用蔗糖密度梯度离心法纯化小球隐孢子虫卵囊试验 被引量：10

1

作者 李建华 张西臣 +1 位作者 陈建宝 田宗成 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2001年第4期22-23,共2页

用蔗糖密度梯度离心法从接种犊牛粪便中纯化小球隐孢子虫卵囊 ,该方法操作简便、快速、经济、获得的卵囊纯度高 ,回收率达 92 .0 % ,适合于国内普通实验室使用。

关键词 卵囊 纯化 小球隐孢子虫 蔗糖密度梯度离心法

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优化的蔗糖密度梯度离心法分离完整叶绿体 被引量：9

2

作者 张年辉 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2010年第7期44-46,共3页

建立了一种简单、低成本的分离完整叶绿体的方法。以家用食品料理机破碎植物细胞,采用两层不连续蔗糖梯度和使用较低的离心速度等措施降低了实验成本和对设备的要求;通过采取措施防止叶绿体粗提物制备过程中叶绿体外被膜的破裂,以及在... 建立了一种简单、低成本的分离完整叶绿体的方法。以家用食品料理机破碎植物细胞,采用两层不连续蔗糖梯度和使用较低的离心速度等措施降低了实验成本和对设备的要求;通过采取措施防止叶绿体粗提物制备过程中叶绿体外被膜的破裂,以及在梯度制备和随后离心过程中由于颗粒扩散而导致的梯度不稳定,从而使方法具有很好的重复性。用该方法分离的完整叶绿体完整性很高（〉90%）,可以用于叶绿体细胞生物学、生物化学与分子生物学等多方面的研究。 展开更多

关键词 完整叶绿体 密度梯度离心 不连续蔗糖梯度 本科生实验

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梯度离心时不同离心力对精子DNA完整性及人工授精结局的影响 被引量：3

3

作者 张洪麟 姜涛 +3 位作者 王艳龙 谭秀飞 高辉 陈浩 《中国性科学》 2022年第9期16-20,共5页

目的 研究宫腔内人工授精(IUI)精液处理过程中不同离心力对精液相关参数及妊娠率、流产率的影响。方法 选取2017年6月至2019年12月大连市妇女儿童医疗中心(集团)共150个周期123对夫妇的IUI临床资料作为研究对象,按照离心力分为300×... 目的 研究宫腔内人工授精(IUI)精液处理过程中不同离心力对精液相关参数及妊娠率、流产率的影响。方法 选取2017年6月至2019年12月大连市妇女儿童医疗中心(集团)共150个周期123对夫妇的IUI临床资料作为研究对象,按照离心力分为300×g组、400×g组、500×g组,比较三组间年龄、不育年限、周期数、内膜厚度等基线资料及精液处理前后的浓度、前向运动精子百分比(PR)、优质精子回收率、精子DNA碎片指数(DFI)、妊娠率、流产率等指标。结果 三组年龄、不孕年限、周期数、内膜厚度、女方体重指数、精液浓度、PR及优质精子回收率比较,差异无统计学意义(P>0.05);300×g组精子DFI处理前后比较,差异具有统计学意义(P<0.05);400×g、500×g组处理前后精子DFI比较,差异无统计学意义(P>0.05);三组妊娠率、流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 辅助生殖过程中处理精液时300×g离心力可适当提高精子DNA完整性,不同离心力优化精液对IUI妊娠率、流产率无影响。 展开更多

关键词 宫腔内人工授精 非连续密度梯度离心法 DNA碎片指数 妊娠率 流产率

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一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化

4

作者 梁爽爽 冀美超 +3 位作者 胡晓晴 付成华 朱长军 董智雄 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2015年第5期262-265,281,共5页

目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度，分别用梯度为10％～30％和10％-45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体；然后将哺乳动... 目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度，分别用梯度为10％～30％和10％-45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体；然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心；再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1．5ml离心管中，测量每一个样品的吸光度值A。并提取其中的蛋白质，利用WesternBlot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位。结果核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上。结论利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体。该法分离效果好，操作简单，为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法。 展开更多

