A型口蹄疫病毒与中和性抗体的复合物结构解析

1

作者 张泽林 武山权 +4 位作者 李凤娟 泽让扎西 卢曾军 李坤 雷东升 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期39-48,共10页

口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是感染猪、牛、羊等偶蹄动物的烈性病原,严重危害畜牧业的发展以及相关产品的对外贸易。FMDV包含七个血清型,其中A型FMDV抗原结构变异最大,因此解析A型FMDV保守抗原结构对广谱疫苗分子设... 口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是感染猪、牛、羊等偶蹄动物的烈性病原,严重危害畜牧业的发展以及相关产品的对外贸易。FMDV包含七个血清型,其中A型FMDV抗原结构变异最大,因此解析A型FMDV保守抗原结构对广谱疫苗分子设计具有重要指导意义。据此,本文作者利用冷冻电镜技术解析了A型FMDV与中和性抗体P22C复合物的三维结构。发现P22C结合于A型FMDV颗粒的三重轴附近,接触面多数氨基酸位于衣壳蛋白VP2 B-C环,其次是E-F/H-I环以及VP3 B-B“结节”上不连续的少量氨基酸。其中,VP2的72、77与195位氨基酸通过氢键与抗体相互作用,可能是影响结合的关键位点。进一步的结合自由能分析支持该猜测,提示72位点是组成抗原表位的关键决定簇,而H77W和S195L突变则可进一步降低结合自由能从而提高与抗体的亲和力。结合自由能分析也说明了P22C具有较高的成熟度。研究结果揭示了A型FMDV的抗原结构信息,为FMDV疫苗分子设计提供了一个重要靶点。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 中和性抗体 冷冻电镜 结合自由能

下载PDF 职称材料

鼠TNF-α功能位点及其中和性抗体结合位点研究 被引量：4

2

作者 贾俊英 周洪哲 唐捷 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第4期424-430,共7页

肿瘤坏死因子TNF-α是一个多功能的细胞因子,许多免疫系统疾病的发生和TNF-α的过量释放有关.对TNF-α的功能研究有助于了解这些疾病的发生机制,而以TNF-α为靶点的抗体可用于治疗多种自身免疫性疾病.通过研究一个抗鼠TNF-α中和性单克... 肿瘤坏死因子TNF-α是一个多功能的细胞因子,许多免疫系统疾病的发生和TNF-α的过量释放有关.对TNF-α的功能研究有助于了解这些疾病的发生机制,而以TNF-α为靶点的抗体可用于治疗多种自身免疫性疾病.通过研究一个抗鼠TNF-α中和性单克隆抗体的结合位点,确定了鼠TNF-α行使其生物学功能的关键部位.首先利用酵母展示技术确定了中和性抗体9C6的结合位点是鼠TNF-α的第29～40氨基酸线性片段.然后在此区域引入点突变,找到鼠TNF-α与9C6抗体结合的关键位点.最终用大肠杆菌表达鼠TNF-α和其突变体蛋白,通过L929细胞杀伤实验,证实与9C6抗体结合的关键位点也是决定鼠TNF-α生物学功能的关键位点. 展开更多

关键词 鼠TNF-α 中和性抗体 结合位点 酵母展示

下载PDF 职称材料

异种免疫诱导中和性抗体抑制小鼠肺癌生长 被引量：1

3

作者 潘琪 刘德森 +3 位作者 茅乃权 杨立 王守峰 吴俊伟 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期762-766,共5页

