流感病毒RNA聚合酶串联亲和纯化方法的建立 被引量：2

1

作者 李印 邓国华 +3 位作者 崔佳莹 于洋 丁晴薇 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期841-844,共4页

为建立流感病毒RNA聚合酶的串联亲和纯化方法,本实验由鸡胚尿囊液中提取病毒核酸,经过RT-PCR和常规PCR方法扩增禽流感病毒株A/Duck/Guangxi/35/01(H5N1)的PB1、PB2和PA的cDNA。分别将PB2基因连接于pcDNATAP载体中,PB1和PA基因连接于pcDN... 为建立流感病毒RNA聚合酶的串联亲和纯化方法,本实验由鸡胚尿囊液中提取病毒核酸,经过RT-PCR和常规PCR方法扩增禽流感病毒株A/Duck/Guangxi/35/01(H5N1)的PB1、PB2和PA的cDNA。分别将PB2基因连接于pcDNATAP载体中,PB1和PA基因连接于pcDNA3A载体中构建了pcDNA-35PB2TAP、pcDNA-35PB1和pcDNA-35PA重组质粒。将构建的真核表达重组质粒共转染293T细胞,经过串联亲和纯化方法获得流感病毒依赖RNA的RNA聚合酶复合体(RdRp)。利用RNA体外合成试验验证获得的RdRp具有生物学活性。 展开更多

关键词 H5亚型禽流感病毒 RNA聚合酶复合体 串联亲和纯化

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串联亲和纯化技术及其应用 被引量：3

2

作者 洪奇华 陈安国 《细胞生物学杂志》 CSCD 2006年第5期694-698,共5页

串联亲和纯化(tandemaffinitypurification,TAP)是一种能快速研究体内蛋白质相互作用的新技术,经过两步特异性亲和纯化,可快速得到生理条件下与靶蛋白质存在真实相互作用的蛋白质。TAP方法最初用于酵母中,因其具通用性、高效性、高纯度... 串联亲和纯化(tandemaffinitypurification,TAP)是一种能快速研究体内蛋白质相互作用的新技术,经过两步特异性亲和纯化,可快速得到生理条件下与靶蛋白质存在真实相互作用的蛋白质。TAP方法最初用于酵母中,因其具通用性、高效性、高纯度及假阳性低等特点得到了快速发展,至今已成功运用于许多其他生物。现主要介绍TAP方法的原理、TAP标签及其在不同物种中的应用。 展开更多

关键词 蛋白质相互作用 串联亲和纯化 标签 应用

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将串联亲和纯化标签敲入耻垢分枝杆菌基因组的方法研究(英文)

3

作者 赵秀芹 夏强 +1 位作者 赵丽丽 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1167-1172,共6页

目的利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将串取亲和纯化(TAP)标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5’端非编码区片段AASF5和a... 目的利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将串取亲和纯化(TAP)标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5’端非编码区片段AASF5和aasf基因下游3’端非编码区片段AASF3,利用重叠PCR将以上4个片段拼接在一起,形成最终的敲入片段A5THA3;将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;将构建好的敲入片段转入感受态细胞,使其重组入耻垢分枝杆菌基因组中,PCR和DNA测序鉴定敲入效果。结果 PCR与DNA测序结果证实带有TAP标签的A5THA3片段已成功敲入耻垢分枝杆菌基因组中。结论成功将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组,为下一步进行目的基因功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 重组工程系统 串联亲和纯化标签 敲入片段 重叠PCR 耻垢分枝杆菌

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串联亲和纯化技术筛选肠病毒71型3D聚合酶的相互作用蛋白 被引量：5

4

作者 江月 丛浩龙 +1 位作者 王健 李梨 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期526-529,共4页

