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小柴胡汤抗人呼吸道合胞病毒感染有效成分与网络机制研究 被引量：1
1
作者 王超 赵君 +2 位作者 白祎名 王喆 刘艾林 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第S01期31-32,共2页
目的探讨小柴胡汤抗人呼吸道合胞病毒(RSV)的物质基础与网络作用机制。方法收集小柴胡汤有效成分和对应靶点,并检索RSV感染疾病靶点,构建小柴胡汤-活性成分-RSV疾病靶点网络,筛选核心靶点基因,进行GO功能和KEGG富集分析。以RSV-Long株... 目的探讨小柴胡汤抗人呼吸道合胞病毒(RSV)的物质基础与网络作用机制。方法收集小柴胡汤有效成分和对应靶点,并检索RSV感染疾病靶点,构建小柴胡汤-活性成分-RSV疾病靶点网络,筛选核心靶点基因,进行GO功能和KEGG富集分析。以RSV-Long株病毒感染的Hep2细胞为研究对象,检测筛选到的化合物抗RSV效果。结果从小柴胡汤中筛选出142个与RSV疾病靶点相关的化合物,包括槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇、豆甾醇、富马碱、黄芩素、查尔酮A、柚皮素等。预测共获得小柴胡汤70个治疗RSV的潜在靶点,富集分析结果表明其多与细胞凋亡、血管生成、氧化应激、抗炎反应、免疫调节和病毒感染等相关,核心基因为AR、NOS2、PTGS2、ADRB2、KDR、BCL2等。此外,体外药效评价结果发现小柴胡汤中一黄铜类化合物能够剂量依赖性地抑制RSV病毒在细胞上的合胞体病变。结论小柴胡汤可通过多个宿主调节因素发挥抗RSV作用,小柴胡汤中存在直接抑制RSV病毒的活性成分。 展开更多
关键词 小柴胡汤 人呼吸道合胞病毒 网络药理学
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人呼吸道合胞病毒疫苗研发的突破及挑战
2
作者 虞结梅 郑妍鹏 +2 位作者 彭向雷 付远辉 何金生 《中国食品药品监管》 2023年第12期64-73,共10页
人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)已被发现60余年。在经历了20世纪60年代RSV疫苗研发失败后,基于融合前融合糖蛋白(prefusion fusion glycoprotein,preF)的RSV结构性疫苗目前已取得突破性进展,通过接种孕妇和6... 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)已被发现60余年。在经历了20世纪60年代RSV疫苗研发失败后,基于融合前融合糖蛋白(prefusion fusion glycoprotein,preF)的RSV结构性疫苗目前已取得突破性进展,通过接种孕妇和60岁以上老年人群,为新生儿及老年人群提供有效保护,从而解决了预防RSV感染“无苗可用”的历史难题。2023年是RSV疫苗研发的里程碑,也将成为新的起点。在此背景下,本文系统介绍了RSV疫苗研发进展、面临的挑战及今后的发展方向,提出针对RSV不同易感人群应采用不同疫苗形式的科学依据及对策,并对RSV感染重点人群(如血清学阴性婴幼儿等低龄儿童)的疫苗研发难点及候选疫苗形式进行了全面分析。结合基于RNA病毒反向遗传学技术的RSV减毒活疫苗(live-attenuated vaccine,LAV)研发设计、临床试验数据及黏膜疫苗优势,笔者认为RSV LAV是预防6个月及以上婴幼儿和低龄儿童RSV感染的前景较好的候选疫苗,有望为RSV疫苗研发带来新突破。此外,本文就如何加强我国RSV疫苗研发提出建议。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 融合前融合糖蛋白 亚单位疫苗 疾病增强作用 减毒活疫苗
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小心感染HRSV——人呼吸道合胞病毒
3
作者 晓金 《生命与灾害》 2023年第3期28-29,共2页
春季是各类呼吸道传染病高发时期,其中人呼吸道合胞病毒(HRSV)是呼吸道感染的一种常见病毒。HRSV到底是什么病毒HRSV为肺炎病毒科、正肺病毒属的RNA病毒。目前,在国际上已鉴定出的45个基因型里,A亚型的ON1基因型和B亚型的BA9基因型是全... 春季是各类呼吸道传染病高发时期,其中人呼吸道合胞病毒(HRSV)是呼吸道感染的一种常见病毒。HRSV到底是什么病毒HRSV为肺炎病毒科、正肺病毒属的RNA病毒。目前,在国际上已鉴定出的45个基因型里,A亚型的ON1基因型和B亚型的BA9基因型是全球流行的优势基因型。 展开更多
关键词 呼吸道传染病 呼吸道感染 优势基因型 人呼吸道合胞病毒 RNA病毒 B亚型 常见病毒 A亚型