目的研究异种固定化完整细胞作为肿瘤疫苗的潜力,初步探讨其诱导的免疫反应的抗肿瘤机制。方法分别使用固定的人肺癌细胞免疫小鼠,再接种小鼠自发肺腺癌鼠肿瘤进行肿瘤挑战,观察肿瘤细胞免疫后对小鼠肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学... 目的研究异种固定化完整细胞作为肿瘤疫苗的潜力,初步探讨其诱导的免疫反应的抗肿瘤机制。方法分别使用固定的人肺癌细胞免疫小鼠,再接种小鼠自发肺腺癌鼠肿瘤进行肿瘤挑战,观察肿瘤细胞免疫后对小鼠肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法观察小鼠肿瘤浸润T细胞的情况,采用MTT法检测小鼠免疫血清对人肺癌细胞生长的影响。结果采用人肺腺癌和鳞癌固定的完整细胞免疫小鼠后均明显地抑制小鼠肺腺癌肿瘤的生长(P<0.05),抑瘤率分别为40.8%及49.2%,显著优于采用人肺腺癌和鳞癌细胞碎片免疫的效果。小鼠免疫血清在体外可抑制人肺癌细胞的生长。结论异种人肺癌固定的完整细胞诱导了有效的小鼠抗鼠肺癌的体液免疫反应,显著抑制肿瘤生长,其抑制作用可能与诱导小鼠产生抗肺癌中和性抗体有关。 展开更多

关键词 异种免疫 肺癌 体液免疫 中和性抗体

下载PDF 职称材料

干扰素中和性抗体研究进展 被引量：3

4

作者 刘晓蕊 阚全程 +1 位作者 余祖江 梁红霞 《河南医学研究》 CAS 2011年第1期108-110,共3页

干扰素（interferon,IFN）是机体免疫细胞分泌的一种细胞因子,是一种广谱抗病毒剂,它并不直接杀伤或抑制病毒,而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而抑制乙肝病毒的复制。

关键词 干扰素 中和性抗体 免疫细胞分泌 细胞因子 抗病毒蛋白 抗病毒剂 抑制病毒 受体作用

下载PDF 职称材料

不同浓度IL-17A中和性抗体对CIA小鼠血清中炎症细胞因子表达的影响 被引量：1

5

作者 刘平 郭锦荣 +1 位作者 姚弘毅 韦卓 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2015年第1期12-14,18,后插2-后插3,共6页

目的通过建立胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型,探讨不同浓度的IL-17A中和性抗体对CIA小鼠血清中炎症细胞因子表达。方法将48只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为4组:A(空白对照)组、B(CIA+生理盐水)组、C(CIA+高浓度)组、D(CIA+低浓度)组;采用... 目的通过建立胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型,探讨不同浓度的IL-17A中和性抗体对CIA小鼠血清中炎症细胞因子表达。方法将48只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为4组:A(空白对照)组、B(CIA+生理盐水)组、C(CIA+高浓度)组、D(CIA+低浓度)组;采用鸡II型胶原加氟氏完全佐剂乳化制备抗原尾部多点皮下注射;初次免疫2周后以同样方法加强免疫,诱导CIA小鼠模型出现后在小鼠腹腔注射细胞因子中和性抗体或生理盐水,观察2周并记录小鼠关节及关节外表现,检测血清TNF-a、IL-17、IL-6表达水平。结果 C、D与B比较TNF-a、IL-17、IL-6表达水平显著降低,并且IL-17A中和性抗体高浓度组较低浓度组血清中炎症细胞因子表达水平降低,差异有统计学意义(<0.05)。结论 IL-17A中和性抗体可显著降低CIA小鼠模型血清中炎症细胞因子TNF-a、IL-17、IL-6表达水平,且以高浓度组较低浓度组改善骨关节功能更显著,其作用机制可能是通过调节Th17细胞参与介导的细胞因子-破骨细胞损伤免疫机制,抑制炎症细胞因子表达,进一步影响破骨细胞因子来实现。 展开更多

关键词 IL-17A 中和性抗体 CIA小鼠 细胞因子 实验动物

下载PDF 职称材料

热休克蛋白B6中和性抗体对脉络膜血管内皮细胞管腔形成的影响及其机制

6

作者 陈惠康 张济明 +4 位作者 李龙标 钱益勇 刘高勤 罗宝根 费梅 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1031-1036,共6页

