细菌脂多糖诱导人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α的合成及核因子-κB的活化 被引量：12

1

作者 李凝旭 李建军 +4 位作者 李庚山 王晶 徐红新 李夏 彭俊 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2002年第4期320-323,共4页

为研究细菌脂多糖对人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α合成和核因子 κB活化的影响 ,采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞 ,经细菌脂多糖刺激后 ,应用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α水平随刺激剂量和时间的变化 ,应用免疫细胞化... 为研究细菌脂多糖对人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α合成和核因子 κB活化的影响 ,采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞 ,经细菌脂多糖刺激后 ,应用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α水平随刺激剂量和时间的变化 ,应用免疫细胞化学方法观察核因子 κB在单核细胞的激活随刺激时间的变化。发现核因子 κB在接受刺激 15min～ 1h之间 ,随刺激时间的延长逐渐从胞质向胞核转移 ,1h达高峰。细菌脂多糖呈浓度依赖性 (1～ 10 0 0 μg L)诱导肿瘤坏死因子α合成 ,肿瘤坏死因子α在刺激后 1h出现 ,6h达到高峰 ,其合成出现在核因子 κB的活化后。以上提示细菌脂多糖通过激活单核细胞内核因子 展开更多

关键词 细菌脂多糖 人外周血单核细胞 肿瘤坏死因子Α 合成 核因子-ΚB 动脉粥样硬化

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细脚拟青霉总多糖对人外周血单核细胞TNF-α水平及增殖活性的影响 被引量：14

2

作者 丁保金 金丽琴 吕建新 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2004年第5期268-270,共3页

目的提取分离细脚拟青霉总多糖 (PtPs) ,探讨其对人外周血单核细胞 (PBMC)的调节作用。方法采用水提醇沉淀法提取PtPs成分 ;用不同浓度的PtPs单独或协同脂多糖 (LPS)在体外刺激PBMC ,酶联免疫法测定TNF α的水平 ,溴化四唑蓝法测定增殖... 目的提取分离细脚拟青霉总多糖 (PtPs) ,探讨其对人外周血单核细胞 (PBMC)的调节作用。方法采用水提醇沉淀法提取PtPs成分 ;用不同浓度的PtPs单独或协同脂多糖 (LPS)在体外刺激PBMC ,酶联免疫法测定TNF α的水平 ,溴化四唑蓝法测定增殖活性。结果所得PtPs制品的纯度为 76 .1% ;适当剂量的PtPs (10 0～ 5 0 0 μg/ml)能够单独或协同LPS提高PBMC对TNF α的分泌 ;还可剂量依赖性地促进PBMC的增殖活性。结论PtPs对体外培养的PBMC具有激活作用 ,可能是发挥免疫药理作用的主要活性成分。 展开更多

关键词 细脚拟青霉 多糖 人外周血单核细胞 肿瘤坏死因子 增殖活性

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来源于人外周血单核细胞的树突状细胞感染rAAV-HBsAg后的功能改变 被引量：6

3

作者 胡贵方 吴小兵 +2 位作者 俞守义 康禹 侯云德 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第7期696-698,701,共4页

目的观察人外周血单核细胞来源树突状细胞(DCs)经重组腺相关病毒(rAAV)载体介导乙肝表面抗原(HBsAg)基因感染后的功能改变。方法采用ELISA试剂盒检测感染rAAV-HBsAg后的DCs (rAAV-HBsAg-DC)分泌IL-12水平以及rAAV-HBsAg-DCs与淋巴细胞... 目的观察人外周血单核细胞来源树突状细胞(DCs)经重组腺相关病毒(rAAV)载体介导乙肝表面抗原(HBsAg)基因感染后的功能改变。方法采用ELISA试剂盒检测感染rAAV-HBsAg后的DCs (rAAV-HBsAg-DC)分泌IL-12水平以及rAAV-HBsAg-DCs与淋巴细胞共孵育后上清中γ-干扰素(IFN-γ)的含量;采用混合白细胞反应(MLR)检测rAAV- HBsAg感染前后DCs刺激同种异体淋巴细胞的增殖能力;用FACSort流式细胞仪检测rAAV-HBsAg-DCs表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR的变化。结果rAAV-HBsAg感染可促进DCs分泌IL-12(P<0.05),感染后的DCs刺激淋巴细胞分泌IFN-γ的水平显著提高(P<0.01),感染前后的DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖能力及其特征性表面分子无明显改变。结论rAAV介导HBsAg基因感染的DCs能诱发淋巴细胞朝Th1型细胞分化,且不明显改变DCs的表型和刺激淋巴细胞增值的功能,rAAV载体介导HBsAg基因体外遗传修饰的DCs可以进一步用于乙型肝炎的免疫治疗研究。 展开更多

