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猪流行性腹泻病毒变异毒株中和表位区S10原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 王美娇 杨丹 +4 位作者 赵飞宇 李春秋 朱庆贺 邢晓旭 孙东波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第6期27-35,共9页
试验对猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株S1的S10表位区进行表达,并制备抗S10蛋白多克隆抗体。将S10区基因连接至原核表达载体pET-32a(+),经大肠杆菌原核表达系统成功表达pET-32a-S10重组蛋白,重组蛋白分子量约为41 kDa,利用Ni柱进行亲和... 试验对猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株S1的S10表位区进行表达,并制备抗S10蛋白多克隆抗体。将S10区基因连接至原核表达载体pET-32a(+),经大肠杆菌原核表达系统成功表达pET-32a-S10重组蛋白,重组蛋白分子量约为41 kDa,利用Ni柱进行亲和纯化后浓度为2.01mg·mL^(-1)。纯化的重组蛋白经Western blot鉴定后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,并收集小鼠血清,利用间接ELISA方法检测血清中抗体效价可达到1∶12800,该抗体可以结合S10重组蛋白和天然PEDV HM2017毒株。研究成功制备了良好免疫原性的PEDV S10蛋白多克隆抗体,为进一步研究S1蛋白及PEDV诊断方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S1蛋白 中和表位区S10 多克隆抗体
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柯萨奇病毒A组10型VP1蛋白线性中和表位的筛选和鉴定
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作者 甘燕媚 何韵怡 +3 位作者 瞿颖 吴岳 刘启亮 刘洪波 《激光生物学报》 CAS 2024年第2期160-166,共7页
柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)是引起手足口病(HFMD)的常见病原体之一。应用重叠肽法筛选出覆盖CV-A10全长VP1区氨基酸序列的39条候选表位肽段,以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及微量中和抑制试验验证。结果发现,候选表位P6(CV-A10 VP1区第3... 柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)是引起手足口病(HFMD)的常见病原体之一。应用重叠肽法筛选出覆盖CV-A10全长VP1区氨基酸序列的39条候选表位肽段,以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及微量中和抑制试验验证。结果发现,候选表位P6(CV-A10 VP1区第39~53位氨基酸)与CV-A10全病毒抗血清具有高反应性,且在3.91μg/mL的稀释质量浓度时仍具有中和抑制作用,为潜在中和表位。用P6肽免疫小鼠制备相应的抗血清,并以微量中和试验验证其保护能力,结果显示,P6抗血清的几何平均中和效价为1:8.97,可确定P6为CV-A10的中和表位。为了解P6序列在CV-A10型内的保守性,将P6的氨基酸序列与CV-A10各基因型代表株进行比对分析,结果显示,P6在CV-A10型内高度保守,表明P6为CV-A10的广谱性中和表位,可应用于CV-A10表位疫苗的研发。本研究旨在筛选鉴定CV-A10 VP1蛋白上的线性中和表位,为CV-A10表位疫苗的研发和HFMD的防控奠定基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组10型 VP1蛋白 线性中和表位 疫苗 手足口病
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猪流行性腹泻病毒S蛋白中和表位区单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:13
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作者 孙东波 冯力 +3 位作者 时洪艳 陈建飞 崔晓辰 佟有恩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期887-890,共4页
以纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白中和表位(SID)重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了6株稳定分泌抗SID区特异性的单克隆抗体细胞株,分别命名为2C4、3G3、5F8、3G5、6E6和3C... 以纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白中和表位(SID)重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了6株稳定分泌抗SID区特异性的单克隆抗体细胞株,分别命名为2C4、3G3、5F8、3G5、6E6和3C3。6株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶51200、1∶6400、1∶12800、1∶6400、1∶51200和1∶25600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为Κ链。Western blot试验结果显示,6株单克隆抗体均能特异性地识别天然PEDV中的S蛋白。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 中和表位 单克隆抗体
