三带喙库蚊和致倦库蚊经口感染乙型脑炎病毒疫苗SA14-14-2株的研究 被引量：11

1

作者 章域震 张海林 +5 位作者 俞永新 冯云 董关木 杨卫红 贾丽丽 姚亚夫 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期584-586,591,共4页

目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时... 目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时间取一定数量的蚊,研磨制成悬液,应用空斑试验方法检测感染后不同时间蚊体内的病毒存在情况和病毒滴度.结果在用6.06logPFU/ml SA14-14-2病毒经口感染的两种库蚊中,没有检测到病毒空斑,即没发现蚊虫的感染;在用较高的6.18logPFU/ml病毒经口感染的三带喙库蚊和致倦库蚊中,分别有一组蚊虫出现低滴度感染,空斑形成单位分别是1.24和1.11log10PFU/ml;在用野毒株经口感染的两种库蚊,共计19组蚊虫中,有14组发生感染,空斑形成单位在3.18～4.79log10PFU/ml.结论作为乙脑主要传播媒介的三带喙库蚊和致倦库蚊对SA14-14-2疫苗株病毒的经口感染和病毒在体内的复制严重受限,当叮咬接种疫苗的人后,不具备发生乙脑病毒感染和传播的能力. 展开更多

关键词 乙型脑炎sa14—14—2疫苗株 三带喙库蚊 致倦库蚊 经口感染 空斑试验

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乙型脑炎病毒SA_(14)-14-2减毒疫苗株的生物学和基因稳定性 被引量：10

2

作者 许乐燕 徐闻青 +2 位作者 徐帆洪 王兵 张秀娟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期833-837,共5页

目的研究乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2减毒疫苗株传代过程中的生物学和基因稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性提供依据。方法将JEVSA14-14-2减毒疫苗株PHKC7代病毒在原代地鼠肾细胞(PHKC)上连续传代,检测各代次病毒的培养特性以及第8、12... 目的研究乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2减毒疫苗株传代过程中的生物学和基因稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性提供依据。方法将JEVSA14-14-2减毒疫苗株PHKC7代病毒在原代地鼠肾细胞(PHKC)上连续传代,检测各代次病毒的培养特性以及第8、12、17和22代病毒的安全性及免疫原性;对起止代次病毒(PHKC8和22代)进行全基因组序列测定,对中间代次病毒(PHKC12和17代)的结构蛋白基因进行测序,并与基因库乙脑病毒SA14-14-2株(D90195)比较。结果各代次病毒产生的细胞病变基本一致,病毒滴度在17代前较稳定;在BHK21细胞上形成的蚀斑形态一致;小鼠脑内的致病力未发生变化,乳鼠传代返祖试验高代次病毒毒力有升高趋势。8、12、17和22代病毒免疫小鼠后,对P3强毒攻击均具有保护作用。E蛋白核苷酸和氨基酸序列,PHKC8代与D90195完全一致;而PHKC12、17和22代出现单个碱基(第2142或2143位)突变,导致E389氨基酸改变(D→N或D→A),但并非回复突变。4个代次病毒的PrM-C区结构蛋白基因均未发生变化。PHKC8、22代病毒的其他核苷酸突变发生在基因组非结构蛋白区和3′端非编码区;全序列PHKC8和22代与D90195比较,发现7～8个核苷酸不同,导致3～4个氨基酸的差异,核苷酸和氨基酸的同源性分别大于99.93%和99.88%,且以上突变不存在于明确的相关减毒位点上。结论JEVSA14-14-2减毒疫苗株在PHKC上连续传15代,仍保持高度的生物学和基因稳定性,疫苗生产用病毒控制在10代以内较为安全。 展开更多

关键词 乙型脑炎 减毒活疫苗 sa14-14-2株 基因稳定性 生物学稳定性

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乙型脑炎减毒活疫苗病毒SA14-14-2株经三带喙库蚊胸腔接种后的生物学和分子生物学特性 被引量：9

3

作者 刘志文 俞永新 +5 位作者 张海林 王志伟 贾丽丽 章域震 董关木 张云 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第6期419-421,共3页