关键词 人外周血单核细胞 树突状细胞 感染 重组腺相关病毒 乙肝表面抗原

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人外周血单核细胞体外诱导树突状细胞的形态学观察与功能研究 被引量：3

4

作者 史毓杰 江振友 董军 《实用医学杂志》 CAS 2005年第4期361-363,共3页

目的:探讨从人外周血单核细胞体外培养扩增的树突状细胞(dendriticcell,DC)形态学特征及其活性。方法:人外周血常规分离单个核细胞,粘附6h后去除悬浮细胞,以细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)进行诱导培... 目的:探讨从人外周血单核细胞体外培养扩增的树突状细胞(dendriticcell,DC)形态学特征及其活性。方法:人外周血常规分离单个核细胞,粘附6h后去除悬浮细胞,以细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)进行诱导培养7d,并进行形态学特征,细胞表型和淋巴细胞刺激能力鉴定。结果:培养1周即可得到大量DC,形态学观察可见细胞形态不规则,细胞表面大量突起,为典型的DC特征,免疫组化和间接免疫荧光显示CD1a阳性表达率达80%～95%,并能刺激同种淋巴细胞增殖反应。结论:人外周血单核细胞可经GM-CSF、IL-4诱导培养成DC,具有典型的树突状细胞的形态学特征及抗原呈递能力。 展开更多

关键词 人外周血单核细胞 树突状细胞 形态学观察 DC GM-CSF IL-4 体外诱导 能力 结论 培养

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重组腺相关病毒2型转导人外周血单核细胞来源树突状细胞的研究

5

作者 胡贵方 康禹 +3 位作者 俞守义 彭建强 马鑫 吴小兵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期371-375,共5页

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前发现的功能最强的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC)，能捕获、加工和提呈抗原,参与淋巴细胞的生长分化,并产生原发性CTL反应的细胞,在激活T细胞介导的免疫反应中起关键性作用[1].

关键词 重组腺相关病毒2型 转导 人外周血单核细胞 树突状细胞

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脂多糖预处理对人外周血单核细胞分泌TNFα和PGE_2的影响

6

作者 孙东旭 杜斌 潘家绮 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2003年第4期407-410,共4页

探讨不同剂量脂多糖预处理对健康人外周血单核细胞分泌细胞因子TNFα和PGE2 的影响。分离健康志愿者外周血单核细胞 ,以不同剂量脂多糖 (0、10、10 0、10 0 0 μg L)预处理 2 4h ,然后测定其再次受到不同剂量脂多糖 (0、10、10 0、10 0... 探讨不同剂量脂多糖预处理对健康人外周血单核细胞分泌细胞因子TNFα和PGE2 的影响。分离健康志愿者外周血单核细胞 ,以不同剂量脂多糖 (0、10、10 0、10 0 0 μg L)预处理 2 4h ,然后测定其再次受到不同剂量脂多糖 (0、10、10 0、10 0 0 μg L)刺激后分泌TNFα和PGE2 水平。采用ELISA方法测定TNFα,EIA方法测定PGE2 。脂多糖可刺激人外周血单核细胞分泌TNFα和PGE2 。脂多糖预处理导致外周血单核细胞分泌TNFα减少 ,而明显增加PGE2 的生成。 展开更多

关键词 脂多糖 预处理 人外周血单核细胞 TNFΑ PGE2 细胞因子 内毒素

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YC-1抑制人外周血单核细胞和内毒素血症小鼠细胞因子的释放

7

作者 周国勇 胡森 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期376-376,共1页

关键词 YC-1 内毒素血症 人外周血单核细胞 诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 抑制 小鼠 肿瘤坏死因子-α DNA结合活性 人血白细胞 LPS诱导 细胞因子生成 致炎细胞因子 细胞毒作用 腹膜内注射 组织学检查 核转录因子 调节作用 细胞生长

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阳离子脂质体介导的A20基因转染人外周血单核细胞的可行性