背景血管内皮细胞的增生和迁移是血管发生的主要环节。新近的研究发现，热休克蛋白B6（HspB6）可促进多种与血管新生相关因子的分泌，导致病理状态下新生血管的发生，研究HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞增生、迁移和管腔形成能... 背景血管内皮细胞的增生和迁移是血管发生的主要环节。新近的研究发现，热休克蛋白B6（HspB6）可促进多种与血管新生相关因子的分泌，导致病理状态下新生血管的发生，研究HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞增生、迁移和管腔形成能力的影响对于脉络膜新生血管相关疾病的靶向治疗具有重要意义。目的探讨HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞管腔形成能力的影响及其机制。方法对人脉络膜血管内皮细胞株进行培养和传代，取对数生长期细胞用于实验。应用逆转录PCR（RT—PCR）和流式细胞术检测HspB6mRNA及其蛋白在人脉络膜血管内皮细胞中的表达。将基质胶铺于96孔板中，凝固后加入细胞悬液，细胞密度为2×10^4个／孔，将不同质量浓度（100μg／L、500μg／L）HspB6中和性抗体分别加入培养孔，未加入HspB6中和性抗体的细胞作为对照组（0μg／LHspB6中和性抗体组），每组设3个复孔。细胞孵育12h后，采用体外三维成型法检测各组完整管腔形成的数量，以评价HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞的管腔形成能力。96孔板培养人脉络膜血管内皮细胞，培养液中加入不同质量浓度（0、50、100、500μg/L）HspB6中和性抗体孵育24h，然后采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞的增生值。采用Transwell小室法检测HspB6中和性抗体作用24h后各组穿过小室膜的“贴壁”细胞数目，以评估人脉络膜内皮细胞的增生和迁移情况。收集HspB6中和性抗体干预后的人脉络膜血管内皮细胞，流式细胞术检测HspB6中和性抗体作用后各组人脉络膜血管内皮细胞的凋亡率。结果人脉络膜血管内皮细胞在基因和蛋白水平均可表达HspB6分子。0、100、500μg／LHspB6中和性抗体组管腔形成数目分别为（67．25±5．75）、（60．39±6．41）和（39．76±10．73）个／视野，总体比较差异有统计学意义（F=10．210，P=0．012），其中500μg／LHspB6中和性抗体组管腔形成数目明显少于0μg／LHspB6中和性抗体组，差异有统计学意义（P=0．005）。随着HspB6中和性抗体质量浓度的增加和作用时间的延长，其对细胞增生和迁移的抑制率均明显增加，差异均有统计学意义（F质量浓度=7．485，P=0．002；F时间=16．684，P=0．001）。Transwell小室法检测显示，0、50、100、500μg／LHspB6中和性抗体组细胞迁移数目分别为（14．0±2．5）、（11．1±0．8）、（6．6±0．1）、（6．7±0．2）个，其中100μg／L、500μg／LHspB6中和性抗体干预24h后细胞迁移数目较0μg／LHspB6中和性抗体组明显减少，差异均有统计学意义（均P=0．000）。流式细胞术检测结果发现，HspB6中和性抗体组人脉络膜血管内皮细胞的凋亡率为（22．73±2．53）％，对照组为（13．33±2．08）％，差异有统计学意义（t=4．967，P=0．008）。结论HspB6中和性抗体对脉络膜血管内皮细胞的管腔形成有抑制作用，可能通过抑制血管内皮细胞的增生、迁移以及促进细胞的凋亡等途径发挥效应。 展开更多

关键词 热休克蛋白 B6 中和性抗体 脉络膜血管内皮细胞 新生血管 迁移 凋亡

下载PDF 职称材料

抗西尼罗病毒中和性抗体的研究进展 被引量：2

7

作者 卢星 肖鹤 《国际药学研究杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期571-575,共5页

西尼罗病毒(WNV)属于黄病毒属,可引起人畜共患病,严重可危及生命。随着WNV感染流行趋于全球化,中国存在输入风险。目前,尚无批准上市的疫苗及药物用于人感染西尼罗病毒的预防和治疗。因此,针对西尼罗病毒的药物研发极有必要。该病毒E蛋... 西尼罗病毒(WNV)属于黄病毒属,可引起人畜共患病,严重可危及生命。随着WNV感染流行趋于全球化,中国存在输入风险。目前,尚无批准上市的疫苗及药物用于人感染西尼罗病毒的预防和治疗。因此,针对西尼罗病毒的药物研发极有必要。该病毒E蛋白是中和性抗体的主要抗原,参与病毒对靶细胞的侵染。E蛋白包含3个结构域(DⅠ、DⅡ、DⅢ)。本综述就近年来靶向这3个结构域中和性抗体的研究进展进行简要阐述。 展开更多