目的研究乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株经三带喙库蚊胸腔接种繁殖后的生物学和分子生物学特性,进一步评价该株病毒的稳定性和安全性。方法将乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株胸腔接种的三带喙库蚊研磨,离心收集上清液,接种于BHK2... 目的研究乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株经三带喙库蚊胸腔接种繁殖后的生物学和分子生物学特性,进一步评价该株病毒的稳定性和安全性。方法将乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株胸腔接种的三带喙库蚊研磨,离心收集上清液,接种于BHK21细胞中培养,得到SA14-14-2M1C1病毒液。应用空斑形成单位法测定病毒滴度,再进行小鼠脑内毒力测定和乳鼠脑内回传后毒力返祖试验。提取病毒RNA,RT-PCR扩增E基因片段,测序后与SA14-14-2原株的E基因序列进行比较分析。结果SA14-14-2M1C1病毒液滴度达1.4×107PFU/ml,小鼠脑内毒力测定结果无小鼠发病死亡,乳鼠脑内传代对小鼠的脑内致病力很低,毒力为1.9LgLD50/0.03ml,小于《中国药典》规定的3.0LgLD50,且皮下注射未见小鼠发病死亡。扩增出的E基因片段序列与原株相比较,只有E区1340位一个核苷酸的变化A→G,导致E447位1个氨基酸的改变D(Asp)→G(Gly),此差异位点不是SA14-14-2株发生基因变异的8个位点之一。结论SA14-14-2疫苗株病毒经三带喙库蚊胸腔接种繁殖后,其生物学(弱毒)特性和基因特征(E区8个氨基酸突变)未发生改变,进一步证实了该病毒的稳定性。 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎 sa14-14-2株 三带喙库蚊 生物学特性 分子生物学特性

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流行性乙型脑炎强毒株和弱毒疫苗株SA14-14-2对猴子和小鼠的致病性和病理学研究 被引量：2

4

作者 凌静萍 朱荫耕 +5 位作者 杜桂枝 朗书惠 贾丽丽 俞永新 周铁群 Scott B Halstead 《微生物学免疫学进展》 2000年第4期1-4,共4页

为了解乙型脑炎 (乙脑 )减毒活疫苗弱毒株SA14 14 2神经毒力的减弱程度 ,本文对弱毒株及其原株SA14强毒株进行了猴体和小白鼠的致病性和病理学变化的比较试验。SA14强毒株病毒 (原始滴度 6 15× 10 8/ml) ,以10 -2 和 10 -4 ～ 10... 为了解乙型脑炎 (乙脑 )减毒活疫苗弱毒株SA14 14 2神经毒力的减弱程度 ,本文对弱毒株及其原株SA14强毒株进行了猴体和小白鼠的致病性和病理学变化的比较试验。SA14强毒株病毒 (原始滴度 6 15× 10 8/ml) ,以10 -2 和 10 -4 ～ 10 -7不同稀释度于丘脑两侧合并脊髓注射恒河猴 ,每组除 10 -4 1只外其余均为 2只。另以 10 -4 和10 -6～ 10 -8不同稀释度脑内注射小鼠 ,每组 8只。结果猴子除 10 -4 1只外其余全部发病死亡 ,小鼠则全部死亡。SA14 14 2以 1∶5稀释病毒 (原始滴度为 8× 10 6/ml)按同样方法注射 4只猴和 30只小鼠 ,结果全部存活。另以SA1410 -2 病毒皮下注射 3只猴未死亡 ,而以 10 -1皮下注射 30只小鼠时则全部死亡。SA14 14 2以 1∶5稀释病毒皮下注射小鼠时则全部存活。病理组织学结果显示二种动物接种SA14株强毒后主要表现为弥散性脑脊髓炎 ,以神经细胞坏死为其主要特征和最突出的病变。猴子的病变以脊髓前角、丘脑和中脑黑质为重 ,小鼠的病变则以大脑皮质、海马部最重 ,脊髓的病变却比脑轻。接种弱毒株的动物则仅有轻微炎症反应、神经细胞坏死极少出现。以上结果表明以脑内接种时恒河猴和小鼠对乙脑病毒均高度敏感 ,以皮下接种时小鼠的敏感性高于猴子。乙脑SA14 14 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 sa14-14-2 减毒株 致病性 病理学

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乙型脑炎病毒SA14-14-2株E基因的克隆、测序与表达 被引量：4

5

作者 徐高原 陈焕春 +4 位作者 徐晓娟 李自力 孙圣福 何启盖 吴斌 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期22-25,共4页