8

作者 徐丹 曲鹏 +1 位作者 高静 崔影 《医学研究杂志》 2014年第3期32-35,共4页

目的探讨阳离子脂质体介导的A20基因转染人外周血单核细胞的可行性及最佳转染条件。方法采用脂质体Lipofectamine TM 2000包裹pCAGGS-GFP/A20质粒转染人外周血单核细胞,通过荧光显微镜检测GFP报告基因,RT-PCR检测A20基因表达。结果应用L... 目的探讨阳离子脂质体介导的A20基因转染人外周血单核细胞的可行性及最佳转染条件。方法采用脂质体Lipofectamine TM 2000包裹pCAGGS-GFP/A20质粒转染人外周血单核细胞,通过荧光显微镜检测GFP报告基因,RT-PCR检测A20基因表达。结果应用Lipofectamine TM 2000介导的A20基因转染人外周血单核细胞,在2×106/L细胞接种浓度,脂质体与质粒的量之比为4μl∶3μg时,转染效果最佳,RT-PCR证实成功获得A20目的基因的表达。结论脂质体转染法可介导A20基因在人外周血单核细胞获得表达,该研究为A20基因转染的相关实验研究提供参考依据。 展开更多

关键词 脂质体细胞转染 人外周血单核细胞

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猪鼻支原体蛋白P37诱导人外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子 被引量：4

9

作者 宁金鹰 黄甦 +2 位作者 吴健 孟麟 寿成超 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期353-357,共5页

胃癌组织中存在较高的猪鼻支原体感染率,提示猪鼻支原体感染同胃癌的发生可能存在某种相关性.由于肿瘤坏死因子(TNF-α)在微生物感染导致肿瘤发生中起重要作用,而P37蛋白是猪鼻支原体的主要免疫原,因此,探讨P37能否诱导TNF-α的表达与释... 胃癌组织中存在较高的猪鼻支原体感染率,提示猪鼻支原体感染同胃癌的发生可能存在某种相关性.由于肿瘤坏死因子(TNF-α)在微生物感染导致肿瘤发生中起重要作用,而P37蛋白是猪鼻支原体的主要免疫原,因此,探讨P37能否诱导TNF-α的表达与释放,对阐明猪鼻支原体在胃癌发生中的可能分子机制有重要意义,运用PCR技术克隆了p37基因,在对其编码序列中7个色氨酸密码子TGA进行TGG定点突变后,利用PGEX-4T-1表达载体在大肠杆菌中成功表达了P37蛋白,并经Western blot得到证实,在此基础上,利用RT-PCR及TNF-α敏感细胞株L929的细胞毒性实验,发现P37确能诱导外周血单核细胞表达和释放TNF-α,抗P37单克隆抗体PD4对该诱导活性有明显的中和作用,结果提示,猪鼻支原体通过P37诱导TNF-α产生在猪鼻支原体感染所致相关疾病中可能起重要作用,值得进一步研究. 展开更多

关键词 猪鼻支原体蛋白P37 人外周血单核细胞 肿瘤坏死因子 猪鼻支原体感染 TNF-Α 胃癌 PD4 组织化学检测

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钙离子载体在诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞中的作用 被引量：2

10

作者 吴军 王晓怀 +4 位作者 杨德懋 杨太成 王捷 陈政良 富宁 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期39-43,共5页

目的　研究钙离子载体 (CI)能否诱导人外周血单核细胞 (PBMC)分化为树突状细胞(DC) ,并初步探讨其信号转导途径。方法　分离健康献血者的PBMC ,在体外用CI(A2 31 87)或人重组粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)和CI培养 4 0h ,或rh... 目的　研究钙离子载体 (CI)能否诱导人外周血单核细胞 (PBMC)分化为树突状细胞(DC) ,并初步探讨其信号转导途径。方法　分离健康献血者的PBMC ,在体外用CI(A2 31 87)或人重组粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)和CI培养 4 0h ,或rhGM CSF和白细胞介素 4 (IL 4 )培养 7d ,部分PBMC预先用W 7或CsA或KT5 92 6处理 30min后 ,再加入上述细胞因子或CI。相差显微镜下观察细胞形态 ,流式细胞仪检测细胞表面CD1 4、CD80、CD86、CD83等分子的表达 ,MTT比色法检测其对同种异体混合T淋巴细胞的刺激增殖作用。结果　健康献血者的PBMC经CI培养 4 0h ,或rhGM CSF与CI培养 4 0h ,或rhGM CSF与IL 4培养 7d ,均可获得DC的典型形态和表面分子的表达 ,包括CD1 4表达下调、共刺激分子 (CD80、CD86 )表达上调 ,以及较强刺激同种异体混合T淋巴细胞增殖的作用 ;CI诱导的DC其CD1 4分子的下调及CD83分子的上调更明显 ,刺激混合T淋巴细胞的增殖能力更强 ;rhGM CSF可协同CI诱导PBMC向DC的分化。经rhGM CSF及CI处理的PBMC ,其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力 ,均受到W 7或CsA或KT5 92 6不同程度的抑制 ;而rhGM CSF及IL 4所诱导的PBMC其形态、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用却不受上述抑制剂的影响。 展开更多