关键词 西尼罗病毒 病毒E蛋白 中和性抗体

下载PDF 职称材料

急性丙型肝炎中,CD4 T细胞效应与中和性抗体及CD8 T细胞效应的不同作用

8

作者 谷甸娜 郑明华 《国际消化病杂志》 CAS 2008年第6期482-482,共1页

关键词 急性丙型肝炎 中和性抗体 细胞效应 CD4T细胞 HCV特异性 丙型肝炎病毒 CD8T细胞 病毒特异性

下载PDF 职称材料

鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用

9

作者 魏蔷 李青梅 +3 位作者 金前跃 宋亚鹏 白怡霖 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第2期128-135,共8页

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iE... 为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。 展开更多

关键词 减蛋综合征病毒 纤维蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 双抗体夹心ELISA

下载PDF 职称材料

诱捕受体3中和性抗体在HepG2细胞凋亡中的作用 被引量：2

10

作者 陈罡 党裔武 罗殿中 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期791-792,共2页

诱捕受体3（decoyreceptor3，DcR3）又称为TR6，在多种恶性肿瘤存在着过度表达。该基因表达产物可与相关配体结合，从而阻断由这些配体介导的细胞凋亡，而且还能调控免疫细胞的活性与分化，下调机体免疫系统，与肿瘤免疫逃逸密切相关。... 诱捕受体3（decoyreceptor3，DcR3）又称为TR6，在多种恶性肿瘤存在着过度表达。该基因表达产物可与相关配体结合，从而阻断由这些配体介导的细胞凋亡，而且还能调控免疫细胞的活性与分化，下调机体免疫系统，与肿瘤免疫逃逸密切相关。我们在前期研究中发现，在原发性肝细胞癌（HCC）组织及非癌肝组织中DcR3阳性者的凋亡率均低于DcR3阴性者，DcR3表达与凋亡率呈负相关。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 细胞凋亡 化学治疗 中和性抗体 诱捕受体3

原文传递

炭疽芽孢杆菌中和性抗体的研究进展 被引量：3

11

作者 李冰 李建民 陈薇 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2010年第2期187-190,共4页

炭疽芽孢杆菌的中和性抗体在炭疽的被动免疫和治疗中有着重要的意义。抗保护性抗原(protective antigen,PA)抗体既能够抑制芽孢出芽又具有中和毒素的作用。抗致死因子(lethal factor,LE)/水肿因子(edema factor,EF)抗体能阻断致死毒素(l... 炭疽芽孢杆菌的中和性抗体在炭疽的被动免疫和治疗中有着重要的意义。抗保护性抗原(protective antigen,PA)抗体既能够抑制芽孢出芽又具有中和毒素的作用。抗致死因子(lethal factor,LE)/水肿因子(edema factor,EF)抗体能阻断致死毒素(lethal toxin,LT)/水肿毒素(edema toxin,ET)发挥活性,荚膜抗体能结合补体导致细菌繁殖体裂解。同时中和性抗体的水平也可以作为保护性免疫的评价标准。另一方面中和性单克隆抗体可以作为分析确定PA的中和性表位的有力工具。对中和性表位的分析既有利于探索炭疽毒素致病机制,也可以为现有炭疽疫苗的使用和发展表位疫苗等新型炭疽疫苗提供理论依据。该文综述了炭疽芽孢杆菌中和性抗体的研究进展。 展开更多

关键词 炭疽芽孢杆菌 炭疽毒素 中和性抗体 中和性表位

原文传递

新型冠状病毒抗体检测及中和性抗体免疫治疗研究进展 被引量：6

12

作者 袁梦娇 王蓓丽 +1 位作者 潘柏申 郭玮 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期265-269,共5页