关键词 连续蔗糖密度梯度 核糖体 核糖体前体 RPL15

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狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发 被引量：4

5

作者 刘珍珍 田大勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期25-33,共9页

目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质... 目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质去除和抗原回收情况,确定合适的收获液浓缩比例;比较不同批次样品纯化后的杂质去除率和重复性,判定本纯化工艺的稳定性。结果:选取60%作为初始蔗糖浓度,在上样速度为150~200ml/min时,可以有效地对10倍浓缩的病毒收获液进行纯化;卵清蛋白、牛血清白蛋白和庆大霉素去除率分别达到99%,95%和95%,且工艺具有极好的稳定性。结论:开发的连续流蔗糖密度梯度离心技术可以作为冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的产业化纯化工艺。 展开更多

关键词 狂犬病病毒疫苗 纯化工艺 连续流蔗糖密度梯度离心

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DNA半保留复制和半不连续复制的提出与确立 被引量：3

6

作者 向义和 《自然杂志》 北大核心 2010年第4期229-235,共7页

笔者介绍了DNA的半保留复制和半不连续复制提出与确立的过程:沃森和克里克提出DNA半保留复制的思路;Meselson和Stahl的实验验证;冈崎提出不连续复制的思路,并通过步步深入的实验证实。

关键词 半保留复制 半不连续复制 密度梯度离心法 脉冲标记实验 冈崎片段 尿嘧啶片段

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不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化 被引量：3

7

作者 熊静 王思雨 +4 位作者 张云惠 吴利红 邓弘仙 刘阳 罗兴燕 《检验医学与临床》 CAS 2019年第3期289-291,共3页

目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果分离离心力结果:离心... 目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300～900g分离时差异无统计学意义(P>0.05)且相对较少,增加离心力,凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1 200g或低至300g时,存活细胞数显著减少。洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300～2 400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时,凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1 200g时,存活细胞数显著减少。结论分离离心力在600～900g及洗涤离心力在300～600g均可用于PBMC的分离。 展开更多

关键词 外周血单个核细胞 聚蔗糖密度梯度离心法 离心力

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一种改进的蔗糖线性密度梯度溶液制备法

8

作者 蒋智文 黄婉玲 +3 位作者 林智鑫 杨婉晴 孙雪荣 刘新光 《生物技术》 CAS 2023年第6期697-701,共5页

[目的]制备具有良好线性的蔗糖密度梯度溶液。[方法]利用溶液梯度混合仪和蠕动泵组装成新型的蔗糖密度梯度溶液制备器,用该制备器制备50%~0%和50%~10%等不同蔗糖密度梯度溶液,然后利用电脑核酸蛋白检测仪检测所制备的蔗糖密度梯度溶液... [目的]制备具有良好线性的蔗糖密度梯度溶液。[方法]利用溶液梯度混合仪和蠕动泵组装成新型的蔗糖密度梯度溶液制备器,用该制备器制备50%~0%和50%~10%等不同蔗糖密度梯度溶液,然后利用电脑核酸蛋白检测仪检测所制备的蔗糖密度梯度溶液的光密度,并对蔗糖密度溶液的线性进行评估;比较自制的蔗糖密度梯度溶液制备器与经典的Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的蔗糖密度梯度溶液的优劣。[结果]自制的蔗糖密度梯度溶液制备器制备的50%~0%和50%~10%蔗糖密度梯度溶液的光密度与蔗糖密度的决定系数(R^(2))都在0.98以上;Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的50%~0%蔗糖密度梯度溶液的光密度与蔗糖密度的决定系数(R^(2))为0.95~0.97。[结论]自制的蔗糖密度梯度溶液制备器制备的蔗糖密度梯度溶液优于Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的蔗糖密度梯度溶液。 展开更多

关键词 离心法 蔗糖 密度梯度 全自动密度梯度制备系统 溶液 吸光度 线性拟合 决定系数

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从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究 被引量：17