目的利用串联亲和纯化技术筛选与肠病毒71型3D聚合酶相互作用的宿主细胞蛋白。方法利用RT-PCR方法从EV71BrCr株全基因组中获得3D聚合酶全长基因,构建pcDNA3.0-3D-Flag-HA真核表达载体并转染RD细胞,48 h后收集细胞。用Western blot方法检... 目的利用串联亲和纯化技术筛选与肠病毒71型3D聚合酶相互作用的宿主细胞蛋白。方法利用RT-PCR方法从EV71BrCr株全基因组中获得3D聚合酶全长基因,构建pcDNA3.0-3D-Flag-HA真核表达载体并转染RD细胞,48 h后收集细胞。用Western blot方法检测3D蛋白在RD细胞内的表达情况。串联亲和纯化技术筛选与3D聚合酶相互作用的宿主蛋白并进行质谱分析,确定与3D聚合酶相互作用的蛋白或多肽。并采用免疫共沉淀实验,对候选蛋白CyclinG1与3D的相互作用进行验证。结果成功构建了pcDNA3.0-3D-Flag-HA载体,在RD细胞内检测到3D蛋白的表达。经串联亲和纯化和质谱分析得到LATS2、Nek2、APC5、CyclinG1、PI3K等一系列参与细胞凋亡及细胞周期调控的蛋白。免疫共沉淀实验证实3D蛋白与CyclinG1的相互作用。结论 3D聚合酶可能与宿主细胞内蛋白相互作用,引起细胞凋亡及细胞周期改变。 展开更多

关键词 肠道病毒71型 3D聚合酶 串联亲和纯化 液相色谱-质谱分析法

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串联亲和纯化(TAP)技术在蛋白质组学中的应用 被引量：5

5

作者 程永升 刘进元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第4期379-383,共5页

蛋白质是各种生命活动的主要执行者 ,因此构建蛋白质相互作用的网络图对于准确理解蛋白质功能、揭开各种细胞活动的奥秘十分重要 .串联亲和纯化 (TAP) ,是近年来发展出来的一种能够快速研究在生理条件下蛋白质相互作用 ,揭示蛋白质复合... 蛋白质是各种生命活动的主要执行者 ,因此构建蛋白质相互作用的网络图对于准确理解蛋白质功能、揭开各种细胞活动的奥秘十分重要 .串联亲和纯化 (TAP) ,是近年来发展出来的一种能够快速研究在生理条件下蛋白质相互作用 ,揭示蛋白质复合体相互作用网络的新技术 ,已成为研究蛋白质组学的一个重要工具 .随着该技术的不断完善 ,TAP技术在认识蛋白质相互作用的过程中必将发挥越来越重要的作用 . 展开更多

关键词 串联亲和纯化 TAP 蛋白质组学 网络图 免疫共沉淀 纯化

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串联亲和纯化技术筛选Bat3的相互作用蛋白质 被引量：1

6

作者 吴为 李琴山 +2 位作者 宋伟 缪时英 王琳芳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-4,共4页

目的寻找与Bat3结合的蛋白质。方法采用串联亲和纯化技术,在Bat3编码序列羧基端融合Strep2和FLAG 2个分子标签,以此为诱饵筛选与其特异结合的蛋白质,最后进行质谱鉴定。结果筛选到1种蛋白质分子,命名为Ubl4A,免疫共沉淀结果显示Ubl4A可... 目的寻找与Bat3结合的蛋白质。方法采用串联亲和纯化技术,在Bat3编码序列羧基端融合Strep2和FLAG 2个分子标签,以此为诱饵筛选与其特异结合的蛋白质,最后进行质谱鉴定。结果筛选到1种蛋白质分子,命名为Ubl4A,免疫共沉淀结果显示Ubl4A可与Bat3相互结合。结论成功建立了串联亲和纯化技术平台,分离出可与Bat3相互作用的蛋白质Ubl4A。 展开更多

关键词 Bat3 凋亡 串联亲和纯化

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串联亲和纯化技术在哺乳动物体系中的应用 被引量：1

7

作者 郭龙华 王建 +1 位作者 杨晓明 贺福初 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期175-178,共4页

蛋白质相互作用的研究是阐释基因功能的重要手段,随着蛋白质组学的发展和相应仪器的进步,在不同生物体系中进行的大规模的蛋白质相互作用研究逐步成为生物学领域的一个重要方面。该文介绍当前在大规模蛋白质相互作用研究中应用最为广泛... 蛋白质相互作用的研究是阐释基因功能的重要手段,随着蛋白质组学的发展和相应仪器的进步,在不同生物体系中进行的大规模的蛋白质相互作用研究逐步成为生物学领域的一个重要方面。该文介绍当前在大规模蛋白质相互作用研究中应用最为广泛的技术之一串联亲和纯化技术,以及该技术在哺乳动物体系中应用时的技术要点和目前取得的重要进展。 展开更多