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可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备 被引量：11
4
作者 杨兵 何金生 +7 位作者 石长信 张梅 虞结梅 谢灿 陆燕燕 付远辉 彭向雷 洪涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期682-685,共4页
构建可表达A亚型人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytialvirus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定。将带有CMV... 构建可表达A亚型人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytialvirus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定。将带有CMV启动子序列的F基因亚克隆至克隆载体pSC11,鉴定正确后,克隆至HDAd质粒pSC15B,构建pSC15B/F HDAd重组质粒,PmeⅠ消化pSC15B/F去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/F DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/F载体粗提液,随后以HDAd/F粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/F达到复制极限,同时以可表达β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)报告基因的HDAdLacZ载体作为平行对照监测载体复制过程。与辅助病毒共感染293Cre4细胞进一步扩增HDAd/F、CsCl梯度法超速离心制备大量纯化的HDAd/F载体,体外感染293细胞,RT-PCR检测到F基因有转录,Western blot分析表明F蛋白有特异性表达。总之,成功构建HDAd/F载体并在真核细胞中实现表达,为体内免疫学效力试验奠定基础,为研制RSV疫苗提供了一种新方法。 展开更多
关键词 辅助病毒依赖型腺病毒载体 人呼吸道合胞病毒融合蛋白 逆转录聚合酶链式反应 免疫印迹
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中药抗人呼吸道合胞病毒感染的研究进展 被引量：7
5
作者 郑海涛 闫永彬 +4 位作者 任献青 翟文生 张霞 袁斌 丁樱 《中国药房》 CAS 北大核心 2020年第10期1276-1280,共5页
目的:为抗人呼吸道合胞病毒(h RSV)的新药研发和h RSV感染治疗策略的制定提供参考。方法:以"中药""人呼吸道合胞病毒""有效成分""复方""Chinese medicine""Human respiratory s... 目的:为抗人呼吸道合胞病毒(h RSV)的新药研发和h RSV感染治疗策略的制定提供参考。方法:以"中药""人呼吸道合胞病毒""有效成分""复方""Chinese medicine""Human respiratory syncytial virus""Active ingredient""Compound"等为中英文关键词,在中国知网、万方数据、维普网、Pub Med、Medline等数据库中组合查询2002年8月-2020年2月发表的相关文献,对抗h RSV中药有效成分、单味中药及中药复方的相关研究进行论述。结果与结论:共检索到相关文献146篇,其中有效文献56篇。有抗h RSV药理作用的中药成分有黄芩苷、荭草苷、大黄素、大蒜多糖、绿原酸、甘草酸等,单味中药有桑白皮、虎杖、板蓝根、甘草、夏枯草、黄芩、金银花等,中药复方有银翘散、扶正解毒化瘀方、定喘汤、清气解毒方、苏黄止咳胶囊、清肺口服液、连花清瘟颗粒、金欣口服液、柴葛口服液、金振口服液等。其相关作用机制主要包括在体内外直接抑制h RSV活性,降低病毒滴度,减轻炎症反应;或通过抑制h RSV相关基因的表达,调控相关信号通路及炎症细胞因子、关键蛋白的表达,影响h RSV的生物学过程;或通过代谢途径,调节h RSV感染后导致的代谢紊乱;或通过免疫调节作用,减轻气道炎症,减少神经源性介质等。目前,抗h RSV中药及其复方有效成分的复杂性以及有效成分对潜在作用靶点研究的局限性均极大程度地制约了中医药的现代化和国际化进程。研究者应利用现代技术优化中药及其复方的药效物质基础研究,并深入探讨其作用机制,以促进中药的合理利用与研发。 展开更多
关键词 中药 人呼吸道合胞病毒 有效成分 单味中药 中药复方
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人呼吸道合胞病毒F基因的克隆、真核表达与鉴定 被引量：4