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戊型肝炎病毒基因1型和基因4型中和表位区域分子差异研究 被引量:7
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作者 郭清顺 葛胜祥 +7 位作者 熊君辉 闫强 李少伟 顾颖 徐平东 史维国 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期454-458,共5页
戊型肝炎病毒(HEV)根据易感宿主的差别可以分为两大类:一类只分离自人的H(Human)类,包括HEV-1和HEV-2;一类为人畜共患的Z(Zoonosis)类,包括HEV3和HEV-4。本研究通过比较这两类HEV的ORF2aa368-606区段,发现存在4个类保守的差... 戊型肝炎病毒(HEV)根据易感宿主的差别可以分为两大类:一类只分离自人的H(Human)类,包括HEV-1和HEV-2;一类为人畜共患的Z(Zoonosis)类,包括HEV3和HEV-4。本研究通过比较这两类HEV的ORF2aa368-606区段,发现存在4个类保守的差异位点,均位于HEV的主要中和表位区域aa459~606,分别是aa483、aa492、aa497和aa599;对这四个位点进行定点替换突变,以一组能够捕获HEV-1和/或HEV-4的单克隆抗体比较各种突变体的免疫反应性,结果表明仅aa497的差异造成了这两类HEV中和表位构象的部分差异,提示aa497及其相关的病毒表面结构差异在H类和Z类HEV宿主选择中可能扮演重要角色。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 宿主差异 中和表位
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乙脑病毒E蛋白中和表位与结核杆菌hsp70在大肠杆菌中的融合表达 被引量:5
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作者 葛菲菲 刘佩红 +3 位作者 王建 沈莉萍 徐锋 孙泉云 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期208-212,共5页
根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373-399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建... 根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373-399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建融合表达载体pet-32a-epitope-hsp70。诱导表达后,将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,结果表明该融合蛋白以包含体形式存在。将包含体在8 mol/L的尿素中过夜溶解,然后将上清过柱,获得良好的纯化结果。融合蛋白的分子量为94 kD。Western blot显示该蛋白兼具对JEV和结核杆菌热休克蛋白70(M.Thsp70)的特异抗原性。 展开更多
关键词 乙脑病毒E蛋白中和表位 大肠杆菌 结核杆菌hsp70 融合 包含体
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应用噬菌体随机肽库技术筛选戊型肝炎病毒中和表位模拟肽 被引量:4
6
作者 顾颖 张军 +4 位作者 王颖彬 李少伟 杨海杰 罗文新 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期680-685,共6页
以识别戊型肝炎病毒 (HEV)构象依赖性中和表位的单克隆抗体 8C11、8H3作为固相筛选分子 ,对噬菌体随机 7肽库进行 4轮筛选后 ,随机挑取单克隆噬菌体进行测序。合成优势 7肽序列基因 ,将其插入HBcAgAA78 83位置之中 ,进行原核表达 ,所获... 以识别戊型肝炎病毒 (HEV)构象依赖性中和表位的单克隆抗体 8C11、8H3作为固相筛选分子 ,对噬菌体随机 7肽库进行 4轮筛选后 ,随机挑取单克隆噬菌体进行测序。合成优势 7肽序列基因 ,将其插入HBcAgAA78 83位置之中 ,进行原核表达 ,所获重组蛋白经蛋白印迹实验证实可与相应单抗结合 ,电镜下可见重组蛋白能形成与HBcAg相似的类病毒颗粒。化学合成单抗 8H3筛选出的优势 7肽 ,所获 7肽经生物传感器结合实验证实与单抗8H3结合。这些结果提示用噬菌体 7肽库可以筛选出部分模拟构象性表位的短肽 ,为亚单位疫苗的研制提供了新的思路。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 中和表位 噬菌体肽库 表位模拟肽
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戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位间的构象诱导 被引量:1
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作者 张军 顾颖 +5 位作者 欧山海 王颖彬 叶祥忠 林鉴 葛胜祥 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期104-109,共6页
