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浅析中国人源性材料利用的伦理问题与监管路径
1
作者 王怡 张美荣 +1 位作者 李一佳 汤苏阳 《中国医药生物技术》 2024年第1期70-73,88,共5页
人源性材料是指利用公民自愿捐献的人体组织,如围产期组织、软骨、肌腱、皮肤、神经等,直接加工或经脱细胞等工艺处理后,制备而成的组织工程材料,作为三类医疗器械产品应用于临床已有20余年。然而,由于人源性材料的原材料来自捐赠的人... 人源性材料是指利用公民自愿捐献的人体组织,如围产期组织、软骨、肌腱、皮肤、神经等,直接加工或经脱细胞等工艺处理后,制备而成的组织工程材料,作为三类医疗器械产品应用于临床已有20余年。然而,由于人源性材料的原材料来自捐赠的人体组织,其合法采集及产品规模化生产中所涉及的伦理问题一直备受关注。 展开更多
关键词 伦理问题 监管路径 组织工程材料 三类医疗器械 自愿捐献 人源性 围产期 工艺处理
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基于人源性乳腺癌类器官的质谱成像数据分析
2
作者 马可鑫 兰春燕 +2 位作者 彭颖 李玥 高华方 《生殖医学杂志》 CAS 2023年第6期898-903,共6页
目的介绍一种兼容高通量常压质谱成像数据的可视化分析流程。方法2022年10月于北京大学第三医院进行手术切除获得乳腺癌组织,并采用机械压滤法悬浮过夜获得人源性乳腺癌类器官。将类器官转移至载玻片上,喷涂2,5-二羟基苯甲酸(DHB)基质... 目的介绍一种兼容高通量常压质谱成像数据的可视化分析流程。方法2022年10月于北京大学第三医院进行手术切除获得乳腺癌组织,并采用机械压滤法悬浮过夜获得人源性乳腺癌类器官。将类器官转移至载玻片上,喷涂2,5-二羟基苯甲酸(DHB)基质进行质谱分析,并将通过常压的质谱成像数据进行格式转换后,导入MSiReader软件,经过数据预处理、二维及三维质谱成像数据的可视化,共定位分析等操作,实现对质谱成像数据的可视化分析。结果采用MSireader软件将.Raw转化为.imzML格式数据以便于读取;经数据预处理后发现,选用Mean进行数据归一化时背景去除效果最显著;在MSiReader软件中,可在二维质谱图中直观观察不同分子在类器官表面的异质性空间分布情况,质谱成像数据除了以二维伪彩图的形式展示分子的信号强度外,还可以更加清晰直观地以三维展示;MSiReader软件中的RGB共定位分析工具,除了能够查看单个分子在类器官表面的分布情况,还有利于寻找分布于特定空间区域的分子共定位情况。结论利用MSiReader软件,提出了一种基于人源性乳腺癌类器官达到可视化分析常压的质谱成像数据分析系统。 展开更多
关键词 常压质谱成像 人源性类器官 MSiReader软件 原位可视化
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综述:人源性组织异种移植动物模型在结直肠癌研究中的应用
3
《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期117-117,共1页
结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是全球排位第三的常见恶性肿瘤,近年来,结直肠癌在全球范围的疾病负担仍在持续加剧。最新数据表明,我国结直肠癌的新发病人数仅次于肺癌,成为第二大癌症。针对结直肠癌发病机制和治疗药物的研究对于提... 结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是全球排位第三的常见恶性肿瘤,近年来,结直肠癌在全球范围的疾病负担仍在持续加剧。最新数据表明,我国结直肠癌的新发病人数仅次于肺癌,成为第二大癌症。针对结直肠癌发病机制和治疗药物的研究对于提高结直肠癌患者的生存率至关重要。能够模拟人类结直肠癌复杂性的动物疾病模型对于结直肠癌研究十分重要。本文总结了目前已经掌握的结直肠癌小鼠模型构建方法有致癌物诱导模型、基因工程诱导模型、结直肠癌细胞株异种移植模型(CDX)和人源性肿瘤组织异种移植(PDX)小鼠模型。 展开更多
关键词 动物疾病模型 疾病负担 异种移植 结直肠癌 动物模型 小鼠模型 人源性 发病机制
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人源性抗HBsAg抗体Fab段在酵母中的表达 被引量：11
4