6
作者 袁媛 何金生 +4 位作者 张梅 宋蔚 李栋梁 虞结梅 杨兵 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期330-333,共4页
目的克隆人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)F基因,构建F基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/F,并进行表达和鉴定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,通过RT-PCR从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得F蛋白的基因,然... 目的克隆人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)F基因,构建F基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/F,并进行表达和鉴定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,通过RT-PCR从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得F蛋白的基因,然后克隆到pGEM-3zf载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),行酶切鉴定,脂质体法转染COS-7细胞,应用Western blotting方法分析F基因表达情况。结果测序证实得到HRSV F基因序列,序列分析显示没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blotting方法检测到了F蛋白的特异性条带。结论成功克隆HRSV F基因,并在真核细胞中获得表达。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 F基因 真核表达
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北京地区人呼吸道合胞病毒核蛋白基因的序列分析及原核表达 被引量：2
7
作者 孙宇 邢江峰 +4 位作者 朱汝南 邓洁 赵林清 王芳 钱渊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期459-465,共7页
为了解北京地区流行的人呼吸道合胞病毒（HRSV）N蛋白基因的特征，并用大肠杆菌表达获得N蛋白，从2006年1月至3月收集的首都儿科研究所附属儿童医院急性呼吸道感染患儿标本中分离到7株HRSV毒株（3株A亚型，4株B亚型），分别经RTPCR扩增... 为了解北京地区流行的人呼吸道合胞病毒（HRSV）N蛋白基因的特征，并用大肠杆菌表达获得N蛋白，从2006年1月至3月收集的首都儿科研究所附属儿童医院急性呼吸道感染患儿标本中分离到7株HRSV毒株（3株A亚型，4株B亚型），分别经RTPCR扩增得到HRSVN蛋白全基因，克隆至pUCm—T载体中并进行测序和分析；从重组质粒pUCm—N9968中经PCR扩增获得N基因，亚克隆人原核表达载体pET30a（＋）中，得到重组表达质粒pET30a—N9968，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导培养；SDS-PAGE和Westernblot检测目的蛋白的表达和抗原性。经扩增并测序，7株HRSVN蛋白基因全长均为1176bp，编码一个含391个氨基酸的蛋白；北京地区7株RSV分离株的N蛋白基因之间的核苷酸和推导的氨基酸同源性分别在85．4％～99．7％之间和95．4％～100％之间，进一步证明N蛋白基因的高度保守性。经诱导培养产生大量带6个组氨酸标记的重组N蛋白，主要以包涵体形式存在。N蛋白粗提物经Ni^2＋亲和层析获得较理想纯化。Westernblot结果显示，所表达的蛋白能与特异性单克隆抗体和人血清反应。说明本研究构建的重组pET30a-N9968原核表达质粒使N蛋白获得了高效表达，并且具有特异的抗原活性，为今后进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 核(N)蛋白 序列分析 原核表达 抗原性
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真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法 被引量：2
8
作者 陆燕燕 何金生 +6 位作者 张梅 虞结梅 谢灿 袁媛 薛绍礼 宋蔚 郑娴娴 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期188-191,共4页