重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394~606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,... 重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394~606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,8H3对8C11和13D8均不能阻断,而8C11非但不能阻断8H3,反而显著增强了8H3与抗原的结合。用生物传感器进行的抗体与抗原结合的动力学分析也证实了这一现象。这些结果提示,在NE2上8H3表位区域受到抗原上某些结构的掩盖,而8C11与NE2的结合引起了抗原空间结构的改变,导致了掩盖8H3表位的结构的去除和8H3表位的充分暴露。免疫捕获RT PCR发现,8C11同样可以显著增强8H3对天然HEV病毒的捕获能力,提示这种结合诱导的衣壳蛋白空间构象改变在天然HEV病毒颗粒上同样存在。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 衣壳蛋白 中和表位 构象 单克隆抗体
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基于HEV中和表位的基因免疫诱导特异性抗体及中和作用研究 被引量:1
8
作者 王春玲 杨书才 +1 位作者 孟继鸿 王立新 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2010年第3期276-280,共5页
目的:观察基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因免疫是否能在小鼠体内诱导具有中和作用的抗体应答。方法:构建含HEV中和表位p179编码基因的真核表达质粒pVAX-179,以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫,实验组每只小鼠给pVAX-179 100... 目的:观察基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因免疫是否能在小鼠体内诱导具有中和作用的抗体应答。方法:构建含HEV中和表位p179编码基因的真核表达质粒pVAX-179,以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫,实验组每只小鼠给pVAX-179 100μg,并设立空质粒pVAX和HEV-p179蛋白两个对照组。定期采集小鼠血清,ELISA法检测其特异性抗HEV-IgG抗体及其亲合力;以基于PCR的体外中和实验检测抗体的中和活性。结果:pVAX-179质粒基因免疫诱导小鼠体内产生了特异性抗-HEV-IgG抗体,抗体水平于第10周达高峰,OD值为0.55±0.13,与空质粒pVAX组(0.15±0.07)比较差异有统计学意义(P<0.001)。第6周实验组抗体亲合力(ED50为2.5 mo.lL-1)高于蛋白对照组(ED50为2.0 mol.L-1),基因免疫促进了抗体亲合力的成熟;体外中和实验证实产生的特异性抗体能够阻止HEV感染人肝癌细胞7721,具有中和HEV的活性。结论:基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因疫苗pVAX-179能够在小鼠体内诱导产生具有中和作用的抗体应答。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 中和表位 基因疫苗 抗体应答 中和作用
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HPV31型L2保守中和表位可诱发广谱中和抗体 被引量:1
9
作者 张婷 陈雪 +3 位作者 刘洪洋 周艳 王志荣 许雪梅 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第11期1552-1556,共5页
目的研究人乳头瘤病毒31型(HPV31)次要外壳蛋白L2保守中和表位的免疫活性及诱发抗体的中和范围。方法合成法获得HPV31 L2 aa.17-40多肽,用EDC法偶联KLH,联合弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,用假病毒中和实验检测免疫血清对来自α4、α7、α9... 目的研究人乳头瘤病毒31型(HPV31)次要外壳蛋白L2保守中和表位的免疫活性及诱发抗体的中和范围。方法合成法获得HPV31 L2 aa.17-40多肽,用EDC法偶联KLH,联合弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,用假病毒中和实验检测免疫血清对来自α4、α7、α9、α10及β1亚属的多个HPV型别的中和抗体。结果 HPV31 L2-KLH偶联肽可在新西兰大白兔体内诱发针对至少17种HPV型别的广谱中和抗体,其中HPV31的中和抗体滴度最高,HPV5/45/57的次之。结论首次发现HPV31 L2保守中和表位免疫血清具有广谱中和活性,为基于该表位的广谱HPV疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒31型 L2保守中和表位 广谱中和抗体
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基于戊型肝炎病毒中和表位的基因免疫表达载体的构建与鉴定
10
作者 翟理杰 王立新 +4 位作者 房雪峰 梁久红 林陵 赵宇 孟继鸿 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2004年第2期71-74,78,共5页