关键词 PBMC RHGM-CSF 诱导 表达 GM—CSF 人外周血单核细胞 CD14 分化 细胞信号转导途径 增殖能力

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抗菌药物对人外周血单核细胞内嗜肺军团菌抗菌活性 被引量：2

11

作者 毕筱刚 周凤丽 +2 位作者 朱翔 冼莹 张扣兴 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期3531-3534,共4页

目的探讨红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星、莫西沙星4种抗菌药物对人外周血单核细胞内嗜肺军团菌的抗菌活性。方法采用有限稀释法测定上述4种抗菌药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞外抗菌活性,再采用噻唑蓝比色法(MTT法)测定上述药物对嗜... 目的探讨红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星、莫西沙星4种抗菌药物对人外周血单核细胞内嗜肺军团菌的抗菌活性。方法采用有限稀释法测定上述4种抗菌药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞外抗菌活性,再采用噻唑蓝比色法(MTT法)测定上述药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞内抗菌活性。结果细胞外抗菌活性(有限稀释法):红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星、莫西沙星分别为0.125、0.020、0.016、0.016μg/ml;4种抗菌药物的细胞内抗菌活性:红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星、莫西沙星分别为0.22、0.017、0.013、0.004μg/ml。结论氟喹诺酮类药物对人外周血单核细胞内嗜肺军团菌ATCC 33152具有很强的抗菌活性,其中莫西沙星的细胞内抗菌活性最强。 展开更多

关键词 嗜肺军团菌 人外周血单核细胞 抗菌活性

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SPE-LC-MS/MS法测定人外周血单核细胞内齐多夫定三磷酸化物

12

作者 牟玲丽 李三望 +4 位作者 刘星菱 谢非凡 周瑞 唐芳 余鹏 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1363-1368,共6页

目的：建立人外周血单核细胞（hPBMCs）内齐多夫定三磷酸化物（ZDV—TP）的固相萃取-液相色谱-串联质谱（SPE—LC—MS／MS）测定方法，并将其应用于临床试验中ZDV—TP在hPBMCs内浓度的测定。方法：hPBMCs样本采用强阴离子交换固相萃取... 目的：建立人外周血单核细胞（hPBMCs）内齐多夫定三磷酸化物（ZDV—TP）的固相萃取-液相色谱-串联质谱（SPE—LC—MS／MS）测定方法，并将其应用于临床试验中ZDV—TP在hPBMCs内浓度的测定。方法：hPBMCs样本采用强阴离子交换固相萃取小柱实现ZDV—TP与齐多夫定（ZDV）、齐多夫定-磷酸化物（ZDV—MP）和齐多夫定二磷酸化物（ZDV—DP）的分离后，加入酸性磷酸酶将其去磷酸化为等物质的量的齐多夫定原药。去磷酸化后的样本经HLB固相萃取小柱脱盐处理后，采用Agi—lent XDB—C18色谱柱，以0．2％甲酸水溶液-甲醇为流动相进行等度洗脱。采用ESI正离子模式检测，离子监测方式为MRM，用于定量分析的离子反应分别为m／z267．9-m办126．8（ZDV）和m／z247．9→m/z120．8（替硝唑，内标）。结果：ZDV—TP在0．1125～82．05ng·mL-1（每106个细胞含ZDV—TP0．06～43pmol），范围内线性良好（r=0．9971），定量下限为0．1125ng·mL-1。日内及日间精密度（RSD）均小于9．0％，回收率和基质效应均符合生物样本的测定要求。结论：本文所建立的方法灵敏度高，专属性强，且成功应用于临床试验中ZDV在hPBMCs内的ZDV—TP的测定。 展开更多