目的真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F),并完成蛋白纯化及纯度测定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,PCR方法扩增出3′端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体... 目的真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F),并完成蛋白纯化及纯度测定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,PCR方法扩增出3′端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine 2000转染COS-7细胞,72h后再用Western blot检测目的蛋白的表达。Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度。结果核酸序列分析证实获得带His标签的RSVF基因序列,没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上。结论初步建立了真核表达RSVF蛋白的纯化方法,为进一步优化RSVF蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 F基因 真核表达 纯化
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人呼吸道合胞病毒不同纯化方法的比较研究 被引量：3
9
作者 董莉娟 李华 +6 位作者 蒋蕊鞠 杨蓉 龙润乡 白慧珠 崔萍芳 杨婷 谢忠平 《医学研究杂志》 2011年第4期73-76,共4页
目的比较人呼吸道合胞病毒（HRSV）的2种纯化方法。方法 HRSV经超滤浓缩后,分别采用蔗糖密度梯度离心法和Sepharose 4FF凝胶过滤层析法纯化。对纯化产物进行感染性效价、SDS-PAGE还原电泳分析及Western blot检测,并取目的产物免疫ICR小... 目的比较人呼吸道合胞病毒（HRSV）的2种纯化方法。方法 HRSV经超滤浓缩后,分别采用蔗糖密度梯度离心法和Sepharose 4FF凝胶过滤层析法纯化。对纯化产物进行感染性效价、SDS-PAGE还原电泳分析及Western blot检测,并取目的产物免疫ICR小鼠,检测免疫血清的中和抗体效价。结果经还原电泳,蔗糖密度梯度离心和Sepharose 4FF凝胶过滤层析的纯化产物都在60-70kDa间呈现一主要条带,前者证实为HRSV特异性F蛋白;但在Sepharose 4FF凝胶过滤层析3个样品（第2峰）中检测出目的病毒,感染性效价分别为4.50、4.25和6.25 lgCCID50/ml。两种方法所得纯化产物免疫ICR小鼠均能诱导产生中和抗体,几何平均效价（GMT）为1∶13.93-1∶4.00。含铝佐剂组的抗体阳性率和中和抗体GMT分别是不含铝佐剂组的1.5-2.0倍和1.0-1.4倍。β-丙内酯灭活组的抗体阳性率和中和抗体GMT分别是甲醛灭活组的1.0-1.3倍和1.0-1.1倍。结论蔗糖密度梯度离心法和Sepharose 4FF凝胶过滤层析法均能纯化出HRSV,后者效果更好、效率更高。加铝佐剂有助于提高抗体阳转率;β-丙内酯和甲醛2种灭活剂对免疫效果的影响差异不大。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 纯化 免疫原性 灭活剂
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人呼吸道合胞病毒病理特征分析 被引量：2
10
作者 李华 龙润乡 +4 位作者 蒋蕊鞠 陈思瑾 李志强 杨蓉 谢忠平 《医学研究杂志》 2009年第4期31-34,共4页
目的系统分析人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)对体内外不同细胞影响的病理学变化特征。方法将HRSV A2株病毒接种到人二倍体KMB17细胞、VERO细胞,同时接种小鼠、乳鼠、豚鼠,通过病理切片及电镜切片检查,分析... 目的系统分析人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)对体内外不同细胞影响的病理学变化特征。方法将HRSV A2株病毒接种到人二倍体KMB17细胞、VERO细胞,同时接种小鼠、乳鼠、豚鼠,通过病理切片及电镜切片检查,分析体内外不同细胞的感染变化情况。结果HRSVA2株病毒对VERO细胞感染力强于二倍体KMB17细胞;小鼠及乳鼠脑内接种不引起死亡,没有炎症细胞浸润;豚鼠鼻腔接种主要感染下呼吸道及肺部,引发浸润性病变,对核膜、核仁均产生损伤,肺及组织片状坏死。结论VERO细胞适于HRSVA2株的病毒培养;豚鼠可作为HRSV毒力评价的动物模型。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 病理特征 电镜检查 动物试验