作者 邓宁 粟宽源 +3 位作者 王珣章 龙綮新 杨林 余宙耀 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期546-550,共5页
通过分步整合的方式 ,将人源性抗乙肝表面抗原 (HBsAg)抗体Fab的轻、重链基因分步整合到巴斯德毕赤(Pichiapastoris)酵母GS115菌株的染色体上 ,经甲醇诱导 ,成功地分泌表达出抗HBsAg抗体的Fab片段 ,表达量达5 0～ 80mg L。ELISA结果显... 通过分步整合的方式 ,将人源性抗乙肝表面抗原 (HBsAg)抗体Fab的轻、重链基因分步整合到巴斯德毕赤(Pichiapastoris)酵母GS115菌株的染色体上 ,经甲醇诱导 ,成功地分泌表达出抗HBsAg抗体的Fab片段 ,表达量达5 0～ 80mg L。ELISA结果显示重组酵母分泌表达出的Fab具有较强的结合HBsAg的能力。通过抗Fab的抗体柱亲和层析 。 展开更多
关键词 人源性抗HBsAg抗体 FAB段 酵母 表达
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人源性抗乳腺癌单链抗体库的筛选与初步鉴定 被引量：4
5
作者 王净 王慧 +4 位作者 王超 袁媛 崔岩 叶菁 李青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期837-840,共4页
目的:本研究旨在已构建的大容量人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体库的基础上,筛选出高亲和力的特异性单链抗体(scFv)并对抗体基本特性进行初步鉴定。方法:以人乳腺癌细胞系MCF-7为靶标,经过4轮淘洗,筛选出高亲和力的特异性抗乳腺癌scFv,并... 目的:本研究旨在已构建的大容量人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体库的基础上,筛选出高亲和力的特异性单链抗体(scFv)并对抗体基本特性进行初步鉴定。方法:以人乳腺癌细胞系MCF-7为靶标,经过4轮淘洗,筛选出高亲和力的特异性抗乳腺癌scFv,并对其结构序列进行分析;通过ELISA和Western blot方法,鉴定scFv的亲和力和特异性,以及其蛋白的基本表达情况。结果:成功构建具有高亲和力的抗乳腺癌单链抗体库,获得scFv的长度约为750 bp,ELISA证实所得抗体对乳腺癌细胞具有良好的亲和力和高度的特异性,IPTG诱导表达及Western blot结果显示,scFv为相对分子质量(Mr)30 000的可溶性蛋白。结论:本研究在已构建的大容量抗乳腺癌单链抗体库的基础上,筛选获得了高亲和力的抗乳腺癌单链抗体库。研究结果为进一步获得可应用于临床诊断和治疗的乳腺癌靶向性抗体奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 单链抗体 乳腺癌 人源性 噬菌体抗体库 筛选 表达
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人源性大肠癌抗原基因噬菌体表达文库的构建及鉴定 被引量：7
6
作者 刘宇虎 张振书 +7 位作者 钟东 武金宝 但汉雷 杨兴龙 杨晓强 陈学清 赖卓胜 肖冰 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第6期538-541,545,共5页
目的构建人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库.方法从人大肠癌组织中提取总RNA,用RT-PCR合成cDNA第1链,用LD-PCR合成cDNA第2链,除去小于500p的小片段,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库... 目的构建人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库.方法从人大肠癌组织中提取总RNA,用RT-PCR合成cDNA第1链,用LD-PCR合成cDNA第2链,除去小于500p的小片段,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库.转化E.coli XL1-B1ue感受态细胞,滴定文库的滴度,确定文库容量大小;用ITPG诱导和X-gal显色测定重组率;用Sfi Ⅰ酶切鉴定插入的cDNA片段大小.结果构建成含2.39×106pfu/ml重组噬菌体的人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,重组率为97.5%,插入cDNA片段大小范围从600～4000bp,平均长约1400bp.结论成功构建高质量人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,适合于大批量筛选cDNA克隆的大肠癌相关抗原基因. 展开更多