2019年12月新发现的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)已被列为国际公共卫生紧急事件。核酸检测在确诊新型冠状病毒(2019-nCoV)感染中具有不可替代的作用,但由于其对实验室和技术人员要求高、操作繁琐以及存在“漏检”可能等,应联合特异性抗... 2019年12月新发现的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)已被列为国际公共卫生紧急事件。核酸检测在确诊新型冠状病毒(2019-nCoV)感染中具有不可替代的作用,但由于其对实验室和技术人员要求高、操作繁琐以及存在“漏检”可能等,应联合特异性抗体对疑似患者和密切接触人群实现大规模批量筛查,且抗体的检测可降低医务人员在呼吸道标本采集过程中的暴露风险。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 中和性抗体

原文传递

猪细小病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

13

作者 刘运超 杨苏珍 +6 位作者 陈玉梅 王聚财 尚延丽 魏蔷 陈维聪 冯华 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2021年第12期155-162,共8页

为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)单克隆抗体,采用血凝试验(HA)鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制(HI)效价可达1∶2^(16),取免... 为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)单克隆抗体,采用血凝试验(HA)鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制(HI)效价可达1∶2^(16),取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,采用有限稀释法进行多轮亚克隆,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选,成功获得杂交瘤细胞株5F7和11B3,能够稳定分泌中和性单克隆抗体。单克隆抗体5F7和11B3的轻链型均为Kappa,重链型分别为IgG2a和IgG2b。经ELISA和IPMA检测,单克隆抗体5F7和11B3均能与重组PPV VP2蛋白和PPV病毒粒子发生特异反应,而与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。5F7和11B3腹水针对PPV病毒反应的ELSIA效价分别为1∶10 240和1∶20 480;针对PPV感染PK15细胞的中和效价分别为1∶2^(11)和1∶2^(10)。Western blot鉴定结果显示,单克隆抗体5F7和11B3均不与变性的VP2蛋白发生反应,说明2株单克隆抗体均识别重组PPV VP2蛋白的构象型表位。综上,成功制备了2株具有中和活性的抗PPV单克隆抗体。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2蛋白 中和性单克隆抗体 免疫过氧化物酶单层细胞试验 杂交瘤细胞株

下载PDF 职称材料

Asia1型和O型口蹄疫病毒中和性单克隆抗体的免疫保护性 被引量：1

14

作者 周国辉 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期300-304,共5页

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体,进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明,针对Asia1型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量(PD50)分别为1995和2371... 本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体,进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明,针对Asia1型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量(PD50)分别为1995和2371;仅用8PD50单抗3E11和11PD50单抗8E8,就可完全保护乳鼠耐受致死剂量Asia1型和O型FMDV的攻击。被动免疫的乳鼠在攻毒后体重增长的百分率随单抗腹水浓度的升高而增加,而且随着单抗腹水浓度的升高,乳鼠的起始死亡时刻后延、终点死亡时刻前移。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 中和性单克隆抗体 保护性免疫

下载PDF 职称材料

应用假病毒和假型病毒制备抗猪瘟病毒E2蛋白中和性单克隆抗体的初步研究 被引量：4

15

作者 陈景艳 尹晓磊 +5 位作者 王宜 袁丽 王超 邓宏魁 钱永华 袁克湖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期289-293,共5页

为制备抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体(MAb),本实验以表达CSFV E2囊膜糖蛋白的水泡口炎假病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;利用间接ELISA方法和携带荧光素酶(Luciferase)报告基因的HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒... 为制备抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体(MAb),本实验以表达CSFV E2囊膜糖蛋白的水泡口炎假病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;利用间接ELISA方法和携带荧光素酶(Luciferase)报告基因的HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒系统筛选分泌中和性E2MAb的杂交瘤细胞;测定MAb亚型并纯化后,间接ELISA方法测定MAb的效价;采用western blot鉴定MAb的特异性亲和力;利用HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒进行体外中和试验,分析MAb抑制病毒感染的能力。结果表明本实验获得了1株分泌中和性MAb的杂交瘤细胞9C8,该MAb能与E2蛋白特异性结合,而且体外抑制试验中和效价大于1∶25600。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 中和性单克隆抗体 假病毒 中和试验