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人呼吸道合胞病毒减毒活疫苗培养的初步探索 被引量：2
11
作者 李志强 陈巍 +5 位作者 李华 龙润乡 沈冬 杨丽仙 张云昆 谢忠平 《实用预防医学》 CAS 2008年第3期698-702,共5页
目的对比人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)经人二倍体KMB17细胞低温传代前后对动物的病理损伤,分析毒力变化情况。方法将HRSVA2株病毒接种到人二倍体KMB17细胞进行低温培养传代,接种原代病毒(5.37LgCCID50/ml... 目的对比人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)经人二倍体KMB17细胞低温传代前后对动物的病理损伤,分析毒力变化情况。方法将HRSVA2株病毒接种到人二倍体KMB17细胞进行低温培养传代,接种原代病毒(5.37LgCCID50/ml)至乳鼠脑内,14d处死解剖,取脑、心、肺作病理切片检查;选择原代、第6代、第11代低温传代病毒接种豚鼠鼻腔,于第7d、第14d分2批分别处死,取心、肝、脾、肺、肾组织作病理切片检查,并取肺组织分离病毒、进行感染性滴度测定、用间接免疫荧光法对其进行鉴定。结果经脑内接种的乳鼠均未死亡,且乳鼠的脑、肺HE染色切片与对照组相比均无明显著差异。豚鼠经鼻腔接种,接种原代病毒组第14d处死时体重明显较对照组轻,6代组和11代组与对照组接近;3组病毒均引发豚鼠间质性肺炎;3组豚鼠肺组织分离的病毒滴度差异不大,平均为4.0Lg。结论乳鼠脑内接种HRSV不能导致死亡,脑组织不是HRSV的病变靶器官;HRSV经鼻腔接种豚鼠能引起强烈的肺部感染,豚鼠可作为HRSV毒力评价的动物模型;HRSV在KMB17细胞上经低温传11代,接种豚鼠仍能引起间质性肺炎,未出现明显的减毒株特征,还需要进一步减毒。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 冷传代 动物模型 间质性肺炎
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人呼吸道合胞病毒Long株的免疫原性初探 被引量：1
12
作者 李华 杨婷 +6 位作者 岳磊 刘正玲 姜广菊 龙润乡 杨蓉 罗芳宇 谢忠平 《医学研究杂志》 2014年第6期17-21,共5页
目的评价人呼吸道合胞病毒(HRSV)Long株的免疫原性,为进一步的研究疫苗提供实验数据。方法将HRSV制备成纯化抗原,取40只ICR鼠,随机分为4组,分别用纯化HRSV、纯化HRSV+Al(OH)3、并设0.01 mol/L PBS、Al(OH)3对照组,0天、28天免疫小鼠,采... 目的评价人呼吸道合胞病毒(HRSV)Long株的免疫原性,为进一步的研究疫苗提供实验数据。方法将HRSV制备成纯化抗原,取40只ICR鼠,随机分为4组,分别用纯化HRSV、纯化HRSV+Al(OH)3、并设0.01 mol/L PBS、Al(OH)3对照组,0天、28天免疫小鼠,采用中和试验检测血清中和抗体,流式检测7种细胞因子。结果初免后28天,加Al(OH)3组与无Al(OH)3组抗体阳转率分别为60%和50%,抗体几何平均效价(GMT)分别为1∶4.49和1∶5.27;加强免疫后,Al(OH)3组与无Al(OH)3组小鼠血清抗体阳转率均达100%,抗体几何平均效价(GMT)分别为1∶17.15和1∶10.56,平均增长3.8倍和2.0倍;中和抗体在组间无差异,而组内初免与再免的中和抗体有统计学差异(P<0.01)。加Al(OH)3样品组与无Al(OH)3样品组,所检测7种细胞因子均诱导IL-6及TNF,与两个对照组间有统计学差异(P<0.05),而另外5种细胞因子则无明显升高。结论人呼吸道合胞病毒Long株可产生良好的免疫效应。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 Long株 细胞因子 免疫原性
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人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P的表达鉴定 被引量：1
13
作者 虞结梅 何金生 +2 位作者 李栋梁 杨兵 袁媛 《中国病毒学》 CSCD 2006年第3期213-216,共4页