目的　克隆乙型脑炎病毒E基因并在大肠杆菌中进行表达 ,为今后研制乙脑分子诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定基础。方法　根据乙型脑炎病毒株SA14 - 14 - 2E基因的序列设计一对引物 ,采用RT -PCR技术扩增其E基因全长cD NA ,将扩增产物克隆... 目的　克隆乙型脑炎病毒E基因并在大肠杆菌中进行表达 ,为今后研制乙脑分子诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定基础。方法　根据乙型脑炎病毒株SA14 - 14 - 2E基因的序列设计一对引物 ,采用RT -PCR技术扩增其E基因全长cD NA ,将扩增产物克隆到pBlusecriptIISK(+)载体中 ,然后亚克隆到原核表达载体PGEX -KG中 ,筛选重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)表达重组蛋白。结果与结论　获得了含全长乙型脑炎病毒E基因的重组质粒 ,经酶切和测序证实构建正确。表达的目的蛋白经SDS -PAGE和Westernblot分析证实确为乙型脑炎病毒E蛋白且有生物学活性。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 sa14—14—2株 E基因 克隆 测序 表达

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流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析 被引量：6

6

作者 杨耀武 齐香荣 +3 位作者 陈德胜 何孔旺 陈溥言 沈国顺 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期31-35,共5页

目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并... 目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并将其克隆入 pET - 32a(+)表达载体中 ,构建重组融合表达载体pET -E ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,利用IPTG诱导获得高效表达。结果　扩增的E蛋白基因片段长 1113bp ,编码 371个氨基酸残基 ,该基因片段与国内发表的减毒株SA14 - 14 - 2碱基序列同源性为 10 0 %。表达产物分子量约为 6 2kD ,经Westernblotting分析表明表达产物具有较好的抗原性。结论　通过序列分析表明 ,我国的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株未发生基因突变。表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据。 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎病毒 sa14-14-2株 E蛋白 基因表达 原核细胞 抗原性 基因克隆

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乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2全基因组序列测定及基因遗传稳定性

7

作者 黄敏 袁良玉 +2 位作者 吕冰凌 潘海龙 卓金蓉 《微生物学免疫学进展》 2017年第1期22-26,共5页

目的对乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株进行全基因组序列测定和分析,并观察该生产株在疫苗制备过程中的基因遗传稳定性。方法根据DNA序列数据库(Gen Bank)公布的SA14-14-2株的序列,设计合成7对引物,提取疫苗生产株SA14-14-2及其工... 目的对乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株进行全基因组序列测定和分析,并观察该生产株在疫苗制备过程中的基因遗传稳定性。方法根据DNA序列数据库(Gen Bank)公布的SA14-14-2株的序列,设计合成7对引物,提取疫苗生产株SA14-14-2及其工作种子批生产的3批原液、3批成品疫苗的病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增SA14-14-2株的cDNA片段,分别克隆到pGEM-T载体,转化至大肠埃希菌DH5α中,挑取阳性菌落克隆、鉴定后测定全序列并对序列进行比较分析,观察毒株在传代的过程中病毒滴度的稳定性。结果乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株基因组全长10 976 bp,编码3 433个氨基酸。3批原液和3批成品疫苗的基因组全长为10 977 bp,比较分析发现,在3'端非编码区10 701处多一个G核苷酸的插入。与DNA序列数据库(Genbank)登录号为D90195的全长序列同源性分别是99.9%、99.9%、99.9%、99.9%、99.8%、99.9%、99.8%,其中E蛋白的同源性均为100%。SA14-14-2生产株的病毒滴度为7.22 lg PFU/mL,原液和成品疫苗的滴度分别为7.32、7.23、7.32、6.86、6.92、6.70 lg PFU/mL。结论乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2基因稳定,具有良好的一致性,为乙型脑炎减毒活疫苗的质量的稳定性提供了可靠依据。 展开更多

关键词 乙型脑炎减毒活疫苗 sa14-14-2株 全基因组序列 E蛋白 遗传稳定性

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乙型脑炎病毒减毒中间株SA_(14)-12-1-7基因组全序列的测定 被引量：5