下载PDF 职称材料

抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：5

16

作者 刘运超 陈玉梅 +4 位作者 冯丽丽 汪磊 王聚财 陆东峰 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2019年第12期114-120,共7页

为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获... 为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体轻链均属于κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型。间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×10^5~1.02×10^6;IPMA效价分别为6.40×10^4、1.28×10^5、2.56×10^5、1.28×10^5;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV2)均无交叉反应。病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×10^4。综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 免疫过氧化物酶单层细胞试验

下载PDF 职称材料

金黄色葡萄球菌肠毒素B 的中和性全人源抗体制备 被引量：1

17

作者 刘成华 刘玉 +2 位作者 冯健男 沈倍奋 杨光(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1480-1483,1493,共5页

目的:制备靶向金黄色葡萄球菌外分泌蛋白肠毒素B(SEB)的中和性全人源单克隆抗体,为SEB诱发的中毒性休克综合征(SEBILS)提供新的治疗方法。方法:以金黄色葡萄球菌COL基因组为模板,利用PCR技术扩增seb基因,进一步构建原核表达载体pET28a-s... 目的:制备靶向金黄色葡萄球菌外分泌蛋白肠毒素B(SEB)的中和性全人源单克隆抗体,为SEB诱发的中毒性休克综合征(SEBILS)提供新的治疗方法。方法:以金黄色葡萄球菌COL基因组为模板,利用PCR技术扩增seb基因,进一步构建原核表达载体pET28a-seb,并克隆至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达目的蛋白,通过Ni2+柱亲和纯化获得SEB蛋白;利用SEB诱导的小鼠SEBILS模型检测SEB活性;进一步通过噬菌体展示技术筛选SEB结合的噬菌体克隆并进行序列测定,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,扩增该抗体的可变区基因并构建重组表达载体转染至293E细胞,并利用Protein A树脂亲和纯化抗体;利用SPR检测其亲和力,通过SEBILS模型验证抗体活性。结果:获得了高纯度重组SEB蛋白,且具有很好的活性;筛选出两株全人源靶向SEB的单克隆抗体YG11-1和YG11-2,SPR结果表明YG11-1、YG11-2的亲和力相当(其KD值分别为16.59 nmol/L和21.35 nmol/L),且YG11-1和YG11-2均能有效抵抗SEB诱导的小鼠中毒性休克综合征,降低小鼠的死亡率,YG11-2(200μg/只)时保护率能够达到100%。结论:本研究获得了具有良好活性的重组SEB蛋白,并制备了抗SEB两株全人源单克隆抗体,为研制SEB中毒治疗制剂提供了新的选择。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 原核表达 重组SEB 中和性全人源单克隆抗体

下载PDF 职称材料

艾滋病毒的中和性单克隆抗体

18

作者 松下修三 丁玉强 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第1期113-114,共2页

自1985年报告HIV感染患者血清中存在阻止艾滋病毒感染的中和抗体以来，对其确切的作用尚不清楚。中和抗体的作用靶点是HIV被膜蛋白gp120，其通过病毒表面或病毒感染细胞表面的gp41的中介作用，在病毒的病原性和感染性上起着重要作用。... 自1985年报告HIV感染患者血清中存在阻止艾滋病毒感染的中和抗体以来，对其确切的作用尚不清楚。中和抗体的作用靶点是HIV被膜蛋白gp120，其通过病毒表面或病毒感染细胞表面的gp41的中介作用，在病毒的病原性和感染性上起着重要作用。作者已制备出与gp120反应的HIV中和性单克隆抗体，本文对其性质和今后应用做一介绍。 展开更多

关键词 艾滋病毒 中和性单克隆抗体 制备 HIV被膜蛋白 GP120

下载PDF 职称材料

人源化抗体中和2009年甲型H1N1流感病毒的研究

19

作者 Shembekar N 董晓云 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期172-172,共1页