关键词 串联亲和纯化 蛋白质组学 哺乳动物 蛋白质相互作用 细胞系

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串联亲和纯化技术在研究细胞内相互作用蛋白质中的应用 被引量：1

8

作者 刘侠 韦薇 《医学综述》 2014年第7期1153-1156,共4页

为了进一步研究蛋白质功能并建立蛋白质在细胞内的相互作用网络,各种研究相互作用蛋白质的方法应运而生,串联亲和纯化(TAP)技术就是其中之一。TAP利用基因重组技术将标签基因融合入靶蛋白基因,转入细胞系后表达带标签的靶蛋白,使用标签... 为了进一步研究蛋白质功能并建立蛋白质在细胞内的相互作用网络,各种研究相互作用蛋白质的方法应运而生,串联亲和纯化(TAP)技术就是其中之一。TAP利用基因重组技术将标签基因融合入靶蛋白基因,转入细胞系后表达带标签的靶蛋白,使用标签的特异性对靶蛋白进行纯化和相关研究,而该技术在实际运用会遇到标签选择、标签位置的选择和重组表达等一系列问题,该文介绍TAP技术在实际使用中的技术要点。 展开更多

关键词 串联亲和纯化 相互作用蛋白质 蛋白质组学

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利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中MutM的相互作用蛋白

9

作者 范尚华 周盈 +4 位作者 张泓泰 Joy Fleming 喻子牛 张先恩 毕利军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第10期935-946,共12页

Mut M(formamidopyrimidine-DNA glycosylase,Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER)中同时具有DNA糖苷酶和脱嘌呤/脱嘧啶AP裂解酶活性的一种双功能酶,不但可以识别DNA损伤,而且能切除损伤的碱基,从而参与到许多种损伤的修复过程.除了高... Mut M(formamidopyrimidine-DNA glycosylase,Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER)中同时具有DNA糖苷酶和脱嘌呤/脱嘧啶AP裂解酶活性的一种双功能酶,不但可以识别DNA损伤,而且能切除损伤的碱基,从而参与到许多种损伤的修复过程.除了高致突变率的8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine,8-oxo G)外,Mut M在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚.本研究主要以耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)为研究对象,利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与Mut M相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定,并于体外用Far-western和GST pull-down方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase、Rps C、Uvr A与Mut M的相互作用进行了验证.实验结果表明,利用串联亲和纯化方法来发现Mut M相互作用的蛋白是切实可行的.本研究为进一步深入研究Mut M在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点. 展开更多

关键词 耻垢分枝杆菌 碱基切除修复 MutM 串联亲和纯化

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一种新的研究蛋白相互作用的技术——串联亲和纯化 被引量：2

10

作者 荆喆 黄尚志 《国外医学（遗传学分册）》 2004年第3期145-148,共4页

蛋白质组学的发展及分析技术的进步,客观上要求建立新的生物纯化策略。串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)是一项新的纯化蛋白复合物的技术,它与质谱技术结合使用,已成为当前蛋白质组学研究的重要工具。本文从该技术的每... 蛋白质组学的发展及分析技术的进步,客观上要求建立新的生物纯化策略。串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)是一项新的纯化蛋白复合物的技术,它与质谱技术结合使用,已成为当前蛋白质组学研究的重要工具。本文从该技术的每一层面人手,对此方法的研究进展进行概述。 展开更多

关键词 串联亲和纯化 TAP 蛋白-蛋白相互作用 质谱技术

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串联亲和纯化(TAP)技术的研究进展 被引量：2

11

作者 吴丽民 刘美龙 刘丽华 《海峡药学》 2009年第1期1-4,共4页

蛋白质是各种生命活动的主要执行者,对揭开各种细胞活动的奥秘以及对促进蛋白分析技术的发展都十分重要,因此在客观上要求建立新的蛋白纯化策略。串联亲和纯化(TAP)是近年来发展出来的一种新的纯化蛋白复合物的技术,能够快速研究在生理... 蛋白质是各种生命活动的主要执行者,对揭开各种细胞活动的奥秘以及对促进蛋白分析技术的发展都十分重要,因此在客观上要求建立新的蛋白纯化策略。串联亲和纯化(TAP)是近年来发展出来的一种新的纯化蛋白复合物的技术,能够快速研究在生理条件下蛋白质相互作用,已成为研究蛋白质组学的一个重要工具。本文从该技术的每一层面入手,对此方法的原理、发展和应用做一综述。 展开更多