关键词 人源性大肠癌抗原基因 噬菌体 表达文库 构建 鉴定 结肠直肠肿瘤
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表达于大肠杆菌中的人源性抗CTLA4单链抗体复性方法探索 被引量：3
7
作者 曾令宇 黄强 +2 位作者 陈利弘 万琳 卢晓风 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第3期588-592,共5页
探索表达于大肠杆菌中的人源性抗CTLA4单链抗体(Anti-CTLA4-scFv)的体外复性方法.采用稀释和透析两种复性方式,并分析影响复性得率的各种因素如复性时间、温度、适宜的氧化-还原体系对其的影响.通过非还原电泳确定复性效果,并测定蛋白含... 探索表达于大肠杆菌中的人源性抗CTLA4单链抗体(Anti-CTLA4-scFv)的体外复性方法.采用稀释和透析两种复性方式,并分析影响复性得率的各种因素如复性时间、温度、适宜的氧化-还原体系对其的影响.通过非还原电泳确定复性效果,并测定蛋白含量.结果显示:含0.15 mol·L-1NaCl、1 μmol·L-1氧化型谷胱甘肽和3μmol·L-1还原型谷胱甘肽的50 mmol·L-1Tris-HCl(pH 8.0)缓冲液作为Anti-CTLA4-scFv的复性液,4℃下透析复性48～54 h,可获得具有天然构象的蛋白质.该方法复性蛋白得率高,从3.9 g菌体中可复性获得28 mg蛋白. 展开更多
关键词 基因表达 大肠杆菌 人源性抗CTLA4单链抗体 复性方法 重组蛋白
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人源性抗日本血吸虫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定 被引量：3
8
作者 雷黎 赵志荣 +4 位作者 朱绍春 刘淼 卞茂红 张林杰 沈际佳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期386-389,共4页
目的利用噬菌体抗体展示技术构建人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库并进行初步鉴定。方法RT-PCR从对血吸虫感染有一定抗性成年人外周血淋巴细胞中扩增出人IgG轻链和重链Fd段基因片段,将其克隆入PComb3中,构建人源性Fab段噬菌体抗体库... 目的利用噬菌体抗体展示技术构建人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库并进行初步鉴定。方法RT-PCR从对血吸虫感染有一定抗性成年人外周血淋巴细胞中扩增出人IgG轻链和重链Fd段基因片段,将其克隆入PComb3中,构建人源性Fab段噬菌体抗体库,并用限制性内切酶酶切、序列分析、DOT-BLOT以及SDS-PAGE等方法对噬菌体抗体库进行初步鉴定。结果噬菌体抗体库的滴度为6.2ⅹ1011/L,库容量为1.2ⅹ107,酶切鉴定结果显示噬菌体抗体库轻重链重组率达到66.6%,测序结果表明克隆入PComb3的是人免疫球蛋白轻链和重链基因,DOT-BLOT实验证明该抗体库表达了人源性的抗体,而SDS-PAGE证实了免疫球蛋白Fab段的可溶性表达。结论成功地构建了人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库,为筛选人源性抗日本血吸虫的抗体、研究这些抗体的特性和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 人源性 噬菌体抗体库 Fab段抗体
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人源性大肠癌抗原基因的SEREX筛选 被引量：4
9
作者 刘宇虎 张振书 +6 位作者 钟东 武金宝 但汉雷 赖卓胜 王亚东 张亚历 肖冰 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第9期1378-1381,共4页