本研究根据编码A亚型人呼吸道合胞病毒(HumanRespiratorySyncytialVirus,HRSV)核壳体蛋白(Nucleocapsidprotein,N)和磷蛋白(phosphoprotein,P)的基因序列,各设计一对特异性的引物,应用RT-PCR技术,从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得n和p... 本研究根据编码A亚型人呼吸道合胞病毒(HumanRespiratorySyncytialVirus,HRSV)核壳体蛋白(Nucleocapsidprotein,N)和磷蛋白(phosphoprotein,P)的基因序列,各设计一对特异性的引物,应用RT-PCR技术,从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得n和p的基因片断,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。获得的重组质粒通过脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,72h后再用Westernblot鉴定蛋白的表达。结果显示真核表达载体pcDNA3.1(+)/N和pcDNA3.1(+)/P的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变,利用蛋白印记方法也检测到了N和P的特异性条带。于是我们认为成功构建了含有HRSVN和P编码基因的真核表达载体,在真核细胞内能顺利表达。为进一步开展HRSV反向遗传学等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒(HRSV) 核壳体蛋白 磷蛋白 真核表达
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人呼吸道合胞病毒M2-1基因转染对人肺腺癌细胞生长特性的影响
14
作者 张利群 陈杭薇 +3 位作者 王四海 杜玉国 刘晓联 尤兰华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期480-483,共4页
目的探讨人呼吸道合胞病毒(hRSV)M21基因转染对人肺腺癌细胞体外生长特性的影响。方法应用脂质体转染法,将携带M21基因的重组载体pXJ41/M21转入人肺腺癌PAa和A549细胞,并获稳定表达;以不含M21基因的空白载体为对照,采用流式细胞术、MTT... 目的探讨人呼吸道合胞病毒(hRSV)M21基因转染对人肺腺癌细胞体外生长特性的影响。方法应用脂质体转染法,将携带M21基因的重组载体pXJ41/M21转入人肺腺癌PAa和A549细胞,并获稳定表达;以不含M21基因的空白载体为对照,采用流式细胞术、MTT法、胰酶消化试验、软琼脂集落形成实验和Boyden小室等方法观察转染细胞的生长特性、贴壁能力及侵袭能力变化。结果与转染前和转染空白质粒组比较,转染M21基因的PAa和A549细胞的G2/M期细胞比例均显著增加(P<0.05,P<0.01);细胞增殖明显加快(P<0.01),倍增时间缩短;集落形成率显著增加(P<0.01);PAa细胞胰酶消化离壁时间缩短(P<0.01),而A549细胞在3组间无统计学差异;Boyden小室实验中,A549细胞透膜数显著增加(P<0.01),而PAa细胞因透膜数很少,均无法计数。结论M21基因转染能提高体外培养的PAa和A549细胞的增殖能力和侵袭能力,感染hRSV病毒的肺癌患者应引起重视。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 肺肿瘤 基因转染 增殖 侵袭
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人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染肺腺癌细胞系的研究
15
作者 张利群 陈杭薇 +3 位作者 王四海 辛庆红 杜玉国 尤兰华 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第12期15-16,共2页
目的　获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法　通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(... 目的　获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法　通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和Western Blot进行验证。结果　得到了约6 5 0 bp的基因插入片段,DNA测序表明该基因高度保守。筛选出了稳定高量表达M2 - 1基因的PAa和A5 4 9细胞,并被证实有M2 - 1蛋白表达。结论　获得了稳定表达h RSV M2 - 1蛋白的PAa和A5 4 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 基因转染 转录调节 基因真核表达载体 M2-1基因 人肺腺癌细胞系 Western A549细胞株 HRSV 稳定表达 DNA测序 PAa 基因重组 阳性表达 插入片段 Blot 蛋白表达 脂质体 筛选
