序。序列分析表明：鸭呼肠孤病毒（DRV）与禽呼肠孤病毒（ARV）的σA和σNS基因的核苷酸同源性分别为76．0％～77．1％和78．4％～79．6％，氨基酸同源性分别为89．5％～91．2％和91.6％～92．7％；而具有诱导群特异性和型特异性中和抗体的σB和σC基因的核苷酸同源性分别为60．3％～64．4%和2．7%～9．9％，氨基酸同源性分别为61．4％～62．0％和22．6％～26．7％；DRV和ARV抗原性存在差异。而DRVS12／S14与法国89026株σA、σB、σNS和σC基因的核苷酸同源性分别为90．0％、93．6％、87．9％～88．0％和93．1%，氨基酸同源性分别为97．1%、94．3%、95．7%～95．9%和93．7％。进化树分析表明，DRV与ARV形成不同的分支，DRV是正呼肠孤病毒属中不同于ARV的一种新的呼肠孤病毒。 展开更多
关键词 番鸭呼肠孤病毒 σA基因 σb基因 σNS基因 σC基因 进化树
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新型鸭呼肠孤病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：7
6
作者 张博 陈立功 +5 位作者 武华 阴雅洁 孟利佳 郭康康 侯绍华 董世山 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期80-84,共5页
为了快速、准确检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV),本试验采用NDRVσB基因的序列保守区,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了NDRV实时荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线,并进行特异性试验、敏感性试验、重复... 为了快速、准确检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV),本试验采用NDRVσB基因的序列保守区,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了NDRV实时荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线,并进行特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验。结果表明:所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线方程为y=-3.354x+44.818,扩增效率为98.7%,标准曲线的相关系数为0.999;该方法可以特异性检测NDRV,但对MDRV、ARV、TMUV、DHAV均无反应信号;该方法检测质粒标准品最低检测浓度为10拷贝/μL,是普通PCR方法检测敏感性的1000倍;该方法的组内与组间变异系数均小于2%;用该方法检测临床样品,结果显示NDRV阳性率为45%,而常规RT-PCR阳性率为33%,比常规RT-PCR敏感。说明本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法可为NDRV的监测和早期诊断提供可靠的技术支撑。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 σb基因 荧光定量 RT-PCR TAQMAN探针 应用
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禽呼肠孤病毒σB基因在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定 被引量：2
7
作者 王盛 谢芝勋 +9 位作者 沈文康 谢丽基 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 邓显文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期479-484,共6页
本研究旨在通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物学活性的禽呼肠孤病毒σB蛋白。首先,根据NCBI中ARVσB基因序列,设计引物构建σB基因重组供体质粒pFast-σB。随后转化DH10bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-σB。通过... 本研究旨在通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物学活性的禽呼肠孤病毒σB蛋白。首先,根据NCBI中ARVσB基因序列,设计引物构建σB基因重组供体质粒pFast-σB。随后转化DH10bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-σB。通过脂质体介导法转化sf9细胞,获得重组杆状病毒rBac-σB。将重组病毒感染sf9细胞,表达重组蛋白。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光(IFA)检测表明,ARVσB蛋白在sf9细胞中成功表达,分子量约为41 ku,并具有良好的生物学活性,为进一步研究ARVσB基因的功能及其基因工程亚单位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σb基因 杆状病毒表达系统 SF9细胞
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