目的:寻找人源性大肠癌相关抗原基因.方法:构建3个以入Tripl Ex2噬菌体作载体的大肠癌抗原cDNA表达文库,用自体或异体大肠癌患者血清应用SEREX方法进行免疫筛选.用平板法扩增阳性克隆噬菌体,提取纯化DNA,用SfiI酶切和PCR鉴定插入片段的... 目的:寻找人源性大肠癌相关抗原基因.方法:构建3个以入Tripl Ex2噬菌体作载体的大肠癌抗原cDNA表达文库,用自体或异体大肠癌患者血清应用SEREX方法进行免疫筛选.用平板法扩增阳性克隆噬菌体,提取纯化DNA,用SfiI酶切和PCR鉴定插入片段的大小.结果:构建成3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库,滴度分别为2.39×106nfu/L,2.07×106nfu/L和1.86×106nfu/L,插入片段长度为0.5-4kb,平均分别为1.4kb,1.6kb和1.3kb.筛选发现4个阳性克隆,插入cDNA片段大小分别为2.4 kb,1.8 kb,2.3 kb和2.2 kb.结论:用SEREX方法筛选大肠癌抗原cDNA表达文库,可获得有价值的大肠癌的重组抗原基因克隆,将有利于大肠癌的早期诊断和重组疫苗的研究. 展开更多
关键词 人源性大肠癌抗原基因 SEREX 大肠癌 免疫筛选 阳性克隆噬菌体 平板法 cDNA噬菌体表达文库
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人源性抗bFGF抗体抑制人黑色素瘤生长的作用研究 被引量：4
10
作者 杜超超 亢中奎 +5 位作者 陈文慧 潘磊 宋其芳 王宏 黄建芳 邓宁 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期578-582,共5页
目的研究人源性抗bFGF抗体对人黑色素瘤A375细胞的体内外增殖抑制作用。方法体外培养人黑色素瘤A375细胞,CCK-8法检测人源性抗bFGF抗体对A375细胞增殖的影响;Western blot检测人源性抗bFGF抗体对bFGF下游信号通路中ERK1/2磷酸化的影响;... 目的研究人源性抗bFGF抗体对人黑色素瘤A375细胞的体内外增殖抑制作用。方法体外培养人黑色素瘤A375细胞,CCK-8法检测人源性抗bFGF抗体对A375细胞增殖的影响;Western blot检测人源性抗bFGF抗体对bFGF下游信号通路中ERK1/2磷酸化的影响;建立裸鼠皮下移植瘤模型,通过记录各处理组裸鼠皮下移植瘤的体积、质量及裸鼠体质量变化,研究人源性抗bFGF抗体在体内对人黑色素瘤生长的抑制作用;免疫组化检测肿瘤组织内的微血管密度。结果 CCK-8实验结果表明人源性抗bFGF抗体能抑制A375细胞的生长,在800 ng/ml的质量浓度下,抑制率为24%;Western blot结果表明人源性抗bFGF抗体显著抑制FGFR下游信号通路中ERK1/2的磷酸化;裸鼠体内试验中,人源性抗体明显抑制了肿瘤的生长,抑制率为28.12%。免疫组化结果显示各组肿瘤组织中微血管密度均有下降。结论该株人源性抗体在体外可有效的抑制人黑色素瘤细胞的生长,并能在体内抑制肿瘤生长及血管新生。 展开更多
关键词 黑色素瘤 碱性成纤维细胞生长因子 人源性抗体
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人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达 被引量：3
11
作者 董轲 郝晓柯 +2 位作者 刘新平 张盈华 季少平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期106-108,122,共4页
目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变。方法从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶AhCPA。以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点。用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变并在大肠杆菌中表达。结果序... 目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变。方法从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶AhCPA。以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点。