关键词 固相萃取-液相色谱-串联质谱法(SPE-LC-MS/MS)齐多夫定 齐多夫定三磷酸化物 人外周血单核细胞(hPBMCs) 生物样本检测

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γ射线对人外周血单核细胞向破骨样细胞诱导分化的影响

13

作者 陈军祥 朱国英 +1 位作者 王建平 翟江龙 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期173-177,共5页

目的探讨电离辐射对人外周血单核细胞来源的破骨细胞体外诱导分化的影响。方法将人外周血采用密度梯度离心法获得单核细胞，经核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）诱导培养24h，分别给予0、0．75和2Gy... 目的探讨电离辐射对人外周血单核细胞来源的破骨细胞体外诱导分化的影响。方法将人外周血采用密度梯度离心法获得单核细胞，经核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）诱导培养24h，分别给予0、0．75和2Gy的137Csγ射线照射，第7天行TRAP染色后计数TRAP阳性多核破骨细胞，第10天取象牙骨片基质行甲苯胺蓝染色观察骨吸收陷窝形成；qRT—PCR检测破骨细胞特征标志物组织蛋白酶K和integrinβ3的mRNA表达水平；ELISA法检测培养上清液中TRAcP-5b含量。结果0．75Gy照射组TRAP染色阳性多核破骨细胞计数显著多于对照组（0Gy）（t=3．451，P〈0．05），组织蛋白酶K和integrinβ3的mRNA表达水平明显上调（t=2．343、2．728，P〈0．05），且培养液中TRAcP-5b浓度明显增加（t=3．631，P〈0．05）。而2Gy照射组的TRAP染色阳性多核破骨细胞计数少于对照组，并伴有组织蛋白酶K和integrinB3的mRNA表达水平下调、培养上清液中TRAcP-5b浓度下降，但差异无统计学意义。结论电离辐射可改变人外周血单核细胞破骨样细胞分化趋势，小剂量照射时可促进破骨细胞分化和骨吸收活性，而较大剂量照射后破骨细胞分化和骨吸收活性均降低。 展开更多

关键词 电离辐射 人外周血单核细胞 破骨细胞分化

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超声波促进人外周血单核淋巴细胞增殖的实验研究 被引量：2

14

作者 史春颖 李甜甜 +4 位作者 安婷婷 张久维 李子卓 王琦 杨秀华 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2015年第5期405-407,411,共4页

目的研究不同强度和辐照时间的超声波对人外周血单核淋巴细胞增殖的影响。方法在96孔板中,对照组不做任何处理,实验组分别用不同强度和辐照时间的超声波进行处理,24 h后用CCK8检测超声波对淋巴细胞活性的影响,计算细胞增殖率。结果实验... 目的研究不同强度和辐照时间的超声波对人外周血单核淋巴细胞增殖的影响。方法在96孔板中,对照组不做任何处理,实验组分别用不同强度和辐照时间的超声波进行处理,24 h后用CCK8检测超声波对淋巴细胞活性的影响,计算细胞增殖率。结果实验组的吸光度值较对照组不同程度的增高,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论一定强度及辐照时间的超声波对淋巴细胞的增殖有促进作用。 展开更多

关键词 超声波 人外周血单核淋巴细胞 细胞增殖

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杂色曲霉素对体外培养人外周血白细胞介素Ⅱ分泌影响的研究 被引量：9

15

作者 黄向华 张祥宏 +7 位作者 严霞 尹桂然 谭延伟 李月红 刘艳丽 杨建柱 王俊灵 王凤荣 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期112-114,共3页

杂色曲霉素是我国肿瘤高发区粮食中的优势污染霉菌毒素。为探讨杂色曲霉素 (ST)对人体免疫机能的影响 ,采用双抗体夹心ELISA方法对ST作用后人外周血单核细胞 (HPBMc)培养上清液中白血细胞介素Ⅱ (IL 2 )的分泌水平进行了检测。结果表明 ... 杂色曲霉素是我国肿瘤高发区粮食中的优势污染霉菌毒素。为探讨杂色曲霉素 (ST)对人体免疫机能的影响 ,采用双抗体夹心ELISA方法对ST作用后人外周血单核细胞 (HPBMc)培养上清液中白血细胞介素Ⅱ (IL 2 )的分泌水平进行了检测。结果表明 ,不同浓度 ( 0 0 3 12 5～ 2mg L)ST处理 2 4h后 ,体外培养的HPB Mc的IL 2分泌均受到一定程度的抑制 ,其中以较低浓度ST( 0 0 3 12 5～ 0 12 5mg L)和较高浓度ST( 1～ 2mg L)抑制作用最明显 (P <0 0 5 )。在ST 1mg L作用 1～ 64h的时间范围内 ,ST对HPBMcIL 2的分泌总体表现抑制作用。ST处理后 8～ 64h ,随ST处理时间的延长 ,对IL 2分泌的抑制作用逐渐增强 (r =0 82 2 ,P <0 0 5 )。本研究结果提示 ,ST对HPBMcIL 展开更多