8

作者 曾明 俞永新 +3 位作者 董关木 范行良 姚智慧 李德富 《中国病毒学》 CSCD 2002年第3期206-210,共5页

本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14 12 1 7株进行全序列测定和分析 ,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制。根据已发表的SA14 14 2株及SA14 株的序列 ,设计 6对重叠引物 ,涵括整个乙脑病毒的基因组 ,通过RT ... 本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14 12 1 7株进行全序列测定和分析 ,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制。根据已发表的SA14 14 2株及SA14 株的序列 ,设计 6对重叠引物 ,涵括整个乙脑病毒的基因组 ,通过RT PCR扩增出SA14 12 1 7株的各cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化至TG1受体菌中 ,挑取阳性克隆进行鉴定后测序。结果表明SA14 12 1 7株基因组全序列长 10 976个核苷酸 ,从 96到 10 394为一个长开放读码框 ,编码 3432个氨基酸。与野毒株SA14 和疫苗株SA14 14 2的核苷酸序列和氨基酸序列相比 ,同源性均在 99%以上 ,突变位点分散于各个区域 ,E区有 5个位点与疫苗株一致而与野毒株不同 ,3个位点与野毒株一致而与疫苗株不同 ,推测与其容易产生回复突变、恢复毒力有关。此外 ,NS3、NS5和 3′NTR的几个位点可能与病毒毒力稳定性相关。综上所述 ,乙脑病毒减毒中间株的基因组全序列基本类似于已发表的序列 ,若干突变位点影响病毒的弱毒性及毒力的稳定性。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 减毒中间株sa14-12-1-7 基因组全序列

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乙型脑炎病毒SA14-14-2株prM基因的克隆与测序 被引量：1

9

作者 王祥 陈焕春 +3 位作者 何启盖 吴斌 贾杏林 吴美洲 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期87-89,共3页

以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558bp特异性带。将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明... 以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558bp特异性带。将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明我国疫苗株SA14-14-2的prM基因核苷酸序列与GenBank收录的完全一致。prM基因的获得为进一步研究该基因的免疫原性以及乙型脑炎病毒基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型脑炎 乙型脑炎病毒 sal4-14-2株 prM基因 基因克隆 序列分析 反转录-聚合酶链反应

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乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白主要抗原片段的高效表达 被引量：2

10

作者 葛菲菲 邱亚峰 +1 位作者 杨耀武 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2005年第2期117-120,共4页

在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14 14 2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,将其亚克隆入酵母表达载体pPICZαA,以电穿孔法转化酵母X 33,用Zeocin平板筛选... 在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14 14 2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,将其亚克隆入酵母表达载体pPICZαA,以电穿孔法转化酵母X 33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。由于糖基化不同,所表达产物有两种,其相对分子质量分别为44kDa和50kDa,表达量较高,约为290mg/L,经Western印迹验证,有较好的抗原性。在ELISA试验中,我们直接以PBS透析后的酵母上清包被,能够很明显地区分出乙脑阴阳性血清,与RT PCR检测的相符率达95%,为制备JEV的诊断抗原和基因工程疫苗提供了依据。 展开更多

关键词 乙脑疫苗株sa14—14—2株 E蛋白基因主要抗原片段 巴斯德毕赤酵母 高效表达

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乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上传代后的基因序列研究 被引量：1

11

作者 李明 赵丹华 李玉华 《中国药事》 CAS 2019年第12期1444-1448,共5页

目的:研究乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上传代后的病毒基因序列,以深入控制乙型脑炎减毒活疫苗的安全性。方法:将乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上连续传代,选取第二代病毒(P2)、第五代病毒(P5)、第十五代病毒(P15... 目的:研究乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上传代后的病毒基因序列,以深入控制乙型脑炎减毒活疫苗的安全性。方法:将乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上连续传代,选取第二代病毒(P2)、第五代病毒(P5)、第十五代病毒(P15)提取RNA,反转录为c DNA后,进行各代病毒全基因序列分析,分析与乙型脑炎病毒毒力密切相关的关键位点基因是否发生改变。结论:乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上传5代后,病毒E蛋白上关键基因第279位(E279)氨基酸由甲硫氨酸(M)突变为赖氨酸(K)。 展开更多

关键词 乙型脑炎减毒活疫苗sa14-14-2 BHK21 E蛋白基因序列

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猪乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株基础种子的鉴定 被引量：1