用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变并在大肠杆菌中表达。结果序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251bp,编码417个氨基酸。hCPA突变体mhCPA基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸。将mhC-PA基因在E.coli中诱导表达3h后表达量高达30%左右。结论成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶前药疗法”ADEPT中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人源性羧肽酸A 基因突变 基因克隆 基因表达
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近红外荧光染料在胃癌人源性肿瘤组织异种移植模型研究中的应用 被引量：5
12
作者 赵宁宁 张彩勤 +4 位作者 赵勇 杨丽 张海 刘漪沦 师长宏 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期643-647,共5页
目的建立胃癌人源性肿瘤组织异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDX)裸鼠模型,探讨近红外荧光(near infrared fluorescence,NIRF)染料IR-783在胃癌PDX模型活体成像研究中的应用。方法取临床胃癌新鲜手术切除标本,裸鼠肾包膜移... 目的建立胃癌人源性肿瘤组织异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDX)裸鼠模型,探讨近红外荧光(near infrared fluorescence,NIRF)染料IR-783在胃癌PDX模型活体成像研究中的应用。方法取临床胃癌新鲜手术切除标本,裸鼠肾包膜移植建立PDX模型,HE染色比较移植肿瘤组织与患者肿瘤组织形态结构的一致性。将移植肿瘤组织裸鼠皮下接种,20 d后,荷瘤小鼠腹腔注射NIRF染料IR-783(每只10 nmol/L),活体成像连续测定肿瘤部位近红外荧光强度并分析肿瘤体积与荧光强度的相关性;免疫组织化学检测移植肿瘤组织中HIF1α与OATP1B3的表达强度。结果成功建立了3个人胃癌PDX模型,移植肿瘤组织较好的保持了原发肿瘤的特征,NIRF活体成像早期检测到肾包膜部位荧光信号。PDX模型中肿瘤体积与荧光强度的相关性均在98%以上。移植肿瘤组织中HIF1α与OATP1B3表达呈强阳性。结论 NIRF染料IR-783可在PDX模型肿瘤部位特异性聚集,用于PDX模型的早期检测,这种肿瘤靶向性可能与HIF1α和OATP1B3的表达相关。 展开更多
关键词 人源性肿瘤组织异种移植模型 近红外荧光染料 低氧诱导因子-1 有机阴离子转运多肽1B3
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内皮素拮抗剂抑制人源性喉癌Hep-2细胞VEGF-C体外表达的定量分析 被引量：3
13
作者 林雁 尹芳 +5 位作者 袁莹 邹剑 刘锋 周鹏 刘世喜 张京晶 《昆明理工大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2013年第4期71-74,共4页
通过影响人源性喉癌Hep-2细胞中血管内皮生长因子C（VEGF—C）表达，探讨内皮素拮抗剂（BQ-123）与喉癌淋巴转移的机制，为临床及基础研究提供相应的实验依据．体外培养人源性喉癌Hep-2细胞，运用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞培养液... 通过影响人源性喉癌Hep-2细胞中血管内皮生长因子C（VEGF—C）表达，探讨内皮素拮抗剂（BQ-123）与喉癌淋巴转移的机制，为临床及基础研究提供相应的实验依据．体外培养人源性喉癌Hep-2细胞，运用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞培养液中VEGF—C的含量；利用M1-r比色法，测定不同浓度的内皮素拮抗剂对人源性喉癌Hep-2细胞增殖的影响．实验中发现当浓度分别为20．0～150．0μg／mLBQ-123作用48h，对人源性喉癌Hep-2细胞增殖有显著抑制作用（P〈0．05）；浓度分别为50．O～150．0μg／mLBQ-123对人源性喉癌Hep-2细胞VEGF—c蛋白分泌量有明显抑制活性作用（P〈0．05）．BQ-123可以有效抑制人源性喉癌Hep-2细胞中VEGF—C体内的表达． 展开更多
