为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的分型检测方法,并掌握长春地区BVDV的流行规律。本研究根据BVDV-1型和BVDV-2型的5’-UTR基因序列差异设计鉴别检测引物,经一步法RT-PCR反应条件的优化,建立了BVDV分型一步法RT-PCR检测方法,并应用该方...为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的分型检测方法,并掌握长春地区BVDV的流行规律。本研究根据BVDV-1型和BVDV-2型的5’-UTR基因序列差异设计鉴别检测引物,经一步法RT-PCR反应条件的优化,建立了BVDV分型一步法RT-PCR检测方法,并应用该方法对长春地区采集的380份样品进行检测。结果表明:该方法最佳退火温度为51℃,最佳模板含量为5.7μg,检测牛肠道病毒(BEV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)均为阴性;对BVDV-1型和BVDV-2型的检测灵敏度可以分别达到0.58 ng RNA和0.51 ng RNA,相对于病毒分离方法的符合率为92.31%,长春地区BVDV阳性率为24.21%,其中BVDV-1和BVDV-2阳性率分别为15.53%和7.37%。以上结果表明,本研究建立的BVDV分型一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和准确性,长春地区BVDV的流行优势基因型为BVDV-1型。展开更多
文摘为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的分型检测方法,并掌握长春地区BVDV的流行规律。本研究根据BVDV-1型和BVDV-2型的5’-UTR基因序列差异设计鉴别检测引物,经一步法RT-PCR反应条件的优化,建立了BVDV分型一步法RT-PCR检测方法,并应用该方法对长春地区采集的380份样品进行检测。结果表明:该方法最佳退火温度为51℃,最佳模板含量为5.7μg,检测牛肠道病毒(BEV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)均为阴性;对BVDV-1型和BVDV-2型的检测灵敏度可以分别达到0.58 ng RNA和0.51 ng RNA,相对于病毒分离方法的符合率为92.31%,长春地区BVDV阳性率为24.21%,其中BVDV-1和BVDV-2阳性率分别为15.53%和7.37%。以上结果表明,本研究建立的BVDV分型一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和准确性,长春地区BVDV的流行优势基因型为BVDV-1型。