目的 :获得戊型肝炎病毒 (HEV )中和表位 p166的编码基因 ,构建基于该中和表位的HEV基因免疫的真核表达载体。方法 :应用RT PCR方法从粪便标本中扩增获得HEVORF2中G64 61~G70 3 5片段 ,通过比较核酸序列同源性鉴定其基因型 ,PCR方法扩... 目的 :获得戊型肝炎病毒 (HEV )中和表位 p166的编码基因 ,构建基于该中和表位的HEV基因免疫的真核表达载体。方法 :应用RT PCR方法从粪便标本中扩增获得HEVORF2中G64 61~G70 3 5片段 ,通过比较核酸序列同源性鉴定其基因型 ,PCR方法扩增该片段中HEV中和表位 p166的编码基因 ,经酶切后克隆于真核表达载体 pTR42 1质粒 ,并以PCR、酶切和DNA测序加以鉴定。结果 :成功克隆了 p166的编码基因 ,其基因型别为Ⅳ型 ;经酶切鉴定和DNA测序证实p166的编码基因已成功插入pTR42 1质粒 ,且核酸序列、读码框架正确。结论 :成功构建含Ⅳ型HEV中和表位编码基因的重组质粒 ,为后续基于HEV中和表位基因免疫的研究奠定基础。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 中和表位 基因免疫 真核表达载体
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奈瑟氏菌属IgA1蛋白酶中和表位基因位点可能集中存在于iga的2601—2722序列
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作者 许福明 马文煜 +2 位作者 项秉懿 阎岩 白光春 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 1996年第3期60-60,共1页
奈瑟氏菌属IgA1蛋白酶中和表位基因位点可能集中存在于iga的2601—2722序列许福明,马文煜,项秉懿,阎岩,白光春(西安第四军医大学微生物学教研室,西安第四军医大学生化教研室,西安710032)IgA1蛋白酶是... 奈瑟氏菌属IgA1蛋白酶中和表位基因位点可能集中存在于iga的2601—2722序列许福明,马文煜,项秉懿,阎岩,白光春(西安第四军医大学微生物学教研室,西安第四军医大学生化教研室,西安710032)IgA1蛋白酶是病原性奈瑟氏菌属产生的一种与致病作... 展开更多
关键词 淋病奈氏球菌 蛋白酶 中和表位 基因 IGA1
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三个HIV-1广谱中和表位与HBV S抗原融合表达可诱导小鼠特异性抗体应答 被引量:4
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作者 李学仁 陈红 +6 位作者 王文 邓瑶 齐香荣 高瑛瑛 孟昕 谭文杰 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期260-267,共8页
为了增强HIV-1交叉中和表位的免疫原性,本研究使用PCR克隆技术将HIV-1三个具有一定广谱中和活性的线性抗原表位ELDKWA(简称2F5)、NWFDIT(简称4E10)和GPGRAFY(简称447-52D)基因分别融合到HBV S基因的3'末端,构建了分别表达这三种融... 为了增强HIV-1交叉中和表位的免疫原性,本研究使用PCR克隆技术将HIV-1三个具有一定广谱中和活性的线性抗原表位ELDKWA(简称2F5)、NWFDIT(简称4E10)和GPGRAFY(简称447-52D)基因分别融合到HBV S基因的3'末端,构建了分别表达这三种融合基因的天坛株重组痘苗病毒疫苗RVJ1175S-2F5、RVJ1175S-4E10和RVJ1175S-447-52D,使用这三种重组痘苗病毒感染的细胞培养上清液经分离纯化制备了三种相应的蛋白亚单位疫苗PS-2F5、PS-4E10和PS-447-52D,对重组痘苗病毒和亚单位疫苗中三种融合抗原的生物学及免疫学特性进行了比较研究。PCR和测序结果表明,三种融合基因序列正确重组到痘苗病毒TK区,HBsAg的ELISA检测表明三种融合蛋白有效表达并分泌到细胞培养上清液中,SDS-PAGE凝胶电泳显示三种纯化后的融合蛋白均含分子量为23kD和27kD两种典型HBsAg条带,Western blot证明这两个条带均能与HBsAg抗体反应,并分别能与三种表位相应的HIV-1单抗2F5、4E10和447-52D反应。小鼠免疫结果显示,三种重组痘苗病毒疫苗和三种蛋白亚单位疫苗均能诱发较高水平的HBsAg抗体和相应HIV-1交叉中和表位抗体,蛋白亚单位疫苗诱生的这两类抗体均明显高于对应的重组痘苗病毒疫苗。这些结果为进一步研究三种表位抗体的中和活性和通过不同类型疫苗联合免疫进一步增强其免疫效果研究奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1 中和表位 重组痘苗病毒 免疫原性
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呼吸道合胞病毒融合蛋白(F蛋白)结构及中和表位的研究进展 被引量:7
13
作者 曹健力 张伟 +1 位作者 夏宁邵 郑子峥 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1569-1574,共6页
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV),是造成全世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的主要原因之一,2岁前的幼儿几乎全部感染过RSV[1],造成肺炎及毛细支气管炎等呼吸道疾病[2]。0~2个月的婴儿在感染RSV后易出现严重的病症[3]... 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV),是造成全世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的主要原因之一,2岁前的幼儿几乎全部感染过RSV[1],造成肺炎及毛细支气管炎等呼吸道疾病[2]。0~2个月的婴儿在感染RSV后易出现严重的病症[3]。而在最新的全球疾病死亡率分析中,1月到1周岁的儿童死亡中约有6.7%是由RSV感染造成的[4]。青壮年人群感染后病症较轻,但在老年人群中会出现严重病症及死亡病例[5]。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 病毒融合蛋白 中和表位 F蛋白 下呼吸道感染 呼吸道疾病 RSV感染 结构