关键词 内皮素拮抗剂 人源性喉癌Hep-2细胞 VEGF-C 酶联免疫吸附测定法 MTT比色法
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人源性肝癌异种移植动物模型的建立及CD90、ALDH1表达鉴定 被引量：3
14
作者 博庆丽 阮亮 +3 位作者 胡安拉 李李 杨懿 赵奇红 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第11期1698-1701,共4页
从新鲜的人肝癌标本上切除肿瘤组织,移植于裸鼠皮下,建立原代移植瘤并连续传代3次,观察移植瘤的成瘤潜伏期、成瘤率、肿瘤体积、肿瘤的侵袭和转移情况。通过HE染色,与临床标本进行组织病理学比较,利用免疫组化方法比较肿瘤干细胞标志物C... 从新鲜的人肝癌标本上切除肿瘤组织,移植于裸鼠皮下,建立原代移植瘤并连续传代3次,观察移植瘤的成瘤潜伏期、成瘤率、肿瘤体积、肿瘤的侵袭和转移情况。通过HE染色,与临床标本进行组织病理学比较,利用免疫组化方法比较肿瘤干细胞标志物CD90和乙醛脱氢酶1(ALDH1)在临床和动物模型组织中的表达变化。结果显示动物模型肿瘤组织和临床肿瘤组织结构类似;CD90、ALDH1表达一致。建立人源性肝癌移植动物模型,其组织结构稳定,某些特定蛋白表达一致,可成为肝癌基础研究的重要工具。 展开更多
关键词 肝癌 人源性组织异种移植 动物模型
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人源性肝细胞生长因子稳定转染细胞株的建立(英文) 被引量：3
15
作者 唐世刚 覃琼华 +1 位作者 罗育林 苏先狮 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第12期8-11,共4页
目的通过实验获得人源性肝细胞生长因子(hHDSSF)稳定转染细胞株,为重组产品的获得奠定基础。方法通过脂质体包裹重组质粒pcDNA3。1hisB-HDSSF转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞;进而通过RT-PCR和NorthernBlot鉴定G418筛选后的单克隆抗性... 目的通过实验获得人源性肝细胞生长因子(hHDSSF)稳定转染细胞株,为重组产品的获得奠定基础。方法通过脂质体包裹重组质粒pcDNA3。1hisB-HDSSF转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞;进而通过RT-PCR和NorthernBlot鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株。结果重组质粒pcDNA3.1hisB-HDSSF转染Hela细胞后,第20天可见G418单克隆抗性细胞株的形成。G418抗性Hela细胞株RT-PCR扩增出600bp左右的目的条带;NorthernBlot获得了明显的阳性杂交影。结论我们的实验证实HDSSF表达重组体被成功转入Hela细胞,并稳定表达;从而获得了HDSSF稳定表达细胞株,为进一步研究HDSSF表达、蛋白纯化和测定其生物学活性奠定了基础。 展开更多
关键词 人源性 肝细胞生长因子 细胞转染 细胞株 克隆
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人源性抗血小板噬菌体抗体库的构建 被引量：2
16
作者 王字玲 赵敬湘 +2 位作者 苏丽 王波 赵莲 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2002年第6期371-374,共4页
目的　应用噬菌体表面呈现表达系统构建一个经血小板主动免疫的人抗体组合文库 ,并筛选与人血小板结合的噬菌体抗体 (Fab片段 )。方法　从一反复输注血小板并出现血小板输注无效的患者的外周血分离淋巴细胞 ,提取mRNA ,逆转录合成cDNA ... 目的　应用噬菌体表面呈现表达系统构建一个经血小板主动免疫的人抗体组合文库 ,并筛选与人血小板结合的噬菌体抗体 (Fab片段 )。方法　从一反复输注血小板并出现血小板输注无效的患者的外周血分离淋巴细胞 ,提取mRNA ,逆转录合成cDNA ,用半巢式PCR扩增重链Fd和κ轻链基因。依次将PCR产物插入载体pComb3相应的位点 ,构建噬菌体抗体Fab组合文库。并以人血小板膜蛋白包被 96孔板 ,对抗体库进行 3轮吸附 洗脱 扩增的亲和选择 ,获得与人血小板膜抗原结合的噬菌体抗体 (Fab片段 )库。结果　半巢式PCR有效地扩增出重链Fd和κ轻链基因 ,以此构建了噬菌体呈现文库。通过特异性筛选 ,获得可与人血小板特异结合的Fab噬菌体抗体次级库。结论　构建的人抗体组合文库通过筛选得到与人血小板特异结合的噬菌体抗体 (Fab片段 )次级库。其对抗血小板抗体药物研究、与血小板相关抗体有关的疾病研究、血小板血型抗原表位研究、进而进行血小板血型分型研究等 。 展开更多