关键词 串联亲和纯化 蛋白质相互作用 蛋白质组学

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紫外交联合并串联亲和纯化高效鉴定蛋白复合物组分的RNA结合活性

12

作者 岳莎 周淑如 郭学敏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第6期617-622,共6页

RNA结合蛋白在RNA的生成与代谢中发挥着重要作用.我们在近年报道的PAR-CLIP(photoactivatableribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation)技术的基础上建立了一套快速、有效鉴定RNA结合蛋白的实验方法:以串联亲和... RNA结合蛋白在RNA的生成与代谢中发挥着重要作用.我们在近年报道的PAR-CLIP(photoactivatableribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation)技术的基础上建立了一套快速、有效鉴定RNA结合蛋白的实验方法:以串联亲和纯化替代一步免疫沉淀获得高纯度蛋白-RNA复合物;将Sypro Ruby蛋白染色与RNA放射自显影相结合判断复合物中哪种或哪些组分为RNA结合蛋白,该方法命名为紫外交联合并的串联亲和纯化(cross-linkingand tandem affinity purification,CLiTAP).运用该方法对布氏锥虫的三种锌指蛋白ZC3H7、ZC3H34和ZC3H5进行分析,发现ZC3H7作为帽结合蛋白复合物的核心组分具有很强的RNA结合能力;ZC3H34结合RNA能力较弱,但其互作蛋白具有强的RNA结合活性;相比之下,ZC3H5及其复合物组分皆无RNA结合活性.这些结果表明,CLiTAP与蛋白质鉴定方法相结合,能够有效鉴定靶蛋白复合物中的RNA结合蛋白种类,也为进一步定位RNA结合位点、研究RNA结合蛋白的结构及作用机制奠定了基础. 展开更多

关键词 紫外交联 串联亲和纯化 RNA结合蛋白 布氏锥虫 CCCH型锌指蛋白

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利用串联亲和纯化结合质谱分析分离和鉴定与蛋白激酶NLK结合的蛋白复合物组分

13

作者 梁俊波 缪时英 王琳芳 《医学研究杂志》 2014年第7期19-22,共4页

目的利用串联亲和纯化结合质谱分析分离和鉴定与蛋白激酶NLK结合的蛋白复合物组分。方法将RFP、NLK和其突变体NLKK155M克隆至本室改造的带有Flag和Strep双标签的反转录病毒载体pMSCVpuro中,通过酶切鉴定并测序验证其构建的正确性。采用... 目的利用串联亲和纯化结合质谱分析分离和鉴定与蛋白激酶NLK结合的蛋白复合物组分。方法将RFP、NLK和其突变体NLKK155M克隆至本室改造的带有Flag和Strep双标签的反转录病毒载体pMSCVpuro中,通过酶切鉴定并测序验证其构建的正确性。采用反转录病毒感染结合嘌呤霉素筛选的方法,获得稳定表达RFP、NLK、NLK突变体NLKK155M的HCT-116细胞株,Western blot法检测目的蛋白RFP、NLK和NLKK155M的表达。采用串联亲和纯化结合质谱分析,分离、鉴定与NLK结合的蛋白。结果构建的pMSCVpuro/N-Flag-Strep-RFP和pMSCVpuro/N-Flag-Strep-NLK质粒经酶切鉴定、测序证明质粒构建正确,pMSCVpuro/N-Flag-Strep-NLKK155M质粒经测序证明构建正确。携带上述基因的反转录病毒感染的HCT-116细胞,Flag-Strep-RFP、Flag-Strep-NLK和Flag-Strep-NLKK155M均正常表达。经串联亲和纯化和质谱分析,发现多个可能与NLK结合的蛋白。结论本研究采用串联亲和纯化结合质谱分析成功鉴定了若干可能与NLK及其突变体NLKK155M结合的蛋白质。 展开更多

关键词 NLK 串联亲和纯化 质谱分析

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串联亲和纯化技术:一种极具潜力的分离、鉴定蛋白复合体的工具

14

作者 狄文娜 花芳 彭小忠 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2006年第3期246-251,共6页