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戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其中和表位的结构研究进展 被引量:1
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作者 郑明华 王凯航 +3 位作者 李琼 张晓 李少伟 夏宁邵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期825-831,共7页
戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,被证实为人兽共患病,该病症对免疫力低下人群和已有基础性肝病的患者的危害更为显著。戊肝病毒主要通过粪口途径传播,猪是其主要的天然宿主。近年来,关于戊肝病毒的... 戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,被证实为人兽共患病,该病症对免疫力低下人群和已有基础性肝病的患者的危害更为显著。戊肝病毒主要通过粪口途径传播,猪是其主要的天然宿主。近年来,关于戊肝病毒的衣壳蛋白及其表位结构的研究取得了重要的进展,对于戊肝病毒的病毒学研究和戊肝疫苗的机制探讨起着重要的指导意义。本文将综述HEV病毒衣壳蛋白的结构研究和中和表位的结构基础,着重说明戊肝病毒中和表位存在型特异性和型交叉两种特征,提示型交叉表位与人兽共患现象的关系。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 人兽共患 结构 中和表位
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人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体的构建 被引量:1
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作者 李金波 朱雷 +5 位作者 戚扬 孙杰 王强 苏海滨 迟淑平 程云 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期178-184,共7页
目的构建人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达目的蛋白。方法合成人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位的串联基因,克隆入pET-28a(+)载体中,构建重组表达载体pET-28a-H3,经酶切鉴定和DNA序列分析后,转化... 目的构建人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达目的蛋白。方法合成人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位的串联基因,克隆入pET-28a(+)载体中,构建重组表达载体pET-28a-H3,经酶切鉴定和DNA序列分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并进行ELISA和Westernblot鉴定。结果重组载体pET-28a-H3酶切片段大小和DNA序列分析与预期结果一致。表达的目的蛋白相对分子质量约9400,与相应的多克隆抗体反应性良好。结论已成功构建人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体pET-28a-H3,并表达了目的蛋白,为制备单克隆和多克隆抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 人甲型流感病毒 H3N2亚型 中和表位 串联基因 原核表达
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人巨细胞病毒包膜糖蛋白B主要中和表位单克隆抗体的制备 被引量:1
16
作者 何赛 廖旻晶 +8 位作者 靳晓瑞 邱义兰 李晓丹 郑姣 唐娜 罗焕 梁湘辉 郭向荣 刘如石 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第1期16-22,共7页
人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并将其... 人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并将其与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒;用IPTG诱导表达重组蛋白,采用Western-blot进行特异性鉴定;将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,然后筛选制备AD13单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)。12%SDS-PAGE电泳鉴定表明重组蛋白表达成功,其相对分子质量约为35 kD;Western-blot和间接ELISA结果说明,重组AD13蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性;克隆化后筛选到5个AD13单克隆抗体细胞株,经间接ELISA鉴定,与AD13抗原有良好的特异性反应。上述研究为研发HCMV快速诊断试剂盒提供了原料,也为研究HCMV亚单位疫苗提供了相关的基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒(HCMV) 包膜糖蛋白B(g B) 中和表位 单克隆抗体(m Ab) 酶联免疫吸附反应(ELISA) 免疫反应性