关键词 杂色曲霉素 人外周血单核细胞 白细胞介素Ⅱ 肿瘤 霉菌毒素 致癌性 免疫机能

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丙型肝炎病毒体外感染人外周血单个核细胞的初步研究 被引量：1

16

作者 闵峰 王素美 +2 位作者 郝飞 王宇明 宋闽宁 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 2003年第9期811-813,共3页

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)在体外能否感染人外周血单个核细胞 ,并观察其复制情况。方法　 HCVRNA阳性血清与原代培养的外周血单个核细胞共同孵育 6～ 8h,收集不同时相点标本 ,以逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)、免疫组化、原位杂交分... 目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)在体外能否感染人外周血单个核细胞 ,并观察其复制情况。方法　 HCVRNA阳性血清与原代培养的外周血单个核细胞共同孵育 6～ 8h,收集不同时相点标本 ,以逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)、免疫组化、原位杂交分别检测细胞内或上清中正负链 RNA,细胞内 HCV NS3、NS5、CP10 3种抗原的表达情况 ,以及原位检测 HCV负链 RNA。结果　接种感染血清后 5 d,可在细胞内或培养上清中间断检出 HCV正负链 RNA;HCV NS3、NS5、CP10可在感染细胞内表达 ,阳性物质位于胞浆中 ;原位杂交法证实细胞胞浆内存在负链 RNA。结论　 HCV在体外能感染原代培养的人外周血单核细胞 ,并在其中复制。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 人外周血单核细胞

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二磷酸盐对关节磨屑刺激单核细胞分泌IL-1β的抑制作用 被引量：2

17

作者 陈明 夏仁云 《中国骨伤》 CAS 2004年第10期596-598,共3页

目的:研究二磷酸盐对关节磨屑刺激单核细胞分泌IL-β的影响。方法:分离培养人外周血单核细胞,加入关节磨屑及不同浓度的阿伦膦酸钠,ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量,原位杂交检测IL-1β mRNA的表达。结果:关节磨屑组IL-1β及基因的表... 目的:研究二磷酸盐对关节磨屑刺激单核细胞分泌IL-β的影响。方法:分离培养人外周血单核细胞,加入关节磨屑及不同浓度的阿伦膦酸钠,ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量,原位杂交检测IL-1β mRNA的表达。结果:关节磨屑组IL-1β及基因的表达显著高于对照组(P<0.01),不同浓度的阿伦膦酸钠组IL-1β及基因的表达明显低于关节磨屑组(P<0.01)。结论:阿伦膦酸钠能通过下调人外周血单核细胞IL-1β3及mRNA的表达,对人工关节松动可能起防治作用。 展开更多

关键词 IL-1Β 关节 阿伦膦酸钠 人外周血单核细胞 表达 二磷酸盐 分泌 下调 入关 刺激

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Ag85A对人单核细胞活性和功能的影响 被引量：1

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作者 许瑞 杜先智 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期98-104,共7页