9

作者 陈甫 黄克和 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期219-222,共4页

目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐... 目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各105体外感染牛输卵管上皮细胞(BFTE),48h和72h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况,以比较卵囊的纯度和活性。结果经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[(2.86±0.08)×107]与改良饱和盐水漂浮法[(2.88±0.15)×107]无明显差异(P>0.05),但高于Percoll密度梯度离心法[(1.52±0.08)×107](P<0.01)和CsCl密度梯度离心法[(2.46±0.13)×107](P<0.05)。4种方法分离纯化的卵囊体外感染BFTE48h和72h后隐孢子虫数无明显差异(P>0.05)。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。结论改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速;CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。 展开更多

关键词 微小隐孢子虫 卵囊 改良饱和盐水漂浮法 Percoll密度梯度离心法 不连续蔗糖密度梯度离心法 氯化铯密度梯度离JD法 牛输卵管上皮细胞

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四种常用的人中性粒细胞分离方法的比较 被引量：27

10

作者 李金凤 刘文礼 +4 位作者 史小娟 刘伟 汉建忠 万静 罗自强 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2008年第4期277-281,共5页

目的:比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法、裂解红细胞法和Dextran作用下红细胞自然沉降法四种常用的人中性粒细胞分离方法。方法:取健康人外周静脉血,分别采用以上四种方法进行中性粒细胞分离,对其细胞纯... 目的:比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法、裂解红细胞法和Dextran作用下红细胞自然沉降法四种常用的人中性粒细胞分离方法。方法:取健康人外周静脉血,分别采用以上四种方法进行中性粒细胞分离,对其细胞纯度、回收率、存活率进行比较。结果:Percoll非连续密度梯度离心法与Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离得到的细胞纯度均大于90%,两者间比较无统计学差异(P>0.05);裂解红细胞法和Dextran作用下红细胞自然沉降法分离得到的细胞纯度略低于Percoll非连续密度梯度离心法(P<0.01)与Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.05)。Dextran作用下红细胞自然沉降法的回收率低于Percoll非连续密度梯度离心法(P<0.01)、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.01)和裂解红细胞法(P<0.05);Percoll非连续密度梯度离心法回收的中性粒细胞存活率明显高于Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.05),裂解红细胞法(P<0.01)和Dextran作用下红细胞自然沉降法(P<0.01)。结论:Percoll非连续密度梯度离心法分离中性粒细胞,纯化程度好,回收率高,是一种简单、高效的中性粒细胞分离方法,适于临床和科研中广泛应用。 展开更多

关键词 中性粒细胞 Percoll非连续密度梯度离心法 Ficoll—Hypaque密度梯度离心法 裂解红细胞法 Dextran红细胞沉降法

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大鼠不饱和脂肪酸的代谢变化与衰老的关系 被引量：5

11

作者 刘惠敏 骆子生 +1 位作者 李兴发 姜玲玲 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期42-43,共2页

目的　探讨衰老与细胞内不饱和脂肪酸代谢变化的关系。方法　采用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝脏线粒体和微粒体 ,用毛细管气相色谱法测定了青年和老年大鼠肝组织、肝线粒体和微粒体中的 1 4种脂肪酸 ,获取有统计意义的数据。结果　 6... 目的　探讨衰老与细胞内不饱和脂肪酸代谢变化的关系。方法　采用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝脏线粒体和微粒体 ,用毛细管气相色谱法测定了青年和老年大鼠肝组织、肝线粒体和微粒体中的 1 4种脂肪酸 ,获取有统计意义的数据。结果　 6种不饱和脂肪酸的总量占所测 1 4种脂肪酸总量的比例 ,老年组均小于青年组 (P<0 .0 5)。结论　随着增龄 ,自由基介导的脂质过氧化程度不断加强 。 展开更多

关键词 生物膜 毛细管气相色谱法 衰老 脂质过氧化 不饱和脂肪酸 蔗糖密度梯度离心法

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Ficoll和Percoll法分离结直肠癌相关巨噬细胞的比较 被引量：5