关键词 血小板 血小板抗体 噬菌体抗体 人源性单克隆抗体 人抗体组合文库
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人源性噬菌体抗体库的构建及抗肺癌抗体基因的筛选、表达和核苷酸序列分析 被引量：1
17
作者 胡建林 郭先健 +3 位作者 胡义德 黄桂君 李淑平 陈维中 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期55-55,59,共2页
人源性噬菌体抗体库的构建及抗肺癌抗体基因的筛选、表达和核苷酸序列分析Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐｈａｇｅａｎｔｉｂｏｄｙｌｉｂｒａｒｙａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＤＮＡｓｅｇｕｅｎｃｉ... 人源性噬菌体抗体库的构建及抗肺癌抗体基因的筛选、表达和核苷酸序列分析Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐｈａｇｅａｎｔｉｂｏｄｙｌｉｂｒａｒｙａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＤＮＡｓｅｇｕｅｎｃｉｎｇｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａ... 展开更多
关键词 噬菌体抗体 人源性抗体 肺肿瘤 重组 核苷酸 序列分析
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人源性抗HFRS病毒抗体基因真核表达载体的构建及鉴定 被引量：1
18
作者 吴兴安 徐志凯 +6 位作者 姜绍谆 阎岩 罗雯 白文涛 张芳琳 刘勇 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期20-22,共3页
目的构建人源性抗HFRS病毒基因工程抗体基因的表达载体 ,为其进一步在真核细胞中表达奠定基础。方法 :经多次克隆将人源性抗HFRS病毒抗体可变区基因与启动子、增强子、前导肽序列和剪接供体信号等真核表达元件及人抗体恒定区基因和抗生... 目的构建人源性抗HFRS病毒基因工程抗体基因的表达载体 ,为其进一步在真核细胞中表达奠定基础。方法 :经多次克隆将人源性抗HFRS病毒抗体可变区基因与启动子、增强子、前导肽序列和剪接供体信号等真核表达元件及人抗体恒定区基因和抗生素筛选标记基因相连接 ,构建抗体重链基因真核表达载体VHEpSV gpt及轻链真核表达载体VκEpSV neo。结果重组质粒酶切鉴定表明 ,人源性抗HFRS病毒抗体可变区基因已与载体pSV gpt和pSV neo正确连接。结论利用基因工程技术成功地构建了人源性抗HFRS病毒抗体基因真核表达载体。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 病毒 人源性抗体 真核表达 载体
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抗bFGF人源性抗体的瞬时表达、纯化及鉴定 被引量：1
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作者 陶俊 李丹 +3 位作者 邓宁 王宏 龚义平 向军俭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期876-880,共5页