2009年甲型H1N1流感病毒(猪源流感病毒)流行在全世界引起较高的发病率和死亡率。除疫苗和抗病毒药物治疗外,使用流感病毒中和性单克隆抗体(MAb)来治疗也是一种可行的选择。前期的研究分离了具有高亲和力的抗2009年甲型H1N1流感病毒的鼠... 2009年甲型H1N1流感病毒(猪源流感病毒)流行在全世界引起较高的发病率和死亡率。除疫苗和抗病毒药物治疗外,使用流感病毒中和性单克隆抗体(MAb)来治疗也是一种可行的选择。前期的研究分离了具有高亲和力的抗2009年甲型H1N1流感病毒的鼠单克隆抗体MA2077,本试验研究了MA2077的人源化及其在哺乳动物细胞中的表达。MA2077的6个互补决定区(CDR)被移植到人类种系可变区,同时在重链和轻链的框架中分别有6和8个回复突变,与微调区和链间包装残基一起促进CDR优势构象及抗原结合。表达于CHO-K1细胞的全长人源化抗体2077Hu2,对血凝素蛋白(KD=0.75nm±0.32nm)表现出较高的亲和力,与H1N1流感病毒(IC50=0.17μg/mL)有强效的中和活性,与MA2077(0.08μg/mL)相比IC50略高。此外,2077Hu2还保留了针对HA流感"Sa"的特异性抗原表位。据悉,这是对甲型H1N1流感病毒的人源化中和抗体的首次报告。 展开更多

关键词 2009年甲型H1N1流感 抗体人源化 CDR移植 表位作图 中和性单克隆抗体

下载PDF 职称材料

脊髓背角基质细胞衍生因子1对皮肤肌肉切口牵拉术致持续性疼痛大鼠中枢敏感化及痛觉过敏的影响 被引量：1

20

作者 李秀娟 李黛 +1 位作者 陈辉 熊源长 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期488-492,共5页

目的观察脊髓背角基质细胞衍生因子1(SDF-1)对皮肤肌肉切口牵拉术(SMIR)致持续性疼痛大鼠中枢敏感化及痛觉过敏的影响,为探讨术后慢性疼痛的发生机制和治疗靶点提供依据。方法采用SMIR后持续性疼痛大鼠模型。将36只雄性SD大鼠随机分为... 目的观察脊髓背角基质细胞衍生因子1(SDF-1)对皮肤肌肉切口牵拉术(SMIR)致持续性疼痛大鼠中枢敏感化及痛觉过敏的影响,为探讨术后慢性疼痛的发生机制和治疗靶点提供依据。方法采用SMIR后持续性疼痛大鼠模型。将36只雄性SD大鼠随机分为假手术组(仅切开皮肤)和SMIR后1、5、10、20 d组以及SMIR+鞘内注射SDF-1中和性抗体组,每组6只大鼠。用up-down法测定术后大鼠痛行为学,用蛋白质印迹法检测各组大鼠脊髓组织中SDF-1的表达。再取18只雄性SD大鼠随机分为假手术组、SMIR组和SMIR+脊髓表面给予SDF-1中和性抗体组(每组6只大鼠),检测3组大鼠脊髓背角C纤维诱发场电位长时程增强(LTP)的变化。结果与假手术组大鼠相比,SMIR后第5、10、20天大鼠脊髓组织SDF-1表达均增加(P均<0.05),且SMIR后大鼠痛阈降低(P<0.01),鞘内注射SDF-1中和性抗体可部分逆转SMIR引起的痛阈下降(P<0.05)。SMIR后1 h脊髓背角LTP升高(P<0.01),脊髓表面给予SDF-1中和性抗体可抑制SMIR导致的LTP升高(P<0.01)。结论脊髓背角SDF-1参与了SMIR致持续性疼痛大鼠中枢敏感化及痛觉过敏,但具体机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 手术后疼痛 基质细胞衍生因子1 中和性抗体 痛觉过敏

原文传递