激活嘌呤回补途径提高淀粉酶产色链霉菌丰加霉素产量

1

作者 张子轩 宋阳 +1 位作者 申屠旭萍 俞晓平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2023年第4期851-860,共10页

丰加霉素是核苷类抗生素家族中的一员,它在抑制真菌方面表现出很高的活性,在植物病害生物防治领域具有重要的应用潜力。淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628是丰加霉素的生产菌株之一,但由于野生菌产量较低,难以实... 丰加霉素是核苷类抗生素家族中的一员,它在抑制真菌方面表现出很高的活性,在植物病害生物防治领域具有重要的应用潜力。淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628是丰加霉素的生产菌株之一,但由于野生菌产量较低,难以实现在工业水平进行丰加霉素的发酵生产。通过对代谢途径分析发现,嘌呤回补途径能够影响丰加霉素合成。为了阐明嘌呤回补途径调控基因xdhR对淀粉酶产色链霉菌丰加霉素合成的影响,本研究通过基因敲除技术探究xdhR基因对丰加霉素产量、丰加霉素合成基因簇转录水平、菌丝分化、抑菌效果等方面的影响。摇瓶发酵试验表明,敲除xdhR基因能够显著提高淀粉酶产色链霉菌1628的丰加霉素产量,发酵至96 h时,重组菌中丰加霉素产量达到最高287.8 mg/L,产量较野生菌株提高约114.0%。q PCR试验表明,xdhR基因能够激活嘌呤回补途径基因的转录和丰加霉素合成基因簇基因的转录。同时,xdhR基因能够改变菌落生长形态。xdhR基因敲除菌株发酵液对水稻纹枯病菌和黄瓜枯萎病菌的抑制率分别提高到69.3%和100%。以上结果证明XdhR参与并调控淀粉酶产色链霉菌1628的丰加霉素合成,并为其他生防菌株提高丰加霉素产量提供了良好的理论依据。 展开更多

关键词 丰加霉素 链霉菌 嘌呤回补途径 生物农药

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丰加霉素对黄瓜立枯丝核菌的拮抗作用 被引量：20

2

作者 于冰 申屠旭萍 俞晓平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期373-377,共5页

采用菌丝生长速率法和盆栽试验法,研究了淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes胞外代谢产物丰加霉素(toyocamycin)对黄瓜立枯丝核菌Rhizoctonia solani的拮抗作用。结果表明:丰加霉素对立枯丝核菌菌丝生长和菌核形成有明... 采用菌丝生长速率法和盆栽试验法,研究了淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes胞外代谢产物丰加霉素(toyocamycin)对黄瓜立枯丝核菌Rhizoctonia solani的拮抗作用。结果表明:丰加霉素对立枯丝核菌菌丝生长和菌核形成有明显的抑制作用,抑制菌丝生长的EC50值为1.67mg.L-1,浓度为2.20mg.L-1时能完全抑制菌核形成。盆栽试验结果表明,丰加霉素对黄瓜苗立枯病有明显的保护和治疗作用。喷施19.54mg.L-1丰加霉素14d后,对黄瓜苗立枯病的治疗效果为71.91%,显著高于对照霉灵1000倍液的治疗效果(35.83%);喷施19.54mg.L-1丰加霉素14d后,预防效果为51.06%,与对照无显著差异。施药后21d和14d的治疗效果和保护效果均相当;同时19.54mg.L-1和9.77mg.L-1的丰加霉素对黄瓜立枯病的作用效果相当。 展开更多

关键词 淀粉酶产色链霉菌 丰加霉素 立枯丝核菌 生防作用

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HPLC法测定发酵液中丰加霉素的研究 被引量：7

3

作者 申屠旭萍 于冰 +2 位作者 李丹婷 王康泉 俞晓平 《中国计量学院学报》 2013年第3期215-218,共4页

丰加霉素是核苷类抗生素的一种,多由链霉菌发酵产生.本研究建立了放线菌发酵液中丰加霉素的高效液相色谱检测方法,采用SHIMADZU C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),甲醇为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱,洗脱程序为0～15min,5%～37%A;15... 丰加霉素是核苷类抗生素的一种,多由链霉菌发酵产生.本研究建立了放线菌发酵液中丰加霉素的高效液相色谱检测方法,采用SHIMADZU C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),甲醇为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱,洗脱程序为0～15min,5%～37%A;15～30min,37%～100%A;30～40min,100%～5%A;流速1.0mL·min-1,检测波长279nm,柱温30℃.该色谱条件下,丰加霉素能得到良好的分离,定量法的线性范围为5～150mg·L-1(r=0.999 7),平均加样回收率为101.01%,RSD(%)为0.62.本测定方法为今后高产丰加霉素的菌种选育和发酵工艺等研究提供了一套准确的检测技术. 展开更多