大多数细胞的生物学功能都是由蛋白复合体而非单一蛋白来完成的,所以识别和分析蛋白复合体的组分是研究蛋白功能所必需的。串联亲和纯化技术(TAP)能在生理条件下有效地分离、鉴定蛋白复合体,而无需知道复合体的组成或功能,目前已成功地... 大多数细胞的生物学功能都是由蛋白复合体而非单一蛋白来完成的,所以识别和分析蛋白复合体的组分是研究蛋白功能所必需的。串联亲和纯化技术(TAP)能在生理条件下有效地分离、鉴定蛋白复合体,而无需知道复合体的组成或功能,目前已成功地应用于酵母及其他生物体中的蛋白复合体的成分分析。与质谱技术联合应用可以识别与目的蛋白相互作用的蛋白,进而揭示蛋白质相互作用网络及其功能。 展开更多

关键词 串联亲和纯化(TAP) 蛋白复合体

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串联亲和纯化标签分类与优化

15

作者 王小伟 金海明 杜宏武 《生物技术通讯》 CAS 2009年第5期749-751,共3页

质谱技术高速发展,检测灵敏度不断提高,但区分特异性与非特异性相互作用仍然是研究相互作用蛋白的瓶颈,获得高纯度的蛋白复合体是鉴定相互作用蛋白的限制性因素。近年来串联亲和纯化(TAP)技术的产生和发展有效解决了相互作用蛋白鉴定中... 质谱技术高速发展,检测灵敏度不断提高,但区分特异性与非特异性相互作用仍然是研究相互作用蛋白的瓶颈,获得高纯度的蛋白复合体是鉴定相互作用蛋白的限制性因素。近年来串联亲和纯化(TAP)技术的产生和发展有效解决了相互作用蛋白鉴定中的特异性问题。TAP技术是将N端或C端TAP标签与目的蛋白融合并导入靶细胞进行表达,裂解细胞释放融合蛋白,在接近生理状态下利用标签两步特异性亲和洗脱得到蛋白复合体。其中,TAP标签蛋白的选择和优化是该技术成功的关键。 展开更多

关键词 相互作用蛋白 串联亲和纯化 标签

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重组蛋白质亲和标签的选择与串联亲和纯化的应用进展 被引量：2

16

作者 占艺 张金钟 王丽芬 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第9期1757-1760,1738,共5页

重组蛋白质技术作为蛋白质研究的重要手段之一,在生物化学与生物物理学研究领域,扮演着极其重要的角色。亲和纯化作为最为方便与快捷的重组蛋白质纯化手段,日益得到广泛的应用。由于各种亲和标签,纯化介质层出不穷,性质各异。应根据自... 重组蛋白质技术作为蛋白质研究的重要手段之一,在生物化学与生物物理学研究领域,扮演着极其重要的角色。亲和纯化作为最为方便与快捷的重组蛋白质纯化手段,日益得到广泛的应用。由于各种亲和标签,纯化介质层出不穷,性质各异。应根据自身研究对象具体情况选择合适的亲和纯化标签。近年双亲和标签进行串联亲和纯化日益成为蛋白质相互作用研究的重要方法。多种亲和标签的搭配已得到成功应用,部分已进入商业化,并在各种模式生物中得到广泛的应用,本文就重组蛋白质亲和标签的选择与串联亲和纯化作一综述。 展开更多

关键词 重组融合蛋白质 亲和标签 串联亲和纯化

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串联亲和纯化原核表达载体的构建 被引量：1

17

作者 魏波 廖翔 +6 位作者 周围 高原 王羽 冉金宝 梁龙 岳俊杰 呼和巴特尔 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期374-380,共7页

【目的】构建串联亲和纯化原核表达载体,用于研究细菌中(生理状态或接近生理条件下的)蛋白-蛋白相互作用。【方法】设计并合成两条串联亲和标签序列,分别可以在靶蛋白N端和C端融合Protein G和链亲和素结合肽(Streptavidin binding pepti... 【目的】构建串联亲和纯化原核表达载体,用于研究细菌中(生理状态或接近生理条件下的)蛋白-蛋白相互作用。【方法】设计并合成两条串联亲和标签序列,分别可以在靶蛋白N端和C端融合Protein G和链亲和素结合肽(Streptavidin binding peptide,SBP)标签;以pUC18载体为骨架,去除原有的阻遏蛋白基因,构建组成型表达载体pNTAP和pCTAP。【结果】成功构建N端和C端标签表达载体pNTAP和pCTAP,它们在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)、肠出血性大肠杆菌O157:H7和痢疾杆菌福氏5型M90T菌株中都可以实现表达。【结论】本实验构建的两个串联亲和纯化表达载体可以在部分革兰氏阴性细菌中表达,为研究细菌内蛋白-蛋白相互作用及致病菌毒力蛋白的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 原核表达载体 串联亲和纯化 蛋白相互作用