12

作者 杨芳 伍菲凡 +2 位作者 王晓燕 胡志燕 李祖国 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第9期1394-1398,共5页

目的：比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离结直肠癌中的巨噬细胞的效果，并进一步探讨贴壁分离巨噬细胞的最适宜贴壁时间。方法：取结直肠癌患者的肿瘤组织，制成单个细胞的悬液，分别使用100％ Ficol... 目的：比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离结直肠癌中的巨噬细胞的效果，并进一步探讨贴壁分离巨噬细胞的最适宜贴壁时间。方法：取结直肠癌患者的肿瘤组织，制成单个细胞的悬液，分别使用100％ Ficoll、35％ Percoll 以及25％与65％双梯度 Percoll 进行巨噬细胞分离，37℃培养2 h后，去除未贴壁的细胞，使用免疫荧光实验来检测巨噬细胞的纯度。之后，将Ficoll分离得到的单个核细胞，分别培养1、2、4和9 h后比较巨噬细胞的纯度。结果：Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离的巨噬细胞的纯度为60．18％，Percoll 非连续密度梯度离心法分离的巨噬细胞的纯度分别为54．33％和10．93％，均低于Ficoll法分离所得到的巨噬细胞的纯度（P ＜0．05）。 Ficoll分离后贴壁1、2、4 h 分离得到的巨噬细胞纯度均达到60％以上，高于贴壁培养9 h得到的巨噬细胞的纯度（34．67％）。结论： Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离巨噬细胞，纯化程度好，是一种简单、高效的巨噬细胞分离方法，适于临床和科研中广泛应用。贴壁培养2～4h是贴壁分离巨噬细胞最适宜的时间。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 肿瘤相关巨噬细胞 Ficoll-Hypaque密度梯度离心法 Percoll非连续密度梯度离心法 贴壁分离

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全血中性粒细胞分离方法对fMLP诱导极性化的影响 被引量：4

13

作者 罗琼 蔡春青 +4 位作者 谢翠华 楚心唯 武清宜 孟晓静 邹飞 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1514-1517,共4页

目的比较Percoll非连续密度梯度离心法和Dextran沉降法两种常用的中性粒细胞分离方法 ,为中性粒细胞极性化研究提供有效手段。方法取健康成年人外周血,采用Percoll非连续密度梯度离心法和Dextran沉降法分离中性粒细胞,分别检测分离后的... 目的比较Percoll非连续密度梯度离心法和Dextran沉降法两种常用的中性粒细胞分离方法 ,为中性粒细胞极性化研究提供有效手段。方法取健康成年人外周血,采用Percoll非连续密度梯度离心法和Dextran沉降法分离中性粒细胞,分别检测分离后的中性粒细胞的极性、纯度、存活率,比较二者对极性信号分子F-actin的聚合和胞内Ca2+的影响。结果二者在极性率、纯度、存活率方面并不存在显著性差异,但Dextran沉降法在fMLP诱导细胞极性3min内对F-actin的聚合产生抑制作用,同时可使胞内Ca2+升高的Ca2+峰降低约25%。结论对PMNs极性功能研究时,两种分离方法都可以选择。Percoll非连续密度梯度离心法更有优势,但在需要纯化大量PMNs时,Dextran沉降法也是一种好的选择。 展开更多

关键词 中性粒细胞 极性 Percoll非连续密度梯度离心法 Dextran沉降法

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从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进 被引量：14

14

作者 黄克和 杨世广 唐建霞 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期360-362,共3页

目的　建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法　在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、... 目的　建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法　在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果　地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论　成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。 展开更多

关键词 微小隐孢子虫卵囊 饱和盐水漂浮法 蔗糖密度梯度离心法 细胞培养 隐孢子虫病

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比较两种精子处理技术对体外受精胚胎质量的影响 被引量：5