关键词 高效液相色谱 丰加霉素 梯度洗脱

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淀粉酶产色链霉菌1628中toyF基因的克隆与丰加霉素合成相关性 被引量：1

4

作者 徐显皓 陶立彬 +1 位作者 马正 俞晓平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期511-517,共7页

为考察编码腺苷琥珀酸裂解酶toyF基因对淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628合成丰加霉素的影响,本研究设计简并引物,首次克隆获得了菌株1628的toyF基因,并构建了敲除质粒p KC1132-toyF’,通过接合转移转入菌株1628... 为考察编码腺苷琥珀酸裂解酶toyF基因对淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628合成丰加霉素的影响,本研究设计简并引物,首次克隆获得了菌株1628的toyF基因,并构建了敲除质粒p KC1132-toyF’,通过接合转移转入菌株1628,获得toyF基因缺失株1628-ΔTOYF。结果表明,与原始菌株1628相比,缺失株1628-ΔTOYF中TOYF的酶活和丰加霉素产量分别降低66.7%、87.5%。在缺失株1628-ΔTOYF中回补表达toyF基因构建了重组菌1628-ΔTOYF/toyF。重组菌1628-ΔTOYF/toyF中的TOYF酶活和丰加霉素产量,较缺失株1628-ΔTOYF分别提高了2.7和8.3倍。由此可见,toyF基因是参与菌株1628生物合成丰加霉素的关键酶基因。本文toyF基因的克隆及其功能研究,为克隆完整的丰加霉素生物合成基因簇及其丰加霉素生物合成机制的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 淀粉酶产色链霉菌1628 toyF基因 基因敲除 丰加霉素 基因簇

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丰加霉素在内质网应激中的研究进展及与抗肿瘤相关机制研究 被引量：1

5

作者 田启泽 胡瑞成 戴爱国 《临床与病理杂志》 2016年第2期204-208,共5页

丰加霉素(Toyocamycin)是一种嘌呤核苷类似物,最早在链霉菌培养基中被发现,能影响多种原核生物及真核生物的生长代谢,具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫以及抗肿瘤的作用。由于其具有较强的毒性作用,因此临床应用受限。最近研究发现丰加霉素... 丰加霉素(Toyocamycin)是一种嘌呤核苷类似物,最早在链霉菌培养基中被发现,能影响多种原核生物及真核生物的生长代谢,具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫以及抗肿瘤的作用。由于其具有较强的毒性作用,因此临床应用受限。最近研究发现丰加霉素与内质网应激密切相关,通过干扰未折叠蛋白反应过程而起到显著的抗肿瘤作用,提示丰加霉素在抗肿瘤方面有望出现新的进展,本文就丰加霉素作用机制方面的研究及其进展综述如下。 展开更多

关键词 丰加霉素 内质网应激 未折叠蛋白反应 肿瘤 抗生素 凋亡

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AdpA_(sd)对于淀粉酶产色链霉菌1628的形态分化和丰加霉素合成的影响

6

作者 王娟 罗帅 +1 位作者 马正 俞晓平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期616-624,共9页

为阐明Adp A与淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628形态分化和合成丰加霉素(Toyocamycin,TM)的相关性。本研究设计简并引物成功克隆了来源于淀粉酶产色链霉菌1628大小为1263 bp的adp Asd基因(Gen Bank登录号:JX8474... 为阐明Adp A与淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628形态分化和合成丰加霉素(Toyocamycin,TM)的相关性。本研究设计简并引物成功克隆了来源于淀粉酶产色链霉菌1628大小为1263 bp的adp Asd基因(Gen Bank登录号:JX847412)。结果发现,Adp Asd的氨基酸序列与灰色链霉菌Streptomyces griseus的Adp Ag及天然色链霉菌Streptomyces coelicolor的Adp Ac的同源性分别为80.7%和78.9%。将adp Asd基因置于载体p IB139启动子Perm E*下游,构建了重组质粒p IB139-adp Asd,将其通过接合转移法分别转入菌株1628-T15(高产TM)和1628-T62(低产TM,孢子合成受阻)中,获得重组菌1628-T15A和1628-T62A。结果表明,与出发菌株1628-T62相比,重组菌1628-T62A产孢能力得到一定程度的恢复;重组菌1628-T15A与出发菌株1628-T15相比,整体形态无明显变化。摇瓶发酵试验表明,重组菌1628-T62A较出发菌株1628-T62的TM合成能力显著提高,最终TM产量提高了近3倍,而重组菌1628-T15A的TM产量比出发菌株1628-T15仅有小幅提升。以上结果证实adp Asd参与淀粉酶产色链霉菌1628形态分化以及TM合成,为今后深入理解adp Asd的分子调节机制奠定了基础。 展开更多