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利用串联亲和纯化技术分离大肠杆菌GroEL蛋白复合物 被引量：1

18

作者 魏波 廖翔 +6 位作者 周围 王羽 李玉霞 高原 岳俊杰 梁龙 呼和巴特尔 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1848-1854,共7页

肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的致病菌,加深其致病机理的基础研究将为相关疫苗研究及疾病控制等提供新的思路和依据。串联亲和纯化(TAP)技术是最近发展的分离纯化天然状态蛋白质复合物进而研究蛋白质相互作用的新方法。用我们自... 肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的致病菌,加深其致病机理的基础研究将为相关疫苗研究及疾病控制等提供新的思路和依据。串联亲和纯化(TAP)技术是最近发展的分离纯化天然状态蛋白质复合物进而研究蛋白质相互作用的新方法。用我们自己构建的原核表达串联亲和标签载体,在大肠杆菌O157:H7中表达了标签融合蛋白GroEL-TAP,建立了非变性条件下制备蛋白复合物的方法,并且对串联亲和纯化过程中的相关实验条件进行了探索和优化,最终得到了高纯度的GroEL-TAP与天然GroEL形成的嵌合型多聚体复合物。这表明我们建立的串联亲和纯化技术能高度特异地纯化靶蛋白参与形成的复合物,为后续寻找O157:H7中毒力蛋白参与形成的复合物奠定了实验基础。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌O157:H7 串联亲和纯化(TAP) 分子伴侣GroEL

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串联亲和纯化技术及其在植物蛋白质组研究中的应用 被引量：1

19

作者 王丰青 吴为人 +3 位作者 陈新建 李娟 周艳 张重义 《生命科学》 CSCD 2013年第6期632-638,共7页

串联亲和纯化(TAP)是一项新颖的蛋白质复合物纯化技术,已被广泛应用于鉴定或验证蛋白质间的相互作用以及建立蛋白质互作网络,其基本原理是,将TAP标签融合到目标蛋白上,然后经过两步亲和纯化,获得融合蛋白及其结构关联蛋白。TAP技术最初... 串联亲和纯化(TAP)是一项新颖的蛋白质复合物纯化技术,已被广泛应用于鉴定或验证蛋白质间的相互作用以及建立蛋白质互作网络,其基本原理是,将TAP标签融合到目标蛋白上,然后经过两步亲和纯化,获得融合蛋白及其结构关联蛋白。TAP技术最初主要在动物和微生物中应用。近几年来,随着新型标签的出现和方法的改进,TAP技术在植物中的应用逐渐增多,为植物蛋白质组学的研究提供了一个有效的手段。简要介绍TAP方法在植物中的应用情况,并对TAP方法应用的限制因素进行分析。 展开更多

关键词 串联亲和纯化 标签 植物 蛋白质组

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串联亲和纯化中应用不同标签组合的研究进展

20

作者 魏衍全 孙世琪 +1 位作者 孙德惠 郭慧琛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期987-990,共4页

综述了原始串联亲和纯化方法的原理及其存在的缺陷和各种最新构建的串联亲和纯化标签组合及其从哺乳动物细胞中纯化蛋白复合物时的蛋白得率。与单步纯化方法相比,串联亲和纯化方法显著地减少了非特异性背景,可分离到高纯度的蛋白复合物... 综述了原始串联亲和纯化方法的原理及其存在的缺陷和各种最新构建的串联亲和纯化标签组合及其从哺乳动物细胞中纯化蛋白复合物时的蛋白得率。与单步纯化方法相比,串联亲和纯化方法显著地减少了非特异性背景,可分离到高纯度的蛋白复合物。这一优势极大地简化了蛋白质鉴定及其相互作用关系的验证工作。 展开更多

关键词 串联亲和纯化 亲和标签 蛋白复合体 高蛋白得率

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