12

作者 巢伟 张桂红 徐雷 《中国兽药杂志》 2014年第7期15-18,共4页

建立了猪乙型脑炎活疫苗基础种子库,对三批基础种子进行了鉴定。结果表明,三批猪乙型脑炎基础种子无外源病毒污染,对敏感实验动物小鼠、乳猪和怀孕母猪接种均安全、无异常反应,原代地鼠肾细胞传代至F12代,免疫原性保持稳定、毒力不返强... 建立了猪乙型脑炎活疫苗基础种子库,对三批基础种子进行了鉴定。结果表明,三批猪乙型脑炎基础种子无外源病毒污染,对敏感实验动物小鼠、乳猪和怀孕母猪接种均安全、无异常反应,原代地鼠肾细胞传代至F12代,免疫原性保持稳定、毒力不返强。由此可见,猪乙型脑炎SA14-14-2疫苗株基础种子无外源病毒污染,具有可靠安全性和良好、稳定的免疫原性,可用于疫苗生产,研究为研制猪乙型脑炎活疫苗打下基础。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 sa14-14-2株 基础种子 鉴定

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乙型脑炎病毒减毒SA14-14-2-B3株基因组全序列分析

13

作者 张学涛 赵明秋 +4 位作者 琚春梅 赵启祖 康艳梅 沈海燕 陈金顶 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期632-634,654,共4页

为进一步了解乙型脑炎病毒(JEV)减毒疫苗株基因组变异和分子遗传特性,本研究根据已发表的JEV基因组序列,设计合成了8对引物,应用RT-PCR对SA14-14-2-B3株基因组进行了克隆和序列测定,获得了该株病毒的全基因组序列(10977nt)并推导出其编... 为进一步了解乙型脑炎病毒(JEV)减毒疫苗株基因组变异和分子遗传特性,本研究根据已发表的JEV基因组序列,设计合成了8对引物,应用RT-PCR对SA14-14-2-B3株基因组进行了克隆和序列测定,获得了该株病毒的全基因组序列(10977nt)并推导出其编码的氨基酸序列(3432aa)。序列分析表明:SA14-14-2-B3株与疫苗株SA14-14-2和SA(A)及野毒株SA14的核苷酸和氨基酸相似性较高,分别为99.8%、99.9%、99.4%和99.7%、99.8%、99.1%,与猪源分离株HEN0701和KV1899的核苷酸与氨基酸相似性较低,分别为88.5%、88.5%和97.6%、96.6%,比较显示在SA14-14-2-B3株基因组第10700nt处有一碱基"G"的插入。以全基因组为基础,对SA14-14-2-B3株进行遗传进化关系分析,结果表明:SA14-14-2-B3株与SA14源病毒株SA14、SA14-14-2、SA(A)、SA(V)及分离株Beijing-1、p3、WHe和HW的遗传关系较近,与XJP613株和HEN0701株的遗传关系较远。以E基因为基础,对SA14-14-2-B3株进行遗传进化关系分析,结果表明SA14-14-2-B3株属于JEV基因Ⅲ型。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 sa14-14-2-B3株 基因组 序列分析

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流行性乙型脑炎14-2株病毒在乳狗肾细胞上的适应性 被引量：1

14

作者 王叔桥 王寿贵 李玉华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1996年第1期18-20,共3页

流行性乙型脑炎14－2株弱病毒在乳狗肾细胞上连续传11代，1代的病毒滴度即达6．21LogPFU／ml，1代后各代病毒滴度无显著升高（6．18～6．40LogPFU／ml）。传代后的病毒对3周龄小鼠脑内无毒力，皮下无致病力，经乳鼠脑内传代后的脑内毒力... 流行性乙型脑炎14－2株弱病毒在乳狗肾细胞上连续传11代，1代的病毒滴度即达6．21LogPFU／ml，1代后各代病毒滴度无显著升高（6．18～6．40LogPFU／ml）。传代后的病毒对3周龄小鼠脑内无毒力，皮下无致病力，经乳鼠脑内传代后的脑内毒力为1．5～3．0LogLD5／0．03ml，与14－2原株的持世无显著差异。用乳狗肾细胞为基质制备的冻干活疫苗，经全面检定完全符合现行《乙型脑炎活疫苗规程》标准。 展开更多

关键词 乙型脑炎 14-2株病毒 乳狗肾细胞 适应性 疫苗

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单剂SA14-14-2疫苗预防乙型脑炎效果的病例对照研究

15

作者 边国林 《国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册）》 2002年第6期274-274,共1页

关键词 sa14-14-2疫苗 预防 乙型脑炎

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猪乙脑传代细胞活疫苗(SAI4-14-2株)对仔猪的安全性试验

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作者 潘文 韩伟 +1 位作者 姜国华 郝霖雨 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期31-33,37,共4页