关键词 淀粉酶产色链霉菌1628 adpAsd 形态分化 丰加霉素

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透明颤菌血红蛋白基因在淀粉酶产色链霉菌中的表达及对合成丰加霉素的影响 被引量：2

7

作者 马正 刘金秀 +2 位作者 申屠旭萍 边亚琳 俞晓平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1175-1185,共11页

【目的】丰加霉素(Toyocamycin)是核苷类抗生素家族的重要成员,其在农业植物病害防治领域具有巨大的应用价值。为改善丰加霉素生产菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes 1628)发酵过程溶氧限制,旨在实现vgb在S.diastato... 【目的】丰加霉素(Toyocamycin)是核苷类抗生素家族的重要成员,其在农业植物病害防治领域具有巨大的应用价值。为改善丰加霉素生产菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes 1628)发酵过程溶氧限制,旨在实现vgb在S.diastato-chromogenes 1628中的表达以促进丰加霉素的生物合成。【方法】首先以gfp为报告基因检测红霉素抗性基因启动子Perm*在S.diastatochromogenes 1628中的转录活性,再利用PermE*实现vgb的异源表达。【结果】在荧光显微镜下,重组菌1628-GFP菌丝可发出稳定明亮的绿色荧光,表明启动子PermE*在菌株1628中可有效启动外源基因的表达;通过一氧化碳结合差光谱分析显示VHb具有生物学活性;摇瓶实验表明:与原始菌株相比,重组菌可促进丰加霉素产量的提高,在中度和高度限氧条件下促进效果尤为明显,提高幅度分别为48.9%和104.5%。PCR和发酵效价检测显示重组菌具有良好的遗传稳定性。【结论】成功实现了vgb在S.diastatochromogenes 1628中的表达,有效提高了其丰加霉素的合成水平,为丰加霉素的工业化生产提供了基础条件。 展开更多

关键词 淀粉酶产色链霉菌 丰加霉素 绿色荧光蛋白 透明颤菌血红蛋白 红霉素抗性基因启动子

原文传递

低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制研究

8

作者 杨漾 肖敏 +3 位作者 许思苗 龚泉 姜立军 周剑峰 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期388-394,共7页

目的初步探讨低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制。方法甲基纤维素集落形成实验检测低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成能力的影响；CCK-8法检测低浓度丰加霉素对K562细胞的生长抑制率；AnnexinV／PI双染... 目的初步探讨低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制。方法甲基纤维素集落形成实验检测低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成能力的影响；CCK-8法检测低浓度丰加霉素对K562细胞的生长抑制率；AnnexinV／PI双染流式细胞仪检测低浓度丰加霉素作用下的K562细胞凋亡率；PI单染流式细胞仪检测药物作用后细胞的周期分布改变；Western免疫印迹和实时定量PCR检测周期相关分子表达水平变化。结果低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞具有较强的集落形成抑制作用；可明显抑制K562细胞的生长，呈时间一剂量依赖性；尽管短时间（48h）的药物处理仅出现轻度的细胞凋亡和周期阻滞，但10nmol/L和30nmol/L的丰加霉素长时间（7d）作用后，K562细胞G0／G1期比例分别是（62．3±1．7）％和（76．9±0．7）％，与对照组（38．9±1．1）％相比差异具有高度统计学意义（P〈0．01）；低浓度丰加霉素长时间作用后诱导K562细胞周期相关分子P16蛋白水平和转录水平的高表达。结论丰加霉素在低浓度，长时间作用于人白血病K562细胞后，具有较强的集落形成抑制和生长抑制作用，此作用可能与诱导细胞周期相关分子p16高表达，导致细胞G0／G1期阻滞有关。 展开更多

关键词 丰加霉素 K562细胞 集落形成 G0/G1期阻滞 P16蛋白

原文传递

基于基因组挖掘的农抗120活性成分制霉菌素和丰加霉素的发现和鉴定 被引量：4

9

作者 王俊博 孔令新 +3 位作者 乔永健 张大杉 邓子新 由德林 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期3076-3086,共11页

【目的】分析刺孢吸水链霉菌北京变种(农抗120产生菌)基因组和次级代谢产物组分,研究并鉴定农抗120产生菌中未被发现的活性组分。【方法】利用antiSMASH在线分析农抗120产生菌Streptomyces hygrospinosusvar.beijingensis基因组信息,锁... 【目的】分析刺孢吸水链霉菌北京变种(农抗120产生菌)基因组和次级代谢产物组分,研究并鉴定农抗120产生菌中未被发现的活性组分。【方法】利用antiSMASH在线分析农抗120产生菌Streptomyces hygrospinosusvar.beijingensis基因组信息,锁定可能的制霉菌素和丰加霉素生物合成基因簇。利用HPLC和LC-MS等分析方法对农抗120产生菌发酵产物进行分析,同时利用制霉菌素和丰加霉素标准品作为对照,以鉴定该菌株代谢组分中的次级代谢产物。此外,通过构建目标基因簇大片段缺失突变株,并对所得突变株发酵产物进行检测,以确定生物合成基因簇与目的代谢产物的对应关系。【结果】本研究综合利用基因组序列分析、基因缺失突变株构建以及代谢产物检测方法,鉴定了农抗120产生菌中制霉菌素和丰加霉素两种活性成分,并确定了负责这些化合物合成的基因簇。【结论】本研究所构建的多重基因簇失活突变株为挖掘刺孢吸水链霉菌北京变种更多的天然次级代谢产物奠定了基础。 展开更多