15

作者 赵妍 文宏贵 刘红 《重庆医学》 CAS CSCD 2003年第9期1247-1248,共2页

目的　比较经两种精液处理技术处理的精液对成熟卵的体外受精、卵裂及胚胎质量的影响。方法　将 1999年 12月～ 2 0 0 0年 4月在重庆妇产科医院生殖与遗传中心进行体外受精胚胎移植 (IVF ET)治疗的 6 0例患者以采卵日时间随机分为两组 ... 目的　比较经两种精液处理技术处理的精液对成熟卵的体外受精、卵裂及胚胎质量的影响。方法　将 1999年 12月～ 2 0 0 0年 4月在重庆妇产科医院生殖与遗传中心进行体外受精胚胎移植 (IVF ET)治疗的 6 0例患者以采卵日时间随机分为两组 ,将其精液分别用上游法和两层不连续 percoll密度梯度离心法处理。结果　 2 5例上游法组受精率、卵裂率、优质胚胎率分别为94 5 0 %、98 75 %、6 0 34% ;35例两层不连续percoll密度梯度离心技术组受精率、卵裂率、优质胚胎率分别为 94 2 1%、96 91%、6 8 75 %。结论　两种精液处理技术处理的精子在成熟卵的受精率、卵裂率上无差别 ,而两层不连续 展开更多

关键词 上游法 两层不连续percoll密度梯度离心法 受精率 卵裂率 优质胚胎率

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长期培养外周血单个核细胞的简易分离纯化方法 被引量：3

16

作者 罗利琼 陈诚华 张军 《新乡医学院学报》 CAS 2013年第4期249-250,共2页

目的对长期培养的外周血单个核细胞(PBMC)进行纯化,为后续研究提供方便。方法用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法对长期培养的PBMC进行再次分离和纯化。结果用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法再次处理长期培养的PBMC,可以得到纯度较高的PBM... 目的对长期培养的外周血单个核细胞(PBMC)进行纯化,为后续研究提供方便。方法用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法对长期培养的PBMC进行再次分离和纯化。结果用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法再次处理长期培养的PBMC,可以得到纯度较高的PBMC。结论聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法是纯化长期培养的PB-MC的一种简便、快捷、成本低的方法之一。 展开更多

关键词 外周血单个核细胞 聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法 细胞培养

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抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备与鉴定 被引量：1

17

作者 肖啸 张曦 +3 位作者 葛长荣 郝军元 汪磊 高士争 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第6期9-11,共3页

以蔗糖密度梯度离心提取猪皮下脂肪细胞和其他组织细胞膜蛋白,经SDS-PAGE分析。

关键词 猪 脂肪细胞膜蛋白 抗体 制备 鉴定 蔗糖密度梯度离心法 提取 体脂沉积 胴体品质

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大鼠肝细胞过氧化物酶体的提取 被引量：2

18

作者 骆子生 王敏彦 姜玲玲 《氨基酸和生物资源》 CAS 2000年第1期20-22,共3页

:采用蔗糖密度梯度离心法 ( 950 0 0× g,2 h)提取大鼠肝细胞过氧化物酶体 ,所得过氧化物酶体形态完整 ,纯度与肝匀浆相比提高了 2 6倍 ,仅有少量 ( 0 .5%～ 0 .9%)的微粒体和线粒体污染 ,回收率为 1 2 %。为研究过氧化物酶体提供... :采用蔗糖密度梯度离心法 ( 950 0 0× g,2 h)提取大鼠肝细胞过氧化物酶体 ,所得过氧化物酶体形态完整 ,纯度与肝匀浆相比提高了 2 6倍 ,仅有少量 ( 0 .5%～ 0 .9%)的微粒体和线粒体污染 ,回收率为 1 2 %。为研究过氧化物酶体提供了有效的分离方法。此法还可将过氧化物酶体、微粒体、线粒体同时进行分离。 展开更多

关键词 过氧化物酶体 提取 蔗糖密度梯度离心法

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还原性谷胱甘肽对兔骨髓间充质干细胞体外冷藏保存活性保护作用研究 被引量：1

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作者 胡坚方 汪照函 +3 位作者 雷雪扬 邓长青 刘文婧 罗文 《现代检验医学杂志》 CAS 2019年第1期115-119,共5页