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人呼吸道合胞病毒荧光PCR检测方法的建立和评价
16
作者 范行良 盛慧英 +1 位作者 田新贵 陈翊 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第8期603-605,共3页
目的建立人呼吸道合胞病毒(hRSV)荧光PCR(FQ-PCR)检测方法,并确定其最低检出限。方法针对hRSVN基因相对高度保守的序列,采用引物和探针设计软件PrimerExpressv2.0,设计1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针,组装成荧光PCR检测试剂。以此试... 目的建立人呼吸道合胞病毒(hRSV)荧光PCR(FQ-PCR)检测方法,并确定其最低检出限。方法针对hRSVN基因相对高度保守的序列,采用引物和探针设计软件PrimerExpressv2.0,设计1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针,组装成荧光PCR检测试剂。以此试剂检测345份咽拭子样品,与ELISA法检测hRSVIgM抗体比较,确定最低检出限。结果该方法的最低检出限是传统的病毒滴度测定的104.79倍。与IgM抗体检测法相比,对于感染早期患者具有更高的检出率。结论建立的hRSVFQ-PCR检测方法具有简便、快捷的特点,适用于hRSV感染的早期诊断。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 荧光聚合酶链反应 病毒滴定
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人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染PAa和A549肺腺癌细胞系
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作者 张利群 陈杭薇 +3 位作者 王四海 辛庆红 杜玉国 尤兰华 《首都医科大学学报》 CAS 2005年第6期733-736,共4页
目的探讨人呼吸道合胞病毒(hRSV)对肺癌细胞的影响。方法构建其转录调控因子M2-1基因真核表达质粒pXJ-41/M2-1,用DNA测序、酶切、PCR等方法鉴定基因重组情况。结果DNA测序表明该基因具有高度保守性;经脂质体转染、以-βactin为参照进行R... 目的探讨人呼吸道合胞病毒(hRSV)对肺癌细胞的影响。方法构建其转录调控因子M2-1基因真核表达质粒pXJ-41/M2-1,用DNA测序、酶切、PCR等方法鉴定基因重组情况。结果DNA测序表明该基因具有高度保守性;经脂质体转染、以-βactin为参照进行RT-PCR,筛选出了高效稳定表达M2-1基因的人肺腺癌PAa和A549细胞株,并经Westernblot验证有M2-1蛋白的表达。结论为进一步探讨M2-1基因在肺癌发生发展中的作用打下基础。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 M2-1基因 肺癌细胞 脂质体 RT-PCR
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人呼吸道合胞病毒感染的SPC-A1细胞相关基因zzz171con的电子克隆与分析
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作者 张其威 李蕾 +4 位作者 赵东赤 张楚瑜 李乐 游上游 黄静宁 《氨基酸和生物资源》 CAS 2005年第2期58-63,共6页
采用mRNA差异显示RT-PCR方法克隆到人呼吸道合胞病毒感染的SPC-A1细胞中相关的50个表达序列标签,其中一个片段g17-1在HRSV感染的细胞中高表达。利用生物信息学的方法对g17-1进行分析鉴定,推测是一个新基因。利用电子克隆,得到一全长210... 采用mRNA差异显示RT-PCR方法克隆到人呼吸道合胞病毒感染的SPC-A1细胞中相关的50个表达序列标签,其中一个片段g17-1在HRSV感染的细胞中高表达。利用生物信息学的方法对g17-1进行分析鉴定,推测是一个新基因。利用电子克隆,得到一全长2101bp的cDNA,对其ORF、启动子、电子表达谱、染色体定位以及所编码的蛋白进行分析,结果表明,该cDNA含有1个ORF,与人类假定蛋白XP_097121同源性达90%,定位于人17号染色体,在肿瘤细胞、腺癌细胞、扁桃体初级B细胞中表达,其编码的蛋白预测定位于细胞核内,推测其与细胞抗病毒感染有一定的关系。 展开更多