评价以Vero细胞为基质的猪乙脑传代细胞活疫苗（SA14-14-2株）对仔猪的安全性,将猪乙脑传代细胞活疫苗,通过1次超剂量（10倍剂量）免疫40～45日龄的仔猪,同时设立病毒液组、冻干保护剂组、空白对照组,监测仔猪体温和临床症状,采集免疫... 评价以Vero细胞为基质的猪乙脑传代细胞活疫苗（SA14-14-2株）对仔猪的安全性,将猪乙脑传代细胞活疫苗,通过1次超剂量（10倍剂量）免疫40～45日龄的仔猪,同时设立病毒液组、冻干保护剂组、空白对照组,监测仔猪体温和临床症状,采集免疫前和免疫后第1、2、3、5、7天血浆,仔猪于免疫后第14天无菌取脑组织.对采集的血样及脑组织进行蚀斑检测,并对血样及脑组织盲传3代的细胞培养液进行RT-PCR检测.结果,试验猪免疫前后临床观察、体温,免疫后接种部位均未见异常.蚀斑法和RT-PCR法检测各试验组仔猪血浆和脑组织提取液均未检出乙脑病毒.表明以Vero细胞为基质的猪乙脑传代细胞活疫苗（SA14-14-2株）对仔猪是安全的. 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎 sa14-14-2减毒株 VERO细胞 疫苗 安全性

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单剂SA14-14-2疫苗抗日本脑炎的效果

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作者 孙杰 孙艳 孙传印 《国外医学（内科学分册）》 2003年第2期91-91,共1页

中国于1988年成功研制了日本脑炎减毒疫苗。自1989年以来,约有1.2亿年龄为1、2和6岁的中国儿童接种了SA 14-14-2日本脑炎减毒活疫苗。一项对照研究发现,两剂的有效率达98％。随后有报道单剂疫苗的功效亦高。本文目的在于验证此结论。 方... 中国于1988年成功研制了日本脑炎减毒疫苗。自1989年以来,约有1.2亿年龄为1、2和6岁的中国儿童接种了SA 14-14-2日本脑炎减毒活疫苗。一项对照研究发现,两剂的有效率达98％。随后有报道单剂疫苗的功效亦高。本文目的在于验证此结论。 方法 尼泊尔自1978年以来发生超过17000例脑炎,其中4000例死亡,1～15岁年龄的儿童占62％。流行期始于7月季风雨期间,终于10月,近70％的病例发生于Bardiya,Banke和Kailali三个地区。1999年6月11日至24日,尼泊尔卫生部首次发起日本脑炎减毒活疫苗接种工作,对居住在上述三个地区的1～15岁儿童,皮下注射0.5mL日本脑炎减毒活疫苗(SA 14-14-2),共用160000剂量。 展开更多

关键词 单剂 sa14-14-2疫苗 日本脑炎 预防

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SA14-14-2乙型脑炎病毒Vero细胞疫苗候选株的筛选及其表型和基因型特征

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作者 刘晓辉 李淼 +4 位作者 刘欣玉 徐宏山 房恩岳 俞永新 李玉华 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第6期315-322,共8页

目的研制以Vero细胞为生产基质的SA14-14-2乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗候选毒株。方法将SA14-14-2株原始病毒在Vero细胞上传代并进行空斑克隆,对克隆株病毒进行Vero细胞培养,使用3周龄小鼠及3日龄乳鼠对脑内致病力进行测定,并进行乳鼠脑... 目的研制以Vero细胞为生产基质的SA14-14-2乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗候选毒株。方法将SA14-14-2株原始病毒在Vero细胞上传代并进行空斑克隆,对克隆株病毒进行Vero细胞培养,使用3周龄小鼠及3日龄乳鼠对脑内致病力进行测定,并进行乳鼠脑内回传、弱毒稳定性实验及免疫力实验等。结果挑选到10个病毒克隆株,通过全面对比后,筛选到1株病毒滴度高(>6.0 lgPFU/ml)且稳定的毒株SA14-14-2 VC_(6)。将该株与SA14-14-2原始株进行主要指标对比,结果表明,VC_(6)株全基因序列与原株相比仅有1个位点发生突变(S66L),对小鼠和乳鼠脑内致病力、弱毒稳定性、免疫原性均与原株相同。结论筛选到的SA14-14-2 VC_(6)株符合中国药典乙脑减毒活疫苗生产毒种的要求。各项主要指标不劣于SA14-14-2生产用毒种,是可应用Vero细胞培养生产的乙脑疫苗候选株。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 sa14-14-2 乙型脑炎减毒活疫苗 Vero细胞系