目的观察冷藏保存对兔骨髓间充质干细胞生长活性的影响及还原性谷胱甘肽对其可能存在的保护作用。方法日本雄性大耳白兔12只,取出兔骨髓后,采用Percoll非连续性密度梯度离心法分离出单个核细胞,取原代培养后细胞经免疫磁珠分析和流式细... 目的观察冷藏保存对兔骨髓间充质干细胞生长活性的影响及还原性谷胱甘肽对其可能存在的保护作用。方法日本雄性大耳白兔12只,取出兔骨髓后,采用Percoll非连续性密度梯度离心法分离出单个核细胞,取原代培养后细胞经免疫磁珠分析和流式细胞术鉴定后进行传代培养。第3代传代培养细胞分别在体外4℃冷藏后分为对照组(0h)和实验组。实验组分为冷藏6h(6h组),12h(12h组)和24h(24h组)。部分冷藏12h单个核细胞分别加入0.5mmol/L和1.0mmol/L还原性谷胱甘肽(GSH)共培养,分别为12h+0.5mmol/L GSH组和12h+1.0mmol/L GSH组。对各组进行8天生长曲线的绘制并完成活性的测定。采用SPSS 17.0软件进行配对t检验分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果对照组分离出单个核细胞12天可铺满瓶底。细胞原代培养后,流式细胞仪显示经免疫磁珠分选的细胞CD29阳性率达91.7%,表达CD29,CD44,CD90,不表达CD19,CD45,CD34。生长曲线显示,6h组,12h+0.5mmol/L GSH组,12h+1.0mmol/L GSH组与对照组的细胞增殖能力差异均无统计学意义(均P>0.05)。统计学显示12h组和24h组的细胞增殖能力与对照组,6h组,12h+0.5mmol/L GSH组及12h+1.0mmol/L GSH组的细胞相比差异有统计学意义(均P<0.01);24h组的细胞增殖能力与12h组的细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Percoll非连续性密度梯度离心法对于兔骨髓的骨髓间充质干细胞分离起着良好的效果。体外4℃冷藏保存对骨髓间充质干细胞的生长活性起着抑制效果,且随着冷藏时间的延长而更加明显。还原性谷胱甘肽对冷藏保存后的骨髓间充质干细胞起着保护活性的作用。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 Percoll非连续性密度梯度离心法 还原性谷胱甘肽 冷藏

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鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定 被引量：2

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作者 陈萍 王红宁 +3 位作者 陈俊杰 胡慧琼 周生 余祖华 《湖北农业科学》 北大核心 2005年第3期94-95,103,共3页

通过鸡胚接种盲传,从重庆某地疑似鸡肾型传染性支气管炎的发病鸡群中,分离到一株病毒,该病毒能导致鸡胚出现侏儒胚。用此病毒回归10日龄雏鸡,可使试验鸡出现典型的花斑肾。尿囊液毒穴36～48h雪经差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心纯化,... 通过鸡胚接种盲传,从重庆某地疑似鸡肾型传染性支气管炎的发病鸡群中,分离到一株病毒,该病毒能导致鸡胚出现侏儒胚。用此病毒回归10日龄雏鸡,可使试验鸡出现典型的花斑肾。尿囊液毒穴36～48h雪经差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心纯化,在电镜下能观察到典型的冠状病毒形态,病毒粒子直径为80～120nm,有囊膜、纤突。应用反转录-聚合酶链式反应穴RT-PCR雪技术扩增出了该病毒的特异性基因M和N,这从分子水平进一步证实引起鸡群死亡的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。 展开更多

关键词 鸡肾型传染性支气管炎病毒 分离鉴定 鸡传染性支气管炎病毒 蔗糖密度梯度离心 聚合酶链式反应 特异性基因 鸡胚接种 发病鸡群 10日龄 差速离心 病毒形态 粒子直径 分子水平 不连续 尿囊液 反转录 雏鸡 花斑

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