关键词 农抗120 刺孢吸水链霉菌北京变种 制霉菌素 丰加霉素 生物合成

原文传递

根际放线菌I06-03431产生的核苷类抗生素3431的研究 被引量：12

10

作者 陈伊 李舟 +6 位作者 魏玉珍 张玉琴 李秋萍 韩宁宁 周建琴 高红 孙承航 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期17-20,共4页

在抗稻瘟菌农用抗生素的筛选过程中,从60多种中药植物根际土壤获得的放线菌中发现,放线菌I06-03431的发酵液具有强抗稻瘟菌的活性。经色谱分离纯化,获得活性成分3431,经光谱学数据分析,证明3431为已知核苷类抗生素,丰加霉素(Toyocamycin... 在抗稻瘟菌农用抗生素的筛选过程中,从60多种中药植物根际土壤获得的放线菌中发现,放线菌I06-03431的发酵液具有强抗稻瘟菌的活性。经色谱分离纯化,获得活性成分3431,经光谱学数据分析,证明3431为已知核苷类抗生素,丰加霉素(Toyocamycin)。进一步生物活性研究表明,0.005μg/mL的3431能够抑制稻瘟菌孢子萌发和菌丝生长。另外,3431还具有与植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤(6-BA)一样的抑制拟南芥根生长的活性。 展开更多

关键词 根际 放线菌 稻瘟菌 丰加霉素 植物生长调节剂

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淀粉酶产色链霉菌1628发酵培养基及发酵条件的优化 被引量：2

11

作者 李丹婷 袁小枫 +1 位作者 申屠旭萍 俞晓平 《中国计量学院学报》 2015年第1期99-104,共6页

淀粉酶产色链霉菌1628(Streptomyces diastatochromogenes)是一株具有广阔应用前景的生防菌株,其合成的主要活性物质为核苷类抗生素——丰加霉素.为了提高淀粉酶产色链霉菌的发酵水平,本研究采用单因素和正交实验设计,对菌株1628的发酵... 淀粉酶产色链霉菌1628(Streptomyces diastatochromogenes)是一株具有广阔应用前景的生防菌株,其合成的主要活性物质为核苷类抗生素——丰加霉素.为了提高淀粉酶产色链霉菌的发酵水平,本研究采用单因素和正交实验设计,对菌株1628的发酵培养基和发酵条件进行了优化,优化后的最佳培养基配方为:可溶性淀粉1.5%、黄豆粉5%、FeSO40.1%、CaCO30.5%、NH4NO3 0.3%、KH2PO4 0.3%,最适初始pH7.0.在供试的发酵条件内,装液量60mL/250mL,发酵温度28℃,摇床转速180r/min,发酵时间为92h.活性物质丰加霉素的产量最高156.17mg·L-1,比优化前提高了3.3倍. 展开更多

关键词 淀粉酶产色链霉菌 发酵优化 丰加霉素 单因素 正交设计

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抗生素C_(666)A的分离与结构鉴定 被引量：1

12

作者 鲁敏 陈汝贤 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2002年第2期132-133,共2页

C666是一株通过精原细胞法筛选出来的链霉菌.其发酵液中具有3个抗菌作用不同的组分,其中仅抗生素C666A有抗精原细胞的活性,同时具有抗真菌活性.本文仅报告3个组分的分离及A组分的化学鉴别,其余两组分因发酵含量甚微而未做鉴别. 1 材料... C666是一株通过精原细胞法筛选出来的链霉菌.其发酵液中具有3个抗菌作用不同的组分,其中仅抗生素C666A有抗精原细胞的活性,同时具有抗真菌活性.本文仅报告3个组分的分离及A组分的化学鉴别,其余两组分因发酵含量甚微而未做鉴别. 1 材料和仪器 GDX-104大孔吸附树脂, 颗粒活性碳,Sephadex LH-20(上海生化试剂厂进口,分装).所用试剂均为分析纯.Shimadzu UV-240紫外分光光度仪;Shimadzu IR-435红外光谱仪;JEOL DX-300质谱仪;JEOL FX-100磁共振仪(100兆). 展开更多

关键词 结构鉴定 抗生素C666A 分子结构 丰加霉素

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