原文传递

乙型脑炎病毒减毒活疫苗生产株SA_(14)-14-2基因组全序列的测定 被引量：36

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作者 曾明 俞永新 +3 位作者 董关木 贾丽丽 姚亚夫 李德富 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期535-539,共5页

目的　对乙型脑炎减毒活疫苗SA14 1 4 2生产株进行全序列测定和分析 ,为进一步了解其基因组结构与疫苗减毒机制的关系及研究疫苗生产的遗传学质控标准奠定基础。方法　根据已发表的SA14 1 4 2株及SA14株的序列 ,设计 6对相互重叠片段的... 目的　对乙型脑炎减毒活疫苗SA14 1 4 2生产株进行全序列测定和分析 ,为进一步了解其基因组结构与疫苗减毒机制的关系及研究疫苗生产的遗传学质控标准奠定基础。方法　根据已发表的SA14 1 4 2株及SA14株的序列 ,设计 6对相互重叠片段的引物 ,通过RT PCR扩增出SA14 1 4 2疫苗生产株的cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化至TG1受体菌中 ,挑取阳性克隆进行鉴定后测定全序列。结果　SA14 1 4 2生产株基因组全序列长 1 0 976个核苷酸 ,96到 1 0 3 94为一个长开放读码框 ,编码 3 43 2个氨基酸。与国外测定的SA14和SA14 1 4 2株的核苷酸序列和氨基酸序列相比 ,同源性均在 99%以上 ,突变位点分散于各个区域 ,以往推测的 7个可能与减毒相关的位点均未发生改变。1 2 96～ 1 50 6间有 4个突变位点 ,有可能作为疫苗质控的遗传学标记。结论　乙脑减毒活疫苗生产株的基因组全序列基本类似于已发表的序列 ,若干不同位点产生的原因可能在于病毒株的不同传代。全序列的测定对于研究疫苗株的减毒机理及疫苗的遗传学质控标准具有一定意义。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 sa14-14-2疫苗株 基因组 序列分析

原文传递

三带喙库蚊胸腔接种乙型脑炎减毒活疫苗病毒的感染动态及致病力观察 被引量：8

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作者 冯云 张海林 +5 位作者 俞永新 章域震 杨卫红 董关木 贾丽丽 姚亚夫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期278-281,共4页

目的通过蚊虫胸腔接种乙脑病毒减毒活疫苗SAl4-14-2株。了解该疫苗病毒在蚊虫体内的繁殖情况及其毒力稳定性，进一步评价该疫苗的安全性。方法建立三带喙库蚊的实验室种群，用SA14-14-2、SA14和中山株胸腔接种三带喙库蚊，感染后不同时... 目的通过蚊虫胸腔接种乙脑病毒减毒活疫苗SAl4-14-2株。了解该疫苗病毒在蚊虫体内的繁殖情况及其毒力稳定性，进一步评价该疫苗的安全性。方法建立三带喙库蚊的实验室种群，用SA14-14-2、SA14和中山株胸腔接种三带喙库蚊，感染后不同时间取一定数量的蚊虫。研磨制成悬液，用空斑试验检测蚊虫体内的病毒滴度。用感染蚊悬液接种乳鼠和感染蚊虫直接叮咬乳鼠的方法，观察对乳鼠的致病性。结果SAl4-14-2、SAl4和中山株病毒感染蚊虫后，第2～20d蚊虫体内均能检测到病毒，其中SA14-14-2株的滴度为2～3．72logPFU／ml，SAl4株为3～4．85logPFU／ml，中山株为3～5．40log-PFu／ml。中山株的感染滴度最高，其次是SA14株，SAl4-14—2株的感染滴度最低。表明蚊虫对野毒株（中山株和SA14株）更为敏感。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊悬液接种乳鼠，未能引起乳鼠发病或死亡。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊叮咬乳鼠，未见乳鼠发病或死亡，也未从小白鼠血清中检测到乙脑病毒抗体。结论经胸腔接种。SA14-14-2病毒能在三带喙库蚊体内稳定繁殖。动物接种和蚊虫叮咬试验表明，经蚊体内繁殖的SA14-14-2病毒毒力仍保持原有的弱毒特性，表明该减毒活疫苗通过蚊虫体内繁殖后不会造成传播。 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎病毒 Ssa14-14-2疫苗株 三带喙库蚊 胸腔接种 动物感染实验 空斑试验

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