目的:将一株人源性中和性抗bFGF单链抗体基因转入真核表达载体,进行真核瞬时表达,通过细胞试验进一步验证其中和活性。方法:将1AscFv抗体基因克隆到真核表达载体pIgG中(编码全长人源性IgG1类抗体),T4连接酶连接后,转化大肠杆菌DH5α,挑... 目的:将一株人源性中和性抗bFGF单链抗体基因转入真核表达载体,进行真核瞬时表达,通过细胞试验进一步验证其中和活性。方法:将1AscFv抗体基因克隆到真核表达载体pIgG中(编码全长人源性IgG1类抗体),T4连接酶连接后,转化大肠杆菌DH5α,挑取4个克隆,经测序其中有一株含有正确的scFv序列,命名为pIgG-1A2,将pIgG-1A2转染真核细胞HEK293T进行瞬时表达,表达产物经蛋白G纯化后,SDS-PAGE检测纯化抗体的纯度;ELISA和Western blot检测抗体的特异性;MTT法检测纯化抗体对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和人神经胶质瘤细胞株U87MG增殖的影响。结果:经酶切鉴定和测序发现pIgG-1A2含有正确的抗体轻重链基因,经293T细胞瞬时表达,表达产物经蛋白G亲和层析柱纯化后经SDS-PAGE鉴定,获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升细胞培养上清10mg,交叉反应显示表达的抗体特异性针对bFGF,体外实验证实1A2能够抑制bFGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞的增殖,同时还能抑制神经胶质瘤细胞株U87MG的增殖。结论:通过真核细胞成功地表达了抗bFGF人源性抗体,纯化后获得了高纯度的抗体,对HUVEC和神经胶质瘤细胞株U87MG具有抑制作用,为抗bFGF人源性抗体抗肿瘤研究奠定基础。 展开更多
关键词 BFGF 人源性抗体 瞬时表达 中和活性
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人源性RUNX相关转录因子1在肾癌中的表达及生物学功能 被引量：1
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作者 蔡波 邢钱伟 +2 位作者 吴优 管杨波 郭新 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第5期509-514,共6页
目的人源性RUNX相关转录因子1(RUNX 1)在肾癌中的作用报道较少。文中旨在研究RUNX1基因在肾癌中的表达及生物学功能。方法从GEO数据库下载GSE66272肾癌芯片原始CEL文件,包括肾癌及癌旁组织样本,利用R软件对组织样本基因进行差异表达分... 目的人源性RUNX相关转录因子1(RUNX 1)在肾癌中的作用报道较少。文中旨在研究RUNX1基因在肾癌中的表达及生物学功能。方法从GEO数据库下载GSE66272肾癌芯片原始CEL文件,包括肾癌及癌旁组织样本,利用R软件对组织样本基因进行差异表达分析。选取2015年1月至2019年6月南通大学附属医院泌尿外科20份肾癌组织标本,另取对应癌旁组织标本。基因芯片分析RUNX 1在肾癌组织中的表达。小干扰RNA转染786-O细胞株,敲低RUNX1基因,将细胞分为:siRNA1组(转染si-RUNX1的siRNA1序列)、siRNA2组(转染si-RUNX1的siRNA2序列)、siRNA3组(转染si-RUNX1的siRNA3序列)、对照组(对照序列空载体siRNA转染)。实时定量PCR测定RUNX 1含量;细胞克隆形成实验统计细胞克隆形成数量;MTT法检测786-O细胞增殖活性;Transwell肿瘤细胞侵袭实验分析细胞迁移数量;Western blot检测蛋白水平变化。结果RUNX 1在肾癌组织中的表达水平(1.95±0.09)显著高于癌旁组织(0.62±0.05),差异有统计学意义(P<0.01)。siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组的siRNA敲减效率显著低于对照组(P<0.01)。MTT检测结果显示,siRNA1组较对照组显著抑制786-O肾癌细胞的增殖(P<0.01)。克隆形成结果显示,siRNA1组786-O肾癌细胞的集落形成效率较对照组显着降低(P<0.003)。siRNA1组的细胞过膜数量[(98.67±3.53)个/视野]明显低于对照组[(143.3±8.74)个/视野],差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示,siRNA1组RUNX1、N-cadherin、MMP9、p-AKT及p-GSK3β较对照组明显下降,E-cadherin明显增加。结论RUNX1在肾癌组织的高表达可促进肾癌细胞的增殖和迁移,故RUNX 1可作为肾癌的潜在临床诊治靶点及预后标志物。 展开更多
关键词 人源性RUNX相关转录因子1 肾癌 细胞增殖 细胞迁移
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