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PRRSV GP5和M抗原中和表位的融合表达与纯化以及间接ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 李雷斌 李晓霞 +9 位作者 王睿男 周智 刘玉良 赵柏林 孙航 冯冰 陈玲 王传彬 李义平 孙雨 《中国动物检疫》 CAS 2022年第3期71-79,共9页
为建立检测猪血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的间接ELISA方法,分析了PRRSV结构蛋白GP5和M的二级结构抗原指数、抗原性、亲水性、表面可及性以及潜在中和表位等参数,选取GP5的47~61、143~156和186~199位氨基酸,M蛋白的63~7... 为建立检测猪血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的间接ELISA方法,分析了PRRSV结构蛋白GP5和M的二级结构抗原指数、抗原性、亲水性、表面可及性以及潜在中和表位等参数,选取GP5的47~61、143~156和186~199位氨基酸,M蛋白的63~70、133~146和156~169位氨基酸作为免疫原,构建带接头序列的GP5/M中和表位融合表达质粒;通过优化大肠杆菌表达和蛋白纯化条件,免疫印迹鉴定GP5/M特异抗原,获得了可溶性的GP5/M中和表位融合蛋白。基于纯化的GP5/M中和表位融合抗原,建立了检测猪血清中PRRSV中和抗体的间接ELISA方法。采用建立的间接ELISA方法对6种其他猪源病原阳性血清进行检测,结果均无交叉反应;敏感性试验显示,将血清中和试验鉴定的PRRSV阳性对照血清稀释到1:12800时仍呈阳性;重复性试验显示,批内重复变异系数为2%~10%,批间重复变异系数小于15%;符合性试验显示,同时用建立的间接ELISA方法和血清中和试验对420份临床血清样品进行检测,结果符合率为95.24%。结果表明,该方法操作简单、耗时短,敏感性、特异性、重复性及符合性均良好,具有较好的应用推广价值。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 中和表位抗原 融合GP5/M ELISA
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H3N2流感病毒血凝素球状头部的保守中和表位
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作者 房明 《微生物学免疫学进展》 2015年第5期59-59,共1页
一些针对流感病毒血凝素的中和抗体主要通过抑制血凝素和宿主细胞表面受体的结合而发挥作用,还有一些中和抗体可以阻止低pH介导的血凝素的构象改变,这种构象改变对膜融合是必须的。总的来说,前一种抗体主要结合在球状HA1的顶端,其... 一些针对流感病毒血凝素的中和抗体主要通过抑制血凝素和宿主细胞表面受体的结合而发挥作用,还有一些中和抗体可以阻止低pH介导的血凝素的构象改变,这种构象改变对膜融合是必须的。总的来说,前一种抗体主要结合在球状HA1的顶端,其针对的毒株特异性不强,而后一种抗体主要结合在HA2的中间,有较强的毒株特异性。在本研究中,我们分析了一种具有广泛中和作用的抗H3 N2流感病毒的人源抗体F005-126的表位及功能。 展开更多
关键词 流感病毒 中和表位 血凝素 球状 中和抗体 保守 头部 细胞表面受体
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添加脂质体和明矾佐剂的戊肝病毒的重组中和表位蛋白免疫小鼠的不同免疫效应
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作者 瓦晓霞 《微生物学免疫学进展》 2017年第5期58-58,共1页
在发展中国家,戊型肝炎病毒是引起成人散发型肝炎和造成孕妇高死亡率的水源性流行病的优势病原体。疫苗的研发主要关注病毒开放阅读框-2的结构衣壳蛋白。作者成功地评价了小鼠和恒河猴体内的以脂质体为佐剂的重组中和表位蛋白,即开放阅... 在发展中国家,戊型肝炎病毒是引起成人散发型肝炎和造成孕妇高死亡率的水源性流行病的优势病原体。疫苗的研发主要关注病毒开放阅读框-2的结构衣壳蛋白。作者成功地评价了小鼠和恒河猴体内的以脂质体为佐剂的重组中和表位蛋白,即开放阅读框-2的一部分的免疫原性,它编码458~607位氨基酸。用5μg/次的剂量肌注小鼠两次,分别比较佐剂、中和表位蛋白、添加脂质体佐剂/明矾佐剂的免疫效应。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 衣壳蛋白 免疫小鼠 中和表位 免疫效应 脂质体 佐剂 重组
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用放射免疫沉淀试验比较不同IBDV毒株的中和表位
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作者 Wher.,PL 王川庆 《国外兽医学(畜禽传染病)》 1996年第3期47-49,共3页
用单克隆抗体(MAb)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)不同毒株中和表位的相关性进行了分析。MAb B69能中和同源病毒D78株,但不中和MD及IBDV Del-A变异株。而MAb 33E8和R63能中和D78株和MD... 用单克隆抗体(MAb)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)不同毒株中和表位的相关性进行了分析。MAb B69能中和同源病毒D78株,但不中和MD及IBDV Del-A变异株。而MAb 33E8和R63能中和D78株和MD及Del-A变异株。在体外将Dcl-A株VP2基因和一个10^3bp片段的cDNA克隆进行翻译,得到6种多肽,它们代表了一个全长产物(35.5kd)和5份切割片段。用MAb B69。 展开更多
关键词 鸡病 雏鸡 IBDV 中和表位 放射免疫沉淀
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