关键词 生物信息学 人呼吸道合胞病毒 电子克隆
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9种传统中药提取成分体外抗人呼吸道合胞病毒作用研究 被引量：3
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作者 胡小媛 尹飞飞 +2 位作者 张俊清 李永辉 张旭光 《海南医学院学报》 CAS 2022年第21期1601-1607,共7页
目的:对三叉苦水提物、黄皮叶水提物、路边青水提物、裸花紫珠水提物、胆木醇提物、胆木水提物、角花胡颓子醇提物、角花胡颓子水提物和竹叶椒醇提物共9种传统中药提取成分体外抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HR... 目的:对三叉苦水提物、黄皮叶水提物、路边青水提物、裸花紫珠水提物、胆木醇提物、胆木水提物、角花胡颓子醇提物、角花胡颓子水提物和竹叶椒醇提物共9种传统中药提取成分体外抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)效果进行研究。方法:通过细胞培养技术评估药物对细胞的毒性作用,利用CCK-8法测定细胞存活率,选择细胞存活率大于50%的药物浓度,通过体外细胞感染模型评估药物抗HRSV的效果。结果:路边青水提物、裸花紫珠水提物和角花胡颓子水提物半数有效浓度(EC_(50))分别为0.05 mg/mL、0.03 mg/mL和0.05 mg/mL,治疗指数(therapeutic index,TI)分别为18.60、21.67和56.80。结论:路边青水提物、裸花紫珠水提物和角花胡颓子水提物具有较好的抗人呼吸道合胞病毒效果。 展开更多
关键词 传统中药 人呼吸道合胞病毒 细胞毒性 抗病毒作用 治疗指数
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2021年银川市4株人呼吸道合胞病毒全基因组基因特征 被引量：2
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作者 王新宁 苏艳艳 +4 位作者 吴忠兰 曹慜 李龙山 裴建新 马学平 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期853-860,共8页
目的 分析2021年银川市人呼吸道合胞病毒(HRSV)全基因组的基因特征。方法 收集2021年银川市2所流感监测哨点医院的流感样标本共1 100份,选择发热并伴有严重呼吸道感染症状的标本共669份,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法... 目的 分析2021年银川市人呼吸道合胞病毒(HRSV)全基因组的基因特征。方法 收集2021年银川市2所流感监测哨点医院的流感样标本共1 100份,选择发热并伴有严重呼吸道感染症状的标本共669份,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法筛选出HRSV阳性标本,对其中符合测序要求的HRSV阳性标本进行全基因组测序。在GenBank数据库下载HRSV全球各基因型别代表株,使用MEGA7软件进行序列比对、亲缘关系进化树构建和遗传距离的计算分析,使用DNAStar软件中MegAlign分析HRSV测序株序列核苷酸(氨基酸)的同源性和氨基酸变异。结果 669份全年龄段的鼻咽拭子标本,HRSV阳性标本60份,阳性率为8.97%。其中有4份HRSV阳性标本全基因组测序成功,亲缘关系进化树显示,2株HRSVA为ON1型,2株HRSVB为BA9型。2条HRSVA全长序列均与MN306029.1/USA/2019/ON1全长序列的核苷酸(氨基酸)同源性最高,2条HRSVB G蛋白基因序列均与MW160815.1/Australia/2017/BA9的G蛋白基因序列核苷酸(氨基酸)同源性最高。氨基酸变异分析结果表明,2条HRSVA在第113、131、178、257、258、266位均发生了突变,分别为T113I、V131D、N178G、E257K、H258Q、H266L,YinChuanRSVA-01在第134位发生K突变为R(K134R),2条HRSVB在第159位和第160位均出现氨基酸缺失,在G蛋白第二高变区的第254、270、276、290位均发生T突变为I(T254I、T270I、T276I、T290I)。结论 2021年银川市HRSV出现了RSVA基因型和RSVB基因型的共同流行,以及多个氨基酸位点的变异。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 全基因组 基因特征 分子流行病学
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