目的研究结核分枝杆菌分泌抗原85A(antigen85A,Ag85A)重组真核表达质粒pcDNA3.1-Ag85A转染人外周血单核细胞的特性,探讨目的基因Ag85A能否在单核细胞表达,从而制备具有免疫活性的人外周血单核细胞。方法分离人外周血单核细胞并进行原代... 目的研究结核分枝杆菌分泌抗原85A(antigen85A,Ag85A)重组真核表达质粒pcDNA3.1-Ag85A转染人外周血单核细胞的特性,探讨目的基因Ag85A能否在单核细胞表达,从而制备具有免疫活性的人外周血单核细胞。方法分离人外周血单核细胞并进行原代培养,流式细胞仪鉴定单核细胞纯度;Ag85A重组真核表达质粒pcDNA3.1-Ag85A转染单核细胞;RT-PCR检测目的基因Ag85A在单核细胞中的表达,目的蛋白Ag85A的表达采用Western blot鉴定。从外周血分离得到T淋巴细胞,与转染后的单核细胞共同孵育,并设空质粒转染组、重组质粒+单核细胞为对照组,3 d后用MTT法检测T淋巴细胞增殖情况。结果人外周血单核细胞经原代培养6 d后,获得大量高纯度的单核细胞,流式细胞术鉴定人单核细胞表面特异性标记CD14阳性的细胞高表达(98.35%);RT-PCR法鉴定表明Ag85A基因在转染单核细胞中成功转录,Western blot证实转染后的单核细胞可合成目的蛋白Ag85A。与外周血T淋巴细胞共同孵育后,经转染重组质粒的单核细胞相对对照组,有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力。结论 Ag85A重组真核表达质粒pcDNA3.1-Ag85A成功转染人外周血单核细胞,目的基因Ag85A能在人单核细胞中的表达。经转染的外周血单核细胞有刺激外周血T淋巴细胞增殖能力,从而为结核病的疫苗的研制以及为患获得性免疫缺陷病的结核病人的治疗提供新途径。 展开更多

关键词 人外周血单核细胞 AG85A

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结核分枝杆菌CE抗原复合物对人单核-巨噬细胞TNF-α产生的影响

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作者 冯永红 丁元生 胡忠义 《中国防痨杂志》 CAS 2006年第S1期28-28,共1页

目的研究结核分枝杆菌早期分泌抗原CFP- 10-ESAT-6复合物(CE复合物)对人单核—巨噬细胞基础以及炎性刺激下TNF-α产生的影响。方法分离新鲜健康人外周血单核细胞,在DMEM-10% AB血清中培养,隔天换液,7d后自然分化成熟为巨噬细胞。给药组... 目的研究结核分枝杆菌早期分泌抗原CFP- 10-ESAT-6复合物(CE复合物)对人单核—巨噬细胞基础以及炎性刺激下TNF-α产生的影响。方法分离新鲜健康人外周血单核细胞,在DMEM-10% AB血清中培养,隔天换液,7d后自然分化成熟为巨噬细胞。给药组在培养早期(d1) 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 巨噬细胞 抗原复合物 人外周血单核细胞 人单核细胞 培养上清 早期 炎性 刺激剂 抑制作用

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人Th17细胞体外诱导分化条件的研究 被引量：3

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作者 王辰 郭薇 +3 位作者 王欣 郁冬梅 王宇恒 姚文兵 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期106-111,共6页

通过密度梯度离心法从人新鲜血液中分离获得人外周血单核细胞(PBMCs),比较分析加入不同细胞极化因子(IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23)以及诱导不同时间(1,2,3,4 d)对Th17细胞分化的影响,利用流式细胞仪、ELISA方法以及Q-PCR技术考察相关指... 通过密度梯度离心法从人新鲜血液中分离获得人外周血单核细胞(PBMCs),比较分析加入不同细胞极化因子(IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23)以及诱导不同时间(1,2,3,4 d)对Th17细胞分化的影响,利用流式细胞仪、ELISA方法以及Q-PCR技术考察相关指标,评估人体外Th17细胞的分化水平。研究表明,IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23单独均能对Th17细胞的分化起到促进作用,联用IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23时可使Th17细胞体外分化效率达到最佳。随着诱导时间的延长,Th17细胞分化水平逐渐升高,培养3 d时达到峰值,继续增加培养时间分化率反而出现降低。最终确立人Th17细胞体外分化的最佳诱导条件:在加入CD3抗体和CD28抗体的基础上,同时加入IL-1β、IL-6、TGF-β以及IL-23共同培养人PBMCs3 d可有效地刺激人Th17细胞的分化,并且流式细胞检测Th17细胞分化率达到近10%,ELISA检测细胞上清液中IL-17A含量达到近3 ng/m L,Q-PCR方法分析IL-17 mRNA基因表达升高达15倍,此方案具有操作简便、周期短、成本低廉等优点,为Th17细胞的功能研究及相关疾病治疗药物的研发建立了有效的检测平台。 展开更多

关键词 人外周血单核细胞 TH17细胞 体外 诱导分化

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